关于植物内生菌的研究作者：李金旭来源：《中国电子商情》2014年第09期引言：近年来，有关植物内生菌的研究已经成为我国微生物学领域研究的热点，由于植物内生菌具有较高的潜在可开发利用价值，使得其越来越受到人们的重视。植物内生菌作为植物微生态系统中的重要组成部分，在其长时间的协同进化中，和植物等进化为了相互依赖的关系，其具有产生活性物质的功能，因此可以用来作为生物的防治资源和外源基因的载体及新药的原料。本文针对植物内生菌进行了分析，重点突出了植物内生菌的概况、作用和应用。一、植物内生菌概述（一）有关植物内生菌的概念及其种类对于植物内生菌的概念有许多不同的定义，其中被公认的定义是指那些在其生活过程中的一定阶段或者全部阶段生活于活体植物的组织内部的微生物，这些微生物并不会对宿主植物产生显著的病害。植物内生菌普遍存在于低等植物和高等植物中。该定义是一个生态学上的概念，而非分类学单位。植物内生菌主要分为内生真菌、内生放线菌和内生细菌等，其主要寄宿在植物的表皮下的组织之中。植物内生真菌是指那些寄宿在植物的茎和叶之中度过生命周期的一种真菌。该种真菌对其宿主植物的害处非常少，甚至没有害处，它们和宿主植物之间形成共生关系。内生放线菌是一类新的生防微生物资源，其主要生活在健康的植物体内，产生系列活性物质并和宿主植物共同生活，是土壤中重要的一种原核生。内生细菌通常是指能生活在活体的植物组织中，和植物形成和谐关系的一类微生物，该类内生菌能进行生物防治、植物促生和内共生固氮作。内生细菌对于改善农业生态系统，保持植物微生态系统的生物多样性和保护农田的生态平衡等研究中具有重要意义。（二）植物内生菌研究发展概述对于植物内生菌的研究要追溯到19世纪中期，在1876年Pasteur从无菌的葡萄果汁中分离出来了植物内生细菌，开创了研究植物内生菌的先河，1886年De Bary首先提出植物内生菌的概念，他将植物内生菌定义为一类在其部分或者是全部生活史中存活于活体植物中，并不会使宿主表现出显著感染症状的微生物。内生菌的概念从1886年Bary提出来之后，距离今天有100余年的时间，在这100余年的时间里并没引起足够的重视，相关研究的进展较慢。到了20世纪末期，植物内生菌的研究才得到微生物学家、植物学家和微生态学家以及作物学家的重视。今天，对于内生细菌的研究已经成为植物微生态学和微生物学学科交叉的新的生长点，同时其也成为我国目前微生物研究领域的热点。目前，有关植物内生菌的研究不仅从深度上还从广度上都有非常大的进展，尤其是对于植物内生细菌的作用研究更是突出。近年来，有一些研究显示，植物内生菌可以作为外源基因的载体，拥有促进植物生长、增强植物抗逆境、增强植物抗病害、增加宿主植物的他感和对病虫害的防治作用等等。二、植物内生菌的作用（一）能够促进宿主生长经过研究发现，一些被感染内生菌的植物拥有比未经感染植株生长速度快的现象，某些内生菌通过人工接种的方式还能够提高植物的存活率，并促使植物发芽。张集慧等人经研究从兰科药用植物之中提取出了五种植物激素，它们分别是吲哚乙酸、玉米素、脱落酸、赤霉素和玉米核苷，这些激素能促进兰花的生长。沈德龙等人研究出水稻的内生成团泛菌YS19可以产生四种植物激素，它们可以调节水稻的生长情况，可以影响水稻的光合作用。（二）生物固氮作用很多植物在生长过程中其内生菌会从空气中吸取氮气，并将氮气转变为化合态氮，化合态的内生菌可以通过植株产生的能量产生固氮功能并且不形成特化的组织结构，差不多能够在宿主植物的各个器官之中进行固氮。通过对内生菌的不断研究，有人发现在甘蔗的根、叶和茎之中有许多的新型内生固氮菌，该种内生菌拥有较强的抗酸能力，它是重氮营养醋杆菌，其可以在高糖的环境中成长并维持高效的固氮活性，从而与甘蔗形成一种联合固氮的关系，其特征为严格的寄主唯一性。（三）抗逆境和抗病虫害作用内生菌可以增强宿主植物的抗逆性，如：通过用棉花的内生细菌回接棉花的方式，能够减轻人工接种感染的棉花枯萎情况。内生菌还可以提高宿主植物对各种其他生物如线虫、昆虫等害虫的抗性。三、植物内生菌的应用分析（一）内生菌在医药中的应用经过相关研究表明，从植物中提取出来的内生菌可以产生许多活性物质，这些活性物质拥有较大的药用价值。从一些植物中提取出的内生菌可以代谢产生抗肿瘤活性物质，这物质是抗癌物或者是其前体的重要来源，例如紫杉醇是一种提取于短叶红豆杉的二萜类生物碱，可以抑制微管解聚和稳定微管，是从植物之中发现的抗癌药物质之一；植物内生菌微生物类群可以产生许多拥有不同抗菌活性的物质，植物内生菌产生的抗微生物物质可以作为抗生素，例如肽、有机酸等抗生素。（二）内生菌在农业中的应用相关研究显示，植物内的内生菌和病原菌拥有同样的生态位，通过在植物体内的争夺空间和营养，迫使病原菌没有正常的营养而死亡，进而提高宿主植物的抵制病虫害的能力。同时，内生菌能够产生抗生素、毒素等激素，这些激素可以诱导植物产生系统抗性，来提高植物的抗逆性和抗害虫性等能力，例如：有机胺类、吲哚双萜、双吡咯烷类和吡咯里西啶类等生物碱可以对线虫等产生毒性，达到生物防治的作用。内生菌能够发生次生代谢产物，这些产物也能够消灭害虫。总之，植物内生菌的特性决定了其具有非常广泛的研究前景，拥有巨大的应用潜力，是一个潜力巨大的微生物新资源。伴随着我国生物化学、分子生物学和微生态学相关学科的发展，植物内生菌的研究将会更加广泛，其在医药和农业等领域的应用也会更加深入。参考文献[1]姜怡，杨颖，陈华红，等.植物内生细菌资源[J].微生物学通报，2005.[2]赫荣乔.植物内生细菌成为我国当前微生物研究领域的热点[J].微生物学通报，2009.[3]孔庆科，丁爱云.内生细菌作为生防因子的研究进展[J].山东农业大学学报：自然科学版，2001.（作者单位：哈尔滨师范大学）￥百度文库VIP限时优惠现在开通,立享6亿+VIP内容立即获取关于植物内生菌的研究龙源期刊网关于植物内生菌的研究作者：李金旭来源：《中国电子商情》2014年第09期引言：近年来，有关植物内生菌的研究已经成为我国微生物学领域研究的热点，由于植物内生菌具有较高的潜在可开发利用价值，使得其越来越受到人们的重视。植物内生菌作为植物微生态系统中的重要组成部分，在其长时间的协同进化中，和植物等进化为了相互依赖的关系，其具有产生活性物质的功能，因此可以用来作为生物的防治资源和外源基因的载体及新药的原料。本文针对植物内生菌进行了分析，重点突出了植物内生菌的概况、作用和应用。第 1 页一、植物内生菌概述（一）有关植物内生菌的概念及其种类对于植物内生菌的概念有许多不同的定义，其中被公认的定义是指那些在其生活过程中的一定阶段或者全部阶段生活于活体植物的组织内部的微生物，这些微生物并不会对宿主植物产生显著的病害。植物内生菌普遍存在于低等植物和高等植物中。该定义是一个生态学上的概念，而非分类学单位。植物内生菌主要分为内生真菌、内生放线菌和内生细菌等，其主要寄宿在植物的表皮下的组织之中。植物内生真菌是指那些寄宿在植物的茎和叶之中度过生命周期的一种真菌。该种真菌对其宿主植物的害处非常少，甚至没有害处，它们和宿主植物之间形成共生关系。内生放线菌是一类新的生防微生物资源，其主要生活在健康的植物体内，产生系列活性物质并和宿主植物共同生活，是土壤中重要的一种原核生。内生细菌通常是指能生活在活体的植物组织中，和植物形成和谐关系的一类微生物，该类内生菌能进行生物防治、植物促生和内共生固氮作。内生细菌对于改善农业生态系统，保持植物微生态系统的生物多样性和保护农田的生态平衡等研究中具有重要意义。第 2 页（二）植物内生菌研究发展概述对于植物内生菌的研究要追溯到19世纪中期，在1876年Pasteur从无菌的葡萄果汁中分离出来了植物内生细菌，开创了研究植物内生菌的先河，1886年De Bary首先提出植物内生菌的概念，他将植物内生菌定义为一类在其部分或者是全部生活史中存活于活体植物中，并不会使宿主表现出显著感染症状的微生物。内生菌的概念从1886年Bary提出来之后，距离今天有100余年的时间，在这100余年的时间里并没引起足够的重视，相关研究的进展较慢。到了20世纪末期，植物内生菌的研究才得到微生物学家、植物学家和微生态学家以及作物学家的重视。今天，对于内生细菌的研究已经成为植物微生态学和微生物学学科交叉的新的生长点，同时其也成为我国目前微生物研究领域的热点。目前，有关植物内生菌的研究不仅从深度上还从广度上都有非常大的进展，尤其是对于植物内生细菌的作用研究更是突出。近年来，有一些研究显示，植物内生菌可以作为外源基因的载体，拥有促进植物生长、增强植物抗逆境、增强植物抗病害、增加宿主植物的他感和对病虫害的防治作用等等
直接看几篇前人发表的格式就好了这里是他们报社的要求行文格式（2010年1月修订）写作内容：关于稿件中的内容，作者可以在本刊网站下载PDF文件或每期发行的期刊，直接看到本刊论文的写作内容。写作格式和排版要求：作者投稿时，应采用通栏排版、不要双栏，图、表要放到文中随文排版应按照阅读顺序，详细要求请请见“投稿要求”。文题作者作者单位摘要关键词中英文脚注正文计量单位数字的使用统计学符号正体与斜体参考文献1. 文题要求简短、醒目、准确反映主题。中文题名一般不超过30个汉字，英文题名应与中文一致。2. 作者文章署名人应对文章全部或部分内容作出主要贡献，并能对内容负责的人。名字的写法是：王小红， Xiaohong Wang。3. 作者单位作者单位加圆括号排在作者署名下方，单位应写全称、所在城市和邮政编码。外国作者单位应注明国名。不同单位的作者应标注清楚。4. 摘要每篇论文（研究报告、研究简报、综述）都应附中、英文摘要，具体写法请详见“投稿要求”。5．关键词每篇文章选取3～8个关键词，中、英文关键词应一一对应。6．中英文脚注（如有些项目没有，可缺项。2006年有所变动！）（1）中文脚注：（正文首页下方）基金项目：……（项目编号）*通讯作者。Tel: +86- ；Fax: +86- ；E-mail：作者简介：姓名（出生年-），性别（民族），籍贯，职称，学位及研究方向。E-mail:（注：指的是第一作者）收稿日期： ；修回日期： （时间写为：年-月-日）（2）英文脚注：（英文摘要下方）Supported by the ……(项目编号)*Corresponding author. Tel: +86- ；Fax: +86- ；E-mail:Received : /Revised: （时间写为：日 月份全拼 年，之间不用标点符号）7．正文（1）各级标题：①引言部分只叙述研究对象、研究目的等。②正文部分一级标题一般为“1 材料和方法”、“2 结果”、“3 讨论”，左顶格顺序编排。③二级标题，如：“ 菌株和质粒”，左顶格排。一、二级标题后的内容另起行排。④三级标题，如：“质粒的提取”，左顶格排。与后面的内容用冒号隔开，内容接排。（2）图和表：文中图、表力求精简，避免图、表的内容重复。在文中的位置应是，先见文后见图和表。请将图表直接随正文排版，不要单独排在文后。①图：在正文中插图位置的下方写图题（中英文）及图注（英文）；照片要清晰，线图要精绘。②表：随正文排。表序及表题（中英文）置表上方，表注（英文）置于表下。表的内容全部用英文表述。一般使用三线表。（3）致谢：放文末，与正文空 一行，左顶格。8．计量单位（1）单位符号均用英文小写、正体，不允许对单位符号进行修饰。常用的计量单位如下： ①时间：日（天）用d ;小时用h;分钟用min ;秒用s 等。 ②溶液浓度：用mol/L 表示，而不用M 或 N。 ③旋转速度：单位符号为 r /min,而不用rpm 。 ④生物大分子的分子量：蛋白质用 kDa,Da;核酸用 bp或 kb。 ⑤光密度：用OD表示。 ⑥灭菌压力：用Pa或kPa表示，而不用磅或kg/cm2 。（2）图表中数值的量和单位：用量和单位的比值表示数值，即物理量符号（斜体）与单位（正体）之间用斜线隔开，如：t /h （时间，单位是小时）。（3）有些数值带的计量单位不能省略，如：30cm X ,不能写成30 X ；15%～20%不可写成15～20% 等。9. 数字的使用凡是可以使用阿拉伯数字且很得体的地方，均应使用阿拉伯数字。如：①公历世纪、年代、年、月、日和时刻必须使用阿拉伯数字。②计数和计量的数字一律使用阿拉伯数字。③不是表示科学计量和有统计意义数字的一位数可以用汉字，例如：一本书、两种产品等。④4位和4位以上的数字，不再采用三位分节法，要连续排。10. 统计学符号一般统计学符号用斜体。本刊常用统计学符号如下：样本算术平均数用英文小写x；标准差用英文小写s；t检验用英文小写t；F检验用F；卡方检验用x2；相关系数用r；样本数用n；概率用P。11. 正体与斜体（1）物种的学名：菌株的属名、种名（包括亚种、变种）用拉丁文斜体。属的首字母大写其余小写；属以上用拉丁文正体。病毒一律用正体，首字母大写。（2）限制性内切酶：内切酶前3个字母用斜体，后面的字母和编码正体平排，如：BamHⅠ、HindⅢ、Sau3AⅠ等。（3）氨基酸和碱基的缩写：氨基酸缩写用3个字母表示时，仅第一个字母大写，其余为小写，全部正体。碱基缩写为大 写、正体。12. 参考文献（1）要求：①文献必须是作者在论文中直接引用的，最主要的，发表在正式出版物上的文献。②未正式发表的文献（如会议论文集、私人通讯等，毕业论文除外）一般不作为文献引用，必要时可作为脚注处理。③文献应以在文中出现的先后顺序排序，论文一般不超过20篇，综述不超过25篇。（2）格式：请严格按照下列格式整理文献。① 列出参考文献中的全部作者。【2010年开始实行】② 姓名采用姓前名后的形式，姓写全称，名缩写（不加缩写点，双名间不空格）。作者之间用逗号隔开，不用“和”字或“and”。③ 外国期刊名应用全拼、不可缩写【2009年开始实行】，西文刊名采用斜体。④ 非英文的期刊，以尊重原始文字为主，在原文刊名的后面注明“标准的西文刊名”，如：微生物学报（Acta Microbiologica Sinica）。 （3）具体模式：① 期刊：[序号] 作者.文章题目.刊名，年，卷（期）：起止页码.② 图书：[序号] 作者.书名.版次.出版地：出版社，出版年：起止页码. [序号] 文章作者.文章题目//书的作者.书名. 版次.出版地：出版社，出版年：起止页码.③ 译著：[序号] 外国作者的原姓名. 中文书名. 译者的中国人名，等译. 版次. 出版地：出版社，出版年：起止页码.④ 专利：[序号] 专利所有者.专利题名.专利国别：专利号.日期.⑤ 论文：[序号] 作者.论文题目.“单位”的“学位论文”，年.⑥ 互联网：写明网址
撰文｜程莉
责编｜李晓明
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每千克身价高达几十万，冬虫夏草到底是食品？药品？还是保健品？“身份”扑朔迷离，命运数度“反转”，背后闪现各方利益角逐，但并没有妨碍它成为中草药里炙手可热的“明星”。
近段时间，冬虫夏草包括其产品中的价格之“王”——极草，被国家食品药品监督管理总局(以下简称“国家食药总局”)公开批评，利益相关各方争辩你来我回，舆论一度甚嚣尘上。
自始至终，被捧上天的冬虫夏草是否含有有效成分饱受专业人士诟病。综其一生，不过是一个“中国式”罢了。
1.籍籍无名
中国传统的中医药学和我国绝大多数学者所指的冬虫夏草, 是特指麦角菌科冬虫夏草菌的子座及其寄主蝙蝠蛾科昆虫冬虫夏草蝙蝠蛾幼虫尸体的复合体，主产于四川、青海、西藏、云南等海拔4000～5000米的高山草甸中。其他500多种虫草属真菌寄生并能产生子座的菌物结合体都只能称作虫草。
研究表明，蝙蝠蛾拟青霉和中国被毛孢同时存在于天然冬虫夏草中。2005年10月，中国菌物学会确认冬虫夏草的学名是Cordyceps sinensi (Berk.) sacc.，中国被毛孢（Hirsutella sinensis）为冬虫夏草的唯一无性型菌种，异名有蝙蝠蛾多（被）毛孢、中华束丝孢。
我国关于冬虫夏草的记载最早见于清代吴仪洛1757年著就的《本草从新》：“冬在土中，身活如老蚕，有毛能动，至夏则毛出土上，连身俱化为草，若不取，至冬则复化为虫。”此后，多种中医书籍都记载了冬虫夏草。《中华人民共和国药典》1990年版收录了冬虫夏草。不过，解放军总医院心内科主任医师吴海云对此并不为意，他在接受媒体采访时表示采访时说，在中医古籍中，几乎所有东西都是药，诸如指甲、灶灰、粪便都是药，都能在古籍中找到“功效”。
而在传统的藏医学中，虫草产地玉树州治多县的藏药师青梅然丁此前接受新华网采访时称：“虫草往往只发挥药引的作用。”在青海省藏医院数百种复方药物中，只有一种用于治疗妇科疾病的制剂用到了冬虫夏草。藏医药典《甘露本草明镜》中关于虫草的功效也只有一句话：“强身，补肾，用于治疗肝胆系统疾病。”北京中医药大学中药生药系主任张贵君也表示，传统中药配方中虫草用得很少。
虫草酸被认为是冬虫夏草的功效成分或标志性成分，但其实虫草酸就是甘露醇——一种非常普通而便宜的化工产品，被广泛用于食品、药物当中，一千克几十元而已。
1951年,德国科学家Cuningham等观察到被蛹虫草寄生的昆虫组织不易腐烂,随后从中分离到一种腺苷类活性物质, 确定其结构式为3’-脱氧腺苷，命名为虫草菌素, 又称虫草素，1960年已经实现了全化学合成。不过化学合成不能规模化生产，所以目前市场上的虫草素主要是通过人工培养蛹虫草（Cordyceps militaris）获得。虫草素是第一个从真菌中分离出来的核苷类抗生素，也是商家所吹捧的冬虫夏草的另一种活性成分。
但实际上，多项研究表明冬虫夏草中并不含虫草素。中科院微生物所真菌学国家重点实验室研究员董彩虹在接受媒体采访时表示，他们实验室采集了青藏高原不同产地的冬虫夏草，对其标本和液体发酵的菌粉进行检测后发现：“冬虫夏草里虫草素的含量超出了我们的检测范围，我们检测不到它，可以说冬虫夏草里基本不含虫草素。” 而据澎湃新闻报道：早在2011年，中科院上海生科院植物生理生态研究所研究员王成树就发表了关于蛹虫草基因组的研究成果。2013年，其课题组又发表了关于冬虫夏草菌基因组的研究论文。这些研究表明：冬虫夏草菌的基因组并没有合成虫草素的基因，所以是不能合成虫草素的，而蛹虫草菌是可以合成虫草素的。
在20世纪70年代乃至之前，冬虫夏草还非常低调，与传统滋补品人参和鹿茸相比，仅被当作“中药三宝”里最寻常的一种药材。60年代，在西藏1千克冬虫夏草可换两包单价3角钱的香烟;70年代，在青海、西藏，冬虫夏草的国家收购价为每千克21元。1974年，在青海省果洛州，不管什么品相的冬虫夏草的价格都是28元/千克左右。
2.身价暴涨
在野外，幼虫被侵染又长成冬虫夏草的几率很低，因此天然冬虫夏草资源很稀缺，人工培植也还没有获得成功，每年全国总产量仅80～150吨。随着需求增长，冬虫夏草的价格出现了一定程度的上升。1983年，上等冬虫夏草的价格涨到了300元/千克，而同一时期长白山区的人参每千克在60～80元左右，这个价钱相当于当时一个工人一个多月的工资。1990年左右，冬虫夏草价格涨至平均1000元/千克。相反，人参价格降至50元/千克。
冬虫夏草在公众眼中第一次公开高调露面伴随着另一个——马家军。1993年4月，马家军在天津集体刷新女子马拉松全国纪录；8月在斯图加特世锦赛包揽女子1500米、3000米、10000米全部3枚金牌；9月在七运会上狂破世界纪录；10月在西班牙夺世界杯马拉松赛女子个人和团体冠军。震惊世界的同时，马家军也一度被国际质疑服用兴奋剂，马家军拿补品、中草药作挡箭牌。除了大家记忆中非常熟悉的“中华鳖精”，还有冬虫夏草。因此，到了上世纪90年代中期，虫草零售价涨到了2000元／千克，上等冬虫夏草价格则更高。最后作家赵瑜的报告文学《马家军调查》证实马家军确实是服用了兴奋剂，队员成绩和“中草药”无关。
2003年非典时期，传言吃冬虫夏草能增强免疫力，甚至能包治百病，虫草一夜之间变成“神草”，引发市场狂炒，其价格一路暴涨，上等冬虫夏草价格从几千元／千克猛涨到万元／千克。从此，虫草正式步入“奢侈保健品”行列，计价单位也从“千克”变为“克”。
之后的2005年和2006年，冬虫夏草价格持续走高，在2007年时价格更是攀上了历史性巅峰，其中每千克2000条规格的冬虫夏草每千克高达20万元。
2008年，由于金融危机影响，虫草的销量严重受挫，当年均价下降了40%左右。到了2010年和2011年，受生态破坏和地震等自然灾害的影响，不少冬虫夏草产区出现减产，有的地区减产幅度甚至高达40%，供应萎缩使冬虫夏草行情再次上涨，价格重新一路飞涨。2011年7月，虫草价格超过2007年的历史最高点，“西藏商城”显示，2200条规格的冬虫夏草批发价万元/千克，而1800条规格的则达到21万元/千克。此后，冬虫夏草价格一直稳中有升。
而据《南方日报》称，业内人士透露除了产量不高，炒家囤货也是虫草涨价的一大原因。从虫草产区到消费城市，多级经销商层层囤货、层层加价。一些买家常年驻扎在青海西宁，在合适的时机出手购入囤货。
经历了多事的2015年和2016年，冬虫夏草的价格持续走低。从中国中药协会中药材信息中心官方网站中药材天地网上可以看到，2000条／千克规格的冬虫夏草，青海产地价格从2015年4月的万元／千克，降至最近价格万元／千克，西藏市场价格则由21万元／千克降至16万元／千克。尽管如此，四十年来，冬虫夏草价格飞涨了近万倍。而冬虫夏草中的“极品” ——极草5X冬虫夏草价格则更为惊人，在其官网上一瓶极草5X冬虫夏草纯粉片—双层片，售价达16900元。极草号称100%冬虫夏草，按照一瓶45片、每片克规格，可折算其价格每千克超过100万元。
3.食品？药品？还是保健品？
尽管冬虫夏草的身价一路飞涨，但它是食品？药品？还是保健品？其身份扑朔迷离。
虽然《中华人民共和国药典》收录了冬虫夏草，但张贵君表示：“收录了只能说它是中药材，但药材和药品还不是一回事。药材，农民可以随便买卖，但药材不能讲功效，只有药品才能讲功效，而药品对应什么疾病，要有实验药理学验证，对人体的作用应该通过临床实验来验证。” 事实上，对于冬虫夏草的功效，一直没有较高级别的论文证据支撑，这是业内共识。
其实早在2001年，当时的卫生部就已明令限制冬虫夏草这类国家二级保护物种作为保健食品原料，保健食品中的冬虫夏草应以冬虫夏草菌丝体蝙蝠蛾拟青霉替换。2005年，接手保健品监管的国家食药总局进一步明确，保健食品的原料使用了冬虫夏草的，应以人工繁殖的菌丝体予以替换。
2008年，极草以食品类产品许可证上市，当时产品外包装上显示为“青卫食证字(2008)第630000-400025号”。但是2009年8月6日，卫生部发文《蜂胶、冬虫夏草等不得挂“食”字号》明确指出：“卫生部未曾批准过冬虫夏草作为普通食品原料使用。国家中医药管理局组织专家讨论后也认为，目前冬虫夏草尚缺少作为食品长期服用的安全性评价研究数据，建议暂不作为食品原料使用。”
2010年12月国家质检总局也发布《关于冬虫夏草不得作为普通食品原料的通知》，严禁使用冬虫夏草作为食品原料生产普通食品。
于是，青海省卫生监督所在2011年4月发布公告，撤销了“极草”的食品批号，同时规定不得在产品包装上标注卫生许可证。
然而，青海省食药监局2010年12月7日出台了《青海省冬虫夏草中药饮片炮制规范》，将“极草”定义为冬虫夏草中药饮片。2012年6月份，国家食药监总局下发《关于冬虫夏草中药饮片炮制规范有关问题的通知》，指出冬虫夏草粉碎及压制成片不属于中药饮片炮制范畴，明确要求青海省对“规范”予以修正，妥善处理，切实加强对中药饮片的监督管理。
直到2012年8月15日，国家食药总局印发了《冬虫夏草用于保健食品试点工作方案》，第一次允许冬虫夏草直接被用为保健食品的原料，试点时限为批准试点企业相关产品之日起5年。同仁堂、康美药业、青海春天、劲牌有限公司、江中药业五家企业进入了保健品试点企业名单，这终于让冬虫夏草保健品拥有了“临时身份”。
2014年7月，冬虫夏草的热点产品“极草”又一次发生了转变。当时青海省食品药品监督管理局下发了《关于冬虫夏草纯粉片相关事宜的通知》和《关于撤销青海省冬虫夏草中药饮片炮制规范的公告》，明确规定：青海春天生产的冬虫夏草纯粉片的新身份为青海省出产的冬虫夏草经加工制成的产品，为青海省综合开发利用优势资源的试点产品。基于青海春天研发的冬虫夏草纯粉片的创新属性，不归属于既有监管体系中的药品，也不归属于既有监管体系中的食品或保健食品，其产品作为滋补类特殊产品进行管理。这样，极草获得了一个仅包括它一家的“滋补类特殊产品”身份。而根据青海省监管部门的规定，其生产依旧可以获得《药品生产许可证》。
4.陷入纷争
2016年2月4日，国家食药总局在其官网发布了《关于冬虫夏草类产品的消费提示》（以下简称《消费提示》），该提示称：近期，食品药品监管总局组织开展了对冬虫夏草、冬虫夏草粉及纯粉片产品的监测检验。检验的冬虫夏草、冬虫夏草粉及纯粉片产品中，砷含量为～毫克/千克。冬虫夏草属中药材，不属于药食两用物质。有关专家分析研判，保健食品国家安全标准中砷限量值为毫克/千克，长期食用冬虫夏草、冬虫夏草粉及纯粉片等产品会造成砷过量摄入，存在较高风险。
2月6日，青海春天发布公告回应称，控股子公司春天药用生产销售的虫草纯粉片为“唯一具备合法生产、销售身份”的此类产品。公司各项试验结果均显示，以净制冬虫夏草为原料的冬虫夏草纯粉片安全无毒。
不久之后的3月4日，国家食药总局在其官网发布了《关于停止冬虫夏草用于保健食品试点工作的通知》，停止冬虫夏草用于保健食品试点工作，此时距离该期限结束还差2年时间。
迫于各方压力，青海春天向国家食药总局申请信息公开，要求公开《消费提示》所依据的检测文件。于是，3月28日，青海春天收到了国家食药总局的回函《政府信息公开告知书》，从该告知书中可知，早在2015年7月11日，国家食药总局便告知青海省人民政府停止冬虫夏草纯粉片作为综合开发利用优势资源的产品试点以及冬虫夏草用于保健食品试点工作。但青海春天否认瞒而不报，表示在2016年3月28日收到告知书才看到该文。
2016年4月1日，青海省食药监局向青海春天子公司春天药用发出《关于青海春天药用资源科技利用有限公司换发〈药品生产许可证〉的批复》。但相关人士认为，青海春天获得《药品生产许可证》只能说明它有研发药品的能力和资格了，并不代表“极草”含片现在就有了药品身份，因为青海春天的冬虫夏草纯粉片产品目前还未获得药品批准文号。
目前，青海春天控股子公司春天药用资源科技利用有限公司已被要求停止冬虫夏草纯粉片产品试点以及相关产品生产经营。公司股票停牌中。
4月5日晚间青海春天连发两则公告，一方面搬出关联公司三普药业有限公司进行救场，春天药用将获得其冬虫夏草为原料的药品全国总经销权授权；另一方面，将向国家食药总局沟通再度申请其公开发布《关于冬虫夏草类产品的消费提示》所依据的法律法规等。
在国家食药总局网站数据库中含有冬虫夏草成分的国产保健食品共有19条记录，包括同仁堂的总统牌冬虫夏草灵芝提取物西洋参提取物三七提取物口服液、劲牌生物医药有限公司的两款冬虫夏草胶囊。而且所有产品宣称的保健功能都是调节或增强免疫力，个别产品还包括抑制肿瘤或辅助抑制肿瘤。国家保健食品评审专家金宗濂教授指出，我国现有一万多种保健食品，60%都是增强免疫功能的，“增强免疫功能”是保健食品申请进入市场时最容易通过的。
然而，对于宣称的“调节免疫功能”，吴海云认为这是一种含糊而讨巧的说法：“到底是增强还是降低免疫功能?还是增加某一项功能呢?免疫功能非常复杂，比如艾滋病会引起免疫功能低下，但有些疾病却是免疫过度亢进了。很多保健品都使用调节免疫的说法，这是卫生管理部门遗留的后患。听起来能增加抵抗力，但又没有临床依据，就叫调节免疫功能。”
而在药品数据库中，药品生产企业包括青海珠峰冬虫夏草原料有限公司、青海国草冬虫夏草资源开发有限公司、青海珠峰冬虫夏草药业有限公司、桓仁满族自治县恒宝参药有限公司、华东医药股份有限公司、杭州中美华东制药有限公司6家。国产药品仅有三种：青海珠峰冬虫夏草原料有限公司生产的发酵冬虫夏草菌粉、百令片和杭州中美华东制药有限公司生产的发酵冬虫夏草菌粉。不过，发酵虫草菌粉并非野生冬虫夏草，而是人工分离出冬虫夏草菌种后在人工环境下培养的，1988年获国家卫生部正式生产批件并获名“发酵虫草菌粉”。而且这三种药品都是作为中药审批的，而中药获批门槛较低。
食品生产许可获证企业(QS)包括两家，一家是青海久泰冬虫夏草酒业有限公司，其官网宣称“久泰所产产品均为保健品酒类，有虫草酒和浆果酒两种类型。而利用发酵冬虫夏草菌粉发酵液，继续发酵生成酒精，制成的虫草酒，其保留发酵冬虫夏草菌粉的多种多糖及营养物质，既有酒的香醇，又有冬虫夏草的功效。” 按照国家法规，食品不能声称功效，该企业产品的功效宣称只能是一句空话。
另一家是扬州凯尔生物科技有限公司，不过使用的是北冬虫夏草，也就是蛹虫草，与冬虫夏草不是一个东西。蛹虫草可以人工培育，能作为食品原料，价格很低。
此外，被当作中药材售卖的冬虫夏草不在食品、保健食品、药品管辖范围内，而我国中药材中标准中并没有砷含量的限量指标。
而被视为“极品”的极草则在食品、保健食品、药品数据库中，都没有找到。
冬虫夏草是青海省的重要支柱产业，据估计，青海省的冬虫夏草年交易额超过200亿元，而全国虫草产业的产值超过300亿元。冬虫夏草的去向，牵扯多方利益。但《冬虫夏草化学成分及其药理活性研究》一文中表明目前冬虫夏草的成分已基本清楚：野生冬虫夏草中含水分，粗蛋白～33%, 粗脂肪, 总糖～, 粗纤维, 水分, 灰分。此外还含有氨基酸、脂肪酸、核苷类物质、甾醇、7%～9％的甘露醇、多糖等, 这些成分是冬虫夏草发挥可能的生理活性或药效的主要物质基础。董彩虹表示，这些物质并不是冬虫夏草特有的，目前也并没有发现冬虫夏草中含有特有的活性成分。
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关于公布广西大学各学科博士研究生取得博士学位科研成果量化指标要求的通知（西大学位字〔2012〕54号）校属各单位：为提高我校博士研究生培养质量，促进我校学科建设与发展，各博士点学科重新修订了博士研究生取得博士学位科研成果量化指标要求，并经校第十届学位评定委员会第九次工作会议（2012年6月15日）审议通过。现将《广西大学各学科博士研究生取得博士学位科研成果量化指标要求（2012年6月15日修订）》予以公布。附件：广西大学各学科博士研究生取得博士学位科研成果量化指标要求（2012年6月15日修订）广 西 大 学 二○一二年七月十二日广西大学各学科博士研究生取得博士学位科研成果量化指标要求（2012年6月15日修订）1应用经济学（一级学科）应用经济学博士研究生从就读到提出申请博士学位期间，发表的论文需与学位论文有关，申请人署名第一或第二 (其导师第一)，且以广西大学为第一署名单位：1.国外权威经济类杂志发表学术论文1篇：要求在国外高级别经济学类期刊（影响因子居前10位、影响因子均大于1）发表论文1篇，这些刊物包括：Journal of Political Economy（University of Chicago Press，影响因子3）；Journal of Economic Literature（American Economic Association，影响因子）；The Quarterly Journal of Economics（MIT Press，影响因子）；Journal of Financial Economics（Elsevier，影响因子）；Review of Economic Studies（Blackwell Publishing，影响因子）；American Economic Review（American Economic Association，影响因子）；Journal of Monetary Economics（Elsevier，影响因子）；Review of Economic Dynamics（Academic Press for the Society for Economic Dynamics，影响因子）；Journal of Economic Perspectives（American Economic Association，影响因子）。2.国内相关权威杂志发表学术论文1篇：要求在国内经济学权威刊物《经济研究》或人文社科类权威刊物《中国社会科学》发表学术论文1篇。3.国内外较高级别经济类杂志发表学术论文2篇：可在国内CSSCI目录中经济类期刊前20%（除权威期刊《经济研究》外）的期刊，包括《中国工业经济》、《世界经济》、《金融研究》、《经济科学》、《中国农村经济》、《国际经济评论》、《中国农村观察》、《数量经济技术经济研究》、《财经研究》、《农业经济问题》、《国际金融研究》、《财贸经济》、《南开经济研究》发表学术论文2篇；或在列入SSCI目录的经济类期刊发表学术论文2篇（以学位申请人每篇论文发表当年最新版SSCI目录为准）。4.按以下规定发表学术论文3篇：在列入CSSCI目录的经济类期刊前20%（除权威期刊《经济研究》外）的期刊，包括《中国工业经济》、《世界经济》、《金融研究》、《经济科学》、《中国农村经济》、《国际经济评论》、《中国农村观察》、《数量经济技术经济研究》、《财经研究》、《农业经济问题》、《国际金融研究》、《财贸经济》、《南开经济研究》或在列入SSCI目录的经济类期刊发表学术论文1篇，加上其他列入CSSCI目录的经济类期刊发表论文2篇（以学位申请人每篇论文发表当年最新版SSCI或CSSCI目录为准）。5.按以下规定发表学术论文4篇：在列入CSSCI目录的经济类期刊发表学术论文2篇，加上列入CSSCI目录的其它相关期刊（含CSSCI目录分类中的管理学，统计学，综合性社会科学，人文、经济地理，高校综合性社科学报类期刊）发表学术论文2篇（以学位申请人每篇论文发表当年最新版CSSCI目录为准）。1.所列5项要求须满足其中1项。在国内外出版的各种增刊（或专刊）和论文集发表的论文不予认定；2. 与国外高校及科研机构联合培养的博士研究生发表的科研成果，若以国外高校及科研机构作为第一署名单位，广西大学作为第二署名单位的，可视同于广西大学为第一署名单位；3.论文的研究写作要在导师指导下进行，杜绝学术不端行为；论文发表必须与导师共同署名，但学位申请人至少要有1篇论文是第一作者（申请人不是第一作者的论文，导师必须是第一作者、申请人必须是第二作者）。4.学位申请人只有达到了本学科科研成果的要求后，方可申请博士毕业及进入博士论文答辩阶段。5.所列第5点中的“其它相关期刊”包含《广西大学学报》（哲社版），但发表多篇时只认定1篇。6.从公布之日开始执行。序号学科名称科 研 成 果 量 化 指 标 及 要 求备 注2生物学（一级学科）1.以第一或并列第一作者（如署名第二，则导师必须署名第一）在本领域国际权威刊物（期刊最新SCI影响因子等于或大于）发表(含已被正式接受) 论文1篇；2. 以第一或并列第一作者（如署名第二，则导师必须署名第一）在本领域SCI收录刊物发表（含已被正式接受）论文2篇；3. 以第一或并列第一作者（如署名第二，则导师必须署名第一）在本领域SCI收录刊物发表（含已被正式接受）论文1篇，并同时满足以下条件之一：1）以第一或并列第一作者（如署名第二，则导师必须署名第一）在国内本领域核心刊物发表（含已被正式接受）论文1篇；2）署名第一（如署名第二，则导师必须署名第一）获得授权国家发明专利1项或授权计算机软件著作权1项或部门审定的植物（作物、经济林）新品种权1项；3）获省部级科技奖项1项（一等奖排名前3，二等奖排名前2，导师必须是核心成员，内容与博士学位论文有关）。1.以上条件须满足其中1项，且科研成果要与学位论文有关并以 “亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室（广西大学）”或“广西大学”为第一署名单位；如是中外联合培养博士生， “广西大学”为第一或第二署名单位；2.从2012级博士研究生开始执行.3生态学（一级学科）1.在本领域国际权威刊物（SCI影响因子等于或大于）发表(含已被正式接受) 论文1篇。2.在本领域SCI收录刊物发表（含已被正式接受）论文2篇。3.在本领域SCI收录刊物发表（含已被正式接受）论文1篇，及在国内本领域一级学报发表（含已被正式接受）论文1篇。4．在国内本领域一级学报发表（含已被正式接受）论文2篇，并至少获得1项发明专利授权或获得1项省部级以上科技进步奖（含省部级）或获得省部级社会科学优秀成果二等奖以上（含二等奖）。1.以上条件须满足其中1项，论文、科研成果、授权专利和获奖等要与学位论文有关，且要以“广西大学”为第一署名单位. 申请人署名第一或第二(其导师为第一)。2.从公布之日开始执行。序号学科名称科 研 成 果 量 化 指 标 及 要 求备 注4电气工程（一级学科）基本条件：（1）至少在与本一级学科相关的SCI 1区及2区（以投稿当年为准）的专业期刊上或重点认定SCI收录期刊上发表一篇论文（见附录A）。（2）获得一项与研究方向相关并投入工业应用的发明专利。（3）在国内顶级期刊上发表一篇论文（见附录B，不含增刊）。（4）在SCI收录期刊发表一篇论文（见附录C）。（5）在指定EI收录期刊发表一篇论文（见附录D）。（6）至少发表一篇被三大索引收录的英文论文。满足下列条件之一，方可申请学位：1.满足上述基本条件（1）或（2）；2.满足上述基本条件（3），并满足基本条件（5）和（6）；3.满足上述基本条件（4），并满足基本条件（5）。1.论文必须以广西大学（业务关系及科研项目、成果管理关系均在广西大学，如“广西大学”、“广西电力系统最优化与节能技术重点实验室”）的名义、研究生为第一（或第二）作者署名发表。2.研究生以广西大学的名义以第一作者或者以第二作者（第一作者必须是其指导教师）发表的论文或获得的发明专利予以确认，第三作者及以后者不计。博士生在攻读硕士期间正式发表的论文或发明专利不计入其博士生学习阶段的论文或专利。3.所有博士生（包括在职委托培养、定向培养、联合培养）在读期间所发表的与学位论文相关的学术论文，其署名单位必须是广西大学。在职培养博士生在读期间，如有与广西大学合作的科研项目，并且该项目的主要内容将作为其学位论文的组成部分，对博士生本人，在获奖、鉴定或发明专利成果的署名单位时可不作硬性要求，但广西大学作为合作方必须在科研成果中有所体现，也应当作为署名单位之一。凡不符合上述要求体现的成果，在学位申请时将一律不予考虑，仅作为参考。4. 博士生学术论文统计，一律以正式发表或收到录用通知为准。5.从公布之日开始执行。序号学科名称科 研 成 果 量 化 指 标 及 要 求备 注5土木工程（一级学科）1．在本学科领域SCI收录的期刊发表论文1篇，同时在国内本领域核心刊物发表论文1篇。2．在本学科指定国内顶级杂志发表论文1篇，同时在国内本领域核心刊物发表论文1篇。3．在本学科领域EI收录的期刊发表论文2篇。4．获得与本学科领域相关的国家发明专利1项，同时在国内本领域核心刊物发表论文1篇。说明：以上各项只需符合1项，其中：[1]SCI收录的期刊论文、EI收录的期刊论文不含增刊、国际会议、学校学报发表的论文；[2]核心期刊以北京大学图书馆最新发布的中文核心期刊要目为准；[3]学科指定国内顶级杂志目录：土木工程学报、建筑结构学报、力学学报、岩土工程学报、水利学报、中国公路学报、建筑学报、机械工程学报；[4]除满足以上条件之一外，另要求发表1篇外文论文（可为国际会议发表的论文）；[5]所有论文均是已发表或已被正式录用的论文； [6]论文、科研成果、授权专利等要与学位论文有关，必须有导师署名，申请人署名第一或第二 (其导师或协助导师为第一)，第一署名单位必须是“广西大学”。从2012级博士研究生开始执行。6化学工程与技术（一级学科）1、指标要求：在本一级学科及相关领域SCI或EI源期刊发表(含已被正式接受)论文3篇，其中必须有1篇SCI源期刊发表(含已被正式接受) 的论文。未达到要求者，原则上不准申请学位论文答辩。2、成果折算：(1)申请人署名第一或第二(其导师或协助导师为第一)的授权国家发明专利，1项等同于1篇EI论文。(2)高水平论文，即SCI二区以上的期刊论文1篇等同于3篇被SCI收录的国际学术期刊论文，SCI三区期刊论文1篇等同于2篇被SCI收录的国际学术期刊论文。从2012级博士研究生开始执行。序号学科名称科 研 成 果 量 化 指 标 及 要 求备 注7作物学（一级学科）1．申请人在影响因子以上（含）的SCI刊物上发表论文1篇。申请人署名第一或第二 (其导师为第一)；2．申请人在影响因子以下的SCI刊物上发表论文2篇，或申请人分别在影响因子以下的SCI刊物和本学科规定的核心刊物上发表论文各1篇。申请人署名第一或第二 (其导师为第一)；3．申请人在本学科规定的核心刊物上发表论文1篇，以及至少获1项与学位论文有关的国家发明专利授权。申请人署名第一或第二 (其导师为第一)；4．申请人在本学科规定的核心刊物上发表论文2篇，以及至少有1个与学位论文有关的通过省部级以上（含省部级）审定的作物品种或获1项省部级以上（含省部级）科学技术奖。申请人署名第一或第二(其导师为第一)。本学科规定的核心刊物：中国科学（C辑，生命科学）、科学通报、自然科学进展、中国生物化学与分子生物学报、中国农业科学、中国水稻科学、中国农业大学学报、华中农业大学学报、华南农业大学学报、中国油料作物学报、分子植物、生态学报、应用生态学报、植物生态学报、生物化学与生物物理学报、林业科学、生物工程学报、生物多样性、农业环境科学学报、土壤学报、植物营养与肥料学报、水土保持学报、作物学报、遗传学报、棉花学报、园艺学报、果树学报、中草药、植物保护学报、植物病理学报、微生物学报、病毒学报、菌物学报、昆虫学报、应用昆虫学报、农药学学报。1．以上4项须满足其中1项，且论文、授权专利、科研成果和获奖等要与学位论文有关并以“广西大学” 第一署名单位。凡学位论文未达到以上要求者，一律不准举行学位论文答辩。2．本规定从2012级开始执行。2008-2011级按照“西大学位字[2008]16号”文执行。2007级之前（含2007级）按照“西大学位字[2007]71号”文执行。序号学科名称科 研 成 果 量 化 指 标 及 要 求备 注8兽医学（一级学科）1.在影响因子以上（含）或本学科SCI二区以上（含二区）的刊物上发表论文1篇（含录用）。申请人署名第一或第二（其导师为第一）。2.在影响因子以下的SCI刊物上发表论文2篇。申请人署名第一或第二（其导师为第一）。3.在影响因子以下的SCI刊物上发表论文1篇的，还需在国内本领域核心期刊上发表（含录用）论文1篇。申请人署名第一或第二（其导师为第一）。1.以上3项须满足其中1项，且论文要与学位论文有关并以“广西大学” 为第一署名单位。2.从2012年入学的博士研究生开始执行。9制糖工程（二级学科）1. SCI或EI收录≥2篇(英文，含已被正式录用的论文，非会议论文)；2. SCI或EI收录≥1篇(含录用)，科研成果、专利和获奖等≥1篇（项）；3. SCI或EI收录≥0篇，科研成果、专利和获奖等≥2篇（项）。（说明：科研成果、专利和获奖等分别为经鉴定达到国内先进水平的科研成果或经省部级以上（含省部级）主持鉴定、验收的科研成果或授权专利或获得省部级以上（含省部级）科技进步奖。（排序：前二名）1．以上3项须满足其中1项，且论文、科研成果、授权专利和获奖等要与学位论文有关，必须有导师署名，申请人署名第一或第二（其导师或协助导师为第一），第一署名单位必须是“广西大学”。2．从2012级开始执行。序号学科名称科 研 成 果 量 化 指 标 及 要 求备 注10植物病理学（二级学科）1．申请人在影响因子以上（含）的SCI刊物上发表论文1篇。申请人署名第一或第二 (其导师为第一)；2．申请人在影响因子以下的SCI刊物上发表论文2篇，或申请人分别在影响因子以下的SCI刊物和本学科规定的核心刊物上发表论文各1篇。申请人署名第一或第二 (其导师为第一)；3．申请人在本学科规定的核心刊物上发表论文1篇，以及至少获1项与学位论文有关的国家发明专利授权。申请人署名第一或第二 (其导师为第一)；4．申请人在本学科规定的核心刊物上发表论文2篇，以及至少有1个与学位论文有关的通过省部级以上（含省部级）审定的作物品种或获1项省部级以上（含省部级）科学技术奖。申请人署名第一或第二(其导师为第一)。本学科规定的核心刊物：中国科学（C辑，生命科学）、科学通报、自然科学进展、中国生物化学与分子生物学报、中国农业科学、中国水稻科学、中国农业大学学报、华中农业大学学报、华南农业大学学报、中国油料作物学报、分子植物、生态学报、应用生态学报、植物生态学报、生物化学与生物物理学报、林业科学、生物工程学报、生物多样性、农业环境科学学报、土壤学报、植物营养与肥料学报、作物学报、遗传学报、园艺学报、果树学报、植物保护学报、植物病理学报、微生物学报、病毒学报、菌物学报、昆虫学报、应用昆虫学报、农药学学报。1.以上4项须满足其中1项，且论文、授权专利、科研成果和获奖等要与学位论文有关并以“广西大学” 第一署名单位。凡学位论文未达到以上要求者，一律不准举行学位论文答辩。2.本规定从2012级开始执行。2008-2011级按照“西大学位字[2008]16号”文执行。2007级之前（含2007级）按照“西大学位字[2007]71号”文执行。11动物遗传育种与繁殖（二级学科）1.在影响因子以上（含）或本学科SCI二区以上（含二区）的刊物上发表论文1篇（含录用）。申请人署名第一或第二（其导师为第一）。2.在影响因子以下的SCI刊物上发表论文2篇。申请人署名第一或第二（其导师为第一）。3.在影响因子以下的SCI刊物上发表论文1篇的，还需在国内本领域核心期刊上发表（含录用）论文1篇。申请人署名第一或第二（其导师为第一）。1.以上3项须满足其中1项，且论文要与学位论文有关并以“广西大学”为第一署名单位。2.从2012年入学的博士研究生开始执行。说明：发表的科研成果（包括论文、专著、获奖、发明专利等）需与学位论文有关，申请人署名第一或第二 (其导师第一)，且以广西大学为第一署名单位；与国外高校及科研机构联合培养的博士研究生发表的科研成果，若以国外高校及科研机构作为第一署名单位，广西大学作为第二署名单位的，可视同于广西大学为第一署名单位，在申请学位时予以认定；在《广西大学学报》发表的论文，可作为国内核心期刊在申请学位时予以认定，但发表多篇时只认定1篇；在各增刊发表的论文不予认定。附：电气工程一级学科博士点博士研究生申请博士学位发表论文期刊目录附录A 与本一级学科相关的SCI 1区及2区（以当年认定为准）的专业期刊或重点认定SCI期刊：（一）电气工程类1. Proceedings of the IEEE（SCI：1区，IF=）2. IEEE Transactions on Power Systems(SCI：2区，IF=)3. IEEE Transactions on Power Delivery （SCI：3区，IF=）4. IEEE Transactions on Energy Conversion （SCI：3区，IF=）5. IET Generation Transmission & Distribution (3区，IF=)6. IEEE Transactions on Dielectrics And Electrical Insulation （SCI：3区，IF=）7. IEEE Transactions on Electromagnetic Compatibility （SCI：3区，IF=）8. IEEE Transactions on Power Electronics（SCI：3区，IF=）9. Applied Energy(2区，IF=)10. Solar Energy(2区，IF=)11. Progress in Photovoltaics(1区，IF=)（二）应用数学类 Programming（SCI：1区，IF=） Journal on Optimization （SCI：2区，IF=） Journal of Operational Research（SCI：2区，IF=）附录B 国内顶级期刊：中国电机工程学报、自动化学报、电子学报、计算机学报、数学学报、机械工程学报附录C SCI收录期刊：（一） 电气工程类1. IEEE transactions on Industry Applications(3区，IF=)2. Electric power systems research(3区，IF=)3. IET Renewable Power Generation(3区，IF=)4. International Journal of Electrical Power & Energy Systems(3区，IF=)5. European Transactions on Electrical Power(4区，IF=)6. Electric Power Components and Systems(4区，IF=)7. Journal of Power Electronics(4区，IF=)8. Power(4区，IF=)9. Energy Conversion and Management(3区，IF=)10. International Journal of Green Energy(4区，IF=)11. Engineering Optimization(3区，IF=)12. Electrical Engineering(4区，IF=)13. Electrical Engineering in Japan(4区，IF=)14. Electromagnetics(4区，IF=)15. Advanced Powder Technology(4区，IF=)16. IEEE Transactions on Circuits And Systems I-Fundamental Theory And Application(3区，IF=)17. IEEE Transactions On Circuits And Systems Ii-Analog And Digital Signal Processing(3区，IF=)18. Energy Exploration & Exploitation(4区，IF=)19. Energy Sources20. Energy Journal(3区，IF=)21. European Journal of Information Systems(3区，IF=)22. Powder Technology(3区，IF=)23. IET Circuits Devices & Systems (4区，IF=)24. IET Control Theory And Applications(3区，IF=)25. IET Electric Power Applications (3区，IF=)26. IEEE Electrical Insulation M
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SCI: plant disease, phytopathology, MPMI, Plant journal, plant cell国内期刊： 各农业大学学报，植物病理学报之类
同意楼上所说
常投期刊： 植物生态学报 、 植物学报 、 植物研究、 菌物学报、 植物科学学报 、植物病理学报 、 植物分类与资源学报、 植物生理学报 、 西北植物学报 、 广西植物 、 热带亚热带植物学报SCI期刊：Journal of Systematics and Evolution
最简单的方法，自然是直接使用【知网】、【百度学术】或【谷歌学术】。首先，在word中设置列表编号为 [1]，然后，在【知网】上找到需要的文献，在前方打上勾，此时会在右下角出现一个窗口，点击【导出/参考文献】，就会导出到相应界面，复制粘贴就行了。同理，其他的也是一样的道理。
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是学校的毕业论文还是杂志上的？ 因为每个地方的要求都不一样。 你可以到大学的教务处网站上看看，对电子版本的论文有非常详细的要求。 去年我才毕业，被这个折腾死了. 华中农业大学学士学位论文撰写规范（暂行） 学士学位论文（设计说明书）是学生在教师的指导下经过调查研究、科学实验或工程设计，对所取得成果的科学表述，是学生毕业及学位资格认定的重要依据。其撰写在参照国家、各专业部门制订的有关标准及语法规范的同时，应遵照如下规范： 1．论文结构及写作要求 论文（设计说明书）应包括封面、目录、题目、中文摘要与关键词、英文题目、英文摘要与关键词、正文、参考文献、致谢和附录等部分。 目录 目录独立成页，包括论文中全部章、节的标题及页码。 题目 题目应该简短、明确、有概括性。论文题目一般中文字数不超过25个字，外文题目不超过15个实词，不使用标点符号，中外文题名应一致。标题中尽量不用英文缩写词，必须采用时，应使用本行业通用缩写词。 摘要与关键词 摘要 摘要是对论文（设计说明书）内容不加注释和评论的简短陈述，要求扼要说明研究工作的目的、主要材料和方法、研究结果、结论、科学意义或应用价值等，是一篇具有独立性和完整性的短文。摘要中不宜使用公式、图表以及非公知公用的符号和术语，不标注引用文献编号。中文摘要一般为300字左右。 关键词 关键词是供检索用的主题词条，应采用能覆盖论文主要内容的通用技术词条（参照相应的技术术语标准），一般列3～8个，按词条的外延层次从大到小排列，应在摘要中出现。中英文关键词应一一对应。 论文正文 论文正文包括前言、论文主体及结论等部分。 前言 前言应综合评述前人工作，说明论文工作的选题目的、背景和意义、国内外文献综述以及论文所要研究的主要内容。对所研究问题的认识，以及提出问题。 论文主体 论文主体是论文的主要部分，应该结构合理，层次清楚，重点突出，文字简练、通顺。 结论（结果与分析） 结论是对整个论文主要成果的归纳，应突出论文（设计）的创新点，以简练的文字对论文的主要工作进行评价。若不可能作出应有的结论，则进行必要的讨论。可以在结论或讨论中提出建议、研究设想及尚待解决的问题等等。结论作为单独一章排列，不加章号。 参考文献 参考文献反映论文的取材来源、材料的广博程度。论文中引用的文献应以近期发表的与论文工作直接有关的学术期刊类文献为主。应是作者亲自阅读或引用过的，不应转录他人文后的文献。 致谢 向给予指导、合作、支持及协助完成研究工作的单位、组织或个人致谢，内容应简洁明了、实事求是，避免俗套。 附录 不宜放在正文中但有重要参考价值的内容（如公式的推导、程序流程图、图纸、数据表格等）可编入论文的附录中。 2．书写及打印要求 论文书写 论文（设计说明书）要求统一使用Microsoft Word软件进行文字处理，统一采用A4页面（210×297㎜）复印纸打印。其中上边距25㎜、下边距25㎜、左边距25㎜、右边距25㎜、页眉15㎜、页脚15㎜。字间距为标准，行间距为单倍行距。页眉内容统一为“华中农业大学学士学位论文（设计）”，采用宋体小五号斜体字居右排写。 页码在下边线下居中放置，用小五号字体。目录、摘要、关键词等文前部分的页码用罗马数字（Ⅰ、Ⅱ……）编排，正文以后的页码用阿拉伯数字（1、2……）编排。 论文错漏按正式出版物要求不能大于万分之一。 目录 目录应包括论文中全部章节的标题及页码，含摘要与关键词（中、外文）、正文章、节题目（农、理、工科类要求编写到第3级标题，即□.□.□。文、法、经、管科类可视论文需要进行，编写到2～3级标题）、参考文献、致谢、附录等。 目录题头用四号黑体字居中排写，隔行书写目录内容。目录中各章节题序及标题用五号宋体。目录打印示例见附录。 摘要与关键词 中、外文摘要与关键词单独成页置于目录后，编排上中文在前，外文在后。摘要、关键词题头均用四号黑体字居中排写，隔行书写具体内容，内容文字用五号宋体字，英文用Times New Roman。关键词各词条间用分号“；”隔开。 论文正文 章节及各章标题 章节标题应突出重点、简明扼要，字数一般在15字以内，不使用标点符号。标题中尽量不采用英文缩写词，对必须采用者，应使用本行业的通用缩写词。 层次 层次根据实际需要选择，以少为宜。各层次标题不得置于页面的最后一行（孤行）。层次代号格式要求参照表2-1和表2-2。 表2-1 农理工科类论文层次代号及说明 章 1□××××× 顶格，四号黑体 节 □××××× 顶格，小四号黑体 条 □××××× 顶格，五号黑体 款 □××××× 顶格，五号黑体 □□××××××××××××××××××××××××××××××× 首行空两格，五号宋体 项 （1）×××× 顶格，五号宋体 □□××××××××××××××××××××××××××××××× 首行空两格，五号宋体 表2-2 文法经管类论文层次代号及说明 章 一、××××× 顶格，四号黑体 节 （一）×××× 顶格，小四号黑体 条 □□1．××××× 空两格，五号黑体 □□××××××××××××××××××××××××××××××× 空两格，五号宋体（正文） 款 □□（1）×××× 空两格，五号黑体 □□××××××××××××××××××××××××××××××× 空两格，五号宋体（正文） 项 □□①□××××× 空两格，五号宋体 □□××××××××××××××××××××××××××××××× 首行空两格，五号宋体（正文） 参考文献 文献标识 引文是论证的辅助手段，应忠于原意，表达完整，准确切题。在论文中引用文献时，应在引文处标注被引用人的姓名和被引用文献发表的年份。若所引用文献只有1－2名作者时作者姓名全部列出（外文文献只列姓氏），当所引用文献作者有3名及3名以上时，只列第一作者，后加“等”字以示省略。如“（梅明华，2002）”，“（梅明华和李泽炳，2001）”，“（梅明华等，2002）”，外文文献引用作同样处理，如（Smith,1990）,(Smith and Jones,1992),(Smith et al.,1993)等。 书写格式 在论文（设计）末尾要列出在论文中参考引用过的专著、论文及其他资料，与文中引用文献一一对应。参考文献题头用黑体四号字居中排写，其后空一行排写文献条目。参考文献排列规则是：中文文献在前，外文文献在后；中文文献按第一作者的姓氏笔画为序排列，英文及其它西文按第一作者姓氏字母顺序排列；第一作者相同的文献按发表时间的先后顺序列出，所列的同一第一作者同年内的文献多于一篇时，可在年份后加“a”、“b”等字母予以分别，如“2001a”、“2001b”等；文献作者人数在3人以下的全部列出，超过3人为多人时，一般只列出3名作者，后面加“等”字以示省略，不同作者姓名间用逗号隔开。姓名一律采用“姓在前名在后”的写法，外文姓名按国际惯例缩写，并省略缩写点，空一个字符。未公开发表的资料不列入参考文献，确有引用必要，须在脚注中说明引用。 所有中文参考文献著录格式中的句号用中文全角状态下的“.”表示，所有西文参考文献著录格式中的标点符号用西文状态下的符号，后空一格。文字换行时与作者名第一个字对齐。常用参考文献编写规定如下： 著作图书类文献——[序号]□作者．书名．版次．出版地：出版者，出版年：引用部分起-止页 翻译图书类文献——[序号]□作者．书名．译者．版次．出版地：出版者，出版年：引用部分起-止页 学术刊物类文献——[序号]□作者．文章名．学术刊物名，年，卷（期）：引用部分起-止页 学术会议类文献——[序号]□作者．题名．见：编者，文集名，会议名称，会议地址，年份．出版地：出版者，出版年：引用部分起-止页 学位论文类文献——[序号]□学生姓名．学位论文题目．学校及学位论文级别．答辩年份：引用部分起-止页 报纸文献――[序号]□作者．文章名．报纸名，出版日期（版次） 在线文献——[序号]□作者．文章名．电子文献的出处或可获得地址，发表或更新日期/引用日期（任选） 公式 原则上居中书写。若公式前有文字（如“解”、“假定”等），文字顶格书写，公式仍居中写。公式末不加标点。公式序号按章编排，并在公式后靠页面右边线标注，如第1章第一个公式序号为“（1-1）”，附录2中的第一个公式为“（②-1）”等。文中引用公式时，一般用“见式（1-1）”或“由公式（1-1）”。 公式较长时在等号“＝”或运算符号“＋、－、×、÷”处转行，转行时运算符号书写于转行式前，不重复书写。公式中应注意分数线的长短（主、副分线严格区分），长分线与等号对齐。 公式中第一次出现的物理量应给予注释，注释的转行应与破折号“——”后第一个字对齐，格式见下例： 式中 Mf——试样断裂前的最大扭矩（N•m）； θf——试样断裂时的单位长度上的相对扭转角 插表 表格一般采取三线制，不加左、右边线，上、下底为粗实线（1磅），中间为细实线（磅）。比较复杂的表格，可适当增加横线和竖线。 表序按章编排，如第1章第一个插表序号为“表1-1”等。表序与表名之间空一格，表名不允许使用标点符号。表序与表名置于表上，居中排写，采用黑体小五号字。 表头设计应简单明了，尽量不用斜线。表头中可采用化学符号或物理量符号。全表如用同一单位，将单位符号移到表头右上角，加圆括号。表中数据应正确无误，书写清楚。数字空缺的格内加“—”字线（占2个数字宽度）。表内文字和数字上、下或左、右相同时，不允许用“〃”、“同上”之类的写法，可采用通栏处理方式。 文法经管类论文插表在表下一般根据需要可增列补充材料、注解、资料来源、某些指标的计算方法等。补充材料中中文文字用楷体小五号字，外文及数字用Times New Roman体小五号字。 插图 插图应符合国家标准及专业标准，与文字紧密配合，文图相符，技术内容正确。 图题及图中说明 图题由图号和图名组成。图号按章编排，如第1章第一图图号为“图1-1”等。图题置于图下，图注或其他说明时应置于图与图题之间。图名在图号之后空一格排写，图题用黑体小五号字。引用图应说明出处，在图题右上角加引用文献编号。图中若有分图时，分图号用a)、b)标识并置于分图之下。图中各部分说明应采用中文（引用的外文图除外）或数字项号，各项文字说明置于图题之上（有分图题者，置于分图题之上），采用揩体小五号字。 插图编排 插图与其图题为一个整体，不得拆开排写于两页。插图应编排在正文提及之后，插图处的该页空白不够时，则可将其后文字部分提前排写，将图移到次页最前面。 照片图 论文中照片图均应是原版照片粘贴，不得采用复印方式。照片应主题突出、层次分明、清晰整洁、反差适中。对显微组织类照片必须注明放大倍数。 附录 附录序号采用“附录1”、“附录2”或“附录一”、“附录二”等，用四号黑体字左起顶格排写，其后不加标点符号，空一行书写附录内容。附录内容文字字体字号参照正文要求。 附录1 目录示例 （空一行） 目□录（4号黑体居中，不加粗） （空一行） □□摘要（5号宋体）……………………………………………………………………………1 □□关键词（5号宋体）……………………………………………………………………………1 □□Abstract（5号宋体）……………………………………………………………………………1 □□Key words（5号宋体）……………………………………………………………………………1 □□前言（5号宋体）……………………………………………………………………………1 1. 材料与方法……………………………………………………………………………………………3 □材料………………………………………………………………………………………………3 □方法………………………………………………………………………………………………3 □育性的观察………………………………………………………………………………3 □有丝分裂计数……………………………………………………………………………3 □减数分裂观察……………………………………………………………………………3 □统计方法…………………………………………………………………………………3 2. 结果与分析……………………………………………………………………………………………3 □花色和育性………………………………………………………………………………………3 □有丝分裂计数………………………………………………………………………………… 4 □染色体数分布及两代间变化 …………………………………………………………4 □植株类型及两代间变化……………………………………………………………5 □F5代不育群体与可育群体的染色体数目变异的比较…………………………………5 □减数分裂的初步观察……………………………………………………………………………6 3. 讨论……………………………………………………………………………………………………6 □关于萝卜与甘蓝远缘杂种雄性不育的思考……………………………………………………6 □关于萝卜与甘蓝远缘杂种稳定方向的思考……………………………………………………7 □向偶数染色体方向稳定…………………………………………………………………7 □向异源双二倍体方向稳定………………………………………………………………7 □关于杂种育性水平逐代提高的可能原因……………………………………………………7 参考文献……………………………………………………………………………………………………8 致谢…………………………………………………………………………………………………………8 附录……………………………………………………………………………………………10 附录2 论文摘要及关键词示例（中、英文） 萝卜与甘蓝属间杂种后代的细胞学观察（小2号黑体居中） （空一行） 摘□要（4号黑体居中） （空一行） □□以萝卜甘蓝属间杂种后代为材料，研究其体细胞的染色体数目变异情况。研究结果表明：F5代植株的染色体数目变异范围为18至38，其中以36最多，占，主要集中于38，37，36和34；F6代植株的染色体数目变异范围明显减小，在30至38之间，其中以36最多，占，主要集中于37、36和35。F5代群体中，2n=36的植株最多，占，其次是2n=38的植株，占；F6代群体中，也是2n=36的植株最多，占，……（5号宋体，单倍行距） （空一行） 关键词（4号黑体居中） （空一行） □□萝卜；甘蓝；属间杂种后代；细胞学；育性（5号宋体） （空一行） Cytological study on the intergeneric hybrid progenies between Raphanus sativus and Brassica oleracea （空一行） 〔3号Times New Roman居中，单倍行距〕 Abstract（4号Times New Roman居中） （空一行） □□The intergeneric hybrid progenies of Raphanus sativus × Brassica oleracea were used in this study, and the variation of chromosome numbers of ovary cells were studied. The results were as follows. In the plants of the F5 generation, chromosome numbers ranged from 18 to 38,and the cells with 36 chromosomes were the most frequent (). Most of the cells were those with chromosome numbers 38,37,36 and 34. In the plants of the F6 generation, the range of chromosome number decreased evidently, which was from 30 to 38. The cells with 36 chromosomes were the highest (). Most of the cells were those with chromosome numbers 37,36 and 35. In the F5 generation, the plants with 2n=36 as the highest chromosome number were the most frequent (), and those with 2n=38 were the second (). In the F6 generation, the plants with 2n=36 as the highest chromosome number were again the highest () …… （5号Times New Roman，单倍行距） （空一行） Key words（4号Times New Roman居中） （空一行） □□Raphanus sativus；Brassica oleracea；intergeneric hybrids；cytology；fertility （5号Times New Roman） 附录3 论文格式示例（农、理、工科类用） 1□标题（正文第1章标题， 4号黑体，上下间距为：段前行，段后行） □□×××××××××（5号宋体，单倍行距）××××××××××××××××××××××××××××……… 1．1□××××××（正文2级标题，小4号黑体） □□×××××××××（5号宋体）××××××………… □××××（正文3级标题， 5号黑体） □□×××××××××（5号宋体）×××××××××××××××××××××××××××××××……… 2□×××××××（正文第2章标题，要求同上） □□×××××××××（5号宋体）×××××××××××××××××××××××××××××××××××……… （正文后空一行） 参考文献（4号黑体居中） （空一行） [1]□××××××××××××（5号宋体） [2]□××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××× [3]□×××××××××××××××××××××× ………… 致□谢（4号黑体居中） □□×××××××××（5号宋体，单倍行距）××××××××××××××××××××××××××××………… 附录：（另起一页，4号黑体，顶格） 注：文中表格与插图格式严格参照规范要求。 附录4 论文格式示例（文法经管类用） 一、标题（正文第1章标题， 4号黑体，上下间距为：段前行，段后行） □□×××××××××（5号宋体，单倍行距）××××××××××××××××××××××××××××……… （一）××××××（正文2级标题，小4号黑体） □□×××××××××（5号宋体）××××××………… □□1．××××（正文3级标题， 5号黑体） □□×××××××××（5号宋体）×××××××××××××××××××××××××××××××……… □□（1）××××（正文4级标题，5号黑体） 二、×××××××（正文第2章标题，要求同上） □□×××××××××（5号宋体）×××××××××××××××××××××××××××××××××××……… （正文后空一行） 参考文献（4号黑体居中） （空一行） [1]□××××××××××××（5号宋体） [2]□××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××× [3]□×××××××××××××××××××××× ………… 致□谢（4号黑体居中） □□×××××××××（5号宋体，单倍行距）××××××××××××××××××××××××××××………… 附录：（另起一页，4号黑体，顶格） 注：文中表格与插图格式严格参照规范要求。 附录5 文献综述示例 中国烟草企业信息化建设的研究现状 （空一行） 摘□要：中国是世界最大的烟叶生产和消费国，在长期的计划体制下发展，市场竞争能力薄弱。面对入世的国际环境，国家加快了烟草企业信息化建设的步伐，以提高其管理效率和市场竞争能力。本文阐述了我国烟草企业信息化建设的现状，分析了烟草企业中MIS系统、电子商务系统、供应链系统、ERP系统以及CIMS等信息系统的特点和存在问题，为烟草企业信息化建设提供参考。 关键词：烟草企业；信息化；MIS；ERP （空一行） 正文…… 说明： ①综述题目采用小二号黑体字居中排写，后空一行书写摘要及关键词； ②摘要、关键词题头为五号黑体字，内容文字为五号楷体字，文中数字及英文采用Times New Roman字体，统一用单倍行距； ③页眉设置：页眉内容统一为“华中农业大学学士学位论文（设计）文献综述”，采用宋体小五号斜体字居右排写； ④正文书写及其它格式参照《华中农业大学学士学位论文撰写规范（暂行）》。 附录6 外文翻译示例 烟草内山梨糖醇对硼吸收和转移的影响 （空一行） □□原文来源：Bellaloui N，Brown P H．Manipulation of in vivo Sorbitol Production Alters Boron Uptake and Transport in Tobacco．Plant ，119（2）：73－74 （空一行） 译文正文…… 说明： ①译文题目采用小二号黑体字居中排写，后空一行书写“原文来源”，统一用单倍行距； ②在题目与译文正文之间必须标明原文来源，原文来源编写参照《华中农业大学学士学位论文撰写规范（暂行）》中参考文献编写格式参照论文（设计）参考文献著录格式； ③“原文来源”首行空两格书写，题头为五号黑体字，内容采用五号Times New Roman字书写； ④页眉设置：页眉内容统一为“华中农业大学学士学位论文（设计）外文翻译”，采用宋体小五号斜体字居右排写； ⑤正文书写及其它格式参照《华中农业大学学士学位论文撰写规范（暂行）》； ⑥外文翻译装订顺序为译文在前原文复印件在后，原文复印件应整洁。 附录7 参考文献示例 （正文后空一行） 参考文献 （空一行） [1] 王石平，刘克德，王江，张启发．用同源序列的染色体定位寻找水稻抗病基因DNA片段．植物学报，1998，40: 42-50 [2] 王明亮．关于中国学术期刊标准化数据库系统工程的进展[EB/OL] ．. edu. cn/pub/wml. txt/． [3] 刘克德．水稻广亲和性遗传基础的全基因组分析及S5位点区段部分物理图谱的构建．[博士学位论文]．武汉：华中农业大学图书馆，1998 [4] 全国文献工作标准化技术委员会第六分委员会．GB 6447-86文献编写规则．北京：中国标准出版社，1986 [5] 张启发，李建雄．水稻杂种优势的遗传和分子生物学基础的研究进展．王连铮, 戴景瑞主编, 全国作物育种学术讨论会论文集．中国作物学会第六届理事会暨全国作物育种学术讨论会, 北京, 1998，北京：中国农业科技术出版社，1998：1-10 [6] 张启发．玉米的群体和群体遗传学．见：刘纪麟主编，玉米育种学．北京：农业出版社，1991： 264-320 [7] 姜锡州．一种温热外敷药制备方法．中国专利, 881056073．1989-07-26 [8] 谢希德．创造学习的新思路[N] ．人民日报，1998-12-25（10）． [9] 蓝盛银，徐珍秀．植物花粉剥离观察扫描电镜图解．北京：科学出版社, 1996：47-48 [10] Ahn S, Tanksley S D. 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Abstract, 7th Annual Meeting of the Rockefeller Foundation's International Program on Rice Biotechnology, 1994, Bali, Indonesia什么是文献 用文字、图形、符号、声频、视频等技术手段记录人类知识的一种载体，或理解为固化在一定物质载体上的知识。现在通常理解为图书、期刊等各种出版物的总和。文献是记录、积累、传播和继承知识的最有效手段，是人类社会活动中获取情报的最基本、最主要的来源，也是交流传播情报的最基本手段。正因为如此，人们把文献称为情报工作的物质基础。在国内国外，都常常可以看到有人把“文献”与“情报”，“文献学”与“情报学”等同起来，虽然这种等同未必适宜，但却反映了文献在情报活动和科学中的极为重
某些国产试剂、试药与进口品存在一定的质量差异，《欧洲药典》收载的冲洗液配方中卵磷脂及聚山梨酯80的含量较多，当用国产品配制时，其溶解性能不好，造成溶液混浊，冲洗量大时，溶液过滤的速度缓慢，影响冲洗效果，甚至无法进行过滤。该问题通过降低配方中各成分的量可以得到有效解决。经验证，即使配方中的各成分量减少一半，效果依然可满足实验的需要，且过滤速度适宜，还可降低实验成本。
吡咯类抗真菌药物制剂微生物限度检查方法的研究摘要] 目的：研究建立吡咯类抗真菌药物制剂的微生物限度检查方法。方法：通过预试验摸索，拟以含有组氨酸、卵磷脂和聚山梨酯80的混合溶液作为稀释剂及冲洗液，采用离心沉淀集菌法与薄膜过滤法联用的方法进行此类药物的微生物限度检查并进行方法学验证。结果：按《中国药典》2005年版附录要求对拟定方法进行验证，结果验证菌株的回收率均大于70%，控制菌检查阳性菌也生长良好。结论：以含有组氨酸、卵磷脂和聚山梨酯80的混合溶液作为稀释剂及冲洗液，采用离心沉淀集菌法与薄膜过滤法联用进行吡咯类抗真菌药物制剂的微生物限度检查，方法是可行的。[关键词] 吡咯类抗真菌药物制剂；微生物限度检查；离心集菌法；薄膜过滤法吡咯类抗真菌药，如硝酸布康唑和克霉唑，具广谱抗真菌活性，对表皮癣菌、毛发癣菌、曲菌、着色真菌、隐球菌属和念珠菌属均有较好的抗菌活性。该类药物通过干扰细胞色素P-450的活性，从而抑制真菌细胞膜主要固醇类-麦角固醇的生物合成，损伤真菌细胞膜并改变其通透性，导致重要的细胞内物质外漏，还可抑制真菌的三酰甘油和磷脂的生物合成，抑制氧化酶和过氧化酶的活性，引起细胞内过氧化氢积聚，导致细胞亚微结构变性和细胞坏死。此类药物对细菌也有一定的抑制作用。根据目前国内要求，非规定灭菌的药物制剂均需建立微生物限度检查方法，包括抗细菌和抗真菌类药物制剂，但由于此类药物抗菌活性很强，因此如何消除其抑菌性，使检验得以顺利进行就成为建立方法时极为重要也是较为困难的关键点。本文作者选择目前在国内还没有适宜微生物限度检查方法的吡咯类（如硝酸布康唑和克霉唑）抗真菌药物制剂进行了试验研究，经多次试验，重点对冲洗液组成和冲洗量进行考察研究和优选，最终参考《欧洲药典》确定了以含有组氨酸、卵磷脂和聚山梨酯80的混合溶液作为稀释剂及冲洗液，采用离心沉淀集菌法与薄膜过滤法联用，从而建立了硝酸布康唑类和克霉唑类药物制剂的微生物限度检查方法，并进行了方法学验证，结果表明该方法是适宜可行的。1试药与仪器试药硝酸布康唑阴道乳膏3批，克霉唑阴道片2个厂家各3批，复方克霉唑乳膏3批，克霉唑乳膏3批，醋酸米康唑乳膏3批，均为市售药品；营养肉汤培养基，改良马丁培养基，营养琼脂培养基，玫瑰红钠琼脂培养基，胆盐乳糖培养基，溴化十六烷基三甲胺琼脂培养基，甘露醇氯化钠琼脂培养基，均购自中国药品生物制品检定所；组氨酸、卵磷脂、聚山梨酯80、蛋白胨、氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠均为市售分析纯试剂、试药；金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]，枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]，大肠埃希菌[CMCC(B)44102]，铜绿假单胞菌[CMCC(B)10104]，白色念珠菌[CMCC(F)98001]，黑曲霉[CMCC(F)98003]，以上菌种均购自中国药品生物制品检定所菌种室，按照《中国药典》2005年版附录的要求将以上5种验证菌配制成每1 ml中含菌量为50~100 cfu的菌液。仪器洁净工作台，医用吸引器，低速离心机等。2方法与结果药典附录收载方法试验的结果将上述各药品用《中国药典》2005年版推荐的常用稀释剂pH 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成1∶10的供试液，依次采用药典附录收载的几种消除药物抑菌性的处理方式，即培养基稀释法（取1∶10的供试液按每皿 ml或取1∶100的供试液按每皿 ml注皿）、离心沉淀集菌法和以pH 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液为冲洗液的薄膜过滤法、以及将离心沉淀集菌法与薄膜过滤法联用进行菌落计数试验。其中，以pH 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液为冲洗液，冲洗总量已达1 000 ml的离心沉淀集菌法与薄膜过滤法联用试验回收率测定结果见表1。回收率测定即使采用了处理力度较大的离心沉淀集菌法与薄膜过滤法联用，5种验证菌株中仍有4种回收率为零，说明吡咯类抗真菌药物具有很强的抑制细菌和真菌的作用，或说明滤膜对此类药物有较强的吸附作用，目前常用的冲洗液很难将其冲洗干净，国内常用的几种处理方式均不适用于此类药品。不同配方稀释剂与冲洗液的效果比较参考《中国药典》2005年版[1]、《欧洲药典》第5版[2]，配制了下列5种稀释剂与冲洗液，详见表2。选用一批克霉唑阴道片，依次试验上述5种稀释剂与冲洗液，采用离心沉淀集菌法与薄膜过滤法联用，比较实验效果，详见表3。上述结果表明，采用欧洲药典配方溶液且卵磷脂为进口试剂，或采用自拟5号溶液作为稀释剂与冲洗液均对消除药品的抑菌性效果较为满意，但当卵磷脂改为国产试剂时，由于溶液呈混浊状，无法进行过滤。将卵磷脂和聚山梨酯80的量降为欧洲药典配方量的一半时，溶液澄清度可不受试剂质量影响，同时冲洗效果也可满足实验要求。建立的方法根据上述试验结果建立方法取供试品10 g，加入含有无菌组氨酸-卵磷脂-聚山梨酯80的混合溶液（配制方法见后）至100 ml，在45℃保温振摇至供试品分散均匀，制成1∶10的均匀供试品储备液。细菌计数、霉菌和酵母菌计数均采用离心沉淀集菌法与薄膜过滤法联用。取1∶10的供试品储备液50 ml，以500 r/min的速率离心5 min，取全部上清液，加上述混合溶液至50 ml，再以3 000 r/min的速率离心20 min，取底部集菌液约5 ml，加上述混合溶液至50 ml，即为1∶10的供试液（乳膏等制剂可略去沉淀步骤）。取1∶10的供试液1 ml，加至上述混合溶液100 ml中，用薄膜过滤器全部过滤，以上述混合溶液作为冲洗液，每次冲洗100 ml，共冲洗3次，取滤膜，依法检查（《中国药典》2005年版二部附录Ⅺ J）。控制菌检查（如金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌等）采用离心沉淀集菌法与薄膜过滤法联用。取上述菌落计数项下1∶10的供试液10 ml，加至上述混合溶液100 ml中，用薄膜过滤器全部过滤，冲洗方式同菌落计数项下，将滤膜接种至相应的培养基中，依法检查(《中国药典》2005年版二部附录Ⅺ J)。无菌组氨酸－卵磷脂－聚山梨酯80混合溶液配制方法聚山梨酯80 15 g，卵磷脂 g，组氨酸 g，蛋白胨 g，氯化钠 g，磷酸二氢钾 g，磷酸氢二钠 g，水1 000 ml，混匀，微温溶解，分装，灭菌。验证试验按照《中国药典》2005年版附录要求对上述建立的方法进行验证。细菌计数、霉菌和酵母菌计数方法的验证菌液组：分别取上述5种菌液各1 ml，采用平皿计数法，测定制备好的菌液中每毫升的活菌数。供试品对照组：取1∶10的供试液1 ml，加入上述混合溶液100 ml，用薄膜过滤器全部过滤，冲洗方式同上，取滤膜，置规定温度培养、计数。试验组：取1∶10的供试液1 ml，按供试品对照组同法操作，在第三次冲洗液中加入1 ml上述菌液（50~100 cfu试验菌），取滤膜，置规定温度培养、计数，计算回收率，见表4。稀释剂对照组：分别取上述5种菌液各10 ml（500~1 000 cfu试验菌），按供试品对照组同法操作，计算回收率，见表4。按下列公式计算回收率(%)：上述实验显示，各验证菌的回收率均达到药典附录要求，表明该类药品采用此法进行细菌、霉菌和酵母菌计数是可行的。控制菌检查方法的验证试验组：取上述1∶10的供试液10 ml，加至上述混合溶液100 ml中，用薄膜过滤器全部过滤，冲洗方式同上，将滤膜加至相应培养基100 ml中进行增菌培养，作为供试品组。空白对照组：取上述混合溶液10 ml，同法操作，作为稀释剂空白对照组。阴性菌对照组：取1∶10的供试液10 ml，加至上述混合溶液100 ml中，用薄膜过滤器全部过滤，冲洗方式同上，但在第3次冲洗液中加入适宜的阴性对照菌（如金黄色葡萄球菌检查就选用大肠埃希菌作为阴性对照菌）10~100 cfu，将滤膜加至相应培养基100 ml中作为阴性菌对照组。阳性菌对照组：取1∶10的供试液10 ml，加至上述混合溶液100 ml中，用薄膜过滤器全部过滤，冲洗方式同上，但在第3次冲洗液中加适宜的菌（如金黄色葡萄球菌检查就加入金黄色葡萄球菌）10~100 cfu，将滤膜加至相应培养基100 ml中作为阳性菌对照组。上述各组均置35～37℃培养18～24 h，分别划线于相应培养基上，再置35～37℃培养18～24 h，结果阳性菌对照组均生长良好，表明该类药物经此法处理后已无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计；阴性菌均未检出，表明该控制菌检查方法的专属性好，说明方法可行。3讨论本实验研究说明吡咯类药物对细菌和真菌同时具有很强的抑菌作用，对于这类具有较强抗菌活性的药物必须首先摸索处理方式来消除其抑菌作用，然后方能顺利进行其微生物限度检查。若采用薄膜过滤法进行药品的微生物限度检查，选用的稀释液和冲洗液的种类和用量非常重要，甚至可以决定方法的适用与否。作为微生物限度检查用稀释液和冲洗液，不单应具有溶解药物的功能，同时还应具有维持菌体细胞膜的通透性、修复受损细胞、破坏药物对菌体细胞损伤等作用。本实验确定的冲洗液的处方中组氨酸是白色念珠菌生长中重要的氮源之一；卵磷脂对于细胞膜的修复可起到重要的作用；聚山梨酯80作为一种表面活性剂，可降低细菌体周围与培养基接触面之间的表面张力，使外围营养物质更快地进入细胞内，因而促进细菌较快的生长和其他活动。卵磷脂和聚山梨酯80配合使用可中和抑菌剂，中和后的产物对细菌及培养基无太大影响，因此在稀释液和冲洗液中加入这些物质可有效的降低药品对细菌和真菌的抑制作用，同时促进受损的细菌和真菌生长。某些国产试剂、试药与进口品存在一定的质量差异，《欧洲药典》收载的冲洗液配方中卵磷脂及聚山梨酯80的含量较多，当用国产品配制时，其溶解性能不好，造成溶液混浊，冲洗量大时，溶液过滤的速度缓慢，影响冲洗效果，甚至无法进行过滤。该问题通过降低配方中各成分的量可以得到有效解决。经验证，即使配方中的各成分量减少一半，效果依然可满足实验的需要，且过滤速度适宜，还可降低实验成本。[参考文献][1]国家药典委员会.中国药典[S].二部.北京:化学工业出版社,2005. 附录93.[2]欧洲药典[S].第5版.Appendix XVI .
抗生素的不良反应【摘要】 目的 帮助临床医生了解抗生素的药物不良反应，促进临床合理使用抗生素药物，保证患者用药安全、有效、合理。方法 复习文献资料，从过敏反应、毒性反应、特异性反应、二重感染、联合用药引起或加重不良反应等几个方面，综述抗生素的药物不良反应及临床危害。结果 抗生素的药物不良反应可以预防和控制，应重视患者用药过程中的临床监护。结论 抗生素的药物不良反应应引起临床医生的高度重视。【关键词】 抗生素；不良反应药物的不良反应是临床用药中的常见现象。它不仅指药物的副作用,还包括药物的毒性、特异性反应、过敏反应、继发性反应等〔1〕。抗菌药物是临床上最常用的一类用药，包括抗生素类、抗真菌类、抗结核类及具有抗菌作用的中药制剂类。其中以抗生素类在临床使用的品种和数量最多。目前临床常用抗生素品种有100多种。抗生素挽救了无数生命，但其在临床应用也引发了一些不良反应〔2〕。抗生素药物不良反应的临床危害后果是严重的。在用药后数秒钟至数小时乃至停药后相当长的一段时间内均可发生不良反应。常见的有过敏性休克、固定型药疹、荨麻疹、血管神经性水肿等过敏性反应、胃肠道反应、再生障碍性贫血等，严重的甚至会引起患者死亡〔3〕。因此，加强临床用药过程中的监督和合理使用抗生素对减少临床不良反应的发生具有特别重要的意义〔4〕。1 过敏反应抗生素引起的过敏反应最为常见〔5〕,主要原因是药品中可能存在的杂质以及氧化、分解、聚合、降解产物在体内的作用，或患者自身的个体差异。发生过敏反应的患者多有变态反应性疾病，少数为特异高敏体质。 过敏性休克 此类反应属Ⅰ型变态反应，所有的给药途径均可引起。如：青霉素类、氨基糖苷类、头孢菌素类等可引起此类反应，头孢菌素类与青霉素类之间还可发生交叉过敏反应。因此，在使用此类药物前一定要先做皮试。 溶血性贫血 属于Ⅱ型变态反应,其表现为各种血细胞减少。如:头孢噻吩和氯霉素可引起血小板减少，青霉素类和头孢菌素类可引起溶血性贫血。 血清病、药物热 属于Ⅲ型变态反应，症状为给药第7～14天出现荨麻疹、血管神经性水肿、关节痛伴关节周围水肿及发热、胃肠道黏膜溃疡和肠局部坏死。如:青霉素类、头孢菌素类、林可霉素和链霉素均可引起以上反应。头孢菌素类、氯霉素等抗菌药物还可引起药物热。 过敏反应 这是一类属于Ⅳ型变态反应的过敏反应。如：经常接触链霉素或青霉素，常在3～12个月内发生。 未分型的过敏反应 有皮疹（常见为荨麻疹）〔6〕、血管神经性水肿、日光性皮炎、红皮病、固定性红斑、多形性渗出性红斑、重症大疱型红斑、中毒性表皮坏死松解症，多见于青霉素类、四环素类、链霉素、林可霉素等；内脏病变，包括急慢性间质性肺炎、支气管哮喘、过敏性肝炎、弥漫性过敏性肾炎，常见于青霉素类、链霉素等。复方新诺明还可引起严重的剥脱性皮炎。2 毒性反应抗生素药物的毒性反应是药物对人体各器官或组织的直接损害，造成机体生理及生化机能的病理变化，通常与给药剂量及持续时间相关。 对神经系统的毒性 如：青霉素G、氨苄西林等可引起中枢神经系统毒性反应，严重者可出现癫痫样发作。青霉素和四环素可引起精神障碍。氨基糖苷类、万古霉素、多粘菌素类和四环素可引起耳和前庭神经的毒性。链霉素、多粘霉素类、氯霉素、利福平、红霉素可造成眼部的调节适应功能障碍，发生视神经炎甚至视神经萎缩。新的大环内酯类药物克拉霉素可引起精神系统不良反应。另有报道，大环内酯类药物克拉霉素和阿奇霉素可能减少突触前乙酰胆碱释放或加强了突触后受体抑制作用，可诱导肌无力危象。 肾脏毒性 许多抗生素均可引起肾脏的损害，如：氨基糖苷类、多粘菌素类、万古霉素。氨基糖苷类的最主要不良反应是耳肾毒性。在肾功能不全患者中，第3代头孢菌素的半衰期均有不同程度延长，应引起临床医生用药时的高度重视。 肝脏毒性〔7〕 如：两性霉素B和林可霉素可引起中毒性肝炎，大剂量四环素可引起浸润性重症肝炎，大环内酯类和苯唑青霉素引起胆汁淤滞性肝炎，头孢菌素中的头孢噻吩和头孢噻啶及青霉素中的苯唑西林、羧苄西林、氨苄西林等偶可引起转氨酶升高，链霉素、四环素和两性霉素B可引起肝细胞型黄疸。 对血液系统毒性 如：氯霉素可引起再生障碍性贫血和中毒性粒细胞缺乏症，大剂量使用青霉素时偶可致凝血机制异常，第3代头孢菌素类如头孢哌酮、羟羧氧酰胺菌素等由于影响肠道菌群正常合成维生素K可引起出血反应。 免疫系统的毒性 如：两性霉素B、头孢噻吩、氯霉素、克林霉素和四环素〔6〕。对机体免疫系统和机制具有毒性作用。 胃肠道毒性 胃肠道的不良反应较常见。可引起胃肠道反应的药物如：口服四环素类、青霉素类等，其中大环内酯类、氯霉素类等药物即使注射给药，也可引起胃肠道反应。 心脏毒性 大剂量青霉素、氯霉素和链霉素可引起心脏毒性作用，两性霉素B对心肌有损害作用，林可霉素偶见致心律失常。3 特异性反应特异性反应是少数患者使用药物后发生与药物作用完全不同的反应。其反应与患者的遗传性酶系统的缺乏有关。氯霉素和两性霉素B进入体内后，可经红细胞膜进入红细胞，使血红蛋白转变为变性血红蛋白，对于该酶系统正常者，使用上述药物时无影响；但对于具有遗传性变性血红蛋白血症者，机体对上述药物的敏感性增强，即使使用小剂量药物，也可导致变性血红蛋白症。4 二重感染在正常情况下，人体表面和腔道黏膜表面有许多细菌及真菌寄生。由于它们的存在，使机体微生态系统在相互制约下保持平衡状态。当大剂量或长期使用抗菌药物后，正常寄生敏感菌被杀死，不敏感菌和耐药菌增殖成为优势菌，外来菌也可乘机侵入，当这类菌为致病菌时，即可引起二重感染。常见二重感染的临床症状有消化道感染、肠炎、肺炎、尿路感染和败血症。5 抗菌药物与其他药物合用时可引发或加重不良反应〔8〕在临床治疗过程中，多数情况下是需要联合用药的，如一些慢性病(糖尿病、肿瘤等)合并感染，手术预防用药，严重感染时，伴器官反应症状，需要对症治疗等。由于药物的相互作用，可能引发或加重抗菌药物的不良反应。 与心血管药物合用 红霉素和四环素能抑制地高辛的代谢，合用时可引起后者血药浓度明显升高，发生地高辛中毒。 与抗凝药合用 头孢菌素类、氯霉素可抑制香豆素抗凝药在肝脏的代谢，使后者半衰期延长，作用增强，凝血时间延长。红霉素可使华法林作用增强，凝血时间延长。四环素类可影响肠道菌群合成维生素K，从而增强抗凝药的作用。 与茶碱类药物合用 大环内酯类药物也可以抑制肝细胞色素P450酶系统，使茶碱血药浓度增加。红霉素与茶碱合用时，茶碱血药浓度可增加约40%，而茶碱可影响红霉素的吸收，使红霉素的峰浓度降低。 与降糖药合用 氯霉素与甲苯磺丁脲及氯磺丙脲合用时，可抑制后者的代谢，使其半衰期延长，血药浓度增加，作用增强，可导致急性低血糖。 与利尿剂合用 氨基糖苷类药物庆大霉素与呋喃苯胺酸类合用时，有引起耳毒性增加的报道。头孢噻啶与呋噻米合用时可增加肾毒性，原因可能是合用时前者的清除率降低。环孢菌素与甘露醇合用时，可引起严重的肾坏死性改变，停用甘露醇后，移植肾的功能可得到恢复。 与其他药物合用 红霉素、四环素与制酸剂合用时，可使抗生素的吸收降低。大环内酯类红霉素与卡马西平合用时，可引起卡马西平中毒症状。综上所述，合理使用抗生素，重视患者用药过程中的临床监护对于临床医生安全用药，保证患者生命健康，减少不良反应的发生有重要的意义。正确诊断分清是否为细菌感染，如利用标本的培养判断认为是细菌感染，才是应用抗菌药物的适应证。熟悉抗生素的药理作用及不良反应特点，掌握药物的临床药理作用、抗菌谱、适应证、禁忌证、不良反应以及制剂、剂量、给药途径与方法等，做到了解病人用药过敏史，使用药有的放矢，避免不良反应发生。在医、护、药三方加强ADR监测〔9～11〕。同时对药物监测、临床血液及生化指标检验监测、护理监护等〔12〕。特别是对氨基糖苷类抗生素药物进行血药浓度监测的同时也应监测肾功能和听力；合并用药时对受影响药物的血药浓度进行监测，如红霉素或四环素与地高辛合用时，对地高辛药物浓度进行监测或避免合用；口服抗凝剂与氯霉素、四环素、红霉素合用时，应监测患者的凝血时间，或避免合用；必须合用时，须调整口服抗凝剂的剂量。护理人员与患者接触较多，认真细致的护理工作，特别是对儿童及老年患者的周到护理，是对药物不良反应及时发现和处理的重要环节。对护理人员进行临床药理知识的培训，增加他们这方面的知识，以便及时发现问题及时报告和处理。一旦发现不良反应应采取果断措施，如停药或换药。若出现过敏反应，应立即采取抢救措施。这些做法对抗生素不良反应的预防和补救都是行之有效的。【参考文献】1 张克义,赵乃才.临床药物不良反应大典.沈阳:辽宁科学技术出版社, 2001， 杨利平.再谈抗菌药物的合理应用.医学理论与实践，2004,17(2): 王正春,李秋,王珊.药物不良反应803例分析.医药导报，2004,23(9): 张立新,王秀美.抗生素应用中的问题与探讨.实用医技杂志，2004,11(8)： 张紫洞,熊方武.药物导致的变态反应、过敏反应.抗感染药学，2004,1(2): 吴文臻,刘建慧.药疹220例临床分析.现代中西医结合杂志，2004,13(13): 刘斌,彭红军.药物性肝炎136例分析.药物流行病学杂志，2004,13(5)： 程悦.联合用药致变态反应探析.现代中西医结合杂志，2004,13(13): 马冬梅,李净,舒丽伟.如何合理使用抗生素.黑龙江医学，2004,28(12): 吴安华.临床医师处方抗菌药物前需思考的几个问题.中国医院，2004,8(8)： 高素华.抗生素滥用的危害.内蒙古医学杂志，2005,37(11): 魏健,郦柏平,赵永根,等.抗生素合理应用自动监控系统的构建.中华医院管理杂志，2004,20(8)：479-481.