覆盆子化学成分研究

　　覆盆子(RubusChingiiHz)为蓄薇科（Rosaceae)悬钩子属植物，覆盆子因叶裂如掌也称掌叶覆盆子，又因其分布区仅在华东地区故为华东覆盆子。《中华人民共和国药典》（2005年)一部收载的覆盆子品种是蔷薇科植物华东覆盆子RihuschingiiHu的果实，果味甜，可食，制糖及酿酒喝，入药则具补肝肾、固精、缩尿的功效，临床上用来治疗肾虚遗尿，小便频数，阳痿早泄，遗精滑精等症[1。

　　对悬钩子属化学成分的系统研宄始于70年代末80年代初，国内外化学工作者己对二十余种本属植物的化学成分进行了研宄，从中分得五十多个新化合物，多为三萜（苷）类和二萜(苷）类化合物，并认为二萜及三萜类化合物是旋钩子属植物中的特征性成分。但对覆盆子化学成分的研宄还存在许多不足之处，因此我们对其进行了系统分离，得到4个化合物，分别(3-谷甾醇（1)、胡萝卜苷（1丨）、椴树苷（111)、山奈酚-3中-D(ilia)-glc(IV)其中化合物V为首次从该种植物中发现。

　　1仪器和材料NMR用BrukerAM-400和BiukerDRX-500以TMS为内标;MS用VGAutospec-3000;紫外用UV757CRT紫外光谱测定仪;熔点仪为XRC-1型显微镜熔点仪，温度计未校正，四川大学科仪厂出品；薄层硅胶及柱色谱硅胶均由青岛海洋化工厂生产。其余试剂均为分析纯。

　　覆盆子样品2003年购于安徽省安国市市场，由安徽中医学院中药教研室方成武副教授鉴定。

　　2提取和分离

　　48kg覆盆子粉碎后，80%乙醇提取，回收乙醇无醇味，过滤。滤渣用水溶解制成混悬液，乙酸乙酷萃取，得浸膏15g，硅胶拌样干法上柱分离，依次用CHCl3-MeOH梯度洗脱，收集洗脱液，每100ml为一个流份，在CHCVMeOH(8:1)部分，流份5浓缩放置，析出白色针状结晶，重结晶后得化合物1(35mg)，在GHQ3-MeOH(5:1)部分，流份17经反复硅胶柱层析处理得化合物li(20mg);滤液上D101树脂柱，依次用H2O和不同浓度乙醇洗脱，每1000ml为一流份，在60%乙醇洗脱部分，流份293031合并浓缩，得浸膏14g.硅胶拌样干法上柱分离，依次用GHCl3-MeOH(5:1-1:1)梯度洗脱，最后纯甲醇冲洗，收集洗脱液，每100ml为一个流份，在CHOa-MeOH(5：1)洗脱部分，流份6至12合并浓缩放置，析出固体，甲醇重结晶，得化合物UK20mg)，流份26至28合并浓缩，乙酸乙酷萃取，得浸膏108g硅胶拌样干法上样分离，依次用CHO3-Me0H(20：1-1:1)梯度洗脱，最后纯甲醇冲洗，收集洗脱液，每100nl为一个流份，在CHCl3-MeOH(8:1)洗脱部分，流份111-180合并浓缩，得固体700mg.硅胶拌样干法上柱分离，用乙酸乙酷一丙酮一H2O-乙酸（5:1：0.5：02)洗脱，得化合物iV(45mg)

　　3鉴定

　　3.1化合物1无色针晶（CHCljEtOAC)，mp136~138°Qliebeimanri-Burdiard反应阳性，EI-MSm/z(%):414(81)，399(35)，396(55)，381(45)329(75)，303(64)，255(71)，213(95)，145(100)55(54)与文献报道一致[2].所以化合物1的结构确定为(3-谷甾醇。

　　3.2化合物U白色无定形粉末（甲醇)，mp285~287°C，Liebermariri-Burchard反应阳性，EI-MSm/z(%)414(M-glc)(7)396(100)，382(15)，367(5)，255(26)，213(23)，145(60)，121(46)，69(73)按常法水解，得到苷元部分和糖部分经TLC展开后，其Rf值分别与随行的卩一谷甾醇及葡萄糖标准品相一致，与文献值一致故化合物1丨结构确定为胡萝卜苷(13-sitosterot3-^)-[3-D-glucopranoside)。

　　3.3化合物HI黄色粉末（甲醇)，mp214~216°C，盐酸一镁粉和Molish反应均呈阳性，紫外光下呈黄色荧光，UVXnm：348266为典型的黄酮类化合物的紫外吸收；酸水解，通过TLC检查，与对照品对照表明有葡萄糖；順R、C-NMR与文献对照表明有山柰酚存在13'4|，'H-NMR谱中有一组AB偶合系统；7.31(1H，dJ=15.9Hz)6.11(1H，d，J=15.9Hz)2组A2B2系统；7.98(2H，dJ=8.8Hz)685(2H，dJ=8.8Hz)7.36(2H，(iJ=8.6Hz)，6.78(2H，(iJ=8.6Hz)和间位偶合系统:637(1H，dJ=1.7Hz)6.15(1H，dJ=1.7Hz)l3C-NMR谱中有组化学位移相同的信号：115.0(X2)，13Q0(X2)，130.7

(X2)和一个酯碳基信号S166.1，HSQC示拓11(1H,dJ=8〃')相关，HMBC示a5.11C1HdJ=15.(Hz)与1660(09〃')相关，7.31C1H，dJ=15.6Hz)与113.1(07〃）1660(09〃）相关，12491308，115.7160.5为苯环，E-MS中有一147碎片，与上述片断相比较多一个17单位，结合1H-NMR、I3C-NMR，进一步证明了分子内有对羟基桂皮酸的存在，286为苷元，121为A环碎片，13ONMR(DEPT)表明，该化合物中含有糖的信号冴00..74..76..70..74.1，62.9，值得注意冴00.6(5.44，1HdJ=7.3Hz)示(3-D葡萄糖。由HMBC表明，^5.44(1HdJ=7.1Hz)与133(C-3)相关，示葡萄糖与C-3位相连。在HBMC谱中可以看到1660CC-9〃)与糖的d-C亚甲基4.02(1H，dJ=12.0Hz)和426C1H，dJ=12.0Hz)相关，另夕卜，mesy谱中也显示H_1"与H_2"，《有关，因此化合物111为椴树苷。

　　以往文献中[把1301归属为C-2、6!，而把1308归属为C2〃6〃但结合2D~NMR中1H，W-COSY及HMBC,HSQG我们有理由把130.1归属为C2〃6〃130.8归属为O么6';1H-HMR、13ONMR及HMBC数据归属见表1。

　　表1化合物nKDMSOYH-NMRJBC-NMR和HMBC光谱数据

　　3.4化合物IV黄色粉末（甲醇）mp171~173°C，盐酸一镁粉和Molish反应均呈阳性，紫外光下呈黄色荧光，UVXim：348266为典型的黄酮类化合物的紫外吸收；酸水解，通过TLC检查，与对照品对照表明有葡萄糖和鼠李糖；1H-NMR,13C-NMR与化合物1对照表明有山柰酚存在，1h-NMR谱中有一组A2B2系统；7.97(2HdJ=8.7Hz)6.87(2HdJ=8.7Hz)和间位偶合系统;639(1H，dJ=1.7Hz)，6.19(1H，dJ=1.7Hz)BC-NMR(DEPT)表明，该化合物中含有糖的信号衍01.3(5.30，1HdJ=7.5Hz)741，76469.9，75.7，669和S10Q7(4.351HdJ=1.2Hz)70.3，70.671.868.2，17.7，分别属于6位取代的(3-D葡萄糖和a-L-鼠李糖，由HMBC和HSQC确定衍00.7(4.351Hd>1.2Hz)与66.9(C-6)相关，说明鼠李糖以a构型与葡萄糖C-6位相连，衍01.3(5.301HdJ=7.5Hz)，与133.2(C-3)相关，说明葡萄糖以(3构型与母核的一个季碳相连，由此可推断化合物W为：山柰酚-3-13-D(rha)-glcCV)1圧HMR、13C-NMR及HMBC数据归属见表2表2化合物W(DMSO)H-HMR、13C-NMR和HMBC光谱数据1D~NMRAtBrukerAm-40inDMSO一d62D~NMRAtBrukerDRX-500inDMSO~d6

    4讨论

　　4.1以往文献中有把C2、6,日属为1301，而把1308归属为C2〃6〃但结合2&NMR中1H」HCOSY及HMBC和HSQC，我们有理由把130.8归属为C2、6'，130.1归属为C2〃6〃。

　　4.2悬钩子属植物所含黄酮醇类化合物以槲皮素、山柰酚为主，成苷位置多在“-3”位，且单糖苷、双糖苷、三糖苷均有17]，但化合物IV在该种中尚未见报道。