农业生物技术学报杨芬

农业生物技术学报杨芬

1．1用基因枪法获得的转基因小麦 1992年对利用现代生物技术改良小麦而言是具有历史意义的一年。Vasil等以长期培养的胚性愈伤组织为外植体，通过基因枪将GUS/Bar基因导入小麦品种“Pavon”，获得对除草剂Basta具有抗性再生植株(T0)及其后一下（T1），从而宣告世界上第一株转基因小麦问世。一年后，同一研究组又对基因方法进行了优化，以未成熟胚及其愈伤组织为外植体，在3个小麦基因型(Pavon、Bobwhite和RH770019)上获得成功，并且将获得转基因小麦植株的时间由15个月缩短至7-9个月。在这一年，Weeks等也报道以品种“Bobwhite”的未成熟胚为外植体通过基因枪法获得转基因小麦植株。两个独立的实验室用同一品种(Bobwhite)的相同组织（未成熟胚）和相同的方法（基因枪法）都得到相同或相似的结果（获得转基因植株），表明所用的转基因方法是可靠的。此后，以未成熟胚（或称为“幼胚”）及其衍生物为外植体，通过基因枪法获得转基因小麦的报道与日俱增，已经成为迄今为止小麦基因转导的主要方法。值得一提的是，以小麦胚顶端分生组织、营养体顶端分生组织和花序分生组织为目标，用“手持式”基因枪射击也获得外源基因的瞬时表达和转基因植株。这一方法能绕过全能性细胞数量的问题，在小麦基因转导上具有一定的潜力。
1．2用花粉管通道法获得的转基因小麦 利用花粉管通道法转导小麦的工作主要集中在前5年（1990-1995），而且主要集中在我国。周文麟等报道，将C4作物的DNA通过花粉管导入春小麦，获得具有C4若干性状的转“基因”小麦及其后代。成卓敏等称获得转小麦黄矮病毒CP基因的小麦，曾君祉等刘根齐等也报道了花粉管通道法转基因小麦的获得。遗憾的是，当时这些报道都缺乏外源基因（或DNA）在转基因小麦植株及其后代中整全和表达的分子生物学证据。最近，Zeng（曾君祉）和Wu等对1990-1994期间通过花粉管通道法获得的转基因小麦的后代进行了外源“基因”表达的分析，包括分子生物学方法的分析，证明了外源基因的整合和表达，从而证明通过花粉管通道法可以获得转基因小麦。周文麟、倪建福等（个人通信）用我们构建的eMS/Bar嵌合基因转导小麦，获得具有除草剂抗性和雄性不育性状的植株，其后代仍然表现出对除草剂的抗性。花粉管通道法避免了复杂的组织培养、植株再生过程，在小麦上是很有潜力的基因转导方法。
1．3其它直接法获得的转基因小麦 其它直接法，如显微注射、激光微束穿刺、PEG介导和电激等对小麦的转化近乎无效。尽管已经有众多的研究证明外源基因在用这些直接法处理后的原生质体和细胞中能瞬时表达乃至能在产生的愈伤组织中的稳定表达，但获得转基因小麦植株的报道仅有一例。He等以品种“Hartog”的原生质体为受体，通过电激法获得具有除草剂（PPT）抗性的绿色转基因植株，但这些植株未能结籽。小麦原生质体或单细胞植株再生的困难可能是电激法、PEG法和显微注射法等直接法在小麦转基因上失败的主要原因。正是由于这些困难，使以原生质体或单细胞为受体的直接法在小麦基因转导上的前景变得十分黯淡。
1．4农杆菌介导法获得的转基因小麦 自1983年第一株农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）介导的转基因植株问世一来，农杆菌介导法很快就成为双子叶植物基因转导的主导方法。这一方法操作容易、成本低、转化效率高、单拷贝基因整合率高而且外源基因在转基因植株后代中比较稳定。能否将这一方法引入包括小麦在内的单子叶植物的基因转导成为90年代前后讨论与研究的热点。当时，一种倾向性的观点是认为单子叶植物不是农杆菌的天然寄主，利用农杆菌介导转化单子叶植物几乎不可能或没有可能性。这种观点的代表人物是曾在小麦等禾谷类作物组织培养与基因枪转导方面卓有建树的瑞士科学家Potrykus，他在国际权威杂志“Bio/Technology”和“Nature”都发表了他的悲观论点。农杆菌介导的石刁柏转基因植株的获得，特别是农杆菌介导的转基因水稻和转基因玉米的获得，不仅改变了单子叶植物不是农杆菌的天然寄主的看法，而且证明农杆菌介导法完全可以用于禾谷类作物的遗传转化。
在小麦上，虽然有人早在1988年就证明农杆菌能侵染并进行遗传转化，随后又有人证明农杆菌能附着到经部分酶解和未酶解的小麦幼胚细胞，但多年来一直没有得到转基因植株。Hess等报道，直接将农杆菌接种到小穗获得具有抗生素性和经Southern Blot杂交证明的转基因当代植株，外源基因部分在F1和F2中却未能检测到外源基因的存在。在人工授粉后再用携带有共合载体（pCV2260和pSIR42）的农杆菌（株系C158）处理雌蕊，Pukhal’skii获得经过PCR和Southern Blot杂交证明的F1植株，并由此获得具有外源基因的F2植株。这种简单的基因转化方法，结合了花粉通道与农杆菌侵染的优势，如果能够被其它实验室所证实，将在小麦等的基因转化上发挥主导作用。
在农杆菌介导小麦基因转导方面，Cheng等于1997打破了十几年的沉默，首次获得的正常的转基因小麦植株。2年后，我国科学工作者夏光敏等报道获得农杆菌介导的转基因小麦植株，笔者的研究组也同样成功地获得农杆菌介导的转基因小麦植株(待发表)。这种成功意味着，小麦也能象双子叶植物一样享受农杆菌介导基因转化的所有优点。
结合农杆菌介导与基因枪法的“Agrolistic”法，或通过微弹造成的微孔来帮助农杆菌附着及其所含质粒向受体细胞的转移，或把分别携带有 VirDl、VirD2和T-DNA的边界序列加外源片段的三个质粒导入受体，通过VirDl和VirD2在受体中的正常表达促使外源目标片段采用T-DNA边界序列以较低的拷贝数插入受体的基因组中，已经在小麦的基因转化上崭露头角。超声波辅助的农杆菌介导法(Sonication-assisted Agrobacterium-mediated transformation ，SAAT)通过超声波在受体细胞上产生的微孔来帮助农杆菌附着及其所含质粒向受体细胞的转移，使外源基因在小麦受体细胞的瞬时表达强度相对纯农杆菌法增加至少100倍。Singh和Chawla和Serik等还利用碳化硅纤维(silicon carbide fibeers)来辅助农杆菌转基因。此外，还有结合农杆菌与病毒的“Agroinfection ”法等。这些方法目前虽然还不成熟，但在小麦基因转导方面具有很大的潜力。

2、小麦基因转化的受体

作为基因转化的受体取决于所用的转基因方法，而受体操作的难易程度又决定了转基因方法的成败。
小麦胚性悬浮细胞及其分离出的原生质体多用作电激法、PEG法和显微注射法等直接转基因法的受体。正是由于原生质体和悬浮细胞再生植株的困难，使电激法等直接法在小麦的基因转化方面没有多少“用武之地”。小麦的胚性愈伤组织，特别是幼胚及其愈伤组织和幼胚盾片及其愈伤组织具有较强的植株再生能力 (有人认为它们具有较大比例的全能性细胞)，无论作为基因枪法的受体还是作为农杆菌介导法的受体都能再生出转基因植株，从而成为迄今为止小麦基因转化的主要受体，同时也使基因枪法成为目前小麦的主要转基因方法，也有可能使农杆菌介导法成为今后小麦基因转化的主要方法。笔者研究组近年的实验结果 (待发表)表明，小麦花药愈伤组织的再生能力很强，经基因枪轰击后比较容易获得转基因植株，因而也是小麦转基因的良好受体。小麦的各种分生组织作为“手持式”基因枪的受体具有较大的利用潜力，但这一潜力的发挥还有待这种基因枪本身的完善和经济可利用性。雌蕊，作为花粉管通道法及农杆菌一花粉通道法的唯一受体，随着这些转基因方法的完善将在小麦转基因方面发挥越来越重要的作用，有可能发挥主导作用。小孢子、花粉、大孢子和叶基作为小麦转基因的受体可能得到进一步的开发，但在不久的将来，不可能成为主要受体。幼穗可能是进行小麦基因转化一个很好的受体。陈梁鸿在比较幼穗和幼胚为受体的转化试验中观察到，幼穗的转化效果优于幼胚。

3、小麦基因转化的目标基因和选择

标志基因到目前为止，在双子叶植物基因转化中常用的选择基因和报告基因仍然多作为小麦遗传转化的目标基因兼选择基因，这些基因主要有报告基因类的GUS、CAT和LUC;抗抗生素类的NptII、Hpt和抗除草剂类的Bar、EPSPs、Bxn、CP4和GOX。这些基因在小麦上利用主要是为了建立有效的遗传转化系统。随着小麦遗传转化体系的建立和完善，旨在改良小麦性状的真正的目标基因的利用不断增多。迄今为止，已经导入小麦并在转基因植株中得到表达的目标基因主要有：①改良小麦加工品质方面的基因：高分子量谷蛋白亚基(HMW Glutenin subunit)基因lAxl、lDx5和lDxl0和重组高分子量谷蛋白亚基基因。②抗病基因：病毒外壳蛋白基因(Coat protein genes，CP)、类萌芽素蛋白(germin-like proteins，GLPs)基因、水稻thaumatin-like 蛋白基因TLP、藜芦醇合成酶(stilbene synthase )基因、大麦种子核糖滞活蛋白（ribosom-inactivating protein，RIP）基因和玉米Ds转座子; ③嵌合雄性不育类基因：核糖核酸酶类基因Barnase、细胞骨架蛋白基因等;④抗除草剂类基因：Bar、EPSPs、Bxn、CP4和GOX。
在双子叶植物上广泛作为选择基因的抗抗生素类基因，如NptII和Hpt等，在小麦转基因上应用较少。其主要原因有两个:第一是小麦对Kan具有较高的天然抗性，第二是,人们对小麦含抗生素基因的安全性的忧虑。到目前为止，在转基因小麦中应用得最多的选择基因是抗除草剂基因Bar。

报告基因GUS、CAT和LUC曾为小麦基因转化体系的建立作出重大贡献。但在小麦转基因体系基本成熟的今天，人们已经开始寻求其它的基因以代替上述单纯的报告基因或者根本不再利用报告基因。值得一提的是外观可见报告基因(visual marker)。McCormac等和Mentewab等用花色素苷生物合成促进基因(anthocyanin biosynthesis stimulatory genes)，如Cl/Lc，作为报告基因，通过对转化受体及其细胞的颜色来选择转化子。这是一种具有广泛应用价值的报告基因。另外，合成的绿色荧光蛋白基因(SGFP-S65T)也已用于报告小麦的基因转化。

4、外源基因在转基因小麦中的表达与表达分析

广泛应用于在转基因植物中组成型表达外源基因的启动子CaMV 35s在谷物类中的作用较弱。为了增强外源基因在转基因小麦中的表达，人们或利用双CaMV35s序列，或加入单子叶植物基因的插入子(如玉米Adhl基因的插入子)，或转而利用单子叶植物基因的启动子，如水稻的Actl基因的启动子和玉米Ubil基因的启动子。Actl和Ubil启动子是目前在小麦转基因中应用最普遍的组成型启动子。另外，人工重组的组成型启动子pEmuGN启动外源基因在转基因小麦等的表达强度比CaMV35s高至少10倍。这类重组启动子在小麦遗传转化上将大有作为。
组织和/或器官特异性表达启动子的应用在小麦转基因上是一个巨大的进步。特别值得一提的是花药花粉特异性启动子的利用。De Block等以水稻花药绒毡层特异性启动子ca驱动核糖核酸酶基因Barnse在转基因小麦中表达，从而在世界上创造出第一株基因工程雄性不育小麦。笔者的研究组利用烟草花药绒毡层特异性启动子TA29也创造出基因工程雄性不育小麦。基因工程雄性不育小麦的完善与配套，将彻底改变目前杂交小麦制种难的状况。另外，化学诱导性启动子在转基因小麦上也具有巨大的应用潜力。
近年来，对外源基因在转基因小麦上的整合、表达方式已经有一定的研究，包括分子方面的研究。一般认为，外源基因在转基因小麦上的整合方式与所用的转基因方法有关，但无论是用基因枪还是农杆菌介导法，低拷贝与简单的整合仍然是占优势的整合方式；导入基因的遗传在大多数转基因系法后代中呈孟德尔遗传。Bieri等的实验证明，与MARs(matrix-associated regions)的目标基因(RIP)在转基因小麦的后4代仍然非常稳定，但Alvarez等观察到在T2代有极少数植株丧失了整合的外源基因。据Uze等报道，外源基因无论以单链还是双链，无论是以线形还是以环形，都可以整合到小麦的基因组，但线形基因的转化效率更高。Zupan等观察到，农杆菌VirE2蛋白能在转基因植物细胞中协调细胞核吸取单链DNA。Srivastava等报道了“位点特异性重组” (site-specific recombination)方法，他们利用这一方法成功地将4个4拷贝插入基因位点转化成单拷贝基因。
此外，Pederson等还利用荧光原位杂交(FlSH)研究了基因枪法导入的基因在转基因小麦染色体上定位。他们观察到，同一品种 (Florida)的不同转基因株系，外源基因的插入位点不同，例如，一个株系的插入点在染色体6B，而另一株系的插入点在染色体2A。这类研究的深入，将有助于了解插入基因的“位置效应”，从而更好地了解外源基因在转基因小麦中的表达及其稳定性。

5、小麦基因转化存在的主要问题

尽管转基因小麦的研究近年来进展很快，但与双子叶植物相比，甚至与同为谷物类的水稻和玉米相比，仍然有较大的差距。最明显的差距是，转基因双子叶作物已经有几十个种类的120多个品种已经用于生产实践或已经被批准进入大田实验，转基因水稻和玉米有若干品种也已经用于生产实践，而转基因小麦基本还处在建立和优化转基因体系阶段。笔者认为，造成这种差异的主要原因或在小麦转基因方面存在如下的问题：
第一，也是最主要的，小麦组织培养技术问题。小麦组织培养中植株再生率低和基因型依赖性很强的问题是限制转基因成功及大幅度提高转基因小麦数量的瓶颈。植株再生性强的小麦品种，如Bobwhite等，无论用基因枪法还是农杆菌法都己经得到转基因植株，而再生性差的品种则用基因枪也无法得到转基因植株。也正是由于品种的再生问题，使全世界的转基因小麦都集中在少数几个基因型，而这些基因型又并非生产实践所需要的或在生产实践中的应用很有限。
第二，基因转化的受体比较单一。未成熟胚及其衍生物是小麦转基因的主导受体，而在世界发展中国家，有条件周年提供小麦未成熟胚者寥寥无几。
第三，过份依獭基因枪法。目前转基因小麦90%以上是用基因枪法获得的，而基因枪法转基因的缺点在双子叶植物上已经表现得很明显，在此毋须多言。其实，这两个原因在本质上是由第一个原因所引起的。另外，基因枪昂贵的价格也是附带因素。
第四，对农杆菌转化单子叶植物，特别是转化小麦的机理缺乏系统而深入的研究。目前人们已经认识到，不同种类的农杆菌对同一种单子叶植物的侵染能力不同，甚至同一菌株在不同的培养条件下侵染能力也有明显差异。而包括小麦在内的一些单子叶植物本身也存在着一些不利于农杆菌侵染的因素，如，细胞壁的果胶多糖的高度酯化而缺乏农杆菌的附着位点;分泌的愈伤诱导物少或缺乏或与双子叶植物存在明显的差异，不利于农杆菌的转化等。正是由于这些了解，人们通过选用适宜的农杆菌菌株和植物表达载体、提高侵染时农杆菌的浓度和延长侵染时间、在共培养时加入vir基因活化剂 (如AS，OH-AS，双子叶植物伤流等)以及选用合适的受体基因型、外植体和培养基等，使农杆菌转化小麦有了重大突破，成功地获得转基因植株。
第五，小麦本身为异源6倍体，基因组较大而复杂，导入的外源基因的沉默与修饰更为严重。
第六，对转基因小麦分子生物学证据作用的过分依赖。这在某中意义上曾扼制了极有优势的花粉管通道法在小麦转基因上的应用。

6、转基因小麦的展望

随着小麦多种基因转化体系的建立或初步建立，小麦的转基因研究的进展在今后5年将会更快。但这种进展将以更高效的植株再生体系的建立和完善为基础。以基因枪为主体的转基因研究将转向以农杆菌介导法为主体转基因研究，这一研究将会优化或完善农杆菌介导的小麦转基因体系。同时，基因枪法转化小麦将从研究阶段进入应用阶段，因而将有少量转基因小麦品系或品种进入大田试验或作为品系、品种释放。花粉管通道法，特别是它与农杆菌结合的方法将被人们普遍接受并广泛用于小麦转基因的实践。各种辅助农杆菌介导的方法将走向成熟。抗抗生素基因作为选择基因将基本在小麦转基因上消失，代之而来的将是不同的抗除草剂基因、不同糖类和激素类基因。明显易见而又对小麦有益的报告基因，如花色素基因等将会得到较普遍的应用，因而转化子的选择效率将大为提高。更多的优良农业性状基因将被导入和表达，特别是提高面粉，营养价值、改良面粉加工性状的品质基因、提高植株抗病性的基因、提高植株抗旱性的基因和促进植株氮的有效利用基因。更高强度的启动子和组织、器官特异性启动子将会被普遍利用，化学剂可调控启动子也将在部分先进的实验室利用，象 “位点特异性重组”等单拷贝插入技术将更加完善并得到应用。基因工程雄性不育体系将会得到完善，并初步用于杂交种子的生产。抗除草剂基因也将用于控制杂种的纯度。另外，对外源基因的插入位点和插入方式将有比较清楚的了解，从而对外源基因的表达与沉默将有更清楚的了解。同时，反义基因技术将初步用于对小麦功能基因的研究。
或
一、植物的遗传转化

20世纪70年代末80年代初，人们用野生型Ri和Ti质粒转化烟草和马铃薯细胞获得再生植株后，以Ti质粒为载体的植物遗传转化技术随之被建立。近年来植物的遗传转化技术得到了迅速发展，建立了多种转化系统。按照基因引入受体植物细胞的方法，植物遗传转化技术大体可分为两类：以载体为媒介的基因转移和基因或DNA的直接转移。所谓以载体为媒介的基因转移就是将目的基因连于某一载体DNA上，然后通过寄主感染受体植物等途径将外源基因转入植物细胞的技术。DNA的直接转移是指利用植物细胞生物学特性，通过物理、化学和生物学方法将外源基因转入植物细胞的技术。

（一）载体法转化 农杆菌介导的转化是最主要的一种载体转化方法。利用经过改造的农杆菌Ti质粒为载体可以高效地转移外源基因。所获得的转化植物有两种基本方法：一种是1979年Marton等以植物原生质为受体的共培养法（ocultivation）；一种是1985年Horsch等人建立的叶盘法（leaf disc cocultivation）。

共培养法是把农杆菌与植物原生质体共同培养以实现转化的方法。其程序包括农杆菌对初生细胞壁的原生质体的转化、转化细胞的筛选和诱导转化细胞分化并再生植株。

叶盘法实际上是对共培养法加以改进后而创立的一种转化方法。用农杆菌感染叶片外植体并短期共培养。在培养过程中，农杆菌的vir基因被诱导，它的活化可以启动T-DNA向植物细胞的转移。共培养后，也要进行转化的外植体的筛选、愈伤组织的培养、诱导分化等步骤，以得到再生植株。叶盘法由于不需进行原生质体操作等，方法简单，获得转化植株也更快，是用植物外植体为材料进行转基因的一个良好途径。

农杆菌介导的遗传转化是大多数双子叶植物转化中常采用的方法，但由于农杆菌具有宿主局限性，极少能感染单子叶植物，特别是一些重要的农作物如水稻、小麦、玉米等对农杆菌不敏感，难于应用此法进行遗传转化。

除上述以Ti质粒为载体的基因转化外，还可以用脂质体（liposome）为载体进行遗传转化。脂质体是由磷脂组成的膜状结构，因此可将DNA分子包装在脂质体内以避免受体细胞DNase的降解，把DNA分子导入到植物的原生质体中去。

（二）基因直接转移的方法 这是指既不依赖于农杆菌，也不依赖其他载体或媒介的一些基因转移方法。

1．电激和电注射法 电脉冲能改变细胞膜的透性。通过高压电脉冲的电激穿孔作用把外源DNA引入植物原生质体的方法就称为电激法（electroporation）。这种方法现已较广泛地应用于单子叶和双子叶植物以及动物的基因转移，如20世纪80年代末用此法将新霉素磷酸转移酶（NPT Ⅱ）基因转入玉米自交系的原生质体，已再生成植株。

通过电激技术把基因直接引入完整的植物细胞或组织的方法，称作电注射（electroinjection）。这种方法可避免原生质体培养和再生成植株的繁杂操作与困难，因而具有巨大的应用潜力。

2．基因枪法 基因枪法又称粒子轰击技术（particle bombardment）。这一方法是用粒子枪把表面吸附有外源DNA的金属微粒高速地射进植物细胞或组织。由于此法快速简便，不受宿主范围限制，而受体植物细胞不需去除细胞壁，转化率又高，被转化的细胞或组织容易再生成植株，因而颇受关注。

3．微注射法 微注射法（microinjection）是利用显微注射仪等，通过机械的方法将外源基因或DNA直接注入细胞核或细胞质。与其他方法相比，这个方法对外源遗传物质的导入更为直接和有效。

微注射法除用于植物细胞外，近些年还发展到用于直接注射植物子房，这样更有利于外源遗传物质对幼胚的转化。这方面的工作我国于20世纪70年代即已进行了理论与实践的探索，并已获得抗枯萎病的棉花转化植株抗虫棉等。

二、转基因动物技术及其应用

（一）转基因动物的概念 借助基因工程技术把外源目的基因导入生殖细胞、胚胎干细胞和早期胚胎，并在受体染色体上稳定整合，使之经过各种发育途径得到能把外源目的基因传给子代的个体，即转基因动物（transgenic animal）。转入的目的基因称为转基因（transgene），这种转移目的基因的过程称为转基因作用（transgenesis）。关于“转基因”的概念，通常只限于动、植物中经基因工程技术进行的基因转移，因此品种间不论有性或无性杂交获得新基因的途径都不属此范畴。

（二）转基因动物技术 转基因动物技术是20世纪80年代初发展起来的一项生物技术，它克服了物种之间的生殖隔离，实现了动物物种之间遗传物质的交换和重组。根据外源基因导入的方法和对象的不同，至今主要有3种途径可以产生转基因动物，即显微注射法、反转录病毒法和胚胎干细胞法。反转录病毒转移基因的基本方法在前面已有简介，这里只介绍显微注射法和胚胎干细胞法两种。

1．受精卵原核显微注射法 显微注射技术是从动物胚胎学研究移核实验的基础上发展而来。20世纪80年代初期人们利用这一方法向动物生殖细胞转移外源基因，成功地建立了转基因小鼠。1985年转基因绵羊和转基因猪问世，以后转基因大鼠、兔、鸡、牛、鱼等都已陆续取得成功，可见显微注射法是迄今应用得较为普遍而又最有成效的一种获得转基因动物的技术。

本方法是在显微镜下，用直径约为1μm的玻璃管直接插入受精卵的雄原核内，将毛细管内所带有的外源基因的DNA注入原核，然后将其移植到假孕母体输卵管或子宫内并发育成子代个体。为了解转基因的整合情况，可酌情应用斑点杂交、多聚酶链式反应或Southern印迹杂交等方法对子代个体DNA进行检测。

显微注射法的优点是导入的外源基因片段可长达50 kb，且无需载体，外源基因在宿主染色体上的整合率相对较高。其不足之处是外源基因的整合是随机的，因而难以控制其整合率；再者，对外源基因能否稳定整合于受体基因组的检测，必须等到子一代个体出生后经过选择才能确定，不利于在生育期长、产仔少的大家畜中应用。

2．胚胎干细胞介导法 胚胎干细胞（embryonic stem cell，ES）是指从哺乳动物胚胎囊胚期内的细胞团中分离出来的尚未分化的胚胎细胞，这种细胞具有发育的多能性，能够分化出各种组织。20世纪80年代中期人们开始研究利用ES细胞获得转基因动物的方法。这个途径是将外源基因直接导入ES细胞，经体外培养筛选后再注入到受体囊胚腔中，与其中的囊胚细胞聚集在一起，成为受体胚胎的一部分，参与其分化。由这种胚胎发育而成嵌合体的转基因动物，即其中有一部分组织来源于整合有外源基因的供体ES细胞。在嵌合过程中，被转化的ES细胞分化而成的生殖细胞可通过杂交将引入的外源基因传递下去。

在以胚胎干细胞为媒介获得转基因动物的技术中，既可以用多种方法将外源基因导入ES细胞，且细胞的鉴定、筛选比较方便，又可预先在细胞水平上测定外源基因的拷贝数、定位和表达的水平以及插入的稳定性等，而且将ES细胞注入囊胚的操作较易进行，整合率相对较高。只是建立ES细胞系本身就是一项难度极高的工作，目前小鼠ES细胞系虽已建立，但在猪、羊中还未能得到真正稳定的ES细胞株。

（三）转基因动物的应用 转基因动物的研究内容非常广泛，20世纪80～90年代以来从基础理论到应用技术在深度和广度上都有了很大发展，并已日渐由实验室走向生产实践。

1．在基因表达调控研究方面的应用 利用转基因动物可作为在体内研究外源基因表达调控的“反应器”，下面仅就DNA顺式调控元件和基因在发育中的时空调节为例予以介绍。

（1）顺式调控元件的研究 异常的脂蛋白水平与动脉粥样硬化等疾病有关。人类有5种脂蛋白，各自含有不同的载脂蛋白。现已发现约有17种载脂蛋白，它们的编码基因已测序，是用于研究心血管疾病的候选基因。把载脂蛋白基因转入小鼠，可用来研究人脂蛋白代谢、调控以及动脉粥样硬化。在研究载脂蛋白基因组织特异性表达的顺式调控元件时，发现有两簇载脂蛋白基因凋节的组织特异性表达（图19-15）。一簇包括A－Ⅰ、C-Ⅲ和 A-Ⅳ基因，定位于人11号染色体长臂2区3带（11q23），是按A－Ⅰ、C－Ⅲ、A－Ⅳ的顺序组成。C－Ⅲ的转录方向与其他两个基因相反。 A-Ⅰ和C-Ⅲ主要在肝和小肠中表达，A-Ⅳ主要在小肠表达。在 C-Ⅲ基因的-0.2～-1.4bp之间是调节 A－Ⅰ基因在小肠中表达的区域。这个区域也是 C－Ⅲ和A－Ⅳ基因在小肠表达的凋控元件，表明这一元件可以调节整个载脂蛋白基因簇在小肠的表达。另一基因簇定位于19号染色体长臂1区3带（19q13），包含有E、C－Ⅰ和C-Ⅱ基因，它们按E、C－Ⅰ、C－Ⅱ顺序排列。E基因主要在肝脏和大部分身体组织中表达，但表达水平低。以后发现在C－Ⅰ基因和C－Ⅱ基因之间有

农业生物技术学报投稿两个月没反应

农业生物技术学报投稿两个月没反应是稿件未被采用或者还未到审稿期限。据查询相关资料按照过去的惯例，杂志社在稿约中都有明确规定，即"本社因人力所限，恕不退稿。如在三个月内未见回复，作者可自行处理。故作者可以再等一个月或放弃投稿。

微生物 牛人 帮忙！！！

如今还健在的微生物界牛人

1.田波，男，1931年12月25日生于山东桓台县，中国科学院微生物研究所分子病毒学与生物工程研究室主任，研究员、院士、博士生导师，著名病毒学与生物工程专家

1954年8月 北京农业大学植保系毕业
1954年8月至1962年6月 中国科学院微生物所研究实习员, 1958年后任课题组长
1962年7月至1978年12月 中国科学院微生物所, 助研, 课题组长,
1977年后任研究室副主任
1979年1月至1986年4月 中国科学院微生物所, 副研, 研究室副主任, 1983年后任主任
1986年5月至1991年12月 中国科学院微生物所, 研究员, 博士生导师, 研究室主任
1991年12月至今 中国科学院院士, 研究员, 博士生导师, 研究室主任

对中国的植物病毒、类病毒和生物工程有系统的研究, 1983年首次报导了应用卫星RNA防治黄瓜花叶病毒获得成功。通过卫星RNA生防制剂和包括卫星 RNA 在内的多基因抗病遗传工程品种, 在田间大面积应用中获得良好的防病增产效果, 并提出了卫星RNA除抑制病毒复制之外的一种新的抗花叶病机理。他所领导的实验室在生物工程方面开展了核酶工程、随机序列多肽库、抗体基因工程、基因工程医药和植物基因工程等研究, 获得在体内高度抗病毒和类病毒的转基因作物; 构建了胞内和表位多肽库并筛选到用于亲合层析和抗病毒的一些多肽; 构建和表达了几种抗肿瘤的抗体基因; 研制成功数种基因工程药物; 在几种作物上用基因工程方法获得了雄性不育系和恢复系, 为杂种优势利用奠定了基础。
在国内外重要学术刊物上发表论文150多篇, 专著五种。

2.张树政，女，1922年10月22日生于河北束鹿县。现任中国科学院院士、微生物所研究员、博士生导师。
1942－1945 北京大学理学院化学系毕业，理学士；
1945－1946 北京大学理学院化学系助教；
1946－1948 北京大学医学院生化科助教；
1948－1949 北京大学理学院化学系助教；
1950－1954 重工业部综合工业试验所技师；
1954－1957 中国科学院菌种保藏委员会助理研究员；
1958－现在 历任中科院微生物所副研究员、研究员、博士生导师、酶学研究室副主任等职。
1991－现在 中国科学院院士
1992－现在 中国科学院生物学部常委
60年代初，在国内首先用纸电泳、酶谱和生长谱法分析比较了当时在酒精工业界有争议的不同种曲霉淀粉酶系的组成，确定了黑曲霉的优越性。60年代阐明了白地霉的戊糖代谢途径，发现白地霉中有甘露醇，查明了其合成途径。发现并纯化了NAP－甘露醇脱氢酶。70年代在国内首先建立了等电聚焦和聚丙烯酰胺凝胶电泳等新技术。在红曲霉糖化酶的研究中，首次得到该酶的结晶，并发现该酶的不同分子型存在构象差异，证明是糖基化程度不同引起的（现称为糖型）。80年代从事多种糖苷酶的应用和基础研究。如细菌(－淀粉酶高产菌株活力在国际上当时领先，果胶酶的应用，右旋糖酐酶已证明有防龋效果，产麦芽四糖的淀粉酶有工业化前景。首次发现了有严格底物专一性的(－D－岩藻糖苷酶，由嗜热菌纯化了5种酶。90年代在国内大力倡导糖生物学和糖工程前沿计划，并建立了糖工程实验室 。

3.魏江春男，1931年11月11日生。研究员、博士生导师、中国科学院院士
自1963年以来一直从事中国地衣区系与分类研究，同时对世界范围石耳科 (Umbilicariaceae)地衣进行了比较系统的研究。先后组织并参加了国家基金委、国家科委和中科院联合资助的重大项目中的三级课题《中国地衣志－石蕊科》，基金委资助的《用地衣进行北京地区大气质量评定的研究》及《世界范围石耳科地衣的综合研究》，中科院重大项目中的三级课题《西藏地衣研究》以及国家85攻关《南极菲尔德斯半岛生态系统的研究》中的《陆地生态系统的研究》。此外，还对中国地衣文献资料进行了整理与分析，对一些地衣类群，如袋衣科，肺衣科，地卷科，茶渍科等进行了初步研究。当前正在主持并参加由基金委、中科院和真菌地衣系统学开放实验室资助的中美合作项目《东亚－北美地衣型与非地衣型真菌的间断分布及其遗传趋异性研究》。自1990年以来，将注意力逐渐集中于地衣表型与基因型相结合的综合研究方面。在石耳科研究中通过PCR技术对地衣型真菌的核rDNA特定片断进行RFLP分析以及对某些疑难种的核rDNA特定片断进行序列测定，并结合形态学，解剖学，化学与地理学等多性状的综合比较进一步阐述了石耳科地衣的科、属、种级的分类学综合概念。

4.郑儒永女，1931年 1月10日生。 研究员、中国科学院院士、博士生导师，系统真菌学专业
一贯致力于真菌分类系统的合理化与完善, 研究小煤炱、白粉菌和毛霉等类 真菌多年。对我国白粉菌目的有关属种以及全世界范围内白粉菌目的所有属的全 型进行了详尽的研究, 澄清和订正了许多国际上有争议的问题, 发表了一个较为 合理和接近自然的白粉菌科属级分类系统, 受到国际公认。1987年与其他人合作 并主写了我国的第一本真菌志《中国白粉菌志》。在分类难度很大的毛霉目研究 中, 注意将形态特征结合生理生化及分子生物学特性和将无性型特征结合有性型 特征并取得了一些有意义的突破。在医学毛霉和内生毛霉方面亦注意开展研究。 共著书10本(主作2本), 发表在国内外学术刊物上和全国会议及国际会议论文62 篇(主作48篇)。

5.方荣祥 院士 男，汉族 1946年1月19日出生于上海，籍贯 安徽省绩溪县
工作单位及地址 中国科学院微生物研究所 北京中关村 100080研究员、博士生导师
电话及传真 62548243 电子邮件

6.我们学校的院士
李季伦（1925.03.15--），男，河北乐亭人，教授，1995年当选为中国科学院院士。

1948年毕业于南京中央大学理学院生物系，留校任教。1950年至今，历任中国农业大学助教、讲师、副教授、教授。1980-1982年在美国Wisconsin大学生化系进修。1989年至今任中国农业大学“农业生物技术国家重点实验室”学术委员会主任；1992年至今任中国科学院微生物研究所“微生物资源前期开发国家重点实验室”学术委员会主任。曾兼任国务院学位委员会学科评议组成员（1985-1991年）、农业部科学技术委员会委员（1983-1995年）、清华大学兼职教授（1994-1996年）、中国微生物学会理事长（1991-1995年）和名誉理事（1995年至今）、《微生物学报》主编（1991年至今） 、《农业生物技术学报》主编（中、英文版，2002年 至今）。

长期从事农业微生物的教学和研究，培养了大量专业人才，其中包括60多名研究生。出版译著8册，发表文章 一百二十余篇。与俞大绂教授合编的《微生物学》在我国微生物界有较大影响，获国家新闻出版署优秀科技图书一等奖（1998年）。

在基础科学研究方面：系统地研究了生物固氮的问题，取得以下成就：（1）在固氮酶催化机制的研究中，证明了固氮酶催化HD形成是固氮酶的普遍特性，而且是绝对依赖N2的；并提出了固氮酶的双位点放H2模式；（2）在固氮螺菌分子遗传学研究中，建立了我国巴西固氮螺菌Yu62菌株的基因文库，克隆和测序了该菌的ntrBC、draTG、nifA、glnB、glnZ和flbD等基因，并分析了它们的功能；构建了能节约玉米氮肥20%的耐铵固氮基因工程菌株；（3）启动了我国豆科植物根瘤菌资源调查和分类的研究，建立了我国根瘤菌资源数据库，为以后的研究奠定基础。

在应用研究方面：先后研制和开发了赤霉素GA3和GA4+7(可用于促进植物生长)、玉米赤霉烯酮和玉米赤霉醇（可用于促进牛、羊增重，并首先发现它们也是高等植物的一类天然激素）、莫能菌素和马杜霉素（可用于预防鸡球虫危害）、以及阿维菌素和伊维菌素（可用于防治动植物的寄生虫）等农牧用微生物制剂，取得了重大经济效益和社会效益。

曾获北京市优秀教育工作者（1986年）、五一劳动奖章（1986年）、全国农业劳动模范（1990年）等荣誉称号 ，自1991年起享受国务院颁发的政府特殊津贴。

7.我们学校的院士
陈文新，女，教授，博士生导师，中科院院士，国际根瘤菌/土壤杆菌分类分委会委员。1952年毕业于武汉大学农学院土壤农化学系。1958年获前苏联季米里亚捷夫农学院副博士学位。1959年1月回国后在北京农业大学(现中国农业大学)生物学院微生物学系工作至今,一直从事土壤微生物学与细菌分类学的教学和科学研究。自二十世纪70年代起，她主持研究我国根瘤菌资源调查与分类。在她卓越的领导下，组织全国20个单位的微生物学工作者，共同完成全国32个省（市）700多个县，不同生态条件下各种豆科植物根瘤菌资源调查，保藏根瘤菌5000多株；对其中2000株进行过100多项性状分析；发现一批抗逆性很强的根瘤菌种质资源；发表根瘤菌新属2个，新种12个，在国际根瘤菌属、种系统中占很大比重；从分类学角度获得豆科植物与根瘤菌共生关系的新认识；在国内外学术刊物上发表论文100多篇，其中近20篇被SCI收录，被引用200多次；培养硕士、博士50多人。她先后获农业部部级科技进步一等奖2项，获国家教委科技进步二等奖2项，获农业部优秀教材一等奖1项，2001年获国家自然科学二等奖1项。她的工作在国际上有较大影响，1996年当选为国际根瘤菌/土壤杆菌分类分委会委员, 1998年被邀与美国学者一道撰写“伯杰系统细菌学手册”第二版根瘤菌部分内容。现在她正热心于将优良豆科植物--根瘤菌共生体系引入我国西部大开发的农林牧业中而努力工作着。

关于农业病虫害防治研究方面的期刊有哪些

涉及这方面期刊挺多的，你看吧——
《生态学杂志》
《福建农业学报》
《中国农业资源与区划》
《辽宁农业科学》
《农业生物技术学报》
《土壤学报》
《河南科技学院学报(自然科学版)》
《植物生态学报》
《甘肃农业》
《天津农林科技》
《云南农业教育研究》
《农业新技术》
《浙江农业学报》
《上海农业学报》
《现代农业科学》
《三明农业科技》
《现代农业科技》
《热带农业科学》
《农业科技通讯》

并不是每个期刊上面全是有关病虫害防治研究方面的文章，但是都有涉及。

——【中州期刊联盟】

戴洪义的论文发表

1 、杭青梨试管苗移栽前后叶片与根部形态结构之电镜观察。莱阳农学院学报，1987年，第2期，戴洪义、沈德绪、林伯年。2、砂梨品种的试管繁殖。植物生理学通讯，1988年第2期，戴洪义、沈德绪、林伯年。3、葡萄81-8单系的倍性鉴定。莱阳农学院学报，1988年第4期，孙敏、戴洪义。4、砂梨茎尖与叶芽的离体培养。浙江农业大学学报，1988年第4期，戴洪义、沈德绪、林伯年。5、枣疯病热处理脱毒之初步研究。落叶果树，1988第4期，戴洪义、沈德绪、林伯年。6、果树组织培养繁殖的研究进展。莱阳农学院学报，1988年第3期，戴洪义、孙敏。7、中国梨同物异名地方品种鉴定方法。国际园艺植物种质资源会议论文集（英文版），万国学术出版社，l989年，辛淑亮、戴洪义、王奎先。8、中香梨授粉品种选择。落叶果树，1990年第1期，戴洪义。9、葡萄染色体倍性与气孔性状的相关及其判别分析。葡萄栽培与酿酒，1990年第2期，戴洪义、孙敏、商传明。10、苹果果皮细胞膜结构分化与虎皮病的关系。果树科学，第9卷第4期，1992年，鞠志国、原永兵、刘成连、戴洪义。11、葡萄资源的研究进展。葡萄栽培与酿酒，l992年第4期，戴洪义、于士梅、刘玉军。12、PP333对梨果实生长和酚类物质合成的影响。园艺学报，1993年，鞠志国、原永兵、刘成连、戴洪义。13、苹果酚类物质合成的调节及其对果实品质的影响。中国农业科学，261（4），1993年，鞠志国、原永兵、刘成连、戴洪义、刘润进。14、接种物形式和寄生植物对丛枝菌真菌发育的影响。植物生理学报，1994年第1期，戴洪义、刘润进、祝军。15、低温对苹果储藏过程中H202水平的影响。果树科学，1994年，鞠志国、原永兵、刘成连、戴洪义。16、矮樱桃的茎尖培养与快速繁殖。园艺学进展，农业出版杜，1994年11月，王然、戴洪义、周爱琴。17、柱型苹果的生物学特性。园艺学进展，农业出版社，1994年11月，戴洪义、王善广、于士梅、王然。18、莱阳梨花期晚霜冻害调查。烟台果树，l994年第4期，戴洪义、姜润丽。19、去病毒大樱桃砧木‘Colt’的试管繁殖。植物生理学通讯：第3l卷第1期，1995年，戴洪义、王然、周爱琴。20、果树综合生产一一国外果树生产新潮流。世界农业，1995年第一期，戴洪义。21、层积和预处理对Wenbo（拼音）和木瓜种子发芽到影响。中国科协第二届青年学术年论文集，1995，戴洪义、Frank H. Alston。22、Research on Quince as a rootstock for pear。纪念吴耕民教授诞生100周年论文集，中国农业科技出版社，1995年4月，戴洪义、Frank H. Alston。24、柱型苹果研究进展及其发展前景。果树科学，第13卷第一期，1996年，戴洪义、于士梅。25、柱型苹果引种研究。果树科学，15（1），1998，戴洪义、王善广、于士梅、王然、于秀敏。26、苹果梨品种资源的研究利用及其开发前景。落叶果树，1998年第三期，戴洪义、王然、王彩虹。27、柱型苹果的研究和利用现状。河北林果研究，2000，15（12），王彩虹、田义轲、戴洪义。28、苹果基因组AFLP分析的DNA模板的制备技术体系的建立。山东农业大学学报，2001（2），王彩虹、王倩、戴洪义等。29、与苹果柱型基因（Co）相关的AFLP标记片断的克隆。果树科学，2001，18（4），王彩虹、王倩、戴洪义等。30、加快高等教育的改革和创新。发展论坛，2001（9），70－71，戴洪义。32、与苹果柱型基因（Co）紧密连锁的分子标记的筛选。农业生物技术学报，2001年（2），187-190，王彩虹、王倩、戴洪义等。33、苹果柱型基因Co的一个AFLP标记的SCAR转换。园艺学报，2002，29（2）：100-104，王彩虹，戴洪义等。34、A report on breeding columnar apple varieties，果树学报，2003年，Vol.20 No.2（2）79-83，戴洪义、王彩虹等。35、果树自交不亲和性的研究进展。莱阳农学院学报，2002年,Vol.19，No.3，王爱华、戴洪义36、甜樱桃胚培养研究。莱阳农学院学报，2003，Vol.20，No.3，王爱华、戴洪义、于士梅37、一个与苹果柱型基因（Co）连锁的RAPD标记。西北植物学报，2003，Vol.23 No.12（2）田义轲，王彩虹，张继树，戴洪义，初庆刚等。39、甜樱桃品种红灯与佐藤锦的 S 基因型测定。山东农业科学 2004 第5期25-26，戴洪义、王爱华40、苹果柱型基因RAPD标记的克隆及序列分析。莱阳农学院学报，2004，21（4）：265-268，田义轲、王彩虹、张继树、戴洪义、赵静。41、辣椒体表茸毛与抗蚜虫关系的研究。莱阳农学院学报，2004，21（4）：293-295，尚宏芹、刘建萍、戴洪义等42、品种权申请公告?苹果属。农业植物新品种保护公报，2004，（3）：41~46，戴洪义、祝军、王然、王彩虹、于士梅、王成荣等。43、12个苹果新品种简介。中国果树，2004，（6）：7~8，祝军，戴洪义。44、菊苣组织培养。植物生理学通讯，2005，41（2），201，尚宏芹、焦红良、，戴洪义。45、拥有我国自主产权的6个苹果新品种。落叶果树，2005，37（1）20-21，祝军、戴洪义。46、Mapping Co，a Gene Controlling Columnar Phenotype of Apple Tree，with Molecular Markers，Euphytica，2005，145，181~188，Yi-Ke Tian，Cai-Hong Wang，Ji-Shu Zhang,Celia James&Hong-Yi Dai（戴洪义，通讯作者）47、浓缩苹果汁非酶褐变的研究进展.莱阳农学院学报，2006，23（1）:23-26.周亚平，刘洪涛，戴洪义(通讯作者)48、苹果制汁新品种鲁加4号浓缩汁储藏过程中稳定性的影响因素。果树学报，2006年，Vol.23 No.（1）65-68，周亚萍，刘洪涛，何维华，刘春辉，祝军，戴洪义（通讯作者）49、与苹果果皮红色性状相关的RAPD分子标记的筛选。果树学报，2006，23卷。第2期，165-168，赵静，田义柯，王彩虹，戴洪义，王 东50、西洋梨矮化资源的生物学特性研究。莱阳农学院学报，2006，23（2），119-121，王彩虹，田义柯，戴洪义，代庆海，殷召学，杨晓芹51、苹果浓缩汁美拉德反应有关影响因素的研究。食品科学，2007，28卷，第四期，39-43，周亚萍，王成荣，于士梅，祝军，王然，王彩虹，戴洪义*（通讯作者）52、苹果浓缩汁后混浊的研究进展。饮料工业，2007，第10卷，第7期，3-6，孙海蜂，孙家财，周亚萍，戴洪义*（通讯作者）53、高效液相色谱法同时测定苹果汁中6种酚类物质。分析化学，2007，35卷，第10期1425-1429，吕海涛，孙海峰，曲宝涵，戴洪义54、菊苣的组织培养繁殖的研究。青岛农业大学学报，2007，24卷，第1期，31-34，尚宏芹，于士梅，戴洪义*55、扎实开展整改，巩固评建成效。高等教育研究与实践，2007，第1期，17-19，戴洪义56、实施教育质量与教学改革工程，全面提高人才培养质量。高等教育研究与实践，2007，第2期，1-3，戴洪义57、苹果汁色泽相关性状遗传的研究。果树学报，2008，25卷。第2期，157-161,何维华，周亚平，曲凌慧，刘春辉，于士梅，祝 军，戴洪义*58、苹果果肉中原花青素超声波的辅助浸提。食品与生物技术学报，2008， 27卷第1期，80-83，刘春辉，周亚萍，祝军，戴洪义*59、HPLC法测定苹果浓缩计中的多酚类物质。食品科学，2008，29卷，第4期，314-317，孙海峰，吕海涛，周莎莎，代庆海，周亚萍，戴洪义*60、矮生西洋梨（Pyrus communis L）茎尖离体培养研究。青岛农业大学学报，2008，25卷，第1期，17-20，代庆海，王彩虹，梁美霞，王亮，戴洪义*61、苹果优良酵母菌株的筛选。青岛农业大学学报，2008，25卷，第1期，28-33，杨晓英，丁立孝，梁美霞，戴洪义*62、苹果原汁褐变有关因素的研究。青岛农业大学学报，2008，25卷，第2期，81-83，周莎莎，周亚萍，冯耀祖，戴洪义*63、梨杂交后代果实主要有机酸遗传动态的研究。青岛农业大学学报，2008，25卷，第3期，231-235，王宏伟，王成荣，于淼，戴洪义 王然*64、 梨矮化基因pcDw的SSR标记定位。果树学报，2008，25（3）：404-407，田义柯，王彩虹，，贾彦利，王 亮，戴洪义65、平邑甜茶与M7离体叶片不定芽再生的研究。青岛农业大学学报，2009，26卷，第2期，103-108，魏国芹，梁美霞，李鼎立，孙海峰，戴洪义*66、酚类物质和可溶性蛋白对苹果浓缩汁后浑浊的影响。食品与发酵工业，2009，35卷，第6期，23-27，孙海蜂，孙家财，于士梅，周亚萍，梁美霞，戴洪义*（通讯作者）67、苹果原生质体培养再生愈伤组织。中国农学通报，2009，第25卷，第20期，179-186，魏国芹，李鼎立，梁美霞，戴洪义*68、柱型与普通型苹果叶片结构与叶绿体超微结构比较。园艺学报，2009，36（10），1504-1510，梁美霞，葛红娟，戴洪义*（通讯作者）69、??离体培养繁殖的研究。山东农业科学，2010，1：5-9，魏国芹，戴洪义，孙玉刚，梁美霞，安淼70、鲜食制汁兼用型苹果优系选育初报，青岛农业大学学报，2009，26卷，第3期，197-202，邵秀红，梁美霞，冯耀祖，祝军，戴洪义*（通讯作者）71、高等教育质量问题与对策研究。高等教育研究与实践，2009，第2期，3-572、.组培和大田条件下苹果叶片结构和表皮特征的比较. 果树学报, 2009,26(06)：781-785，梁美霞，葛红娟，戴洪义*（通讯作者）73、苹果组培苗离体叶片诱导不定芽分化研究 湖南农业大学学报 2009，35（05）：470-473，梁美霞，戴洪义*（通讯作者）.74、抗生素对菊苣子叶离体分化的影响. 分子植物育种， 2009,7(2):371-374. 梁美霞，戴洪义*（通讯作者）.75、. 菊苣子叶离体培养与植株再生的研究. 北方园艺 2009,03:72-74，梁美霞，戴洪义*（通讯作者）76、葛红娟.苹果叶片解剖结构和表皮特征的生态适应性.园艺学报(增刊),2009,36（36）:1873，梁美霞,戴洪义*（通讯作者）77、农杆菌介导柱型苹果“鲁加6号”遗传转化体系的建立, 分子植物育种, 2009,7(6):1130-1136，梁美霞，祝军，戴洪义*（通讯作者）.78、玻璃化与正常苹果试管苗的叶片和茎的显微结构比较。植物生理学通讯，2010,46.3.223-227，葛红娟，梁美霞，戴洪义*（通讯作者）79、优势醋酸菌株QA-9号选育及其初步鉴定。中国酿造，2010,3.46-48，张赞，梁美霞，席超，阎振华，戴洪义*（通讯作者）80.、壳聚糖澄清苹果酒的工艺优化及其效果评价。食品与发酵工业，2010，第36卷第4期，126-129席超，张赞，闫振华，魏国芹，戴洪义*（通讯作者）81、苹果浓缩汁中酚类物质提取方法。 食品研究与开发，2010,第31卷第6期，139-141闫振华，徐坤，张赞，席超，戴洪义*（通讯作者）82、普通型与矮生型梨叶片显微结构比较。西北植物学报，2010,30（8）：1584-1588，葛红娟，梁美霞，戴洪义*（通讯作者）83、苹果品种华翠果实制汁性评价。中国果树，2010（5）：18-20，康国栋，张玉刚，田义，刘艳艳，丛培华，戴洪义（第二单位，戴洪义为第二通讯作者）84、柱型苹果和矮生型梨组培苗叶片表皮结构研究. 果树学报， 2010， 27（01）：1-7，梁美霞，葛红娟，戴洪义*（通讯作者）.85、利用自动电位滴定法测定果汁中的维生素C含量。果树学报， 2010， 27（06）：1-7，董月菊，梁美霞，戴洪义*（通讯作者）86、苹果玻璃化试管苗生理特性的研究。果树学报， 2010， 27（专刊22-24葛红娟，梁美霞，张玉刚，董月菊，王 英，戴洪义*（通讯作者）87、‘嘎拉’ב特拉蒙’杂交后代中柱型和普通型苹果叶片光合特性比较.果树学报， 2010， 27（专刊）：35-37。张玉刚，梁美霞，祝军，戴洪义*（通讯作者）88、沸石负载壳聚糖对高酸苹果发酵酒的澄清工艺。食品科学，2010，31（22）：164-169.席超，张赞，闫振华，戴洪义*（通讯作者）