自噬，简单来说就是细胞自己吃自己、废物再利用。细胞陷于困境时 (如营养物质匮乏)，启动自噬程序自救，通过降解蛋白质和细胞器获得必需的氨基酸、脂肪酸等营养物质维持基本生命活动，以便死中求生。一直以来，自噬都是生命科学领域的研究热点。 2020 年 8 月 17 日，图卢兹大学综合生物研究中心 Arnaud Besson 教授团队，在期刊 Nature cell biology 中发表的自噬相关文章(图 1)，阐明了自噬与细胞周期调控的新机制。 背景介绍 p27Kip1 (p27) 被认为是细胞周期蛋白 CDK 的抑制因子，具有诱导细胞周期停滞的能力。营养匮乏往往是自噬发生的主要诱导原因，已有研究表明，细胞质中的 p27 是自噬的正调节剂 (葡萄糖匮乏或者血清剥夺的条件下)，它可以保护细胞免受应激诱导的细胞凋亡。但是， p27 调控自噬作用的具体分子机制仍然是未知的 。 接下来，M 君和大家一起来看看，关于自噬调控，作者团队做了哪些精彩的工作。 p27 调控细胞自噬 作者团队通过研究 p27+/+ MEFs 和 p27-/- MEFs 应对氨基酸剥夺后自噬的变化，证明了 氨基酸缺乏的细胞中，p27 促进自噬 。 细胞： p27+/+MEFs: p27 野生型(p27+/+)小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)，源于 p27 野生型小鼠胚胎。 p27+/+MEFs: p27 缺失型(p27-/-) MEFs，源于 p27 缺失的小鼠胚胎。 1、p27 促进自噬发生 LC3B-II 是自噬小体的标记物，位于自噬体膜，与溶酶体融合时被降解。氨基酸剥夺的短时间内，如图 2a 所示，p27+/+ 和 p27-/- 小鼠胚胎成纤维细胞中，LC3B-II 表达水平相似，随着氨基酸剥夺时间的延长，p27-/- 中的 LC3B-II 表达水平明显会更高，并且在 48 小时表现出显著统计学差异(图 2b)。在随后的实验中，选择 48 小时作为氨基酸的长时间剥夺的诱导时间。图 2c 的 LC3B 的免疫荧光染色同样也呼应这一观察结果 (红色箭头)。这表明 p27 可促进氨基酸剥夺细胞中的自噬。2、p27 调控自噬流的检测 自噬是一个多步骤的动态过程，当应答营养匮乏的压力时 (如氨基酸或葡萄糖缺乏)，细胞接受自噬诱导信号，随后会在胞浆处形成一种扁平的叫做吞噬泡 (Phagophore) 的双层膜结构。紧接着，吞噬泡不断延伸，包裹一些细胞元件或者自噬物 (Autophagic cargo)，形成密闭的球状的自噬小体 (Autophagosome)。自噬体与溶酶体融合形成自噬溶酶体 (Autolysosome)，自噬体中的内容物被溶酶体中的酶降解，降解产生的营养物质会被细胞重新利用。在整个过程中， 细胞将自噬物吞噬到自噬小体，直到最后自噬溶酶体形成并降解自噬物的这个过程被称为自噬流 (Autophagic flux) (图 3)。自噬流中的任一环节出现障碍自噬都无法完成其生物学功能。LC3B-II 通常是自噬小体的 Marker，哺乳动物细胞内 LC3B 的总量通常不会有巨大波动，一般只会出现 LC3B-I 和 LC3B-II 间的相互转换。如果 LC3B-II 表达增加，可能是由于前期自噬活化后自噬小体增多导致的，也可能是后期自噬溶酶体清除失败使其积累所致。因此，某单一时间点的 LC3B-II 的表达改变并不能体现自噬流的改变。 在文章中，使用了 WB 检测蛋白、免疫荧光，mCherry-eGFP-LC3B 双荧光系统的组合测量方法，检测 p27+/+ 和 p27-/- MEFs 自噬流。(1) 氯喹 ( Chloroquine ，CQ) 处理，检测自噬流中 LC3B-II 变化 在酸性溶酶体中，氯喹会使溶酶体 pH 值升高，使溶酶体中酸性水解酶失活 ，从而抑制细胞内自噬溶酶体的融合与降解。氯喹处理细胞会导致 LC3B-II 的聚集，此时观察到的 LC3B-II 的变化仅代表自噬小体数量的改变。 氯喹处理细胞后，在短期氨基酸剥夺的条件下(0-4 h)，两种细胞的自噬通量是相似的 (图 4a, b)。但是随着时间的增加，长时间的氨基酸剥夺处理后，p27-/- MEFs 与 p27+/+ MEFs 相比，LC3B-II 数量显著降低 (图 4c, d)。这说明 p27 促进氨基酸缺失细胞中自噬通量 。(2) p62/SQSTM1 在细胞中的积累 p62 也称为 SQSTM1 蛋白，作为一种调节因子参与自噬体的构成，具有底物的特异性，是连接 LC3B-II 与待降解泛素化底物的桥梁。p62 结合泛素化蛋白进入到自噬体后最终与溶酶体融合形成自噬溶酶体从而得到清除 (图 5a)。自噬流被抑制时，p62/SQSTM1 会在自噬流受损的细胞中积累, 在细胞内整体 p62 水平的表达与自噬活性存在负相关。如图 5 b 所示，随着时间的增长，p62 在氨基酸缺乏的 p27-/- 细胞中的表达量更高，p27-/- 细胞的自噬流受损，这进一步说明了，p27 可以促进自噬流活化。(3) mCherry-eGFP-LC3B 双荧光系统检测自噬体与自噬溶酶体。 mCherry (红光)-eGFP (绿光)-LC3B 串联荧光蛋白可用于检测自噬流水平的融合蛋白。它利用了酸性自溶酶体和中性自噬体之间的 pH 差异以及不同荧光素对 pH 的敏感性差异，以监控从自噬体到自溶酶体的进程 (图 6a)。如图 6a-b，mCherry 荧光基团的 pH 值稳定性比 GFP 高，GFP 荧光信号在进入溶酶体后由于 pH 值的下降会出现淬灭，而 mCherry 荧光基团进入溶酶体后仍能发出荧光。因此若细胞内出现绿和红色荧光共定位，即 出现黄色荧光 时，表明：mCherry-eGFP-LC3B 融合蛋白并未与溶酶体发生融合, 说明了 自噬流被阻断 。当细胞内仅出现红色荧光而无绿色荧光时，代表 mCherry-eGFP-LC3B 融合蛋白定位于溶酶体或自噬溶酶体内， 即自噬流活化 。与 p27+/+ 细胞相比，p27-/- 细胞中自噬溶酶体的比例下降 (72% vs 95%)，进一步表明 p27 促进自噬流 (图 6b-c)。 (4) p27 促进自噬体成熟 之前有文献表明(参考文献 5)，自噬体在成熟过程中，LC3B 阳性自噬囊泡会聚集在细胞核周围形成环状聚集结构，这种结构被认为是自噬体成熟过程中的中间结构。如图 7a 所示，p27+/+细胞中有明显的环状聚集体，但是在p27-/- 细胞中很少观察到，取而代之的是小囊泡结构。这表明 p27 可促进自噬体成熟过程。 总结 1、在长期氨基酸剥夺的情况下，与p27-/- 细胞相比，p27+/+ 小鼠胚胎成纤维细胞中 LC3B-II 的上调，p62 蛋白表达量减少，自噬溶酶体数目比例增加，以及自噬体成熟过程环状聚集体的形成，可以证明 p27 在氨基酸长期匮乏的细胞中促进自噬流活化。 2、自噬流在细胞内是流动的细胞代谢过程, 自噬流中的任一环节出现障碍自噬将无法完成其生物学功能。尚无某种单一方法可以绝对准确特异的检测自噬，因此应该使用组合的实验方法来评估自噬活动(自噬相关工具药物的使用，WB 检测自噬相关蛋白变化，免疫荧光共定位，以及 mCherry-eGFP-LC3B 双荧光检测等)。 原文链接： DOI: 10.1038/s41556-020-0554-4. 参考文献 1. Ada Nowosad, et al. p27 controls Ragulator and mTOR activity in amino acid-deprived cells to regulate the autophagy-lysosomal pathway and coordinate cell cycle and cell growth. Nat Cell Biol. 2020 Aug 17. 2. Prashanta Kumar Panda, et al. Chemical Screening Approaches Enabling Drug Discovery of Autophagy Modulators for Biomedical Applications in Human Diseases. Front Cell Dev Biol. 2019 Mar 19; 7: 38. 3. Maria Condello, et al. Targeting Autophagy to Overcome Human Diseases. Int J Mol Sci. 2019 Feb 8; 20 (3): 725. 4. Liang, J. et al. Te energy sensing LKB1-AMPK pathway regulates p27kip1 phosphorylation mediating the decision to enter autophagy or apoptosis. Nat. Cell Biol. 9, 218-224 (2007) 5. Saori R Yoshii, et al. Monitoring and Measuring Autophagy. Int J Mol Sci. 2017 Aug 28; 18 (9): 1865. 6. Mizushima, N. & Klionsky, D. J. Protein turnover via autophagy: .implications for metabolism. Annu. Rev. Nutr. 27, 19-40 (2007). 7. Stefanie Jäger, et al. Role for Rab7 in maturation of late autophagic vacuoles. J Cell Sci. 2004 Sep 15; 117 (Pt 20): 4837-48.
主要应用于工业生产等！
做出来了可以吃的发臭 狗肉
细胞工程论文
细胞工程是生物工程的一个重要方面。总的来说，它是应用细胞生物学和分子生物学的理论和方法，按照人们的设计蓝图，进行在细胞水平上的遗传操作及进行大规模的细胞和组织培养。下面是我为大家整理的细胞工程论文，欢迎阅读。
【摘要】 目的制作去细胞肌肉组织工程支架，并检测其与人羊膜上皮细胞的生物相容性。方法 采用TNT和十二烷基磺酸钠结合的化学萃取方法制作去细胞肌肉组织工程支架，冰冻切片观察其结构。将人羊膜上皮细胞种入支架培养7 d后，用免疫组化检测羊膜上皮细胞的增殖活性、NT3及BDNF的表达,扫描电子显微镜观察其超微结构。结果 支架中细胞去除完全，其主要结构为平行排列的管状结构。细胞外基质的主要成分弹性纤维和胶原纤维保持完好。羊膜上皮细胞在支架里有增殖活性，并呈现NT3、BDNF免疫反应阳性。扫描电镜显示，羊膜上皮细胞在支架中分布均匀，生长良好。结论 成功的制作了去细胞肌肉组织工程支架，其与人羊膜上皮细胞有良好的相容性。
【关键词】 去细胞肌肉;人羊膜上皮细胞;生物相容性
近年来组织工程研究的重要进展之一就是采用自体或异体移植物制作天然生物降解材料的组织工程支架。其中去细胞移植物与机体有良好的生物相容性。去细胞肌肉支架可作为生物工程支架支持神经细胞轴突再生。Mligiliche等〔1〕把去细胞肌肉移植入大鼠坐骨神经缺损处,4 w后发现有大量神经轴突长入去细胞肌肉支架中。由于单独应用去细胞肌肉支架治疗神经系统疾病的效果有限，去细胞肌肉支架要发挥更大的作用往往需要向支架中植入种子细胞〔2，3〕。研究表明羊膜上皮细胞可分泌多种神经因子〔4，5〕，促进神经元轴突的生长，是一种良好的治疗神经系统疾病的种子细胞。本研究利用化学去细胞的方法制成去细胞肌肉支架，并把羊膜上皮细胞种入去细胞肌肉支架内，探究两者的相容性，为开展组织工程治疗神经系统方面的疾病提供新的途径。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物 Wistar 大鼠由吉林大学白求恩医学院实验动物中心提供。
1.1.2 试剂 IMDM培养基及小牛血清由Hyclone 公司提供。5′溴尿嘧啶核苷(BrdU) 及BrdU 单克隆抗体购自Neomarker公司;神经营养素(NT)3,脑源性神经营养因子(BDNF)兔抗人多克隆抗体购自武汉博士德公司，SABC免疫组化试剂盒购自福州迈新生物公司。人羊膜上皮细胞株为本实验室保存。
1.2 方法
1.2.1 去细胞肌肉支架的制备 参考 Brown等〔6〕去细胞膀胱的制作方法制备去细胞肌肉支架，简述如下：取Wistar大鼠腹锯肌，放入蒸馏水中，在摇床中以37℃、50 r/min摇48 h后,转入3%的TritonX100溶液,摇床中37℃、50 r/min摇48 h。然后放入蒸馏水中，摇床37℃、50 r/min摇48 h。换成1% SDS溶液，摇床37℃，50 r/min摇48 h。PBS洗24 h。PBS中4℃保存备用。
1.2.2 支架形态结构的观察及成分鉴定 肉眼观察去细胞肌肉的形态。去细胞肌肉用4%多聚甲醛PBS固定1 h，5%蔗糖90 min，15%蔗糖90 min，30%蔗糖过夜以梯度脱水，OCT包埋，冷丙酮速冻，之后放入-70℃冰箱保存。恒冷箱切片机切片，HE 染色，观察其内部结构。此外对切片进行Van Gienson(VG)染色和 Weigert染色(VG+ET染色)检测支架的细胞外基质成分。
1.2.3 人羊膜上皮细胞的培养 人羊膜上皮细胞在DMEM培养液中(含10%胎牛血清，100 U/ml青霉素，100 mg/ml链霉素，200 μg/ml的谷氨酰胺)，37℃、5 % CO2及饱和湿度条件下的细胞培养箱中培养，隔天换液，待单层培养细胞生长至80%汇合后，传代培养。
1.2.4 人羊膜上皮细胞与去细胞肌肉支架相容性的鉴定
1.2.4.1 取生长良好的人羊膜上皮细胞，80%细胞接近融合，弃去培养液，0.25%胰蛋白酶消化，当胞体回缩，细胞间隙变宽时，用血清终止消化，反复轻吹瓶壁细胞，制成单细胞悬液于离心管中，1 000 r/min，离心3 min。用DMEM重悬细胞。用1 ml注射器吸入细胞悬液，以2×106/ml 密度注入去细胞肌肉支架中分装至24孔板中，在37℃、5 % CO2及饱和湿度条件下的细胞培养箱中培养，隔天换液，培养1 w。掺入Brdu(终浓度为10 mg/L)，继续培养1 d后，恒冷箱切片机切片(方法同前)。切片经PBS 洗后，3% H2O2灭活内源性过氧化物酶10 min，血清封闭20 min;一抗用BrdU(1∶1 000稀释)单克隆抗体，BDNF和NT3多克隆抗体(1∶100稀释)4℃孵育过夜，PBS 洗后，二抗37℃孵育30 min，PBS 洗后，SABC37℃孵育30 min，DAB显色。光镜下观察。
1.2.4.2 扫描电子显微镜鉴定羊膜上皮细胞在去细胞肌肉支架上的生长情况 取生长良好的人羊膜上皮细胞，80%细胞接近融合时，用上述方法消化下来后，把羊膜上皮细胞种植到去细胞肌肉支架中，放在24孔板中，在37℃、5 % CO2及饱和湿度条件下的细胞培养箱中培养7 d后，用2%戊二醛固定后，梯度乙醇脱水，CO2临界点干燥，镀膜，采用扫描电子显微镜观察并拍照。
2 结 果
2.1 支架的组织结构与成分 去细胞肌肉外观呈乳白色,半透明,质地柔软。从大体上看，肌肉去细胞前后整体大小与形状无显著变化。支架纵切面的HE染色观察可见骨骼肌细胞成分消失,而纤维网架结构保持完整，支架内主要为平行管道。VG+ET染色证明支架成分主要为胶原纤维和弹力纤维等细胞外基质成分，胶原纤维为红色波浪状结构，弹性纤维为蓝色丝状结构，见图1。
2.2 羊膜上皮细胞与去细胞肌肉支架的兼容性 见图2，HE染色显示人羊膜上皮细胞在支架中生长良好，分布均匀(图
图1 去细胞肌肉支架大体与组织切片染色
图2 去细胞肌肉支架的病理图片2A)。免疫组化染色显示，BrdU阳性细胞数目多，提示支架中的人羊膜上皮细胞有增殖能力(图2B)。抗NT3和BDNF染色显示，支架中的人羊膜上皮细胞含有NT3、BDNF阳性颗粒，呈棕褐色分布在细胞质中(图2C，2D)。JSM5600LV扫描电子显微镜显示，在支架内部分布有大量细胞，细胞在支架中分布比较均匀，生长状态良好(图2E)。
3 讨 论
理想的支架材料应与细胞外基质类似，与活体细胞有良好的生物相容性〔7，8〕。去细胞肌肉作为治疗神经损伤的生物工程支架材料有如下优势：(1)去细胞肌肉的细胞外基质成分对组织细胞的'迁移、黏附、生长代谢都有重要作用，研究表明再生的轴突可以很好的黏附在去细胞肌肉支架上〔9〕。(2)去细胞肌肉的排列结构与神经膜管类似,仅在直径上略大于神经膜管〔10〕，它们提供了轴突可生长穿过的足够空间〔9〕，该结构对于诱导神经轴突再生是十分重要的。 Fansa等比较了接种施万细胞的不同去细胞生物材料(肌肉，静脉，神经外膜)桥接缺损的外周神经的结果，发现缺乏神经膜管样结构的去细胞肌肉支架(静脉和神经外膜支架)中的再生轴突是无序和排列混乱的，而有神经膜管样结构的去细胞肌肉支架中的再生轴突是有序排列的〔11〕。这种轴突再生的有序性对神经损伤的轴突再生同样也是十分重要的。(3)去细胞肌肉引起的免疫排斥反应较小〔9，12〕。这些优势都说明去细胞肌肉可作为治疗神经损伤的理想的材料。本研究采用的制作去细胞肌肉的方法主要用来减少异种移植材料的免疫排斥反应。该方法能有效的去除脂膜和膜相关抗原以及可溶性蛋白，并能有效的保留细胞外基质成分的原始空间结构。肌细胞正常呈平行分布，其细胞外基质成分也是平行分布的，从支架纵切面的结果看支架的纤维成分也是平行排布的，VG+ET染色结果显示细胞外基质的主要成分胶原纤维和弹性纤维保持完好。这些结果进一步证实此方法可成功制备去细胞肌肉支架。
由于单独应用去细胞肌肉支架治疗神经系统疾病的效果有限〔13〕，去细胞肌肉的生物相容性也有待验证。本研究用人羊膜上皮细胞作为种子细胞种入去细胞肌肉支架以探讨其相容性。研究表明，羊膜上皮细胞中含有多种生物活性因子，包括黏蛋白、转移生长因子、前列腺素E、表皮生长因子样物质,IL1，IL8 等因子，另外，还可分泌BDNF和NT3等重要的神经营养因子〔4〕。其中层黏蛋白、BDNF和NT3等生物活性因子对神经损伤的治疗具有十分重要的作用。羊膜上皮细胞可作为一种较理想的种子细胞，与去细胞肌肉支架结合可能成为治疗神经系统疾病的一个理想的组织工程材料。本实验观察到人羊膜上皮细胞在去细胞肌肉支架中分布均匀，抗BrdU、BDNF及NT3免疫组化显示去细胞肌肉支架中羊膜上皮细胞有良好的增殖能力，并能表达BDNF和NT3，说明羊膜上皮细胞在去细胞肌肉支架中保持了良好的生物学活性。以上结果一方面证明了本研究制作的去细胞肌肉支架有良好的生物相容性，另一方面为应用羊膜上皮细胞和去细胞肌肉支架结合治疗神经系统疾病提供了理论和实验基础。
总之 ，本研究成功制备了去细胞肌肉支架，并证实人羊膜上皮细胞在去细胞肌肉支架中能分泌重要的神经营养因子，人羊膜上皮细胞与去细胞肌肉支架桥接体为神经缺损再生提供了基底膜、神经营养因子等种种有利因素，构成了良好的神经再生微环境，有利于使神经缺损得到较好地修复，为进一步研究羊膜上皮细胞与去细胞肌肉支架桥接体治疗神经损伤奠定了一定的实验基础。
【参考文献】
1 Mligiliche N，Kitada M，Ide C.Grafting of detergentdenatured skeletal muscles provides effective conduits for extension of regenerating axons in the rat sciatic nerve〔J〕.Arch Histol Cytol，2001;64 (1):2936.
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10 李培建,胥少汀.去细胞肌肉支架移植及神经生长因子对脊髓横断性损伤的修复作用〔J〕.中国脊柱脊髓杂志，2000;10(4)：2203.
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13 李培建，李兵仓，胥少汀.肌基膜管移植修复脊髓缺损的实验研究〔J〕.中华创伤杂志,2001;17(9)：5258.
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山东师范大学细胞生物学硕士研究生专业是生命科学学院下设的研究生专业，生命科学学院下设一个生物学博士后科研流动站，植物学、动物学、细胞生物学三个博士点，生物学硕士点一级学科(包括12个在职硕士点)，食品科学硕士点及生物学科教学论、环境生物学等两个硕士方向。山东师范大学细胞生物学硕士研究生专业培养方案如下：一、培养目标二、学习年限硕士研究生学习年限一般为3年。符合学校有关规定者，可申请提前毕业或提前攻博，硕士生学习年限最长不超过4年。三、研究方向1、细胞增殖与调控 2、免疫细胞生物学四、培养环节1、综合考核：研究生综合考核是在研究生课程学习基本结束以后，以研究生的培养计划为依据，对研究生的思想政治表现，基础理论、专业知识的掌握和科研能力等方面进行的一次综合考核。研究生综合考核工作一般在第三学期末完成。 2、论文开题：硕士研究生至迟在第三学期末确定学位论文题目并通过论文开题报告论证，写出论文工作计划。根据研究生的实际情况，确定论文开题的具体时间，如果条件成熟，也可在课程学习结束之前进行。 3、论文工作检查：在论文撰写过程中，要进行论文工作检查。导师组要根据硕士生论文开题情况，检查论文写作计划的进展和完成情况，并针对论文写作中出现的问题加强指导，以保证硕士学位论文工作的顺利进行。硕士研究生用于学位论文的工作时间一般不少于一年。 4、学术活动：为拓宽研究生的学术视野，促进研究生关注和了解学科前沿的发展，硕士研究生在校期间参与高水平的科研项目，参加本学科专业的国际国内学术会议。要求每名硕士研究生听取学术报告不少于10次，公开做学术报告不少于1次，至少撰写专业文献综述1篇。达到此要求方可获得相应学分。 5、科研活动：硕士研究生在学期间应在正式出版发行的国内外学术期刊上发表一篇本专业研究领域内能反映其学术水平的学术论文(不包括增刊、专刊和一般论文集)，硕士研究生发表的文章第一作者单位署名必须是山东师范大学，如导师为第一作者，研究生可为第二作者。未达到上述要求的，不能授予硕士学位。 6、实践活动：实践活动包括教学实践、科研实践、社会实践与社会调查等。可根据本学科特点确定实践活动的形式。实践活动结束，指导教师给予相关评价，评价合格后方可获得相应的学分。非全日制研究生可通过选修研究生课程的方式来获得该环节的相应学分。 7、论文答辩、学位授予按照国家和学校的有关规定执行。五、培养方式培养方式采取导师负责与导师组集体培养相结合的方法，对研究生综合考核、论文开题报告、论文工作检查等研究生教育的重要环节，应由导师组集体讨论。导师要因材施教，教书育人，严格要求，全面关心研究生的成长，要定期了解研究生的思想状况、学习和科研状况，并及时予以指导帮助。 1、第一学年基本学完专业学位课程和部分非学位课程，第三学期除继续学习非学位课程外，同时要进入实验室从事研究工作，为毕业论文实验奠定基础。 2、根据专业特点，加强对研究生实验能力和解决问题能力的培养，鼓励研究生参加导师的课题研究，提高研究生科研水平。 3、根据学校有关规定，按期进行研究生综合考核和论文工作检查，保证研究生的培养质量。考研政策不清晰？同等学力在职申硕有困惑？院校专业不好选？点击底部官网，有专业老师为你答疑解惑，211/985名校研究生硕士/博士开放网申报名中：
细胞工程论文
细胞工程是生物工程的一个重要方面。总的来说，它是应用细胞生物学和分子生物学的理论和方法，按照人们的设计蓝图，进行在细胞水平上的遗传操作及进行大规模的细胞和组织培养。下面是我为大家整理的细胞工程论文，欢迎阅读。
【摘要】 目的制作去细胞肌肉组织工程支架，并检测其与人羊膜上皮细胞的生物相容性。方法 采用TNT和十二烷基磺酸钠结合的化学萃取方法制作去细胞肌肉组织工程支架，冰冻切片观察其结构。将人羊膜上皮细胞种入支架培养7 d后，用免疫组化检测羊膜上皮细胞的增殖活性、NT3及BDNF的表达,扫描电子显微镜观察其超微结构。结果 支架中细胞去除完全，其主要结构为平行排列的管状结构。细胞外基质的主要成分弹性纤维和胶原纤维保持完好。羊膜上皮细胞在支架里有增殖活性，并呈现NT3、BDNF免疫反应阳性。扫描电镜显示，羊膜上皮细胞在支架中分布均匀，生长良好。结论 成功的制作了去细胞肌肉组织工程支架，其与人羊膜上皮细胞有良好的相容性。
【关键词】 去细胞肌肉;人羊膜上皮细胞;生物相容性
近年来组织工程研究的重要进展之一就是采用自体或异体移植物制作天然生物降解材料的组织工程支架。其中去细胞移植物与机体有良好的生物相容性。去细胞肌肉支架可作为生物工程支架支持神经细胞轴突再生。Mligiliche等〔1〕把去细胞肌肉移植入大鼠坐骨神经缺损处,4 w后发现有大量神经轴突长入去细胞肌肉支架中。由于单独应用去细胞肌肉支架治疗神经系统疾病的效果有限，去细胞肌肉支架要发挥更大的作用往往需要向支架中植入种子细胞〔2，3〕。研究表明羊膜上皮细胞可分泌多种神经因子〔4，5〕，促进神经元轴突的生长，是一种良好的治疗神经系统疾病的种子细胞。本研究利用化学去细胞的方法制成去细胞肌肉支架，并把羊膜上皮细胞种入去细胞肌肉支架内，探究两者的相容性，为开展组织工程治疗神经系统方面的疾病提供新的途径。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物 Wistar 大鼠由吉林大学白求恩医学院实验动物中心提供。
1.1.2 试剂 IMDM培养基及小牛血清由Hyclone 公司提供。5′溴尿嘧啶核苷(BrdU) 及BrdU 单克隆抗体购自Neomarker公司;神经营养素(NT)3,脑源性神经营养因子(BDNF)兔抗人多克隆抗体购自武汉博士德公司，SABC免疫组化试剂盒购自福州迈新生物公司。人羊膜上皮细胞株为本实验室保存。
1.2 方法
1.2.1 去细胞肌肉支架的制备 参考 Brown等〔6〕去细胞膀胱的制作方法制备去细胞肌肉支架，简述如下：取Wistar大鼠腹锯肌，放入蒸馏水中，在摇床中以37℃、50 r/min摇48 h后,转入3%的TritonX100溶液,摇床中37℃、50 r/min摇48 h。然后放入蒸馏水中，摇床37℃、50 r/min摇48 h。换成1% SDS溶液，摇床37℃，50 r/min摇48 h。PBS洗24 h。PBS中4℃保存备用。
1.2.2 支架形态结构的观察及成分鉴定 肉眼观察去细胞肌肉的形态。去细胞肌肉用4%多聚甲醛PBS固定1 h，5%蔗糖90 min，15%蔗糖90 min，30%蔗糖过夜以梯度脱水，OCT包埋，冷丙酮速冻，之后放入-70℃冰箱保存。恒冷箱切片机切片，HE 染色，观察其内部结构。此外对切片进行Van Gienson(VG)染色和 Weigert染色(VG+ET染色)检测支架的细胞外基质成分。
1.2.3 人羊膜上皮细胞的培养 人羊膜上皮细胞在DMEM培养液中(含10%胎牛血清，100 U/ml青霉素，100 mg/ml链霉素，200 μg/ml的谷氨酰胺)，37℃、5 % CO2及饱和湿度条件下的细胞培养箱中培养，隔天换液，待单层培养细胞生长至80%汇合后，传代培养。
1.2.4 人羊膜上皮细胞与去细胞肌肉支架相容性的鉴定
1.2.4.1 取生长良好的人羊膜上皮细胞，80%细胞接近融合，弃去培养液，0.25%胰蛋白酶消化，当胞体回缩，细胞间隙变宽时，用血清终止消化，反复轻吹瓶壁细胞，制成单细胞悬液于离心管中，1 000 r/min，离心3 min。用DMEM重悬细胞。用1 ml注射器吸入细胞悬液，以2×106/ml 密度注入去细胞肌肉支架中分装至24孔板中，在37℃、5 % CO2及饱和湿度条件下的细胞培养箱中培养，隔天换液，培养1 w。掺入Brdu(终浓度为10 mg/L)，继续培养1 d后，恒冷箱切片机切片(方法同前)。切片经PBS 洗后，3% H2O2灭活内源性过氧化物酶10 min，血清封闭20 min;一抗用BrdU(1∶1 000稀释)单克隆抗体，BDNF和NT3多克隆抗体(1∶100稀释)4℃孵育过夜，PBS 洗后，二抗37℃孵育30 min，PBS 洗后，SABC37℃孵育30 min，DAB显色。光镜下观察。
1.2.4.2 扫描电子显微镜鉴定羊膜上皮细胞在去细胞肌肉支架上的生长情况 取生长良好的人羊膜上皮细胞，80%细胞接近融合时，用上述方法消化下来后，把羊膜上皮细胞种植到去细胞肌肉支架中，放在24孔板中，在37℃、5 % CO2及饱和湿度条件下的细胞培养箱中培养7 d后，用2%戊二醛固定后，梯度乙醇脱水，CO2临界点干燥，镀膜，采用扫描电子显微镜观察并拍照。
2 结 果
2.1 支架的组织结构与成分 去细胞肌肉外观呈乳白色,半透明,质地柔软。从大体上看，肌肉去细胞前后整体大小与形状无显著变化。支架纵切面的HE染色观察可见骨骼肌细胞成分消失,而纤维网架结构保持完整，支架内主要为平行管道。VG+ET染色证明支架成分主要为胶原纤维和弹力纤维等细胞外基质成分，胶原纤维为红色波浪状结构，弹性纤维为蓝色丝状结构，见图1。
2.2 羊膜上皮细胞与去细胞肌肉支架的兼容性 见图2，HE染色显示人羊膜上皮细胞在支架中生长良好，分布均匀(图
图1 去细胞肌肉支架大体与组织切片染色
图2 去细胞肌肉支架的病理图片2A)。免疫组化染色显示，BrdU阳性细胞数目多，提示支架中的人羊膜上皮细胞有增殖能力(图2B)。抗NT3和BDNF染色显示，支架中的人羊膜上皮细胞含有NT3、BDNF阳性颗粒，呈棕褐色分布在细胞质中(图2C，2D)。JSM5600LV扫描电子显微镜显示，在支架内部分布有大量细胞，细胞在支架中分布比较均匀，生长状态良好(图2E)。
3 讨 论
理想的支架材料应与细胞外基质类似，与活体细胞有良好的生物相容性〔7，8〕。去细胞肌肉作为治疗神经损伤的生物工程支架材料有如下优势：(1)去细胞肌肉的细胞外基质成分对组织细胞的'迁移、黏附、生长代谢都有重要作用，研究表明再生的轴突可以很好的黏附在去细胞肌肉支架上〔9〕。(2)去细胞肌肉的排列结构与神经膜管类似,仅在直径上略大于神经膜管〔10〕，它们提供了轴突可生长穿过的足够空间〔9〕，该结构对于诱导神经轴突再生是十分重要的。 Fansa等比较了接种施万细胞的不同去细胞生物材料(肌肉，静脉，神经外膜)桥接缺损的外周神经的结果，发现缺乏神经膜管样结构的去细胞肌肉支架(静脉和神经外膜支架)中的再生轴突是无序和排列混乱的，而有神经膜管样结构的去细胞肌肉支架中的再生轴突是有序排列的〔11〕。这种轴突再生的有序性对神经损伤的轴突再生同样也是十分重要的。(3)去细胞肌肉引起的免疫排斥反应较小〔9，12〕。这些优势都说明去细胞肌肉可作为治疗神经损伤的理想的材料。本研究采用的制作去细胞肌肉的方法主要用来减少异种移植材料的免疫排斥反应。该方法能有效的去除脂膜和膜相关抗原以及可溶性蛋白，并能有效的保留细胞外基质成分的原始空间结构。肌细胞正常呈平行分布，其细胞外基质成分也是平行分布的，从支架纵切面的结果看支架的纤维成分也是平行排布的，VG+ET染色结果显示细胞外基质的主要成分胶原纤维和弹性纤维保持完好。这些结果进一步证实此方法可成功制备去细胞肌肉支架。
由于单独应用去细胞肌肉支架治疗神经系统疾病的效果有限〔13〕，去细胞肌肉的生物相容性也有待验证。本研究用人羊膜上皮细胞作为种子细胞种入去细胞肌肉支架以探讨其相容性。研究表明，羊膜上皮细胞中含有多种生物活性因子，包括黏蛋白、转移生长因子、前列腺素E、表皮生长因子样物质,IL1，IL8 等因子，另外，还可分泌BDNF和NT3等重要的神经营养因子〔4〕。其中层黏蛋白、BDNF和NT3等生物活性因子对神经损伤的治疗具有十分重要的作用。羊膜上皮细胞可作为一种较理想的种子细胞，与去细胞肌肉支架结合可能成为治疗神经系统疾病的一个理想的组织工程材料。本实验观察到人羊膜上皮细胞在去细胞肌肉支架中分布均匀，抗BrdU、BDNF及NT3免疫组化显示去细胞肌肉支架中羊膜上皮细胞有良好的增殖能力，并能表达BDNF和NT3，说明羊膜上皮细胞在去细胞肌肉支架中保持了良好的生物学活性。以上结果一方面证明了本研究制作的去细胞肌肉支架有良好的生物相容性，另一方面为应用羊膜上皮细胞和去细胞肌肉支架结合治疗神经系统疾病提供了理论和实验基础。
总之 ，本研究成功制备了去细胞肌肉支架，并证实人羊膜上皮细胞在去细胞肌肉支架中能分泌重要的神经营养因子，人羊膜上皮细胞与去细胞肌肉支架桥接体为神经缺损再生提供了基底膜、神经营养因子等种种有利因素，构成了良好的神经再生微环境，有利于使神经缺损得到较好地修复，为进一步研究羊膜上皮细胞与去细胞肌肉支架桥接体治疗神经损伤奠定了一定的实验基础。
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细胞生物是指所有具有细胞结构的生物。这是我为大家整理的关于细胞生物学术论文，仅供参考!
细胞因子的生物学活性
关键字： 细胞因子
细胞因子具有非常广泛的生物学活性，包括促进靶细胞的增殖和分化，增强抗感染和细胞杀伤效应，促进或抑制其它细胞因子和膜表面分子的表达，促进炎症过程，影响细胞代谢等。
一、免疫细胞的调节剂
免疫细胞之间存在错综复杂的调节关系，细胞因子是传递这种调节信号必不可少的信息分子。例如在T-B细胞之间，T细胞产生IL-2、4、5、6、10、13，干扰素γ等细胞因子刺激B细胞的分化、增殖和抗体产生;而B细胞又可产生IL-12调节TH1细胞活性和TC细胞活性。在单核巨噬细胞与淋巴细胞之间，前者产生IL-1、6、8、10，干扰素α，TNF-α等细胞因子促进或抑制T、B、NK细胞功能;而淋巴细胞又产生IL-2、6、10，干扰素γ，GM-CSF，巨噬细胞移动抑制因子(MIF)等细胞因子调节单核巨噬细胞的功能。许多免疫细胞还可通过分泌细胞因子产生自身调节单核巨噬细胞的功能。许多免疫细胞还可通过分泌细胞因子产生自身调节作用。例如T细胞产生的IL-2可刺激T细胞的IL-2受体表达和进一步的IL-2分泌，TH1细胞通过产生干扰素γ抑TH2细胞的细胞因子产生。而TH2细胞又通过IL-10、IL-4和IL-13抑制TH1细胞的细胞因子产生。通过研究细胞因子的免疫 网络调节，可以更好地理解完整的免疫系统调节机制，并且有助于指导细胞因子做为生物应答调节剂(biologicalresponsemodifier’BRM)应用于临床 治疗免疫性疾病。图4-1 细胞因子与TH1、TH2的相互关系(略)
二、免疫效应分子
在免疫细胞针对抗原(特别是细胞性抗原)行使免疫效应功能时，细胞因子是其中重要效应分子之一。例如TNFα和TNFβ可直接造成肿瘤细胞的凋零(apoptosis)’使瘤细胞DNA断裂’细胞萎缩死亡;干扰素α、β、γ可干扰各种病毒在细胞内的复制，从而防止病毒扩散;LIF可直接作用于某些髓性白血病细胞，使其分化为单核细胞，丧失恶性增殖特性。另有一些细胞因子通过激活效应细胞而发挥其功能，如IL-2和IL-12刺激NK细胞与TC细胞的杀肿瘤细胞活性。与抗体和补体等其它免疫效应分子相比，细胞因子的免疫效应功能，因而在抗肿瘤、抗细胞内寄生感染、移植排斥等功能中起重要作用。
三、造血细胞刺激剂
从多能造血干细胞到成熟免疫细胞的分化发育漫长道路中，几乎每一阶段都需要有细胞因子的参与。最初研究造血干细胞是从软琼脂的半固体培养基开始的，在这种培养基中，造血干细胞分化增殖产生的大量子代细胞由于不能扩散而形成细胞簇，称之为集落，而一些刺激造血干细胞的细胞因子可明显刺激这些集落的数量和大小因而命名为集落刺激因子(CSF)。根据它们刺激的造血细胞种类不同有不同的命名，如GM-CSF、G-CSF、M-CSF、multi-CSF(IL-3)等。目前的研究表明，CSF和IL-3是作用于粒细胞系造血细胞，M-CSF作用于单核系造血细胞，此外Epo作用于红系造血细胞，IL-7作用于淋巴系造血细胞，IL-6、IL-11作用于巨核造血细胞等等。由此构成了细胞因子对造血系统的庞大控制 网络。某种细胞因子缺陷就可能导致相应细胞的缺陷，如肾性贫血病人的发病就是肾产生Epo的缺陷所致，正因如此，应用Epo 治疗这一疾病收到非常好的效果。目前多种刺激造血的细胞因子已成功地用于临床血液病，有非常好的 发展前景。
四、炎症反应的促进剂
炎症是机体对外来刺激产生的一种病理反应过程，症状表现为局部的红肿热痛，病理检查可发现有大量炎症细胞如粒细胞、巨噬细胞的局部浸润和组织坏死，在这一过程中，一些细胞因子起到重要的促进作用，如IL-1、IL-6、IL-8、TNFα等可促进炎症细胞的聚集、活化和炎症介质的释放’可直接刺激发热中枢引起全身发烧’IL-8同时还可趋化中性粒细胞到炎症部位’加重炎症症状.在许多炎症性疾病中都可检测到上述细胞因子的水平升高.用某些细胞因子给动物注射’可直接诱导某些炎症现象’这些实验充分证明细胞因子在炎症过程中的重要作用.基于上述理论研究结果’目前已开始利用细胞因子抑制剂治疗炎症性疾病’例如利用IL-1的受体拮抗剂(IL-1receptor antagonist’IL-lra)和抗TNFα抗体治疗败血性休克、类风湿关节炎等，已收到初步疗效。
五、其它
许多细胞因子除参与免疫系统的调节效应功能外，还参与非免疫系统的一些功能。例如IL-8具有促进新生血管形成的作用;M-CSF可降低血胆固醇IL-1刺激破骨细胞、软骨细胞的生长;IL-6促进肝细胞产生急性期蛋白等。这些作用为免疫系统与其它系统之间的相互调节提供了新的证据。
细胞衰老的分子生物学机制
摘要：细胞衰老(cellular aging)是细胞在其生命过程中发育到成熟后，随着时间的增加所发生的在形态结果和功能方面出现的一系列慢性进行性、退化性的变化。细胞衰老是基因与环境共同作用的结果，是细胞生命活动过程的客观规律。为研究细胞衰老分子生物学机制，本文就此展开研究。
关键词：细胞衰老;分子生物学;机制研究
细胞的衰老和死亡与个体的衰老和死亡是两个不同的概念，个体的衰老并不等于所有细胞的衰老，但是细胞的衰老又是同个体的衰老紧密相关的。细胞衰老是个体衰老的基础，个体衰老是细胞普遍衰老的过程和结果。
细胞衰老是正常环境条件下发生的功能减退，逐渐趋向死亡的现象。衰老是生界的普遍规律，细胞作为生物有机体的基本单位，也在不断地新生和衰老死亡。生物体内的绝大多数细胞，都要经过增殖、分化、衰老、死亡等几个阶段。可见细胞的衰老和死亡也是一种正常的生命现象。我们知道，生物体内每时每刻都有细胞在衰老、死亡，同时又有新增殖的细胞来代替它们。
衰老是一个过程，这一过程的长短即细胞的寿命，它随组织种类而不同，同时也受环境条件的影响。高等动物体细胞都有最大增殖能力(分裂)次数，细胞分裂一旦达到这一次数就要死亡。各种动物的细胞最大裂次数各不相同，人体细胞为50～60次。一般说来，细胞最大分裂次数与动物的平均寿命成正比。通过细胞衰老的研究可了解衰老的某些规律，对认识衰老和最终找到延缓或推迟衰老的方法都有重要意义。细胞衰老问题不仅是一个重大的生物学问题，而且是一个重大的社会问题。随着科学发展而不断阐明衰老过程，人类的平均寿命也将不断延长。但也会出现相应的社会老龄化问题以及呼吸系统疾病、心血管系统疾病、脑血管病、癌症、关节炎等老年性疾病发病率上升的问题。因此衰老问题的研究是今后生命科学研究中的一个重要课题。
1 细胞衰老的特征
科学研究表明，衰老细胞的细胞核、细胞质和细胞膜等均有明显的变化：①细胞内水分减少，体积变小，新陈代谢速度减慢;②细胞内酶的活性降低;③细胞内的色素会积累;④细胞内呼吸速度减慢，细胞核体积增大，核膜内折，染色质收缩，颜色加深。线粒体数量减少，体积增大;⑤细胞膜通透性功能改变，使物质运输功能降低。形态变化总体来说老化细胞的各种结构呈退行性变化。
衰老细胞的形态变化表现有：①核：增大、染色深、核内有包含物;②染色质：凝聚、固缩、碎裂、溶解;③质膜：粘度增加、流动性降低;④细胞质：色素积聚、空泡形成;⑤线粒体：数目减少、体积增大;⑥高尔基体：碎裂;⑦尼氏体：消失;⑧包含物：糖原减少、脂肪积聚;⑨核膜：内陷。
2 分子水平的变化
①从总体上DNA复制与转录在细胞衰老时均受抑制，但也有个别基因会异常激活，端粒DNA丢失，线粒体DNA特异性缺失，DNA氧化、断裂、缺失和交联，甲基化程度降低;②mRNA和tRNA含量降低;③蛋白质含成下降，细胞内蛋白质发生糖基化、氨甲酰化、脱氨基等修饰反应，导致蛋白质稳定性、抗原性，可消化性下降，自由基使蛋白质肽断裂，交联而变性。氨基酸由左旋变为右旋;④酶分子活性中心被氧化，金属离子Ca2+、Zn2+、Mg2+、Fe2+等丢失，酶分子的二级结构，溶解度，等电点发生改变，总的效应是酶失活;⑤不饱和脂肪酸被氧化，引起膜脂之间或与脂蛋白之间交联，膜的流动性降低。
3 细胞衰老原因
迄今为止，细胞衰老的本质尚未完全阐明，难以给明确的定义，只能根据现有的认识，从不同的角度概括细胞衰老的内涵。细胞衰老是各种细胞成分在受到内外环境的损伤作用后，因缺乏完善的修复，使“差错”积累，导致细胞衰老。根据对导致“差错”的主要因子和主导因子的认识不同，可分为不同的学说，这些学说各有其理论基础和实验证据[1]。
3.1差错学派 有以下七种学说，有代谢废物积累学说、大分子交联学说、自由基学说、体细胞突变学说、DNA损伤修复学说、端粒学说、生物分子自然交联说等。其中最主要的自由基学说和端粒学说。
3.1.1自由基学说 自由基是一类瞬时形成的含不成对电子的原子或功能基团，普遍存在于生物系统。其种类多、数量大，是活性极高的过渡态中间产物。正常细胞内存在清除自由基的防御系统，包括酶系统和非酶系统。前者如：超氧化物歧化酶(SOD)，过氧化氢酶(CAT)，谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)，非酶系统有维生素E，醌类物质等电子受体。机体通过生物氧化反应为组织细胞生命活动提供能量，同时在此过程中也会产生大量活性自由基。自由基的化学性质活泼，可攻击生物体内的DNA、蛋白质和脂类等大分子物质，造成损伤，如DNA的断裂、交联、碱基羟基化。实验表明DNA中OH8dG(8-羟基-2‘-脱氧鸟苷)随着年龄的增加而增加。OH8dG完全失去碱基配对特异性，不仅OH8dG被错读，与之相邻的胞嘧啶也被错误复制。大量实验证明实，超氧化物岐化酶与抗氧化酶的活性升高能延缓机体的衰老。Sohal等(1994、1995)，将超氧化物岐化酶与过氧化氢酶基因导入果蝇，使转基因株比野生型这两种酶基因多一个拷贝，结果转基因株中酶活性显著升高，平均年龄和最高寿限有所延长。
英国学者提出的自由基理论认为自由基攻击生命大分子造成组织细胞损伤，是引起机体衰老的根本原因，也是诱发肿瘤等恶性疾病的重要起因。自由基就是一些具有不配对电子的氧分子，它们在机体内漫游，损伤任何于其接触的细胞和组织，直到遇到如维生素C、维生素E、β-胡萝卜素、OPC(原花青素)之类的生物黄酮等抗氧化剂将其中和掉或被机体产生的一些酶(如SOD)将其捕获。自由基可破坏胶原蛋白及其它结缔组织，干扰重要的生理过程，引起细胞的DNA突变。此外还可引起器官组织细胞的破坏与减少[2]。例如神经元细胞数量的明显减少，是引起老年人感觉与记忆力下降、动作迟钝及智力障碍的又一重要原因。器官组织细胞破坏或减少主要是由于自由基因突变改变了遗传信息的传递，导致蛋白质与酶的合成错误以及酶活性的降低。这些的积累，造成了器官组织细胞的老化与死亡。
生物膜上的不饱和脂肪酸易受自由基的侵袭发生过氧化反应，氧化作用对衰老有重要的影响，自由基通过对脂质的侵袭加速了细胞的衰老进程[3]。 自由基作用于免疫系统，或作用于淋巴细胞使其受损，引起老年人细胞免疫与体液免疫功能减弱，并使免疫识别力下降出现自身免疫性疾病。
3.1.2端粒学说 染色体两端有端粒，细胞分裂次数多，端粒向内延伸，正常DNA受损。
3.2遗传学派 认为衰老是遗传决定的自然演进过程，一切细胞均有内在的预定程序决定其寿命，而细胞寿命又决定种属寿命的差异，而外部因素只能使细胞寿命在限定范围内变动。
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cell2020是一本由美国细胞出版社出版的杂志，主要关注生物学、医学和生物技术领域的最新研究和发展。该杂志每月出版一次，每期收录有关生物学、医学和生物技术领域的最新研究和发展的文章。
影响力很高。美国植物生物学家学会主办的植物学领域顶级期刊《植物细胞》(The Plant Cell)。
The Plant Cell植物学术很高，是世界植物学领域最顶级期刊,相关研究工作会得到国家重点研发计划、国家自然科学基金、国家青年人才计划等的支持。
2020年发表的细胞生物学杂志包括：1. Cell：《细胞》（Cell）是一本由美国细胞生物学会出版的期刊，主要发表细胞生物学领域的研究论文。2. Molecular Cell：《分子细胞》（Molecular Cell）是一本由美国细胞生物学会出版的期刊，主要发表分子细胞生物学领域的研究论文。3. Developmental Cell：《发育细胞》（Developmental Cell）是一本由美国细胞生物学会出版的期刊，
一、Protein & Cell期刊历史以及定位 Protein & Cell创刊于本世纪初，其由高等教育出版社、北京生科院和中国生物物理学会联合创办，由Springer-Nature集团负责海外发行，2012年首次被SCI收录。其编辑部位于中国科学院生物物理研究所所内，曾长期被研究所学生作为所刊看待（类似于中科院遗传所的Journal of Genetics and Genomics）。其主编为著名结构生物学家、生物物理所前所长饶子和院士。从其创刊背景来看，该杂志更多的聚焦于结构生物学。但随着时间的发展，该杂志逐步成为了一本生物学综合性期刊，其不仅发表生物物理学相关研究，也发表基础细胞生物学、干细胞乃至病毒学、免疫学等方面的内容。 其2012年首个影响因子为3.2分， 2019年则已经上涨至10.164分，而更惊人的是，预计今年6月份公布的JCR报告中，其影响因子可高达13.6分 ，一举超过Science Advances，Nature Communications和Cell Reports这三本综合性期刊。鉴于目前的政治导向，扶持国产期刊成为了趋势。科技部发布的破四唯文件中，明确要求对科研评价采取代表作制度，而 5篇代表作中，必须含有国产期刊 。因而，国产期刊未来必然是科研人员争夺的焦点。 Protein & Cell作为的少有的国产高影响因子生物学综合性期刊，必然会获得更多的关注和投稿。 局座说“颜值就是战斗力”。一个期刊的排版很大程度上反映了该期刊的定位和专业性。该期刊排版清爽简介，非常现代，无论是字体还是整体版式设计，均是属于一流水准。而其每期的Cover，则隐隐有Cell系列子刊的风范。至少从美学角度讲，Protein & Cell是有办成高品质期刊的野心的。 二、Protein & Cell成长史 当然，就跟看人一样，不能只看外表，也要看内在的内涵。那么下面我们就分析一下Protein& Cell是如何用短短十年，在影响因子这一个指标上，超越创刊历史超过70年的Journal of Cell Biology的。从下表可以看到，以 2015年为节点，该杂志水涨船高，其增长速度远超我国GPD增长速度 ，就像做了火箭一样迅速从一个 3分杂志窜升为10分杂志 ，并正式超过IF 8.6分的JCB。通过我们详细分析发现，该杂志影响因子的迅速提升，是由于一下几个原因： 第一，保持较低的发文量。例如，2018/2019两年，其article、review和letter的数目为174篇，而JCB则为523篇。在发文量较低的情况下，少数单篇引用超高的文章会显著提高影响因子，反过来说，这也是PNAS这种年发文量超过3000篇的巨无霸杂志，其影响因子极其稳定的原因。 第二，大量刊发综述性文章。例如，2018/2019两年，其review的数目为38篇，篇均引用达到19次，直接贡献了50.8%的引用数。而JCB的综述贡献则为22%。而另一本综合性生物期刊Cell Reports则只发表了1篇综述，对总引用的贡献率只有0.16%。 第三，大量刊发研究性letter。一个研究性期刊为了健康发展，是不能完全依赖于综述性文章的。那么，如何同时提高研究型文章版面，又同时提高影响因子呢？JCR报告对于影响因子的计算规则是这样的：两年内该杂志发表的所有文献在第三年度的引用数字作为分子，所发表文献中article和review的数目作为分母，其比值则为影响因子。因此，如果说大量刊发review是从分子入手，那大量刊发letter则是从分母入手。Nature在改版前，曾有个栏目为letter，其刊发figure数目不超过4个的研究性文章，其不作为article计入分母。医学类期刊，例如Blood，则每年刊发接近5000篇meeting abstract，同样在贡献大量总引用的情况下，不影响分母的数值。因此，Protein & Cell发表了68篇letter，贡献了18.9%的总引用。 三、投稿建议 说了那么多，那么读者们最想问的核心问题肯定是：Protein & Cell到底值不值得投稿？小公子个人认为，虽然该期刊IF增长迅速是利用了IF的计算规则，但无论是从其文章内容还是排版设计来看，该期刊都有一个成长为优秀期刊的野心和潜力。合理利用IF计算规则，提高影响力，是国产期刊做大做强的必由之路，并没有什么上不得台面。而我们科研狗所关心的是，我们能否利用期刊的规则，来满足我们自己的需求。投稿该期刊，我认为有一下几点优势： 第一，国产血统，就是高贵。四个自信建设有一条就是文化自信，而掌握科研话语权是文化自信的一个子方面。无论是科技部还是中科院文献中心，对国产期刊都是关怀备至。科技部要求5篇代表作中必须含有国产期刊；中科院文献情报中心出品的期刊分区，则将国产期刊强行抬升至1区，并为此创造出一个超越指数的指标。须知科学院1区理论上只包含该领域前5%的期刊，基本上都是各个领域最顶尖的老牌刊物或者CNS的子刊。连PNAS和NC都曾经因为这个规则给划分到2区。而JCR的一区则是该领域前25%的期刊，标准要宽松的多。很多学校，无论是招聘还是学生毕业，对于论文都有分区要求，有的要求科学院1区，有的要求JCR 1区。JCR 1区其实还是比较容易达到的，而科学院1区则基本上高不可攀。国产期刊，则为我们提供了一个发科学院1区刊物的略轻松的途径。因此，从这方面讲，Protein & Cell值得投资。 第二，利用letter发高分杂志。我们前文提到，Protein & Cell利用letter提升了接近20%的影响因子，那我们是否可以利用这个呢？研究性Letter这种类型，其实并不多见，我们最长看到的就是改版之前的Nature。但Nature明确指出，letter和article在科学性上没有优劣之分，都是nature的研究性文章，letter相对而言只是在正文上figure更少，研究更简洁，但supplemental material则相当之多，甚至达到几十页，其是因为纸质杂志版面不够所导致的妥协性选择。而Protein & Cell的letter，经过我仔细查看，其收稿标准显著的低于article，其正文经常只有两张figure，附件里数据也相对较少，而其探讨的科学问题，则明显不如article那么热点。说服力的是，letter的平均引用数字也略低于article，更坐实了我们的推测。因此，我建议，如果您对自己的工作完整性和创新型有信心，但热度或者深度可能略微不足的情况下，可以试试该杂志的letter栏目。需要注意的是，该杂志的letter是纯研究性论文，而非单纯信件，因此完全符合各大高校的毕业要求。 第三，对国产研究极度友好。大家都知道，科研是一个赢家通吃的竞争性行业，首先发表工作的人，基本上会获得所有的荣誉。投稿是一个漫长的历程，大家都担心热点问题会被人抢发，或者因为政治因素发表碰壁。国家之所以扶持国产期刊，有一点就是掌握科研话语权，排除科研之外的因素对文章发表的影响。例如， 韩春雨事件中，国内外20名学者共同署名迅速以 Letter 形式在Protein & Cell发表了题为“Questions about NgAgo”的文章 。中山大学的黄军利用基因编辑技术，在人类胚胎中修复引发地中海贫血的突变的文章，在国外杂志屡屡碰壁， 最后迅速发表于Protein & Cell，该作者也凭此当选了当年Nature杂志评选的年度科学人物 。 因此， 综合以上几点，无论是从性价比，还是从现实利益出发，Protein & Cell均有投资价值 。如果投稿老牌高分杂志不中，该杂志是一个不错的选择。 四、投稿体验 最后，给大家看一下网友们的投稿体验吧，其数据来源于网友分享。 1. 经验分享：非常好的国产杂志！1.编辑非常专业！ 整个编辑部响应速度特别快 ！不管是送审还是返修都是3天内处理，即使疫情期间也没有受影响。2.审稿周期2周，我们那篇3个审稿人，提的意见很专业，硬伤全被一一找出，连逗号全角半角错误都被发现了...（捂脸）。3.每期发表2-3篇左右的article，3-5篇的research letter。我们的文章开始投的article，审下来达不到articel的要求，最后改成letter发表。 2. 我们文章投过去3天送审， 审稿10天 ，审稿意见回来后2天就给了decision，效率特别高。3个审稿人，a和b提的意见普遍比较靠谱，让补的实验也算合理。我们当时就一个审稿人c比较tricky，让我们补了这个又补那个。。。。后来第二轮的时候编辑自己也写了一段意见，认为一篇文章讲好一个故事即可，没有让我们按审稿人c的意见继续补实验。 pc这个杂志article很少，大部分是letter。我们的文章第一次投的article，审下来被拒。后来补了一年实验又投，审下来还是达不到articel的要求，编辑问要不要改成letter发表。我们研究了一下近3年pc的letter，觉得水平也不错。2年硕士时光，能发一篇letter也算知足了，希望以后努力能发一篇article！ 沃斯(WOSCI)由耶鲁大学博士团队匠心打造，专注最新科学动态并提供各类科研学术指导，包括：前沿科学新闻、出版信息、期刊解析、论文写作技巧、学术讲座、SCI论文润色等。
Physiological Genomics网络释义Physiological Genomics: 生理基因组学physiological genomics and pathological genomics: 生理与病理基因组学期刊名 physiological genomics 出版周期： 半月刊偏重的研究方向：GWAS(1) 外显子组(1) 基因组(1) genomics(1) 审稿速度：平均2个月的审稿周期 投稿命中率：25%SCI期刊分区 大类：生物3区；小类：生理学 3区 中科院JCR分区 大类：生物 3区； 小类： 细胞生物学 4区、生理学 3区、遗传学 3区NLM 缩写： Physiol GenomicsNLM ID： 9815683出版国家： United States出版地： Bethesda, MD出版商： American Physiological Society出版周期： Once or twice a year创刊年份： 1999语言： 英语SCI收录： YES