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20版药典附录在中国药典里。根据查询相关公开信息第十三批《中国药典》2020年版四部通则增修订内容公示，包括26个药典附录，公示期为三个月。
《中国药典》二部的，索引方式按汉语拼音顺序排列医学教育网搜集整理和英文索引两种索引方式。根据查询相关信息显示，中华人民共和国药典二部2020年版，是2020年中国医药科技出版社出版的图书，作者是国家药典委员会。
多次引用的文献需要于每处参考文献的序号标注处，置于方括号后并作上标即可。
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参考文献是文章或著作等写作过程中参考过的文献。
书写要求：
根据《中国学术期刊（光盘版）检索与评价数据规范（试行）》和《中国高等学校社会科学学报编排规范（修订版）》的要求，很多刊物对参考文献和注释作出区分，将注释规定为“对正文中某一内容作进一步解释或补充说明的文字”，列于文末并与参考文献分列或置于当页脚地。
参考资料来源：百度百科－参考文献
医学论文的格式
医学论文写作是一项严肃、意义重大的工作、是交流经验，传播科技成果，不断提高临床诊治和科研水平的重要组成部分。下面是我整理的医学论文的格式，希望对大家有帮助！
1、论文标题：
医学论文标题应简明确切反映所写论文的内容，一般不要采用副标题，如有可能，也尽可能不使用代号。文章标题控制在20个字左右（以内）。同时，对与论文所使用的“英文题目”、“摘要”、“关键词”与“作者名拼音”，使用时中英文必须一致。
2、作者单位
作者单位应按照顺序写在文章标题下一行，在单位后面用括号注明邮政编码，然后空一格再写上论文作者及姓名，此处，投稿送排后应保证作者顺序不再改动。
3、论文摘要
所有论文的摘要（含医学论文）均采用结构式的文摘，按照目的、方法、结果、结论四要素写，字数应在300字左右。
4、论文关键词
多选用3-8个关键词，具体可参考MesH（即《医学主题词注释字须表》）中的主题词，如果MesH词表中空缺，则可使用自由词（自定义词）。
5、图表
凡是在论文文字中能表述或说明的'内容建议或尽量不使用表图，另外，对于正文、表和图3者中的数据不应重复。论文中涉及的统计表应在投稿时应在纸上绘出并附 在所投稿件中，以便审阅。表中要有表题（表的标题），图有图题（图的标题）以及各自的图标或序号。论文图标应采用三线表或王字表，表中数据应多加检查，务 必核实，准确无误，数字小数点后应最少保留一位。
对于表中需要说明的问题或注释可采用*，2个以上说明依次为**、***表示，在表的下方，加“注：……”。另外，对于图的坐标需刻度均匀，设计准确，坐 标轴上有数值，不用箭头。图表要用绘图笔、硫酸纸等绘制，做到曲线均匀、圆滑，图面清洁、图中数字与符号应在打印后植入，不可机打或打印前写入，纵横坐标 应同时注有量和单位，例如t/h、t/min。
另外，对于统计学上的处理结果应用用P<0.01、P<0.05、p>0.05表示。
6、医学名词、药物名称
论文中使用的医学名词与药物名称要注意稿件前后统一，应使用全国自然科学名词委员会公布的各科名词，不能随意缩写、更改，如果所用名词太长，文件中又多次重复使用，可在第一次使用时，在全名后加上括号并注明缩写，如：游行性脑脊髓膜炎（流脑）。
对于在论文中使用的“药物名称”则应以《中国药典》与《中国通用药名》二者为准，不可随意使用。
7、计量单位
论文中出现的计量单位需用我国法定计量单位，而标点符号和数字用法等均按要按国家标准执行。
8、标题序号
医学论文中的标题序号应全部靠左并顶格写，按照1，1.1，1.1.1，1.1.1.1依次排序。然后紧跟其后空一格写标题，仅限分4级，不可再分。在标题后再空一格写正文。对与正文内序号宜用①……②……等表示。
9、论文讨论
对于论文讨论部分，要求重点阐述论文中新的发现、得出的结果与观点，但请勿作文献综述，不可重复在讨论中表达己叙述过的内容。对于论述应联系本论文的与研究结果，并应该与其所报告的相联系，当理由充足时，则可恰如其分地提出论文的建议或设想。
例如：“本结果与文献（2）结果相符”则应写成“本结果与文献[2]结果相符”。
10、参考文献
论文中的参考文献部分为极易出错的地方，医务人员在投稿时务必引起重视。
论文中的参考文献应只限作者阅读过、引用的近期公开出版的主要文献，外文文献限定为近5年内，中文文限 为近3年内，不宜采用过早的文献内容。文献顺序应按文中首次出现的次序依次编号，在正文右上角部分用圆括号注明，如“王书中，李国坚，等（1.1~2）报 道”（（1.1~2）用上标！应网页排版特殊性，本处暂无法列出，请注意！）。未公开发表的资料和内部刊物均不列入参考文献中。
参考文件具体格式
“参考文献”4个字应另起新段，所列文献按次序另起新段，具体采用格式如下：
10.1 期刊 作者（0～3个作者应全部列出，3个以上作者只写前3个（作者之间用“，”分隔开），在作者后面加“，等。”或者是“，et cd”）。文章标题，所引用的刊名，出版年；卷（期）：起页~结束页。
10.2 书籍名称 作者·书名·版本（第一版可不写）。出版地：出版者，年。起页~结束页。
国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].版本(第一版不著录).北京:中国医药科技出版社,2010:起止页码
是写的一般格式的文件。 医学论文的基本格式和写作 ？（一）标题 ？标题的要求： ？具体和简洁的介绍：一般不超过20个字。 ？文字标题相称，准确，鲜明的标题反映的内容描述标题。 ？重点，主题鲜明突出论文，高度总结一目了然。总结论文不够，你可以添加字幕（破折号，括号或添加序列码）。 签名？（二） 意义的签名？ ？（1）一个明确的论断职责：负责他们的后 ？（2）应具备的荣誉：载入史册的科学和技术发展 ？（3）文献检索的需要：作者检索 ？（4）明确著作权：人身和财产权利 2署名权的原则 ？作者个人签名，仅限于选定的研究课题和制定研究方案，直接参与全部或部分的研究工作，以促进和参与撰写论文和负责人的内容 签名要求？ ？（1）划分成集体签名和个人签名。 ？（2）第一作者的论文题目创意的设计师，实施者，是该论文的作者。 ？多单位合写，脚注表示;（3）合写的主阵地，在时间更多。 ？（4）数量不宜过多，一般不超过六人。 ？指导（5）协作，评论可能也将包括在致谢。 ？（三）摘要 ？的内容和格式摘要 ？一般格式： ？（1）目的：解决问题，它的起源，起源的文件的说明。 ？（2）：描述的时间，参与研究的患者或一些学科和研究方法完成。 ？（3）结果：研究成果，包括数据和统计测试结果的说明。 ？（4）结论：主要结论，包括直接的临床应用。 ？其他格式 ？（1）目的：纸来解决它的起源问题的起源，背景。 ？（2）设计：纸是基本的研究设计。 ？（3）地点：要学习的位置，单位，级别。 ？（4）对象：论文的时间，参与完成的学习和研究方法的患者或受试者的人数。 （5）治疗：纸张的临床治疗和其他治疗方法。？ ？（6）检测：论文评价结果的测试项目。 （7）？结果：研究结果和数据的描述。 ？（8）结论：主要结论，包括直接的临床应用。 ？（2）摘要写作要求 ？（1）连续写入，而不管该段没有字幕，不提供的例子。 ？（2）格式的标准化。 ？（3）文本全文约10％的简短，完整，通常账户。 ？（4）无图，表，化学结构的文本数据。 ？（5）的内容基本英文摘要。 ？（四）关键词 ？关键词是科学文献中的元素表达的特点，是一个有意义的单词或词组。 ？主题词是标准化关键词，关键词的灵活性和广泛的自由语言。这个阶段的关键字和关键字作为检索语言。关键的词是自然语言，同义词，近义词，多义字不统一，导致检索错误，它是从医学主题词表（MESH）选择。 ？1。格式 ？3-8词或词组写在网格，无标点之间的空间。逗号之间的外国人物，专有名词前缀，我有小写。 ？选择关键字 ？（1）可以从标题，摘要和全文，选择从标题中使用最常用的选择。 ？（2）严格的筛选，全面，准确，全面地反映文章的核心内容。 ？（3）确认访问的医学主题词。 ？（5）简介 ？1引言 ？（1）研究这项工作的原因和目的的简要说明 ？（2）研究的历史背景 （3）？家国内外研究这项工作的地位和研究趋势 ？（4）强调这项工作的重要性，必要性和意义 ？（5）适当的时间对这项工作的，材料和方法的研究 ？（2）书面要求 ？（1）简明扼要，重点突出的：一般为200-500字，占全文的1/8-1/10。 ？（2）实事求是，客观的评价：你不能刻意贬低他们的前辈，不要妄下结论。 （3）少用行话：如何拥有一个总的理论水平。？ ？（4）与摘要相同，以避免重复文本：不涉及结果或结论。 ？（5）一般不写的话“导言”的标题。 ？（F）的材料和方法 ？？主要内容的材料和方法 ？（1）主题： ？①动物：名称，种类，数量，来源，年龄，性别，标准和方法进行分组。 ？②微生物或细胞：种类型，厂房，制度，文化和实验室条件。 ③临床病例的来源，数量，性别，年龄，病因，病程，病理诊断，分类标准，选择标准？ ？（2）实验仪器设备名称，制造商，型号，操作方法，提高到了点。 ？（3）材料：药品和试剂，成分，规格，纯度，来源，生产日期，批号，浓度，剂量，给药方法，途径，药物总的名称。 ？（4）实验方法和条件： ？（1）临床病例的观察方法，指标，方法的治疗，药物名称，剂量，使用的治疗方法。 ②手术与标本：手术名称，手术，麻醉，样品制备过程。？ ？（3）实验室实验和记录观察的步骤，指标，预防措施，改进方法和基础。 ？（5）统计方法： （7）？结果 ？其结果是纸张价值的研究成果的结晶。全文的结论导致讨论引发，判断推理和建议，导致出口。 ？结果的内容 ？数据：（1）无原始数据，通过统计分析。 ？（2）图表：用于显示规律性和对比。 ？（3）图片：客观的形象来表达的结果。 ？（4）文本数据，图表，照片说明这一点。 ？（2）书面要求的结果 ？（1）由实验安排获得的事实资料，可以分次节，你可以添加字幕。 ？（2）解释的客观结果，而不是加上作者的评价，分析和推理。 （3）你想真伪的结果，而不是数据或其他结果不符合主观设想删除。？ ？（4）可以使用文字，图表和照片的空间较大份额，尽可能少尽可能带或不带图表或照片。 ？（8）讨论 ？的探讨是本文的主要组成部分，作者总结中进行总结和讨论，并提出自己的想法，评价其意义的研究中获得的信息。 ？讨论的内容 ？（1）实验数据或现象，理论分析和解释的过程中观察。 ？（2）与他人的，以评估结果的准确性和可靠性，结果比较异同，并解释为什么。 ？（3）实验结果的理论意义和实践的指导作用和价值。 （4）机制的变化？ ？（5）类似的主题，在家里和国外研究动态，并与本文的关系。
1.1实物标本的选择选择实物标本依托中国药典，以教材中收载的常用药材为主。然而，将教材中的药材品种一一收录既不现实、也不必要，应根据教学大纲的要求和教学实际，选择具有代表性的药材标本。在品种的选择上要力争具有代表性，如根和根茎类、茎木类、皮类、花类、果实种子类、全草类、其它类、动物和矿物类药材等都要涉及;且应根据分类学涉及代表科属的药材，如毛茛科选取了黄连、乌头、白芍、威灵仙等，分别涉及了黄连属、乌头属、芍药属和铁线莲属等;同时，根据地方使用习惯的不同，有意识收集本地习用品种，如紫萁贯众、断血流等;道地药材是中药鉴定技术中最具特色的，收集实物标本还应对道地药材有所侧重，如安徽的凤丹皮、宣木瓜、贡菊等。基于以上思路，我们根据课程教学的需要，编写《中药鉴定技术》教学实物标本目录，加大收集工作，并应用于教学实践中。1.2实物标本的制作《中药鉴定技术》教学用实物标本编写目录后，根据目录进行收集和制作工作，主要有三种方法:⑴从市场采购。利用去药材市场参观学习的机会，从市场采购典型的药材标本，主要是一些本地不产的药材，如人参、大黄等，且经过不同批次的采购能得到不同等级和规格的药材。⑵与兄弟院校和同行之间交换、交流。通过与同行之间进行教学标本的交换和交流，可以扩大药材标本的种类，减少收集标本花费的精力，有利于建立整套标本。⑶实地采集和制作。这是最重要的方法，将收集实物标本与药用植物学采药实习等结合起来，通过实地采集收集本地地产药材和习用品种。例如，我校每年会到南陵丫山进行药用植物学采药实习，可收集到牡丹皮、半夏、鱼腥草、金荞麦、桔梗等地产药材。同时，还可以利用野外资源调查的机会，搜集各地药材标本，如岳西的茯苓、僵蚕、灵芝，霍山的霍山石斛、天麻，滁州的菊花和全蝎等。通过野外采集，可以准确鉴定药材的来源，从而做到在课堂上教授给学生科学、准确的药材知识。1.3影像标本的制作收集的药材标本有时个体较小，如冬虫夏草、半夏、太子参等，使用时难以满足教学需要，还有一些标本容易变色变质，如党参、大黄等。如何能给予学生最真实的药材特征，就需要通过制作影像标本来完成。颜色是标本最重要的特征，在制作影像标本时也容易失真，为此，我们引入了专业的摄影设备，同时邀请专业的摄影和计算机老师，协助影像标本的制作，专业教师则根据药材的鉴别要点提出拍摄意见，如大黄要拍摄断面的“星点”特征、黄连要拍摄“过桥”特征、冬虫夏草要特写头部特征等。为了增加药材照片的立体感，还须对药材的不同面进行拍摄，以期得到最完整的药材性状特征。同时，利用野外资源调查的机会，拍摄新鲜药材的照片，并制作了产地采集、加工等的视频短片，后期利用专业软件制作了《黄山采药录》等视屏资料，作为对理论课的补充，在课堂上也收到了较好效果。2体会2.1理论教学和实践教学应选用不同的标本理论教学一般是大班教学，对实物标本的需求量较多，标本数量少时难以顾及到所有同学，此时配合影像标本的使用，才能取得较好的效果;而像苏子、菟丝子这些较小的药材，可以给每位学生准备一份标本，看着标本学习和讲解才能取得最佳的效果。实践教学一般是小班教学，学生和教师互动交流的机会较多，一般选用实物标本，对于人参、冬虫夏草等贵重药材标本，也可让学生有充分的观察机会。另外，还可以根据药材的性质制作不同的药材标本，展示于实践教学场所。比如全草类药材可以制作成腊叶标本和彩色照片，悬挂于实验室墙上，让学生在日常学习中受到潜移默化的影响。2.2注意标本和影像资料的积累教学实践中，实物标本和影像资料发挥了较为重要的作用，但由于标本种类不够完善，在使用中时常受到限制，因此，收集足够的实物标本和影像资料十分重要。但《中药鉴定技术》教学实物标本和影像标本的搜集制作并非一朝一夕能完成的，需要专业教师不断的积累和完善，逐渐搜集完善标本的品种，提高同类标本的等级规格。同时，随着数码技术的发展，可以应用先进的数码技术制作更为完善的影像标本，以更好的为教学服务。只有积累足够的标本和素材，才能在《中药鉴定技术》的教学实践中发挥更大的作用《，中药鉴定技术》才能成为学生愿意学、教师愿意教的一门专业课，也才能最大程度地发挥本课程的根本目的，为学生今后从事中药类专业相关工作打下坚实的基础。关于中药的毕业论文范文二：中药中医药学论文1合理用药基本原理1.1现代合理用药原理从实际临床工作中可知，用药过程实际上包括了：诊断、开处方、包装调配、分发给患者以及患者遵医嘱服用药品的过程。简而言之，合理用药就是要做到安全、有效、经济的用药。从生物医学的角度出发，合理用药内涵有明确规定，包括：①药品使用与患者疾病相吻合;②符合药品使用指征;③除药品疗效外，合理药品使用还应该综合考虑安全性、经济性;④服用方法、剂量要正确;⑤要确保不良反应小，患者无所使用药品禁忌症;⑥医嘱内容情况明确，患者遵医嘱情况良好。1.2中医药理论下中药用药原理中医治病救人主要依赖与中药的使用。因此，中药的使用应该严格遵循中医药理论指导，在此基础上进行合理炮制、配伍、煎服、制剂来减毒增效。既可以达到事半功倍的作用，又可以减轻患者经济及身体负担，两全其美。1.2.1药性理论在中药合理使用中的应用药性理论主要是指：四气五味、升降浮沉、归经、毒性等几个方面，是中药合理使用最基本最核心的理论之一，在临床使用过程中，只有严格遵循药品药性，才能确保药物临床疗效及用药安全。1.2.2中药配伍理论在中药合理使用中的应用配伍理论主要是指：组方的应用要严格遵循君、臣、佐、使的配伍理论，尽量避免无逻辑药物配伍，或者滥用某些药物的情况出现。1.2.3七情配伍理论在中药合理使用中的应用所谓七情配伍理论是指药品使用中的单行、相须、相使、相畏、相杀、相恶和相反，是指药品的使用要注意彼此之间的配合，有些药物配伍使用可增强药效，有些药物配伍使用会增加毒性，在使用过程中要加以甄别。1.2.4将辨证论治理论应用于中药合理使用中中药使用最基本前提是，需对症用药，只有给合适病症使用合理药物，才能最大限度发挥其临床作用。而所谓辩证论治理论是指：通过四诊(望、闻、问、切)进行辨证，再根据证侯临床表现而拟订治法，是中医药最基础理论之一。其应用与中药使用工作中，具有主导作用，只有准确辨证，才能真正达到合理安全使用中药的作用，才能取得理想疗效。1.2.5将中医整体观念应用与合理用药工作中整体观念是中医基础理论之一，即应重视患者身体整体的病变以及与环境之间的关系，不能简单“头痛医头，脚痛医脚”，中药使用相关医务人员应该严格遵循疾病发生与发展规律，全面合理用药,综合治疗,标本兼顾。2促进合理用药相关建议2.1医疗行政机构各级医疗机构管理者需要高度重视合理用药的意义在我国，85%以上的药品是在医院进行销售的，也就是说，医疗机构是药品使用的最主要场所。所以，涉及到药品合理使用的各个环节必须由医疗机构自身出发。把握医疗机构的用药规范是贯穿合理用药质量管理的最为重要的主线。另一方面，随着中药使用安全问题的不断暴露，医疗机构管理者应该投入一定精力在中药合理使用中，以提升合理用药整体水平。2.2各级医疗机构药事管理委员会充分发挥作用药事管理委员会是指各级医疗机构药品有关工作行政管理单位，其最主要的工作职能就是通过采取多种形式的宣传手段，大力宣传相关国家药物政策，着力将国家基本药物政策在各级医疗机构进行宣传和应用。定期举办各种宣传活动，加强介绍中药合理使用，将中医药理论渗透于相关工作人员脑海中，努力促使医务人员、患者甚至广大人民群众了解中药合理用药的临床意义。2.3医疗行政单位协助各级医疗机构建立标准化治疗方案传统中医药的使用，应该遵循中医药理论的基础上，建立标准化治疗方案，促进中药的合理使用。而中药标准化治疗方案也够进一步促进治疗规范化、合理化，与经验治疗相比，它能够提供诊断、治疗的基本标准，避免了随意、不合理的治疗决策。各级医疗机构制定具有较高水准的中药标准治疗方案，用来指导临床规范化诊断、治疗、护理。应对中药标准治疗方案执行情况进行适时检查、监督。从而促进合理中药合理安全使用。
医学专业参考文献
参考文献是指为撰写或编辑论著而引用的有关图书资料。那么，关于医学专业论文的参考文献有哪些?
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多媒体技术应用论文参考文献
参考文献是在学术研究过程中，对某一著作或论文的整体的参考或借鉴。征引过的文献在注释中已注明，不再出现于文后参考文献中。按照字面的意思，参考文献是文章或著作等写作过程中参考过的文献。然而，按照GB/T 7714—2005《文后参考文献著录规则》的定义，文后参考文献是指：“为撰写或编辑论文和著作而引用的有关文献信息资源。下面是我收集整理的多媒体技术应用论文参考文献，欢迎大家分享。
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[2]基于广电平台的多媒体云发展及应用浅析.宫.于文婷，2014第二十二届中国国际广播电视信息网络展览会——中国国际广播影视发展论坛.
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[6]多媒体信息处理平台的设计与建设.陈娟，2014第22届中国数字广播电视与网络发展年会暨第13届全国互联网与音视频广播发展研讨会
[7]辅助多媒体标注:基于人机结合的多媒体理解.汪萌，2012第十二届中国Rough集与软计算学术会议、第六届中国Web智能学术研讨会及第六届中国粒计算学术研讨会联合学术会议.
[8]周期性多媒体实时业务的动态QoS管理.常凤.余江.常俊.谈桂林.赵凌，2013中国电机工程学会电力系统自动化专业委员会三届三次会议暨2013年学术交流会
[9]基于5GHz传输的USB多媒体适配器设计与实现.孔明.黄坚，2013浙江省电子学会2013年学术年会.
[10]网络报纸多媒体功能在企业科技创新中的作用.庞建华，2013首届中国科技传播论坛.
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[4]面向多媒体社交网络的访问控制模型.《西安电子科技大学学报（自然科学版）》.被中信所《中国科技期刊引证报告》收录ISTIC.被EI收录EI.被北京大学《中文核心期刊要目总览》收录PKU.2014年6期.陈庆丽.张志勇.向菲.王剑.
[5]基于DSP和双目视觉的多媒体传感器网络节点设计与实现.《通信学报》.被中信所《中国科技期刊引证报告》收录ISTIC.被EI收录EI.被北京大学《中文核心期刊要目总览》收录PKU.2014年12期.张云洲.蒋培.高亮.李立强.
[6]一种面向多媒体和通信应用的处理器指令集及架构实现.《湖南大学学报（自然科学版）》.被中信所《中国科技期刊引证报告》收录ISTIC.被EI收录EI.被北京大学《中文核心期刊要目总览》收录PKU.2014年10期.王志君.梁利平.吴凯.王光玮.洪钦智.罗汉青.
[7]新型通用格式多媒体数字版权管理系统设计与实现.《通信学报》.被中信所《中国科技期刊引证报告》收录ISTIC.被EI收录EI.被北京大学《中文核心期刊要目总览》收录PKU.2013年10期.黄勤龙.马兆丰.莫佳.钮心忻.杨义先.
[8]基于分簇的无线多媒体传感器网络数据聚合方案研究.《电子与信息学报》.被中信所《中国科技期刊引证报告》收录ISTIC.被EI收录EI.被北京大学《中文核心期刊要目总览》收录PKU.2014年1期.张军强.王汝传.黄海平.
[1]目录.多媒体学习中认知负荷的优化控制.被引次数：33作者：龚德英.发展与教育心理学西南大学2009（学位年度）
[2]目录.高中生物实验教学与多媒体有效整合的设计与实践.被引次数：3作者：王玉君.学科教学(生物)上海师范大学2013（学位年度）
[3]目录.多媒体原则在小学英语教学中的应用研究——基于梅耶的多媒体学习认知理论.作者：倪勤.学科教学(英语)杭州师范大学2013（学位年度）
[4]目录.论多媒体艺术的时间与空间.被引次数：2作者：廖国张.设计艺术学湖南师范大学2010（学位年度）
[5]目录.新课程背景下实施多媒体语文教学的有效途径.被引次数：14作者：张文娟.学科教学(语文)四川师范大学2012（学位年度）
[6]目录.多媒体网络教学平台在高校体育教学中的推广策略研究.被引次数：10作者：祝峰.体育教学内蒙古师范大学2013（学位年度）
[7]多媒体连环画艺术的研究与实践探索.作者：胡玲.美术学四川师范大学2014（学位年度）
[8]目录.无线多媒体传感器网络QoS路由优化算法研究.被引次数：1作者：孙仁科.通信与信息系统中国矿业大学2012（学位年度）
[9]车联网中多媒体合作共享的研究.作者：陈娜.计算机应用技术大连理工大学2014（学位年度）
[10]目录.移动多媒体推送业务终端功能研究.被引次数：31作者：苏毅.通信与信息系统北京邮电大学2009（学位年度）
Hello,大家好呀，本期我们介绍一篇南方医科大学皮肤病医院于2021年6月17日发表于Nature Communications的文章，题目为 《Single-cell RNA-seq reveals fibroblast heterogeneity and increased mesenchymal fibroblasts in human fibrotic skin diseases》IF：14.914 。本研究通过使用单细胞RNA-seq，探索纤维化皮肤病范例瘢痕疙瘩中的成纤维细胞异质性。结果表明，瘢痕疙瘩中成纤维细胞可分为4个亚群：分泌-乳头状、分泌-网状、间充质和促炎性。有趣的是，与正常瘢痕相比，瘢痕疙瘩中间充质成纤维细胞亚群的百分比显著增加。这些发现将帮助我们更好地理解皮肤纤维化发病机制，并为纤维化疾病治疗提供潜在靶点。 单细胞RNA-seq揭示人纤维化皮肤病中成纤维细胞异质性和间充质成纤维细胞增加 研究背景 纤维化时以成纤维细胞增殖和细胞外基质(ECM)过度蓄积为特征，全球的发病率和死亡率较高。纤维化可累及任何器官，导致进行性组织瘢痕和器官功能障碍。纤维化性皮肤病涉及真皮中ECM成分的积聚，包括硬皮病、增生性瘢痕、瘢痕疙瘩和移植物抗宿主病。纤维化皮肤病的全球影响显著，影响全球数百万人。迄今为止，纤维化皮肤病的病因发病机制尚未彻底阐明，目前尚缺乏根治方法。 许多导致纤维化的细胞类型，如血管内皮细胞、免疫细胞和成纤维细胞已被确定。成纤维细胞是皮肤纤维化过程中的中心细胞类型，可导致ECM积聚和炎症。纤维化疾病中的成纤维细胞表现出明显的增殖潜能、迁移和侵袭能力增加以及ECM沉积增加，从而导致纤维化发病。这些作用主要由成纤维生长因子驱动，如TGFβ、FGF、PDGF、VEGF和POSTN。 长期以来，我们都认为成纤维细胞是梭形细胞群中的一种，然而，新出现的证据表明成纤维细胞实际上是形态和功能异质性的细胞群。单细胞RNA测序(scRNA-seq)的发展使我们有机会探索稳态和病理下皮肤的成纤维细胞异质性。scRNA-seq提示成纤维细胞在正常人真皮中可分为多个亚群。 scRNA-seq也被用于研究一些纤维化疾病中成纤维细胞的异质性，如肺纤维化、系统性硬化症和Dupuytren病。然而，据我们所知，关于scRNA-seq应用于探索纤维化皮肤病中成纤维细胞异质性的研究仍然缺失。在本研究中对纤维化皮肤病的范例瘢痕疙瘩中进行了scRNA-seq分析，探索纤维化疾病中成纤维细胞的异质性。 研究方法Sample: 共3例患者中采集瘢痕疙瘩组织; 建库方式：Chromium Single Cell 3′ Library & Gel Bead Kit v2 (PN-120237), Chromium Single Cell 3′ Chip kit v2 (PN-120236), Chromium i7 Multiplex Kit (PN-120262)； 比对：human genome (hg38) 细胞过滤：filtered by removing cells with high and low (>6000 and <200) UMI-counts； 基因富集分析：clusterProfiler v3.12.0； 转录调控因子分析：ARACNe； 细胞间的交互分析：CellPhoneDB 2.0； 伪时序分析：destiny R package 结果 结果（一）： 如图1所示，单细胞RNA-seq揭示正常瘢痕和纤维化皮肤病真皮组织的细胞异质性；作者鉴定出了5个成纤维细胞簇(C2、C4、C8、C14、C15)和3个内皮细胞簇(C1、C6、C7)，并对不同类型组织的细胞比例进行统计。在瘢痕疙瘩组织中观察到内皮细胞和平滑肌细胞比例增加，这与瘢痕疙瘩表现出血管生成增加的报告一致。与正常瘢痕组织相比，瘢痕疙瘩组织中成纤维细胞的比例降低，可能是内皮细胞和平滑肌细胞过度扩增所致。在比较瘢痕疙瘩和正常瘢痕中的基因变化时，作者发现成纤维细胞的差异最大（图1g），表明成纤维细胞在纤维化进展过程中发生显著变化。结果（二）： 真皮纤维化皮肤病中间充质成纤维细胞增加；在对所有瘢痕疙瘩和正常瘢痕成纤维细胞进行重新聚类，并分成13个细胞亚型sC1至sC13（图2a）。图2b，c显示了瘢痕疙瘩和正常瘢痕中成纤维细胞亚群的细胞比例。从结果可以看出，与正常瘢痕样本相比，瘢痕疙瘩样本中sC4的比例持续增加（图2b，c）。 在细胞亚群中，sC2、sC3和sC9是促炎性成纤维细胞，sC6和sC7是分泌-乳头状成纤维细胞，sC1和sC4是间充质成纤维细胞，sC5是分泌-网状成纤维细胞。特定胶原的表达与特定成纤维细胞功能相关。因此，作者还分析了4种成纤维细胞亚群的胶原表达水平。分析显示，胶原相关基因COL11A1在sC1和sC4成纤维细胞中特异性表达，表明在该细胞亚群中具有更多的间充质成分。 然后，作者比较了瘢痕疙瘩和正常瘢痕之间四个成纤维细胞亚群的比例。结果显示，与正常瘢痕相比，瘢痕疙瘩中分泌-乳头状、分泌-网状和促炎亚群的比例降低，而间充质亚群增加（图2f）。瘢痕疙瘩中间充质亚群的增加提示该亚群可能对瘢痕疙瘩发生非常重要。 接下来，研究者比较瘢痕疙瘩间充质成纤维细胞和正常瘢痕间充质成纤维细胞之间的差异，发现确定了骨骼系统发育、骨化和成骨细胞分化相关基因，如COL11A1、COMP和POSTN，在瘢痕疙瘩间充质成纤维细胞中表达显著增加。提示与正常瘢痕相比，瘢痕疙瘩中间充质成纤维细胞的比例不仅增加，而且间充质成纤维细胞的同一性也发生了变化。结果（三）：真皮纤维化皮肤病中间充质成纤维细胞的特征；在研究瘢痕疙瘩中间充质成纤维细胞中研究人员发现，骨骼系统发育、骨化和成骨细胞分化相关基因如POSTN和COL11A1在间充质亚群中富集（图3a）。热图表明间充质亚群和其他亚群之间的基因表达存在显著差异（图3b）。间充质亚群中增加的基因包括一些分泌蛋白，如POSTN、COMP、COL11A1、COL12A1和COL5A2（图3c和补充数据2）。我们还发现，间充质亚群中的一些膜蛋白，如SDC1、ADAM12和CD266（由TNFRSF12A编码）增加，而CD9减少（图3c）。GO和GSEA分析表明，间充质亚群中上调的基因与胶原组织过程、伤口愈合、骨骼系统发育、成骨细胞分化等相关。 在转录调控分析中，作者发现一些成骨、软骨形成、韧带和肌腱分化相关的TF，如SCX、CREB3L1和RUNX2，在间充质成纤维细胞亚群中富集，与其间充质特征一致。结果（四）： 间充质成纤维细胞亚群中的潜在配体-受体相互作用分析；为了确定瘢痕疙瘩和正常瘢痕中成纤维细胞亚群和其他细胞之间的细胞-细胞通讯景观，使用cellphondb 2.027进行了分析，其中包含了配体-受体相互作用。在正常瘢痕中，分泌网状成纤维细胞和其他细胞之间的相互作用最丰富（图4a），但在瘢痕疙瘩中，间充质成纤维细胞和其他细胞之间的相互作用最丰富（图4b），表明间充质成纤维细胞在瘢痕疙瘩发展中的重要作用。作者还发现在瘢痕疙瘩中NOTCH信号传导显著增加，如JAG1-NOTCH1（图4c，右图）。瘢痕疙瘩中与FGF2配体-受体相互作用相关的纤维化抑制显著降低，这与之前的报告一致。结果（五）： sC4成纤维细胞的分化程度可能低于sC1成纤维细胞。为了进一步探索瘢痕疙瘩中间充质成纤维细胞亚群的关系，作者对sC1和sC4成纤维细胞进行了伪时序分析。提示sC4成纤维细胞的分化可能低于sC1成纤维细胞。有趣的是，与正常瘢痕相比，瘢痕疙瘩中sC4成纤维细胞的比例显著增加。最后，作者在硬皮病公共数据中验证以上结论，证明间充质成纤维细胞增加可能是纤维化皮肤病的普遍机制。 参考文献： Deng, CC., Hu, YF., Zhu, DH. et al. Single-cell RNA-seq reveals fibroblast heterogeneity and increased mesenchymal fibroblasts in human fibrotic skin diseases. Nat Commun 12, 3709 (2021).
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参考资料来源：百度百科-参考文献
写法如下：
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