分子生物学论文开题报告

分子生物学论文开题报告

分子生物学技术在国内防制虫媒传染病领域的应用
【摘要】　本文综述了国内近年来,分子生物学技术在虫媒病中蚊媒传染病防制的应用情况,以期为蚊媒传
染病的防制、应对突发公共卫生事件中蚊媒传染病的发生提供参考.
【关键词】　分子生物学技术;虫媒;传染病
虫媒病是由节肢动物携带病原体传播的一组疾病.
1992年在国际虫媒病毒中心登记的已达535种,其中128
种对人有致病性[1].我国法定报告的传染病中,虫媒病占
13种,蚊虫作为媒介,除了传播病毒性疾病外,还可传播
寄生虫病.这类疾病大都属于自然疫源性疾病,有一定的
地域性和时间性,发病率低、死亡率高,主要通过媒介的
控制进行防制[2].近年来,随着分子生物学技术的研究和
发展,在医学领域的应用日趋广泛,并取得了重大进展,
作者就近年来分子生物学技术在蚊媒传染病的诊断和防制
等方面的应用综述如下.
1　常用的分子生物学技术[3]
1·1　核酸分子杂交技术
核酸的分子杂交(molecular hybridization)它是利用核
酸分子的碱基互补原则,在特定的条件下,双链解开成两
条单链,与异源的DNA或RNA (单链)复性,若异源
DNA或RNA之间的某些区域有互补的碱基序列,则在复
性时可形成杂交的核酸分子.杂交的双方是待测核酸序列
及探针.核酸探针可用放射性核素、生物素或其它活性物
质标记.根据其来源和性质可分为cDNA探针、基因组探
针、寡核苷酸探针、RNA探针等.
分类:根据被测定的对象,分为Southern杂交和
Northern杂交;根据所用的方法,分为斑点(dot)杂交、
狭槽(slot)杂交和菌落原位杂交;根据环境条件:分为液
相杂交和固相杂交.
1·2　聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)
是以拟扩增的DNA分子为模板,以一对分别与模板互
补的寡核苷酸片段为引物,在DNA聚合酶的作用下,按照
半保留复制的机理沿着模板链延伸直至完成新的DNA合
成.通过不断重复这一过程,可以使目的DNA片段得到扩
增,同时新合成的DNA片段也可以作为模板,使DNA的
合成量呈指数型增长.
PCR各种应用模式:兼并引物( degenerate primer)
pcr、套式引物(nested primer) pcr、复合pcr (multiplex
pcr)、反向pcr ( inverse pcr或reverse pcr)、不对称pcr
(asymmetric pcr)、标记pcr ( lp-pcr)和彩色pcr、加端
pcr、锚定pcr或固定pcr、玻片pcr、反转录pcr方法检测
rna、定量pcr.
1·3　DNA芯片
基因芯片又称DNA芯片(DNA chip)或DNA微阵列
(DNA microarray).是采用光导原位合成或显微印刷等方
法将大量特定序列的探针分子密集、有序地固定于经过相
应处理的载体上,然后加入标记的待测样品,进行多元杂
交,通过杂交信号的强弱及分布,来分析目的分子的有无、
数量及序列,从而获得受检样品的遗传信.特点:具有通
量大,并行性、微量化与自动化等优点,但在实践中其研
究成本较高;方法标准化不足;配套软件不够完善.
2　分子生物学技术在虫媒病诊断的应用
2·1　疟疾
黄炳成等[4]用pBF2 DNA片断,经标记后作探针,从
多种疟原虫DNA样本中检出恶性疟原虫.基因芯片在疟原
虫的研究内容还有疟原虫新基因发现[5]、转录因子调控网
络[6]、疟原虫适应人体宿主机制[7]、疟原虫比较基因组杂
交分析[8]、恶性疟原虫抗原变异分子机制[9]以及疟原虫攻
击红细胞机制[10]等.
2·2　丝虫病
黄志彪等[11]运用PCR技术检测血液中的班氏丝虫微
丝蚴,可检出lOOul阳性血样中的l条班氏丝虫微丝蚴;用
于检测班氏丝虫监测点540份血液样本结果均为阴性,镜
检血片结果亦为阴性.常规丝虫检测是在夜间采血,有资
料显示[12], SsP/PCR扩增系统可用于检测班氏丝虫病患
者血样中的循环DNA,能用于周期性或夜间周期性丝虫病
的日间血检工作,从根本上改变了丝虫病的诊断、监测和
工作方式.
2·3　登革热病
郑夔等[13]应用多重PCR技术快速鉴定4种血清型登
革病毒,并在同一反应管中进行多重PCR对登革病毒进行
分型鉴定,证实了2004年在广东发生的登革热疫情为I型
登革病毒;也有报道应用寡核苷酸芯片技术能同时确认流
感和登革热病毒[14].长期受这种疾病困扰的地区将有望通
过这种技术的完善,获得有效的治疗和保护.

分子生物学技术在动物营养学上的应用及其发展前景的论文

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分子生物学技术在动物营养学上
的应用及其发展前景(上)
摘要：本文从营养与基因表达调控、基因工
程、转基因等三个方面综述了分子生物学技术在
动物营养学中应用的最新进展，并对动物营养学
的发展前景作了展望。
自从发现双螺旋结构以来，分子生物学取得了飞跃性的发展，
形成了以基因工程为主要内容的的现代分子生物
学技术@在生物学、医学等研究中得到广泛的应用，
几乎渗透到生命科学的每一个领域，成为研究和
揭示生命现象本质和规律的一种重要工具。当前，
世界各国都将分子生物学纳入本国科技发展的重
点，可以预见，"21世纪将是生命科学的世纪，全世
界所共同面临的许多重大问题，诸如饥饿与营养、
疾病、能源与环境污染等问题的根本解决，在很大
程度上将依赖于分子生物学技术的发展和应用。
及时全面的了解和掌握分子生物学理论和技术的
发展动态及研究热点，将具有重要的意义。
就目前来看，我国动物营养学方面的研究工
作基本尚处在机体水平：即在机体水平上研究各
种营养素对机体的作用、在机体内的代谢与平衡、
影响机体吸收营养素的因素等问题。分子水平方
面的研究还刚刚起步，尚处于初级阶段。动物机体
的生理病理变化，如生长发育、新陈代谢、遗传变
异、免疫与疾病等，就本质而言，都是动物基因的
表达调控发生了改变的结果，许多生理现象的彻
底阐明，最终需要在基因水平上进行解释，所以动
物营养学的各方面研究应与分子生物学技术，尤
其是基因工程技术相结合，从分子水平上来解释
各种营养素对机体的作用机制、动物机体的生理
病理变化等问题，这也是动物营养学今后发展的
必然趋势之一。
*营养与基因的表达调控
随着分子生物学技术不断发展，越来越多与
代谢有关的动物基因被克隆和鉴定，人们对营养
与基因调控的关系越来越感兴趣。营养与动物基
因表达调控的研究已成为当今动物营养学研究的
一个热点领域；如何通过改变日粮组成成分来调
节体内相关基因的表达，从而使动物体处于最佳
生长状况已成为现代动物营养学研究的重点；通
过营养对动物基因表达的调控途径及其机制的研
究，将为人们如何更加有效地对某些特定有益基
因的表达提供理论依据。已有大量证据表明，主要
的营养物质如糖、脂肪酸、氨基酸以及一些微量元
素（如锌）对动物体内许多基因的表达都有影响。
!"!营养对磷酸烯醇式丙酮酸激酶
基因表达的调控
PEPCK是动物肝和肾中糖元异生作用的关
键酶，目前较为研究清楚的是日粮中糖含量对
PEPCK基因表达的调控。
糖类对PEPCK的调控主要是通过对其启动
子的作用，当动物进食含有大量糖类的饲料时，
PEPCK的启动了就会关闭，从而导致ABA8C水平
大幅度下降，而当禁食或饲喂高蛋白质低糖的饲
料时，PEPCK的启动子就会处于打开状态，从而
PEPCK水平得到大幅度提高，其具体调控机制大
致如下：?556D4（*0)#）等通过对大鼠ABA8C基因
的分析表明，ABA8C基因启动子位于1 E+.至F
#,之间，其中包含了大多数激素调控基因转录所
必需的组织特异性调控元件。日粮中糖的含量水
平会影响胰岛素、;?GA等激素的相对水平，而胰
岛素与;?GA等激素相对水平又会影响到特异性!"#!
转录因子的活性，特异性转录因子与$%$&’启动
子上的相应调控元件结合与否，又会影响$%$&’
基因的表达(，)。现有大量证据表明，$%$&’基因
一系列复杂的调控元件中，有包括胰岛素、甲状腺
激素、糖皮质激素、视黄酸对$%$&’基因转录的
正调控元件和胰岛素对$%$&’基因转录的负控
调元件，在上述调控元件中，*+,$调控元件-&.
%/和$(-0/调控元件是最重要的两种，*+,$对
$%$&’基因的诱导和胰岛素对$%$&’基因的抑
制作用就是通过这两个调控元件来进行调控的。
因此，当进食含大量糖类的饲料时，由于*+,$水
平的急剧下降以及胰岛素水平的急剧上升，从而
抑制$%$&’基因的表达，导致肝中$%$&’水平
大幅度下降，当禁食或饲喂高蛋白低糖的饲料时，
则情况恰好相反。
!"#营养对脂肪酸合成酶（$%&）基因表达的
调控
1+2是脂肪酸合成的主要限制酶，存在于脂
肪、肝脏及肺等组织中，在动物体内起催化丙二酰
&3+连续缩合成长链脂肪酸的反应，其活性高低
将直接控制着体内脂肪合成的强弱，从而影响整
个机体中脂肪的含量。有关营养与1+2基因的表
达调控，2!4!&56789-:;;(/曾报道：糖类能诱导1
+2基因的转录，而脂肪则抑制这种诱导的表达。
&3<=9等（:;;>）试验研究也表明，当给禁食后的
成年鼠饲喂含高糖低脂肪的饲料时，1+2基因的
表达就增强，而且相应的?.@+含量的增加幅度
与碳水化合物的摄入量也成正比。
糖类对1+2基因表达的影响。为区分活体中
激素水平变化的协同作用，13<A9559-:;;B/通过体
外细胞培养的方法研究葡萄糖和胰岛素等激素的
作用效果。研究表明，加入葡萄糖和胰岛素的脂肪
细胞培养组织中，1+2的?$@+水平相对于对照
组提高"#C；单独添加葡萄糖相对于对照组则提
高了DC，而单独添加胰岛素则没有效果。因此我
们可以得出结论，葡萄糖对1+2基因的表达调控
可以通过与胰岛素的协同作用而得到显著提高。
另外，有关研究表明，(E F E甲基葡萄糖（一种葡
萄糖类似物，不能被已糖激酶磷酸化）不能激发1
+2基因的表达，这表明葡萄糖必须通过中间代谢
环节才能对1+2基因的表达调控起作用，因此对
于弄清楚是由葡萄糖哪个代谢产物来作为启动基
因的表达信号尤为重要。13<A9559-:;;"/认为，G E
磷酸E"E脱氧葡萄糖在脂肪组织中有类似葡萄
糖的作用，能激发1+2基因的表达，且:?,的作
用效果等同于">?,葡萄糖的作用效果。最近
H3I73J等-:;;G/试验研究也表明，在成年大鼠肝
细胞培养物中G E磷酸E"E脱氧葡萄糖水平与
1+2的?.@+含量呈正相关。因此G E磷酸E"E
脱氧葡萄糖极有可能是参与1+2基因表达的重
要中间代谢物。
脂肪对1+2基因表达的影响。&56789-:;;(/
的研究表明，脂肪抑制1+2基因表达主要与脂肪
抑制1+2基因转录的能力和脂肪中脂肪酸的碳
链长度、双键位置和双键的数量有关，饱和脂肪酸
和（J E;）族脂肪酸不能抑制1+2基因的表达，多
不饱和脂肪酸（$K1+）中的-J E G/和-J E(/族脂
肪酸是1+2基因的有效抑制剂，研究表明，日粮中
$K1+可使1+2?.@+的水平降低D>C E;>C。
蛋白质对1+2基因表达的影响。,I5LJ97
-:;;:/研究表明，高蛋白饲粮将抑制猪脂肪组织
中1+2基因的表达，脂肪组织中1+2基因的?.M
@+的含量会显著下降：用蛋白质含量分别为:)C、
:#C、")C的日粮饲喂G>E::>8N的肥育猪，其脂
肪组织中1+2?.@+的含量分别下降了#!:)C、
::!D(C和)#!"C。由此可见日粮蛋白质将会影响
脂肪组织中1+2基因的表达，但这种调控具体发
生在哪个水平及其作用机理目前还不清楚。
!"’营养对()*+,*基因表达的影响
长期以来，我国商品猪的瘦肉率较国际优良
品种低，而目前常规的育种方法已很难使之有大
幅度的提高。因此OP6JN等（:;;)）小鼠3Q基因的
克隆成功为这方面的研究提供了新的思路。由于
R9=SIJ基因具有可以大大降低动物体脂含量这一
特性，因此通过营养对R9=SIJ基因表达调控的研
究，将有助于深入了解R9=SIJ对动物体重的调控
机制。王方年等（:;;;）研究表明，浓度从B??35 T
R到:>??35 T R葡萄糖可以显著地促进脂肪细胞
中59=SIJ基因的表达。
!"-营养与神经肽.（/0.）基因表达的影响
@$U是一种含(G个氨基酸残基的生物活性
多肽，在体内具有收缩血管、影响激素分泌、调节
生物节律及摄食行为等多种生物学功能，其中促进动
物采食是@$U最主要的功能之一。试验研究表
广东饲料第;卷第G期">>>年:"月综述广东饲料第#卷第$期"%%%年&"月综述
明，限饲特别是限制能量采食将会显著提高’()
在下丘脑中的表达量，*+,-.等（#/）在限饲、低
碳水化合物、低脂肪、低蛋白质日粮组成的试验条
件下，发现下丘脑中’()0 1’2显著提高345。
!"#微量元素对基因表达的调控
&!4!&锌对基因表达的调控
锌作为动物体的一种必需微量元素，具有增
强机体免疫功能、促进细胞增值分化、参与核酸蛋
白质代谢、维持细胞周期正常进行等生物学功
能。上述作用以前曾被认为主要是由于含锌酶活
性的改变以及对细胞信号传导系统产生影响的结
果，但近年来的研究表明，事实并不如此，锌主要
是通过对基因的转录和表达的影响而产生一系列
的生物学效应。6,7+.89.:;#<=认为，锌离子是
>’2聚合酶的一个重要组成成分，锌对于维持>
’2聚合酶的活性具有相当的重要性；另外锌通过
影响1’2聚合酶活性及转录因子的作用，能够导
致基因转录异常，从而使蛋白质表达也发生变化；
还有饲料中锌的含量，可以通过影响金属调节蛋
白的转录活性而影响金属硫蛋白（6?）基因的表
达，@A88,BC:等（#3）认为可将6?基因的表达量
作为体内锌状况的重要衡量指标。67’C88;#4=
发现低锌日粮限制动物生长的直接原因是由于低
锌抑制了体内DEF G D、EH受体、EH结合蛋白等
基因的表达。
&!4!"其他微量元素对基因表达的调控
镉、铜、汞等元素的增加将显著提高6?基因
的表达量。I+JA;#/=研究表明高铜将显著提高
体内EH基因的表达水平。IC+K,:L.K等（M$）认
为铁可以通过控制01’2的稳定性和翻译过程，
调节铁蛋白的水平。
"基因工程技术
所谓基因工程，就是按照人们的意愿在体外
获得目的基因，再按预先的设计，在体外将目的基
因进行酶切连接，构建成适当的表达裁体，然后导
入细菌或动物细胞或机体内，以研究该目的基因
的结构与功能、表达的调控机制、或者获得该基因
的表达产物。分子生物学技术的核心就是基因工
程，而基因克隆和表达是基因工程的核心技术。下
面就抗菌肽、植酸酶，甜菜碱等，对基因工程技术
在动物营养学领域中的应用作一简单阐述。
$"!抗菌肽基因工程
自从NJ0C:等（M&）首次从美国惜古比天
蚕;HOC8JP+JKC 7.7KJP,:=中成功地分离到两种抗
菌肽蚕素（7.7KJP,:）2和N后，国内外很多科学家
对这一类抗菌肽进行了深入细致的研究，发现在
许多昆虫、植物、哺乳动物中均有这样的多肽存
在，它们由<%多个氨基酸残基组成，不同来源的
多肽的氨基酸序列具有较强的保守性且共同具有
如下特点：（&）’端由碱性氨基酸残基组成；（"）Q
端均酰胺化；（<）绝大多数多肽在第二位均为?KP，
它对杀菌活性至关重要；（/）它们都有较广的杀菌
谱。其抗菌机制大致如下：抗菌肽作用于细菌的细
胞膜，破坏膜的完整性，造成离子通道，最终导致
细胞内含物的泄漏。由于抗菌肽具有广谱杀菌作
用、相对分子量较小、热稳定、水溶性好等优点，更
为重要的是抗菌肽对真核细胞几乎没有作用，仅
仅作用于原核细胞和发生病变的真核细胞，在目
前不少病原菌对原有抗生素逐步产生耐药性，尤
其是肉用动物长期使用抗生素受到严格检查和批
评时，对畜禽体内自然产生的抗菌肽功能的了解
以及设计一种方法来调节动物体内自然抗菌肽的
功能便显得极为重要，其中通过抗菌肽基因的克
隆与表达而大量生产抗菌肽是一种较为直接而有
效的方法。目前昆虫和植物抗菌肽基因工程，在国
内外已有不少成功的报道，但就畜禽抗菌肽基因工
程国内外尚未见报道。因此，运用基因工程技术，通
过对畜禽抗菌肽的研究，对提高畜禽的抗病能力、减
少甚至替代抗生素的使用将起积极的促进作用。
目前，猪抗菌肽（(1 G<#）已被发现（8..等，
M#），它是一个分子量为/3道尔顿的肽，从猪
肠中分离，属于富含(KJ G 2KL的肽家族，不裂解野
生型大肠杆菌，但对突变型R&"有作用，其作用机
制是通过阻断蛋白质和>’2的合成，从而导致这
些成分的降解。(1 G<#在一个单层囊泡中可以诱
导钙的降低和电流的线性增加，此诱导与肽浓度
和膜上甘油磷酸脂（带负电荷）有关。另外在猪小
肠中，还发现另一种抗菌肽7.7KJP,:(&，它是以裂
解细菌来完成杀菌作用的。2:S.K99J:;#4=运用
基因工程技术从猪骨髓1’2中克隆到一种新型
的7>’2，其编码一个3M残基的抗菌肽’R G 8O9,
:，有三个分子内二硫键，这种肽对’R G敏感型的
肿瘤细胞株)2Q G&有裂解活性，但不裂解红血
球细胞。;
!"#!
分子生物学技术在动物营养学上
的应用及其发展前景$下%
郑家茂赵国芬许梓荣
!"!植酸酶的基因工程
植酸酶的研究已有近.’年的历史，植酸酶作
为一种单胃动物的饲料添加剂，其饲喂效果已在
世界范围内得到广泛的确证，随着饲料工业的发
展和分子生物学的兴起，从(’年代开始的植酸酶
的分子生物学研究，已成为世界性的研究热点之
一。目前国内外研究的主要思路集中在通过基因
工程这一手段解决饲用植酸酶的两个主要问题：
一个是植酸酶在天然材料中表达水平太低，这造
成植酸酶难以大量生产及生产成本过高的问题，
通过基因工程技术，利用生物反应器则有望成百
上千倍地提高它的表达量；另一个问题是天然植
酸酶的一些酶学性质，如耐温性，/0适性、催化活
性等不能完全适合饲料加工业和养殖业的要求，
利用基因工程手段在分子水平上对植酸酶基因进
行改造，从而提高其在饲料中使用的有效性。
#!#!&在微生物中高效表达植酸酶基因
目前，植酸酶基因表达的研究主要集中在来
源于曲霉的植酸酶基因/123和/425上。06789
:;<=>?4@8等$&(("%将来源于3!A:BCDDEFFG"&"-
的/123基因导回原菌株，使/12基因的拷贝数增
加到&-个以上，从而使植酸酶的表达量提高到
,H’’C I D4。J174:B1等（&((-）在3!K72L6?中表达来
源于酵母的植酸酶基因和来源于3!;:<?7,H#的
/125基因，其结果也是使表达量分别提高到M.’
C I D4和,-’C I D4，将植酸酶基因/123置于来源
于3!;:<?7的淀粉葡萄糖甘酶$3N%启动子之下，
信号肽序列分别用3N信号肽的&M个氨基酸序
列、3N信号肽的#.个氨基酸序列及植酸酶原来
的信号肽序列"种构建，将植酸酶基因重组到3
;:<?7基因组中而获得植酸酶基因的阳性克隆子
在这"种构建中其植酸酶在重组菌株中的表达量
分别达到了&!&O’!-O#!M P&’-C I D4，比原植酸酶
产生菌株的表达量高约&’’’Q"’’’倍左右。
#!#!#植酸酶热稳定性
加工饲料都需要一个制粒工艺，在制粒过程
中有一个短暂的高温过程，温度一般在,-
("R，一般植酸酶在此高温下会大幅度地丧失活
性，因此，能在饲料中真正推广利用的植酸酶必须
具有良好的热稳定性；然而另一方面饲料中的植
酸酶最终的作用场所却是动物正常体温（",R）的
肠胃中，植酸酶同时又必须在常温下具有较高活
性，因此，如何解决在制粒高温和在动物正常体温
下同时具有较高酶活性这一对矛盾是目前饲用植
酸酶应用的关键性技术环节，通过基因工程技术
对植酸酶基因在分子水平上进行改造将是一个强
有力的手段。近年来，已从嗜温微生物中发现多种
高温植酸酶，对它们的结构与热稳定性的研究将
为植酸酶基因的分子改造提供理论依据。
#!#!"植酸酶基因工程的一个新突破点
假设在一些植物性饲料$如玉米、大麦、大豆
等%中本身就含有足量的植酸酶，如果在饲喂过程
中，植酸酶在动物的肠胃中释放出来降解饲料中
的植酸磷，这岂不是一举两得，即省去了植酸酶添
加剂的生产，又省去了在饲料中植酸酶的添加，这
无疑是植酸酶应用的最佳方法。随着分子生物学
技术的发展，这一“天方夜谭”的假设将成为现
实。目前，科学家们已经开始尝试这一方面的研究
并取得了阶段性的进展，其主要思维路线如下：将
植酸酶基因通过基因工程技术转化到用作饲料的
玉米、大豆、大麦中，培养出高含植酸酶的大豆、玉
米、大麦。目前国外许多研究机构都在尝试此项工
)中图分类号*SM&H!")文献标识码*5)文章编号*&’’-!MH&"$#’’&%’&!’’"#!’#作，预计近期内会取得突破性进展。
#!"甜菜碱基因工程
甜菜碱$%&’()*&+是广泛存在于动植物体内的
季铵型生物碱。近年的研究表明，甜菜碱是一种高
效、安全的营养再分配剂，添加于饲料中，可以显
著提高畜、禽胴体瘦肉率、减少脂肪沉积，并可改
善肉质，在养殖工业上应用前景广阔。但就甜菜碱
本身而言，目前国内的甜菜碱生产均是通过化工
工艺合成，通过基因工程手段来获得甜菜碱方面
还是空白，国外近年来已开始这方面的研究。
许多细菌和植物中由胆碱经两步氧化而成甜
菜碱，合成代谢途径已经阐明，催化两步反应的酶
蛋白已经分离和纯化，已克隆其基因并测定了碱
基顺序。,-.’/01研究室已完成大肠杆菌的%&’
操纵元全序列分析，发现%&’操纵元由四个基因
组成，其中%&’,编码胆碱脱氢酶（23 4 567(），
%&’%编码甜菜碱醛脱氢酯（8#4 567(），%&’9编
码胆碱转移系统（:8 4;67(），%&’<编码%&’基因
的调节中作为阻遏物的#3!;67(蛋白。
目前已有一些报道认为细菌9&’操纵元和
=&>操纵元能在烟草中表达，因此将.’/01研究室
得到的%&’操纵元;!:?@7A,片段导入烟草，探
讨甜菜碱是否能表达是一个诱人的研究领域。
"转基因技术
转基因技术是指用实验手段，将外源基因导
入动物细胞或动物受精卵中，由此稳定整合到动
物基因组，并能遗传给子代。目前常用的转基因技
术主要有：显微注射法；胚胎多能干细胞虫；精子
裁体法；反转录病毒载体法以及电转移技术等等，
其中显微注射法是最常用、最有效的基因导入技
术。目前培育成功的转基因动物绝大部分是采用
该方法获得的。最早的转基因动物是将疱疹病毒
基因与BCDE早期启动子联在一起，用显微注射
法导入小鼠受精卵获得的转基因小鼠。目前，在动
物营养领域转基因技术的研究主要包括：
"!3提高动物生长性能
生长激素$FG+在动物生产中基本上采用注
射方法，虽然有一定的促生长作用，但程序复杂繁
琐，解决思路之一就是采用转基因技术。G(11&/
等$35;8+人生长激素$HFG+转基猪研究成功，这
种转基因猪的生长速度比对照组高出38I，日增
重可达3#:"J，饲料利用率提高#3I，采食量减少
#EI，陈永福$3553+用自己构建的融合基因
KL9 M NFG获得了转基猪，其生长速度提高
33!;I O 3D!#I，饲料利用率提高3EI。另外，转
基因羊、转基因鸡、转基因兔、转基因牛、转基因鱼
等研究也相继获得成功。
"!#改变动物体内的代谢途径
动物营养研究表明，有些生长发育和维持所
必需的营养物质必须由外界供给，例如赖氨酸，但
是否可以不必由外界供给呢？可行的方案不外乎
这么两种：一种是重建动物体内某些丢失的代谢
途径；另一种是导入目前在动物体内尚未发现的
代谢途径。转基因技术的出现提供了通过改变动
物代谢途径从而让动物自身合成赖氨酸的可能
性。-&&.等$355E+已经清楚大肠杆菌合成赖氨酸
途径中的酶基因编码，运用基因转移技术也证明
了在细胞中施行这些途径的可行性，因此-&&.等
提出设想：把赖氨酸在微生物中生物合成的途径
导入动物体内，使动物自身就能合成赖氨酸。
"!"提高动物产毛性能
由于胱氨酸在羊瘤胃中降解，所以饲料中加
入胱氨酸并不能提高产毛量。因此能够得到一种
自身合成胱氨酸的转基因羊，将会大大提高羊毛
产量。P(/Q$3553+发现某些细菌能将硫固定并转
化为胱氨酸，他们分别在大肠杆菌和沙门氏菌中
分离到了丝氨酸乙酸转移酶基因和K 4乙酰丝氨
硫化氢解酶基因，并且将这两种基因与金属硫蛋
白$L9+基因启动子联接；并在"R端装上FG基因
的序列，然后将这组调控序列通过转基因技术导
入羊体内而得到高产羊毛转基因绵羊。
D展望
综上所述，以基因工程为核心的分子生物学
技术应用于动物营养学研究领域，具有很大的潜
力，它不仅为动物营养学研究提供了一套全新的
技术和方法，而且可在基因水平上解决许多动物
机体生理病理变化、营养素的代谢调节机制以及
其与机体的相互关系等问题。我们可以设想，基因
工程抗菌肽完全可以减少甚至替代抗生素的使
用；随着转基因技术的日益完善，各种生长性能优
越的动物新品种将层出不穷；用转基因动物来大
量生产各种生理活性物质，也将成为现实。无可置
疑，#3世纪是高新技术畜牧业应用大发展的时
期，以基因工程为主导的分子生物学技术将会为
我国的畜牧业的发展开辟广阔前景。

医学检验本科毕业论文

医学检验本科毕业论文

紧张又充实的大学生活将要谢下帷幕，我们都知道毕业前要通过最后的毕业论文，毕业论文是一种比较正规的检验学生学习成果的形式，那要怎么写好毕业论文呢？以下是我整理的医学检验本科毕业论文，欢迎大家借鉴与参考，希望对大家有所帮助。

1资料和方法

1.1一般资料

选取2012年10月～2013年12月在我院呼吸内科接受治疗的重症患者72例，采取随机分组的形式将其分成两组。观察组、对照组中分别有41例患者、31例患者；其中患有慢性呼吸衰竭的患者为13例，患有肺癌的重症患者为6例，患有支气管炎的患者为39例，患有支气管扩张的患者为14例。女性患者、男性患者分别为48例、24例；年龄为27.2～81.3岁，平均年龄为(51.39±5.07)岁。两组患者在性别、年龄以及临床症状等方面对比，差异较小，无统计学意义(P>0.05)。

1.2方法

对照组患者采取基础的常规护理模式，给予患者对症治疗后，严密检测病症变化情况。观察组患者采取缜密的临床护理模式，分别针对患者的住院环境、治疗等多方面进行护理干预，具体实施方案如下。

1.2.1环境心理干预

呼吸内科患者对空气质量要求较高，因此要保证病房内良好的空气流通，可在病房内安装空气净化器。并每天对病房进行清扫，尤其对灰尘，尽量运用吸尘器进行打扫，保持病房内整洁。禁止摆放花草，探望患者人员带来的花束，说明缘由后给予带回，避免患者因花粉过敏加重病情。由于病情较长，患者极易出现烦躁不安等情绪，尤其重症患者，感觉治疗无望，极易产生绝望、消极心理。护理人员应针对患者出现的不同情绪，做好患者的心理工作，让患者树立起战胜疾病的勇气。

1.2.2治疗干预

对不同病症患者给予对症治疗后，要对患者的生命体征等进行严密观察，要特别留意患者的呼吸频率、节奏。一旦出现咳血、咳痰等症状，及时报告给医生进行抢救。同时针对每位患者的病情状况和短期治疗结果，制定相应的抢救预案并做好基本准备工作，可为抢救节省出时间。对患者讲解药物名称、疗效等基本情况，准确掌握患者的用药剂量、浓度等。建立两条静脉通路，分别为一般药物的输入、特效药物的输入。另一种给药方式为雾化吸入，可确保药物治疗的安全性。

1.2.3通气干预

及时对患者进行通气治疗，可改善患者的呼吸障碍症状。在治疗时，需保持患者呼吸道的通畅程度，对呼吸道、口腔内的分泌物及时进行清除，可减少感染的发生率。病情相当危重的患者，无法进行自主呼吸，可运用呼吸机给予辅助呼吸。在进行辅助呼吸时，要严密细致的贯彻呼吸机上各项参数的变化，若出现异常及时处理纠正。

1.3统计学分析

对本文所得实验数据均采用SPSS14.0统计学软件进行检验，所得计量资料采用t检验，所得计数资料采用X2检验，以P<0.05为有统计学意义。

2结果

41例观察组患者经护理后，病情得到好转生命体征恢复正常的患者为38例，无效的患者为3例，好转率为92.68%；3例患者进行及时抢救后，已基本恢复生命体征；无死亡患者。31例对照组患者病情得到好转的患者为23例，无效的患者为8例，好转率为74.19%；8例患者进行及时的抢救后，6例患者抢救成功，2例患者病情突然加重抢救无效死亡，病死率为6.45%。观察组的整体疗效明显优于对照组(P<0.05)。

3讨论

对呼吸内科重症患者来说若不及时实施有效的抢救预案给予护理干预，很可能加重患者的病情，产生呼吸衰竭以至死亡。在治疗中，为每位患者制定有效的抢救预案，可为挽救患者生命缩减准备时间，提高患者的抢救有效率。在整个护理中，护理人员要以缜密的心思，观察每位患者产生的不同心理变化，注重微小细节的护理。饮食上要以易消化、高营养的流食或半流食为主，并注重饮食的安全卫生。加强有关疾病的知识讲解工作，让患者知道治疗流程，可缓解患者的担忧。并对患者进行健康教育，让患者注重个人卫生的整洁，勤换衣物，防止不必要的感染。本次研究中，观察组患者实施缜密的临床护理后，病情的好转率为92.68%，未出现死亡病例，总体疗效明显优于对照组(P<0.05)。

4结语

综上所述，将缜密的临床护理运用于呼吸内科重症患者中，在极大程度上让患者的生命得到保障，提高患者的抢救有效率。

1对象与方法

1.1对象

从某所大型综合性医院860名临床护理人员中随机抽取300名进行问卷调查。年龄18~52岁，平均(30.0±7.1)岁。学历:中专84名(28.0%)，大专166名(55.3%)，本科及以上50名(16.7%)。职称:护士94名(31.3%)，护师130名(43.3%)，主管护师76名(25.3%)。工作年限:1~6年94名(31.3%)，~12年94名(31.3%)，~18年65名(21.7%)，18年以上47名(15.7%)。

1.2方法

调查方法:采用问卷调查法[3]。自行设计问卷，内容包括护理人员基本状况，对循证护理的认识和了解程度，制定护理计划时参考的依据，临床护理科研及护理实践的方法等26个有关问题。将问卷发放给20名临床护理人员进行预调查；请专家评审，根据专家的意见进行修改。问卷的内部一致性信度为0.84，内容效度为0.92。然后由笔者将问卷发放给被调查者，向其讲解填写要求后，由被调查者自行填写，当场收回。发放问卷300份，收回有效问卷300份，有效率100%。

统计学方法:将数据录入计算机，用SPSS10.0统计软件进行统计分析，行χ2检验。

2结果

2.1临床护理人员循证护理知晓情况

63.4%的临床护理人员知道循证护理，但非常熟悉和比较熟悉者仅占15.7%(47/300。不同学历、职称、工作年限的护理人员对专业教材，不同职称、工作年限护理人员对护理常规，不同年限的护理人员对专家意见及不同学历护理人员对科学证据[4]的应用差异有显著性意义(P<0.05或P<0.01)；其它项差异无显著性意义(均p>0.05)。依选用临床参考依据构成比的多少排序依次为护理常规(50.6%，152/300)、专业教材(34.7%，104/300)、科学证据[4](7.7%，23/300)、医学杂志(5.0%，15/300)及专家意见(2.0%，6/300)。由此可见护理人员应用护理常规百分构成比最高，专业教材次之，而采用科学证据[4]、医学杂志及专家意见较前2项差距较大。

2.2临床护理人员循证护理实践现状

统计显示，只有7.7%(23/300)的临床护理人员应用最可靠、科学的证据，结合个人临床经验和病人的需求为病人提供护理方案。进一步查询原因:工作繁忙占54.1%(150/277)，新资料缺乏占20.6%(57/277)，没有条件上网占6.8%(19/277)，缺乏上网技巧占4.0%(11/277)，不知道如何获取自己需要的资料占10.5%(29/277)，其它原因占4.0%(11/277)。

3讨论

3.1普及循证护理知识，将循证护理教育深入到临床和继续护理教育中

本次调查显示，15.7%的临床护理人员熟悉循证护理，84.3%的临床护理人员对循证护理了解不深，遵循证据的科学观念尚未被广大护理人员所接受。因此，有必要在各级护理院校中增设循证护理课程。临床护理人员也必须接受循证护理的继续教育，如开展专题讲座、强化培训等。使临床护理人员熟悉更多的循证护理知识和循证护理的实践方法，同时掌握学习的技巧和方法，成为一名终身的自我教育者[5]，在今后的工作中能主动学习，最大限度地应用现有的、最可靠的科学证据为病人服务。使循证护理在日常护理实践如查房、会诊、学术活动、科学研究中得以应用。实施循证实践，落实“以病人为中心”的服务宗旨，提高护理服务水平。

3.2大力开展循证护理研究，及时提供“可利用的最可靠的科学证据”

评价证据的正确性、有用性和实用性时常根据证据的性质分为4个等级:A级，设计良好的随机对照试验；B级，设计较好的队列或病例对照研究；C级，病例报告或有缺点的临床试验；D级，个人的临床经验[4]。A级证据级别最高，依次递减，D级级别最低。

遵循科学的证据为病人服务，是循证护理与传统的经验和直觉式护理的根本区别。本调查显示，50.7%(152/300)的临床护理人员习惯按护理常规办事，34.7%(104/300)按专业教材办事；提示大部分护理人员缺乏批判性思维。由于专业教材出版周期长，各地区各医院的护理常规的质量参差不齐，临床护理人员无法将护理服务建立在目前现有的科学证据基础上。致使许多护理手段停留在约定俗成的习惯与经验阶段，缺乏科学证据[6]。

调查同时也显示了不同背景的护理人员对某些临床参考依据的应用程度存在差异。工作年限长、学历高及职称高的护理人员更习惯按专业教材、护理常规办事；只有7.7%的护理人员应用了最可靠的科学证据，大多数临床护理人员对科学证据应用不足，可能与其知识老化、凭经验和直觉护理病人、不知如何获取证据及缺乏自我教育的能力有关；中专护士对科学证据的应用较好，可能与其工作年限较短、临床工作经验欠缺、护理病人过程中遇到困难的频率较高，促使她们多渠道获取护理新知识等因素有关。

目前有说服力的护理研究信息资源仍然有限，研究结果的传播与推广不够充分[7]，导致科学证据的'应用范围狭小。护理人员在临床工作中参考期刊亦较少，仅为5.0%(15/300)。实质上期刊出版周期短，更新知识快，统计资料多，可从中查找到大量的最新的实用性科学证据。护理人员尚可通过Medline或Cochrane图书馆查询获取自己所需的证据，不断更新专业知识。与此同时，广大护理人员也应根据Medline或Cochrane图书馆提供的结论选题，大力开展循证护理研究，为临床实践及时提供“可利用的最可靠的科学证据”是当前乃至今后一段时间极为重要的工作，也是循证护理得以开展的关键。

3.3成立循证支持小组，提高护理人员循证能力

本次调查结果显示，54.1%的临床护理人员工作繁忙，10.5%不知道如何获取自己需要的资料，4.0%缺乏上网技巧，6.8%没有条件上网。由此可见临床护理人员受多种因素的影响，循证护理实践开展不够。因此，挑选一批具有循证能力的临床护理人员成立循证支持小组，参与或支持不同技能和背景的临床护理人员从事循证护理实践，也是目前可以采取的有效办法之一。循证支持小组的成员可以通过网络、期刊及书籍帮助繁忙的临床护理人员从浩瀚的医学信息海洋中获得科学的证据，再结合病人的实际情况、需求和护理人员的个人经验，分析证据的可应用性，制定出高质量的护理方案和护理决策，供临床护理人员运用，以普遍提高临床护理人员的循证能力，转变护理人员的护理行为，从事更多的循证护理实践，从而促进临床护理持续健康发展。

1.对象与方法

1.1研究对象

重庆医科大学2008届医学检验专业本科生共69篇毕业论文。

1.2基础工作

在校期间开设专业英语、医学统计学、文献检索、文献综述等课程，在实习前进行科技论文写作讲座，主要内容包括:论文开展的基本步骤和内容、论文选题和开题报告、论文的撰写格式和要求。把丰富临床思维与提高创新能力有机统一起来，为做好毕业课题、文献查阅、撰写综述及毕业论文打下良好的基础。

1.3课题开展和论文撰写

由实习基地带教教师指导学生掌握文献复习、课题设计、开题报告、实验准备和完成、资料总结、分析及统计学处理、论文撰写指导与修改、论文答辩准备工作等。并为课题的顺利进行提供技术和经济支持。

1.4成绩评定办法

系部根据毕业论文的研究方向进行亚专业分类，分为临床基础检验、临床血液学、临床微生物学、临床免疫学、临床生物化学与生物分析化学等研究方向。毕业论文送交答辩委员会成员初审后，进行毕业论文答辩，学生也根据毕业论文的研究方向进行分组。各论文答辩小组委员由医学检验系研究决定，主要由教学基地和医学检验系各亚专业的专家组成。论文答辩小组成员根据论文的先进性与难易度、实验设计合理性、原始记录完整性、统计学运用的正确性、推理逻辑性及结论情况、答辩时表达与回答问题能力、论文文字表达、书写格式、图文运用、多媒体制作、所附综述水平及论文中应用情况为每位学生的毕业论文评分。

2.结果

2.1毕业论文指导教师

毕业论文指导教师全部由实习医院中具有中级以上专业职称、有较强科研能力和较高学术水平的教师担任。2008届69名学生的毕业论文由62名教师指导。毕业论文指导教师情况见表1。

2.2论文选题范围的分析

论文选题范围较广，体现专业特色，涉及临床生物化学、临床微生物学、临床免疫学、临床基础检验、临床血液学、分子生物学等各亚专业。见表2。

2.3论文成绩分析

根据论文的先进性与难易度、实验设计合理性、原始记录完整性、统计学运用的正确性、答辩时表达与回答问题能力、论文文字表达、书写格式、图文运用、多媒体制作、所附综述水平及论文中应用情况，将论文质量分为优秀、良好、中等、及格、不及格五个等级。分布情况见表3。

3.讨论

3.1指导教师水平

指导教师经教学基地所在科室推荐，由检验系答辩管理委员会进行资格审定并备案。表1显示，有62名教师指导2008届69名学生完成毕业论文，每位教师带1~2名学生。指导教师以副高级职称为主，占53.23%。但由于招生人数的增加，每个实习基地的实习生人数也逐年增加，导致指导教师数量不足。而各实习基地科研能力参差不齐，科研能力较高的教师有限，因此大量中级职称的青年教师也参加了毕业论文的指导工作，中级职称指导教师占40.32%。

3.2论文选题

论文选题工作至关重要。选题是做好毕业论文的开端，它不仅关系到毕业论文的质量，还关系到人才培养规格和学生创新精神与实践能力的培养。表2显示，69篇论文选题范围比较广，涉及医学检验的各亚专业，以临床生物化学、临床微生物学、临床免疫学为主，大部分选题能够围绕专业的前沿性、热点性的问题进行选题。但有的学生一味追求前沿问题，而平时对理论性问题钻研不够深入，使得文章缺乏深度；有的是已经研究很成熟的问题，缺乏创新;有的选题较大，主题包含2个或多个中心，学生难以把握，导致文章内容重心不明确。

3.3论文成绩

本届69篇毕业论文成绩呈正态分布，优秀论文较少，占4.38%;良好比例相对较大，占65.21%；中等占30.43%。优秀论文较少主要有以下原因：①毕业论文经费缺乏。经费问题是目前困扰医学检验专业毕业论文可持续发展的首要问题。要提高毕业论文质量，必须有相对固定的经费投入。经费是实验顺利进行的保障，由于目前学校没有毕业论文专项经费，实验经费全部由实习基地承担。各实习基地用于指导学生毕业论文的经费有限，随着招生人数的逐年增加，毕业论文经费不足问题突显。②学生重视不够。学生实习期间学习任务重、就业压力大，很多学生无法投入更多精力在毕业论文工作中，部分学生甚至把毕业论文作为任务来完成，应付了事。③指导教师水平参差不齐。由于学生实习基地分布广，各实习基地教师科研能力参差不齐。此外扩招后学生人数增加，大量青年教师加入到指导教师行列，这些教师由于缺乏带教经验，在指导学生完成论文时缺乏具体的要求，不能具体帮助学生克服遇到的问题。

3.4提高论文质量的措施

毕业论文质量的高低不仅是学生综合能力的体现，更是学校办学水平、教师教学质量、学生的综合素质和能力、校风学风等诸多因素的综合体现。为了从根本上提高我系学生的毕业论文水平，对下一届的毕业生论文必须抓好以下几点。

3.4.1培养学生创新能力

改革实践教学体系，实验课独立开设，强调设计为主线（包括设计性实验、创新实验等），重点在于提升学生实践层次和水平，并且把科学研究引入教学过程，全面培养学生科学研究思维能力，增加创新精神和实践能力，创新意义的实践能力培养，进一步增强了学生创新能力。

3.4.2严格把关学生的选题

学生根据选题原则，在对本专业的现状进行调研后，提出拟做课题的方向或题目，经与指导教师商定与讨论，报所在基地检验科毕业生毕业论文指导小组审查，经审查合格后，再进行开题的准备。每位学生原则上一人一题，不得重复或相近。

3.4.3严格把关指导教师资格审查

加强指导教师培训指导教师必须具有主管技师及以上技术职称，每位教师原则上最多带两名学生。指导教师经教学基地所在科室推荐，由检验系答辩管理委员会进行资格审定并备案。对于缺乏带教经验的青年教师，由系部聘请科研能力和带教能力强的高年资教师对青年教师定期开展培训课程。

3.4.4加强对课题实施与进展进行质量监控

系部领导、实习带教教师和学办管理人员亲临实习基地进行中期检查，正确引导学生合理安排毕业论文与其它工作，加强与指导教师的沟通，了解学生实习的进度和存在的问题，同时协调和解决课题所需的实验器材、试剂和标本等问题，保证课题顺利完成。此外，学生人数逐年增加和毕业论文经费的缺乏的矛盾也应向学校反映，以便得到相应的支持。

3.4.5严格把好毕业论文成绩评定关

毕业论文在所在实习基地完成后，按照科研论文撰写的要求成文，经指导教师修改和审查后，由实习基地科室领导安排在科内进行预答辩，预答辩通过后，再回学校参加正式答辩。预答辩不合格的学生不能回校参加正式答辩。毕业论文及原始记录本和课题相关的综述交检验系部审查，严查弄虚作假现象，对有抄袭者给予一定处罚。杜绝答辩流于形式，对不合格的论文，限期修改后再答辩。

3.4.6建立毕业论文奖励机制

每年对优秀毕业论文给予表彰，并将每年论文评定成绩反馈给各实习基地，对优秀论文的指导教师给予表扬。