毕业论文参考文献可以按以下方式引用：
1参考文献的借鉴是做学术的第一步骤，引用参考文献是必然的。任何思想结论成果，都离不开前人的知识经验积累，不引用参考文献那就是典型的天马行空了，不具有可研究性和学术价值，所以参考文献是必要的，没有参考文献成不了论文。参考文献引用要注意格式。
2、引用参考文献，不是抄袭别人的成果。引用是说明你的思想或者你的论文启发，出处在哪里。一般情况下，引用他人的观点，尽量用自己的语言表达出来。
3、引用参考文献，可以在作者的立意上继续深挖，但是不要偏离作者的中心意思。引用还是要尊重原创作者，以事实为主体，可以有深入发展，也可以弥补原作者的不足和缺陷，但是不能扭曲事实。
4、参考文献引用源一般是百度学术查和知网查，可以直接找到相关文献，选择引用就可以。重点是找到最初的文献来源，也就是最早的最权威的出处，引用专业来源。
5、引用参考文献，不是为了文章格式必须要这个而去完成任务，找文献凑上，而是根据自己的论点找文献辅助。
一、参考文献著录格式1 、期刊作者．题名[J]．刊名，出版年，卷(期)∶起止页码2、专著作者．书名[M]．版本(第一版不著录)．出版地∶出版者，出版年∶起止页码3、论文集作者．题名〔C〕．编者．论文集名，出版地∶出版者，出版年∶起止页码4 、学位论文作者．题名〔D〕．保存地点．保存单位．年份5 、专利文献题名〔P〕．国别．专利文献种类．专利号．出版日期6、 标准编号．标准名称〔S〕7、 报纸作者．题名〔N〕．报纸名．出版日期(版次)8 、报告作者．题名〔R〕．保存地点．年份9 、电子文献作者．题名〔电子文献及载体类型标识〕．文献出处，日期二、文献类型及其标识1、根据GB3469 规定，各类常用文献标识如下：①期刊〔J〕②专著〔M〕③论文集〔C〕④学位论文〔D〕⑤专利〔P〕⑥标准〔S〕⑦报纸〔N〕⑧技术报告〔R〕2、电子文献载体类型用双字母标识，具体如下：①磁带〔MT〕②磁盘〔DK〕③光盘〔CD〕④联机网络〔OL〕3、电子文献载体类型的参考文献类型标识方法为：〔文献类型标识/载体类型标识〕。例如：①联机网上数据库〔DB/OL〕②磁带数据库〔DB/MT〕③光盘图书〔M/CD〕④磁盘软件〔CP/DK〕⑤网上期刊〔J/OL〕⑥网上电子公告〔EB/OL〕三、举例1、期刊论文〔1〕周庆荣，张泽廷，朱美文，等．固体溶质在含夹带剂超临界流体中的溶解度〔J〕．化工学报，1995(3)：317—323〔2〕Dobbs J M, Wong J M. Modification of supercritical fluid phasebehavior using polor coselvent〔J〕. Ind Eng Chem Res, 1987,26:56〔3〕刘仲能，金文清.合成医药中间体4-甲基咪唑的研究〔J〕.精细化工，2002(2)：103-105〔4〕 Mesquita A C, Mori M N, Vieira J M, et al ． Vinyl acetate polymerization by ionizing radiation〔J〕．Radiation Physics and Chemistry,2002, 63:4652、专著〔1〕蒋挺大．亮聚糖〔M〕．北京：化学工业出版社，2001．127〔2〕Kortun G． Reflectance Spectroscopy〔M〕． New York: Spring-Verlag,19693、论文集〔1〕郭宏，王熊，刘宗林．膜分离技术在大豆分离蛋白生产中综合利用的研究〔C〕．//余立新．第三届全国膜和膜过程学术报告会议论文集．北京：高教出版社，1999．421-425〔2〕Eiben A E, vander Hauw J K．Solving 3-SAT with adaptive genetic algorithms 〔C〕．//Proc 4th IEEE Conf Evolutionary Computation．Piscataway: IEEE Press, 1997．81-864、学位论文〔1〕陈金梅．氟石膏生产早强快硬水泥的试验研究（D）．西安：西安建筑科学大学，2000〔 2 〕 Chrisstoffels L A J ． Carrier-facilitated transport as a mechanistic tool in supramolecular chemistry〔D〕．The Netherland：Twente University．19885、专利文献〔1〕Hasegawa, Toshiyuki, Yoshida,et al．Paper Coating composition〔P〕．EP 0634524．1995-01-18〔 2 〕 仲前昌夫， 佐藤寿昭． 感光性树脂〔 P 〕． 日本，特开平09-26667．1997-01-28〔3〕Yamaguchi K, Hayashi A．Plant growth promotor and productionthereof 〔P〕．Jpn, Jp1290606．1999-11-22〔4〕厦门大学．二烷氨基乙醇羧酸酯的制备方法〔P〕．中国发明专利，CN1073429．1993-06-236、技术标准文献〔1〕ISO 1210-1982，塑料——小试样接触火焰法测定塑料燃烧性〔S〕〔2〕GB 2410-80，透明塑料透光率及雾度实验方法〔S〕7、报纸〔1〕陈志平．减灾设计研究新动态〔N〕．科技日报，1997-12-12(5)8、报告〔1〕中国机械工程学会．密相气力输送技术〔R〕．北京：19969、电子文献〔1〕万锦柔．中国大学学报论文文摘(1983-1993)〔DB/CD〕．北京：中国百科全书出版社，1996
(1) 参考文献的著录应执行GB7714-87《文后参考文献著录规则》及《 中国学术期刊（光盘版）检索与评价数据规范》规定，采用顺序编码制，在引文中引用文献出现的先后以阿拉伯数字连续编码，序号置于方括号内。一种文献在同一文中反复引用者，用同一序号标示，需要表明引文出处的，可在序号后加圆括号著名页码或章、节、篇名，采用小于正文的字号编排。 (2)文后参考文献的著录项目要齐全，其排列顺序以在正文中出现的先后为准；参考文献列表时应以“参考文献：”（左顶格）或“[参考文献]”（居中）作为标识；序号左顶格，用阿拉伯数字加方括号标示；每一条目的最后均以实心点结束。 (3) 参考文献类型及文献类型，根据GB3469-83《文献类型与文献载体代码》规定，以单字母方式标识： (4)关于参考文献中的起始页码，请在正文内的引文后以“（P+起止页码）”标注。 ▲专著(M)；论文集（C）；报纸文章（N）；期刊文章（J）学位论文（D）；报告（R）；标准（S）专利（P） A．专著、论文集、学位论文、报告 [序号]主要责任者．文献题名[文献类型标识]．出版地：出版者，出版年． [1] 周振甫．周易译注[M]．北京:中华书局．1985． [2] 陈送．五四前后东西方文化问题论战文选[C]．北京:中国社会科学出版社,1985． [3] 陈桐生．中国史官文化与《史记》[D]．西安:陕西师范大学文学研究所,1992年． [4] 白永秀,刘敢,任保平．西安金融、人才、技术三大要素市场培育与发展研究[R]．西安:陕西师范大学西北经济研究中心,1998． b．期刊文章 [序号]主要责任者．文献题名[J]．刊名，年，卷(期)． [5] 何龄修．读顾城《南明史》[J]．中国史研究，1998(3)． c．论文集中的析出文献 [序号]析出文献主要责任者．析出文献题名 [A]．原文献主要责任者(任选)． 原文献题名[C]．出版地：出版者，出版年． [6] 瞿秋白．现代文明的问题与社会主义[A]．罗荣渠．从西化到现代化[C]．北京：北京大学出版社，1990． d．报纸文章 [序号]主要责任者．文献题名[N]．报纸名，出版日期(版次)． [7] 谢希德．创造学习的新思路 [N]．人民日报，1998-12-25(10)． e．国际、国家标准 [序号]标准编号，标准名称[S]．
引用硕士论文应按照参考文献中硕士论文的格式进行标注。
根据国家标准：GB/T 7714-2015的规定，参考文献引用时硕士论文的格式为：[序号]作者. 题(篇)名[C]. 出版地：出版社，出版年.
例如：
[1]张筑生. 微分半动力系统的不变集[D]. 北京：北京大学数学系数学研究所，1983.
[2]李现名.化学反应中和热的测定研究[D]. 南京：南京工业大学，2008.
扩展资料
参考文献类型及文献类型，根据GB3469-83《文献类型与文献载体代码》规定，以单字母方式标识：
1、专著M ； 报纸N ；期刊J ；专利文献P；汇编G ；古籍O；技术标准S ；
2、学位论文D ；科技报告R；参考工具K ；检索工具W；档案B ；录音带A ；
3、图表Q；唱片L；产品样本X；录相带V；会议录C；中译文T；
4、乐谱I； 电影片Y；手稿H；微缩胶卷U ；幻灯片Z；微缩平片F；其他E。
参考资料来源：百度百科-参考文献
一般性的工程硕士论文大约是3000元左右。高质量的论文大约是5000元左右。如果还提供论文后的所有服务(例如，论点答辩、答辩问题准备、疑问点预案等等)得要再加3000元左右。
研究生论文多少钱一篇，我觉得研究生的论文一般的情况都是1000-2000块钱之间吧。
你好，如果是研究生论文的话，这个一般都是要个500多块钱左右的呢
研究生论文多少钱？研究生写论文是在研究生毕业的时候，要自己都要写论文的论文部分多少钱一斤的部分多少钱研究生的论文是没有价值价钱的，是无价之宝
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是从你字数类别定的 大概3-6月
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核心期刊都有审稿费，不过你没有毕业的话导师会出的，因为他是第二作者。
1 序言部分要概括、总结和分析他人的工作,还要论述自己的观点.2 硕士论文要尽可能多地利用图形、表格、公式、数据表达意思,说明原理、方案等,有助于读者理解内容.3 论文在评论他人的研究工作时,一定要客观,避免引起纠纷.特别是谈论其不足和缺点时,一定要慎重,没有把握时,且不可凭感觉或印象随意发表评论.4 参考文献中列出的文献,应尽可能地标注在论文中.一方面尊重他人成果,另一方面可反映作者阅读的文献丰富,理论有根据.有的参考文献可能是间接引用,就不一定标注出来.注意参考文献尽量选用最新发表的文章和最新出版的著作.有的研究生不注意这个问题,选用的参考文献很多是几十年前的文章和著作.科学技术发展日新月异,应该随时掌握和了解最新的知识.不少科学家的习惯是,看论文时先看参考文献,如果参考文献太陈旧,说明作者掌握和参考的知识不是最新的,就可能怀疑论文研究内容是否新颖.所以,参考文献在一定程度上反映了作者知识水平的新旧程度,硕士论文要注意参考文献的写法.5 一般对硕士论文的创新性没有特别的要求,但特点总应该有的,即使利用现成的方法、原理、工艺解决了生产或研究中的某个问题,也算有实用的特点.作者应尽力将研究工作的特点或创新点传达给读者,有的研究生为了显示论文的重要性,也不管是不是特点和创新点,列出一大串的特点和创新点,而有的根本不是特点和创新点.实际上,作为硕士论文,只要选题有一定的意义和工作量,作者能够独立完成,没有错误,有特点,就符合基本要求,创新点或特点有2~3个就相当不错了.所以,作者不要刻意去寻找那么多的特点和创新点,真正的创新点哪怕有一个也是可以的,关键是作者一定要弄清楚真正的特点和创新点.6 硕士学位论文一般控制在3~5万字,不易过长或过短.正文写好后,还要写好以下六个方面:(1)论文摘要.要以十分简练的语言概括论文的精华,不要简单浓缩全文,更不可三言两语草草了事.摘要是论文的"窗口",一定要认真对待,字斟句酌.摘要最好是在全文完成以后再写,这样可以概括得更准确一些.外文摘要现在大都搞得比较马虎,这里有外文水平的问题,但主要是不认真.写外文摘要时最好不由中文摘要直接翻译,因为中、外文的写作习惯是不同的,直译往往效果较差,应当摆脱中文的束缚直接用外文写作.篇幅还可以稍长一些.(2)关键词.要精选能反映本文主要特点的单词或词组.词组应简明通用,约定俗成,不要生编乱造.词组不宜过多,一般以3~4个为宜.(3)引言.引言的内容是要提供该论文的研究背景,包括研究的意义、历史和现状,由此引出写作论文的目的.一般在一千字左右.(4)注释.注释要求准确、统一、标准化.引证一定要核对原文,特别是经典著作,有新版本的就不能引用老版本.格式要按照新闻出版署的规范要求进行统一.(5)参考文献.参考文献目录不规范也是个通病.要注意的是,只能列出自己读过的文献,不能列出自己没有读过的文献;只能列出和本文有关的文献,不能列出不相干的文献;文献目录编排一定要分类,分类的参考系可以自己酌情而定.参考文献目录也是判断一个学生论文质量的"窗口".(6)后记.这也是论文中必须有的内容.对自己论文的写作过程作些说明是必要的,对曾经支持和帮助过自己写作的人,特别是对自己的授课教师、论文的指导教师,表示感谢也是合乎情理的.但是一定要注意分寸,溢美之词太多是不必要的,如果把一些不大相干、无关紧要的东西也写了上去,是不合适的.7 论文的写作过程,一般要经过大纲、初稿、定稿几个阶段.即使是有写作经验的学生,往往也要精心修改, 数易其稿,才能写出一篇质量较高的论文.论文一定要由导师审定后方可打印.写作时要注意不能前松后紧,草率收兵.一篇合格的学位论文,一般地说,在内容上要具有三"感",即理论感、现实感、历史感.就是说,一定要有理论的深度,要有历史的根底,要回答现实提出的问题.在逻辑上,要具有整体性、规范性、朴实性.就是说,体系要严密,表述要规范,包括印制成册过程中的校对,都要一丝不苟;文章要朴素无华,不要哗众取宠,更不要弄些故意让人读不懂的东西.(学术堂提供更多论文知识)
(一)题名(Title,Topic)题名又称题目或标题。题名是以最恰当、最简明的词语反映论文中最重要的特定内容的逻辑组合。论文题目是一篇论文给出的涉及论文范围与水平的第一个重要信息，也是必须考虑到有助于选定关键词不达意和编制题录、索引等二次文献可以提供检索的特定实用信息。 论文题目十分重要，必须用心斟酌选定。有人描述其重要性，用了下面的一句话：“论文题目是文章的一半”。 对论文题目的要求是：准确得体：简短精炼：外延和内涵恰如其分：醒目。(二)作者姓名和单位(Author and department)这一项属于论文署名问题。署名一是为了表明文责自负，二是记录作用的劳动成果，三是便于读者与作者的联系及文献检索(作者索引)。大致分为二种情形，即：单个作者论文和多作者论文。后者按署名顺序列为第一作者、第二作者……。重要的是坚持实事求是的态度，对研究工作与论文撰写实际贡献最大的列为第一作者，贡献次之的，列为第二作者，余类推。注明作者所在单位同样是为了便于读者与作者的联系。(三)摘要(Abstract)论文一般应有摘要，有些为了国际交流，还有外文(多用英文)摘要。它是论文内容不加注释和评论的简短陈述。其他用是不阅读论文全文即能获得必要的信息。 摘要应包含以下内容：①从事这一研究的目的和重要性;②研究的主要内容，指明完成了哪些工作;③获得的基本结论和研究成果，突出论文的新见解;④结论或结果的意义。(四)关键词(Key words)关键词属于主题词中的一类。主题词除关键词外，还包含有单元词、标题词的叙词。主题词是用来描述文献资料主题和给出检索文献资料的一种新型的情报检索语言词汇，正是由于它的出现和发展，才使得情报检索计算机化(计算机检索)成为可能。 主题词是指以概念的特性关系来区分事物，用自然语言来表达，并且具有组配功能，用以准确显示词与词之间的语义概念关系的动态性的词或词组。
工程管理硕士论文
引导语：对于一个工程项目来说，学会对工程的整体管控是非常重要的，接下来是我为你带来收集整理的工程管理硕士论文范文，欢迎阅读！
摘要 :胜利油田工程投资项目多，利用ERP系统进行投资管控已成为投资管理部门的重要手段。在本文中，通过ERP系统持续深化应用，强化对工程项目投资管控，取得了显著效果，给同类企业提供借鉴意义。
关键词 ：ERP；工程项目；投资管控
一、ERP系统对工程项目投资管控的方式
胜利油田工程项目按其生命周期一般可划分为项目决策阶段、设计阶段、实施阶段、投产及评估阶段，ERP系统项目管理模块从设计阶段便开始进行投资管控，直到项目投产及评估阶段结束，其管控方式主要有以下几种：
（一）设置唯一项目编码，实现工程项目统一管控
胜利油田ERP系统投资项目管理模块将每一个工程投资项目都进行编码，该编码是在油田统一的编码规则下设置，系统自动生成，附带项目属性、项目开始年度以及本年度项目顺序号，具有唯一性，不可重复、不可修改。在此基础上，油田投资管理部门与ERP支持中心共同开发了集合所有工程分类和工程项目的预算释放及管控界面，将本年度所有实施项目统一展示，由油田投资管理部门根据项目效益、实施进度、年度投资总盘等情况进行综合平衡，完成每个工程项目投资的预算释放、投资进度管控等工作，预算释放后系统自动锁定预算，确保所有项目统一管控。
（二）推行标准化模板，确保项目内子工程投资受控
按照油气田项目特点，ERP系统将工程项目分解为不同层级的更易管理的单元，即WBS层级，一般划分为4个层级：工程项目为一级层级；之下划分为钻井工程、采油工程、地面工程3个二级层级；二级划下分三级层级，三级下划分四级等级。如采油工程划分为某一口单井三级层级，再细分为这口单井的井下作业服务、射孔服务、采油管杆泵物资供应等四级层级。每个WBS层级均设置统一的序号，便于预算分配及汇总。每个WBS层级可视作子工程，在设计阶段将每一个WBS层级的预算确定下来，由投资管理部门管控并锁定，在实施阶段，将实际发生投资录入系统，并与该层级的控制投资进行实时对比，并设置预警（一般在达到控制投资的80%时）、报警（一般在达到控制投资的100%时）功能，原则上不允许超出控制投资，确需超出的，须在预警之前即开展相关分析工作，向投资管理部门履行审批手续。
（三）严格权限管理，强化项目预算多重核查
通过标准的'流程设计，从项目的创建开始，直至项目结算、关闭的各个环节，划分多个细分控制点，每个控制点均设置严格的系统权限管理，归纳起来有“四大控制”，一是纵向预算控制，油田投资管理部门与下属单位投资管理部门之间的项目预算控制。二是横向审核控制，油田下属单位各部门在项目创建、WBS层级分解、子工程预算下达、竣工结算、项目关闭等阶段，均设立审核点，所有审核点的操作都必须经过审核批准，未经批准的无法进行下一步操作。三是投资计划控制，主要体现在外围系统审核上，如工程服务合同由合同管理部门在合同管理系统中进行审批，其签订额不得超过投资管理部门在ERP系统所批准下达的预算（ERP系统通过接口方式对合同管理系统进行管控），每一笔合同进度款也必须在合同规定条款下经过投资管理部门的审核确认。四是结算过程控制，主要是财务人员在进行项目结算时要求所有结算必须归集到相应的WBS层级，总额不超该WBS设计预算，当结算数超预算时，系统报警，需履行相关预算调整审批手续。
（四）开发实时查询功能，方便不同岗位人员查询、复核及监督
胜利油田ERP系统经过十余年的持续深化应用，相继开发出了一系列完善的报表体系及其查询界面。一是通过项目编码查询单个项目预算、结算、转资、形象进度等数据，实时了解该项目运行情况。二是通过项目间、单位间穿透查询，可定向查询指定的工程分类、行政单位所有项目的预算、结算等汇总查询，方便不同业务人员的查询需求。三是定制了胜利油田特色查询分析界面，在该界面中整合工程投资项目各阶段业务所有数据，可按年度、分单位、专业及岗位、项目决策级别等分类穿透查询和同比分析，提升了统计分析效率，将原来需1天时间完成的多维度统计工作，变为实时查询分析。四是针对合同、工程、物资、财务、审计等不同部门的工作需求也分别定制了十余套报表。这些报表在为相关人员提供快速数据查询、汇总、分析的同时，也提供相互数据校验、监督的功能，进一步提高系统数据准确性。
二、ERP系统投资管控效果分析
ERP系统作为投资管理部门对油田投资全面管控的一种信息系统，在深化应用过程中逐步将投资管理相关制度融入其中，在规范项目运行、项目投资管控、提高项目运行效率等方面都发挥了重要作用，主要体现在：
（一）油田投资总盘全面管控，杜绝不规范项目产生
所有工程项目须先由油田投资管理部门下达投资计划，下属单位投资管理部门在ERP系统创建项目，再由油田投资管理部门释放项目预算，不规范项目在ERP系统中也得不到批准。因此，投资管理部门对油田投资总盘实现了实时有效管控，根据效益情况对于投资优化调整的职能更加顺畅，近几年胜利油田的投资有效利用率均在98%以上。
（二）工程项目投资得到有效管控，项目效益进一步提升
ERP系统通过对项目预算以及WBS层级预算的严格控制，以及对于结算额的预警、报警功能，倒逼项目实施部门对项目方案进行不断优化，投资优化控制观念进一步强化。近几年油田工程项目投资结余率均在5%左右，油田投资效益得到提升。
（三）系统数据实时展示，运行效率提高
通过一系列报表开发，工程项目所有运行数据均可实时展示，无论是工程形象进度、工程物资运行情况、结算情况等均方便查询、实时共享，且不同项目间、不同单位间可进行对比分析，促使项目实施部门提高效率，投资时效性进一步提高。总之，胜利油田通过ERP系统投资项目管理模块的持续深化应用，强化对工程项目投资管控力度，提高了投资项目管理水平，降低了投资风险，投资效益得到显著提升。
参考文献：
[1]卢成勇.ERP系统PS模块在油田企业投资管理中的作用[J].《中国电子商务》,2013(8).
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基因工程制药------浅谈摘要： 主要介绍基因工程的概念、基因工程技术开发药物的一般过程及基因工程药物，同时探讨了今后利用基因工程技术进行药物开发、研究的发展方向。正文：1 基因工程概述所谓的基因工程是指在体外将核酸分子插入病毒、质粒或其它载体分子，构成遗传物质的新组合，并使之参入到原先没有这类分子的寄主细胞内，而能持续稳定地繁殖。基因工程的第一个重要特征是跨越天然物种屏障的能力，即把来自任何一种生物的基因放置在与其毫无亲缘关系的新寄主生物细胞中去的能力。这表明人们有可能按照主观愿望创造出自然界中不存在的新物种。第二个特征是，它强调了一种确定的DNA小片段在新寄主细胞中进行扩增的事实．才能制备到大是纯化的DNA片断，从而拓宽了分子生物学的领域，使之在生物制药领域有巨大的应用。基因工程自从20世纪70年代初期问世以来，无论是在基础理论研究领域，还是在生产实际应用方面．都已经取得了惊人的成绩。基因组核苷酸全序列的测定与分析，是基因工程技术促进基础生物学研究的一个出色范例。2001年2月12 日，由6国的科学家共同参与的国际人类基因组公布了人类基因组图谱及初步分析结果，这结果为人们提供了约3000 多个基因可用来制药，将推进基因制药产业的快速发展。由于基因克隆技术的发展，已使得基因工程技术在工业生产尤其是制药生产中发挥了重要作用。以前人们利用微生物自身生产有用的产品，如利用青霉菌生产青霉素、利用链霉菌生产链霉素等。但是从这些生物体中分离纯化这些药物，不仅成本昂贵，而且技术上也相当困难。如今将编码这些药物的基因克隆并转移到合适的生物体内进行有效的表达，就可以方便地提取到大量的有用药物。2 基因工程技术开发药物的一般过程利用基因工程技术开发一个药物，一般要经过以下几个步骤：①目的基因片断的获得：可以通过化学合成的方法来合成已知核苷酸序列的DNA片段；也可以通过从生物组织细胞中提取分离得到，对于真核生物则需要建立cDNA文库。 ②将获得的目的基因片断扩增后与适当的载体连接后，再导入适当的表达系统。③在适宜的培养条件下，使目的基因在表达系统中大量表达目的药物。④将目的药物提取、分离、纯化，然后制成相应的制剂。以上方法大部分是以微生物或组织细胞作为表达系统．通过微生物发酵或组织细胞培养来进行药物生产。近年来，通过转基因动物来进行药物生产的"生物药厂"成为目前转基因动物研究的最活跃的领域，也是基因工程制药中最富有诱人前景的行业。转基因动物制药具有生产成本低、投资周期短、表达量高、与天然产物完全一致、容易分离纯化等优势，尤其是适合于一些用量大、结构复杂的血液因子，如人血红蛋白（Hb）、人血白蛋白（HSA）、蛋白C（Protein C）等。英国的爱丁堡制药公司通过转基因羊生产α1-抗胰蛋白酶（α1-AAT）用于治疗肺气肿，每升羊奶中产16g AAT，占奶蛋白含量的 30%，估计每只泌乳期母羊可产70g AAT。另外，转基因植物制药比转基因动物制药更为安全，因为后者有可能污染人类的病原体。目前，已经开发出许多转基因植物药物，例如脑啡肽、α-干扰素和人血清蛋白，以及两种最昂贵的药物即葡萄糖脑苷脂酶和粒细胞-巨噬细胞群集落因子等。3 基因工程药物基因工程药物自20世纪70年代末期以来，有了飞跃的发展。1978年首次通过大肠杆菌生产由人工合成基因表达的人脑激素和人胰岛素，1980年美国联邦最高法院裁定微生物基因工程可以获得专利．1982年第一个由基因工程菌生产的药物--胰岛素．在美国和英国获准使用以来，各种基因工程药物犹如雨后春笋，得到了蓬勃发展。我国的医药技术的研发和产业化也取得了长足的进展。（1） 抗生素类 传统的抗生素生产，主要利用化学合成或微生物发酵来获得，其生产过程中菌种的表达水平比较低，生产成本比较高，而且在使用过程中容易产生耐药菌群。而利用基因工程技术可以对生产菌种进行基因改造，得到表达水平高、产品目的性强的菌株，如大肠杆菌生产青霉素酞胺酶。德国一个科研小组对生产半合成青霉素的材料6APA．用基因工程来增强大肠杆菌的青霉素酰胺酶活性。将大肠杆菌的基因 PBR322的质粒克隆化所形成的菌株，其酶活力比原株提高 50倍．从而提高6APA生产能力。我国王以光利用基因重组技术对螺旋霉素产生菌进行改造，增强了丙酰基转移酶的基因在螺旋霉素产生菌中的表达，并提高了丙酰螺旋霉素的产量。（2） 活性多肽类 在人体中存在一系列含量较低，但生理活性很高，而且在人体代谢过程中起着重要的调节作用的活性多肽类物质如激素等，这些物质在临床上可以作为药物来治疗相应的因此类物质失衡而造成的疾病。此类药物的制剂多来源于各种动物的脏器，生产方法复杂，成本高，个别产品还必须从动物的尸体中进行提取，无法进行大规模工业化生产，自基因工程技术问世以来，通过基因重组技术，可以由微生动进行生产，这是基因工程技术的最大成就之一，以下是这类药物中比较典型的两个。胰岛素： Genentech公司在1978年，由Goeddel等学者应用基因重组技术开发出使用大肠杆菌生产人胰岛素。随着基因工程技术的不断发展，生产胰岛素的工艺和技术也不断得到完善，在临床上已经完全取代了由动物脏器提取得到的产品。目前，我国新疆转基因羊已能够成功表达人胰岛素原，为胰岛素的生产开发了新途径。生长素： 人类生长素临床用于治疗侏儒症和肌肉萎缩症．传统制造方法是由人脑下垂体抽提精制而得，其原料来源困难，产量受到极大限制。全世界侏儒症患者中仅有1%可以得到治疗，原因是生长素价格极其昂贵，达每克5000美元。1979年Genentech公司由Goeddel等学者应用基因重组技术首先开发出使用大肠杆菌生产人生长素．近年来还开发了以酵母菌来生产生长素，其产量可达到×106～× 106分子/细胞。目前，我国基因工程人生长素已研制成功，并投入市场和用于临床使用。除上述药物外，运用基因工程技术生产的这类药物还有神经生长因子（PDGH）、人基底成纤维细胞生长因子、绒毛膜促性腺激素等。（3） 细胞免疫调节因子 基因工程技术用于细胞免疫调节因子的产品较多，临床广泛应用于抗肿瘤和免疫调节等。近年来，由于基因重组和细胞融合两大技术的进步，加上高压液相层析技术、氨基酸序列分拆装置以及蛋白质的精制和解析技术的改进，使一些调节细胞免疫活性物质的研究和开发得到快速发展，如干扰素（INF）、白介素（IL）、集落刺激因子（CSF）和肿瘤坏死因子（TNF）等。干扰素是其中研究较为广泛，技术比较成熟，产业化较早的一个产品。第一代干扰素是从血液中进行提取而得到。据芬兰的K Canted报道，处理23000L血液，所得纯度1%以下的干扰素不足100mg．所以产量很低。而且由于血源质量不能保证，可能造成血源性传染病的传播。第二代干扰素是采用基因工程技术进行生产的，其生产水平可达250000分子/细胞，每升可含亿单位，成本显著下降，产品纯度很高，含量可达90%以上。目前，已经商品化的基因工程干扰素有α、 β、γ三种，而且生产技术也在不断完善。俄罗斯科学家构建了以假单胞菌为载体的表达系统来生产基因工程干扰素．与传统的大肠杆菌表达系统相比其培养周期短，细胞易于破碎便于提取。随着基因重组技术的不断发展，一些研究人员对干扰素基因进行改造，构建靶向干扰素基因及表达载体。夏小兵等利用限制性内切酶分别从含有抗乙型肝炎S抗原（HbSAg）人源单链抗体与人干扰素α质粒中切出目的基因，连接到 pET22b质粒中，构建成单链抗体靶向干扰素表达载体，在大肠杆菌中表达成功。（4） 疫苗传统的疫苗是病源微生物的减毒或灭活物质，但这些疫苗都不理想，有可能发生回复突变，恢复毒性；或者因为灭活不适当引起疾病流行。利用基因工程技术生产的新型疫苗，可以克服传统疫苗价格昂贵、安全性能差等缺点，能为目前尚无有效疫苗的某些特殊疾病如艾滋病，提供有效的治疗手段。第一个商品化的基因工程疫苗是抗人乙型肝炎病毒（HBV）的疫苗。我国大约有10% 的人口受到HBV的侵害， HBV的感染通常还与特殊的肝癌（HCC）有着密切的关系，每年全世界死于HCC的病人有30万左右。HBV具有高度的寄主专一性，只能感染人类和黑猩猩，这意味着只能从肝炎患者身上才能获得有限数量的病毒，供做疫苗使用，而且从患者血液中提取制备的疫苗，还有传染艾滋病的可能。利用基因工程技术生产的抗HBV疫苗克服了传统疫苗的缺点，质量和安全性高，用量极少，一般剂量为10mg以下，接种3次，为普通药品用量的千分之一。1982年P Valenzuela等人将S基因（HBV表面抗原基因）的一个片段克隆在一种载体上，结果在酵母中合成出来HBV表面抗原（HbsAg）颗粒，其产量达25 μg/L，酵母表达系统现在已经能够大规模生产供给人类使用的重组肝炎疫苗。大约20年前，人们发现"裸露"DNA注入体内能够诱发免疫反应，科学家们进行了大量研究，开发出了新型的核酸疫苗。所谓核酸疫苗，是指将编码某种抗原蛋白的外源基因（DNA或RNA）直接转移到动物体内，通过宿主表达系统合成抗原蛋白，诱导宿主对该抗原蛋白产生免疫应答，以达到预防和治疗疾病的目的。现已开发出多种核酸疫苗，例如：流感核酸疫苗、艾滋病疫苗、狂犬病疫苗、结核病疫苗和乙型肝炎疫苗和戊肝疫苗等。（5） 基因治疗制品 基因治疗在1990年开始进行实验， 1993年美国FDA给人类基因治疗下的定义为："基于对活性细胞遗传物质的改变而进行的医学治疗，这种改变可以在活体外进行，然后应用于人体，或者直接在人体内进行"。因此，基因治疗存在两种方式，即间接体内法和体内法。间接体内法主要是通过在体外进行基因转移，筛选可表达外源基因的细胞，然后再转移到体内；体内法则是直接在体内改变与修复遗传物质。随着分子生物学、基因重组技术的发展，有关目的基因的获得方法已趋成熟，但是，目的基因的转移传递系统、目的基因的表达调控以及疗效和安全性还需进一步研究证实。目前，基因转移系统主要是两类：一类是由病毒介导的基因转移系统，主要包括逆转录病毒（Rt）、腺病毒（Ad）、疱疹病毒（HSV）和腺病毒相关病毒（AAV）载体等。Nnldini等开发出一种基于HIV的重组Rt载体，不需要辅助细胞，能广泛感染各种非分裂细胞，同时保留了能整合在宿主染色体上的特点。世界上第一例基因治疗所采用的载体即是Rt载体，治疗腺苷酸脱羧酶缺乏所致的严重联合免疫缺乏症（ADA-SCID）。另外一类是非病毒介导的基因转移系统，包括脂质体、分子偶联载体、基因枪和裸DNA等。另外，反义核苷酸技术也应用于基因治疗，尤其在抗乙肝病毒的基因治疗方面，包括反义DNA、反义RNA和核酶 RNA等。2001年，Robaczewska等首次通过静脉给予反义 DNA，选择性抑制北京鸭HBV在鸭肝脏中的复制和表达，证明了反义DNA在动物实验中的有效性。美国Viagene公司研究出一种被称为"艾滋病毒免疫制剂"，该药为一种鼠逆病毒与核心蛋白编码的基因序列和HIV表面抗原RNA结合产物，在小鼠和灵长类动物试验中确定该药能诱导出强的 HIV-特异性杀伤细胞。4 结束语基因工程技术使药品开发发生了根本性的转变。传统的药品开发方式是在大量的化学合成物质和微生物代谢产物中进行随机筛选，得到其中的有效成分作为新的药物。采用基因工程技术开发新药，是通过对致病机理的研究，找到那些可用于治疗目的的有效成分以及其编码基因，经过基因重组将其转入适当的载体，大量表达其有效成分作为治疗药物。同时，基因工程技术给药品生产技术带来了革命性变化。过去一些生产困难的产品，如激素、酶、抗体等一些生物活性物质，通过基因工程手段可以高质量、高收率地付诸生产，同时生产成本也大幅度降低，提高了患者的用药水平和生活质量。基因工程技术在传统医药不能有效治疗的一些疾病，如癌症、艾滋病、遗传病等的诊断、治疗和预防等方面提供了有效的新手段，并取得了一些重大的突破。如发现了致癌基因，可使癌症的早期诊断和治疗药物的开发成为可能。随着分子生物学和基因重组技术的发展，我们相信这些严重危害人类生命的疾病，在不久的将来会得到有效的预防和治疗。
我国生物工程发展的现状与展望摘要我国在年代初即将生物工程确定为科技和产业发展的重要领域, 制订了发展的战略目标和具体规划组织了攻关队伍, 采取各种措施, 使我国生物工程的发展走上了有计划的迅速发展道路取得了许多重大的突破性进展为在本世纪末形成一定规模的生物工程新产业, 跻身世界生物工程先进行列, 打下了坚实基拙。关键词基本情况战略目标重大进展我国生物工程发展的基本情况鉴于生物工程的发展直接关系到医药卫生、轻工、食品、农牧渔业以及能源、化工、冶金、等国民经济的各个行业, 涉及有关传统产业的改造和新兴产业的建立, 我国在年代后期,即把生物工程确定为科技与产业发展的重要领域, 并积极研究对策, 抓住机遇, 迎接挑战。研究对策层层制定规划年方毅同志代表国务院和国家科委召开了第一次基因工程座谈会。翌年, 又召开了第二次座谈会, 并在全国科技大会上将生物工程的核心一基因工程, 列为重点发展的八大新兴技术领域和带头学科之一。年全国分子生物学与基因工程会议在北戴河召开, 会上不仅进行了学术交流, 而且还讨论了今后发展规划。年, 国家科委又决定把基因工程列入“ 六五” 年期间的科技攻关计划,主要课题包括乙型肝炎病毒表面抗原, 口蹄疫病毒表面抗原、人一干扰素以及植物基因工程等。年国家科技攻关项目中又增补了酶工程及发酵工程。年国务院领导亲自动员并组织了近百位专家和有关部委领导, 组成了“ 全国科学技术发展长远规划工作组” , 根据国际高科技发展情况, 结合我国国情, 历时年制订出科技与经济同步发展的长远规划一。 国务院组织了“ 迎接世界新技术革命的挑战对策讨论会” , 制订了发展我国生物工程的对策。年国务院又组织了有关生物工程发展政策的讨论会, 制订和发表了“ 我国生物技术发展政策” 的白皮书和蓝皮书。在我国科技发展的“ 七五” 一一年、“ 又五” 一年以及目前正在制订的“ 九五” 一。。年规划中, 均把生物工程列为重点发展领域, 拨专款予以支持。特别是年, 国务院根据小平同志的批示亲自领导并组织了全国多位专家, 制订了立足于本世纪末下世纪初参与国际竞争的高科技规划即“ ”计划, 生物工程列为七项高技术之首位, 极大地鼓舞了全国的生物科学工作者。
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9、 论味精工自动化生产艺 选择这个交叉性的，比较方便，当然你要懂具体工艺，看书哈。搜索下最新的自控设计产品、方案，抄就可以了；答辩时搞发酵的老师不一定懂。