自噬论文参考文献

自噬论文参考文献

自噬，简单来说就是细胞自己吃自己、废物再利用。细胞陷于困境时 (如营养物质匮乏)，启动自噬程序自救，通过降解蛋白质和细胞器获得必需的氨基酸、脂肪酸等营养物质维持基本生命活动，以便死中求生。一直以来，自噬都是生命科学领域的研究热点。

2020 年 8 月 17 日，图卢兹大学综合生物研究中心 Arnaud Besson 教授团队，在期刊 Nature cell biology 中发表的自噬相关文章(图 1)，阐明了自噬与细胞周期调控的新机制。

                                                                                   背景介绍

p27Kip1 (p27) 被认为是细胞周期蛋白 CDK 的抑制因子，具有诱导细胞周期停滞的能力。营养匮乏往往是自噬发生的主要诱导原因，已有研究表明，细胞质中的 p27 是自噬的正调节剂 (葡萄糖匮乏或者血清剥夺的条件下)，它可以保护细胞免受应激诱导的细胞凋亡。但是， p27 调控自噬作用的具体分子机制仍然是未知的 。

接下来，M 君和大家一起来看看，关于自噬调控，作者团队做了哪些精彩的工作。

                                                                             p27 调控细胞自噬

作者团队通过研究 p27+/+ MEFs 和 p27-/- MEFs 应对氨基酸剥夺后自噬的变化，证明了 氨基酸缺乏的细胞中，p27 促进自噬 。

细胞：

p27+/+MEFs: p27 野生型(p27+/+)小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)，源于 p27 野生型小鼠胚胎。

p27+/+MEFs: p27 缺失型(p27-/-) MEFs，源于 p27 缺失的小鼠胚胎。

1、p27 促进自噬发生

LC3B-II 是自噬小体的标记物，位于自噬体膜，与溶酶体融合时被降解。氨基酸剥夺的短时间内，如图 2a 所示，p27+/+ 和 p27-/- 小鼠胚胎成纤维细胞中，LC3B-II 表达水平相似，随着氨基酸剥夺时间的延长，p27-/- 中的 LC3B-II 表达水平明显会更高，并且在 48 小时表现出显著统计学差异(图 2b)。在随后的实验中，选择 48 小时作为氨基酸的长时间剥夺的诱导时间。图 2c 的 LC3B 的免疫荧光染色同样也呼应这一观察结果 (红色箭头)。这表明 p27 可促进氨基酸剥夺细胞中的自噬。

2、p27 调控自噬流的检测

自噬是一个多步骤的动态过程，当应答营养匮乏的压力时 (如氨基酸或葡萄糖缺乏)，细胞接受自噬诱导信号，随后会在胞浆处形成一种扁平的叫做吞噬泡 (Phagophore) 的双层膜结构。紧接着，吞噬泡不断延伸，包裹一些细胞元件或者自噬物 (Autophagic cargo)，形成密闭的球状的自噬小体 (Autophagosome)。自噬体与溶酶体融合形成自噬溶酶体 (Autolysosome)，自噬体中的内容物被溶酶体中的酶降解，降解产生的营养物质会被细胞重新利用。

在整个过程中， 细胞将自噬物吞噬到自噬小体，直到最后自噬溶酶体形成并降解自噬物的这个过程被称为自噬流 (Autophagic flux) (图 3)。自噬流中的任一环节出现障碍自噬都无法完成其生物学功能。

LC3B-II 通常是自噬小体的 Marker，哺乳动物细胞内 LC3B 的总量通常不会有巨大波动，一般只会出现 LC3B-I 和 LC3B-II 间的相互转换。

如果 LC3B-II 表达增加，可能是由于前期自噬活化后自噬小体增多导致的，也可能是后期自噬溶酶体清除失败使其积累所致。因此，某单一时间点的 LC3B-II 的表达改变并不能体现自噬流的改变。

在文章中，使用了 WB 检测蛋白、免疫荧光，mCherry-eGFP-LC3B 双荧光系统的组合测量方法，检测 p27+/+ 和 p27-/- MEFs 自噬流。

(1) 氯喹 ( Chloroquine ，CQ) 处理，检测自噬流中 LC3B-II 变化

在酸性溶酶体中，氯喹会使溶酶体 pH 值升高，使溶酶体中酸性水解酶失活 ，从而抑制细胞内自噬溶酶体的融合与降解。氯喹处理细胞会导致 LC3B-II 的聚集，此时观察到的 LC3B-II 的变化仅代表自噬小体数量的改变。

氯喹处理细胞后，在短期氨基酸剥夺的条件下(0-4 h)，两种细胞的自噬通量是相似的 (图 4a, b)。但是随着时间的增加，长时间的氨基酸剥夺处理后，p27-/- MEFs 与 p27+/+ MEFs 相比，LC3B-II 数量显著降低 (图 4c, d)。这说明 p27 促进氨基酸缺失细胞中自噬通量 。

(2) p62/SQSTM1 在细胞中的积累

p62 也称为 SQSTM1 蛋白，作为一种调节因子参与自噬体的构成，具有底物的特异性，是连接 LC3B-II 与待降解泛素化底物的桥梁。p62 结合泛素化蛋白进入到自噬体后最终与溶酶体融合形成自噬溶酶体从而得到清除 (图 5a)。自噬流被抑制时，p62/SQSTM1 会在自噬流受损的细胞中积累, 在细胞内整体 p62 水平的表达与自噬活性存在负相关。

如图 5 b 所示，随着时间的增长，p62 在氨基酸缺乏的 p27-/- 细胞中的表达量更高，p27-/- 细胞的自噬流受损，这进一步说明了，p27 可以促进自噬流活化。

(3) mCherry-eGFP-LC3B 双荧光系统检测自噬体与自噬溶酶体。

mCherry (红光)-eGFP (绿光)-LC3B 串联荧光蛋白可用于检测自噬流水平的融合蛋白。它利用了酸性自溶酶体和中性自噬体之间的 pH 差异以及不同荧光素对 pH 的敏感性差异，以监控从自噬体到自溶酶体的进程 (图 6a)。

如图 6a-b，mCherry 荧光基团的 pH 值稳定性比 GFP 高，GFP 荧光信号在进入溶酶体后由于 pH 值的下降会出现淬灭，而 mCherry 荧光基团进入溶酶体后仍能发出荧光。因此若细胞内出现绿和红色荧光共定位，即 出现黄色荧光 时，表明：mCherry-eGFP-LC3B 融合蛋白并未与溶酶体发生融合, 说明了 自噬流被阻断 。当细胞内仅出现红色荧光而无绿色荧光时，代表 mCherry-eGFP-LC3B 融合蛋白定位于溶酶体或自噬溶酶体内， 即自噬流活化 。

与 p27+/+ 细胞相比，p27-/- 细胞中自噬溶酶体的比例下降 (72% vs 95%)，进一步表明 p27 促进自噬流 (图 6b-c)。

(4) p27 促进自噬体成熟

之前有文献表明(参考文献 5)，自噬体在成熟过程中，LC3B 阳性自噬囊泡会聚集在细胞核周围形成环状聚集结构，这种结构被认为是自噬体成熟过程中的中间结构。如图 7a 所示，p27+/+细胞中有明显的环状聚集体，但是在p27-/- 细胞中很少观察到，取而代之的是小囊泡结构。这表明 p27 可促进自噬体成熟过程。

总结

1、在长期氨基酸剥夺的情况下，与p27-/- 细胞相比，p27+/+ 小鼠胚胎成纤维细胞中 LC3B-II 的上调，p62 蛋白表达量减少，自噬溶酶体数目比例增加，以及自噬体成熟过程环状聚集体的形成，可以证明 p27 在氨基酸长期匮乏的细胞中促进自噬流活化。

2、自噬流在细胞内是流动的细胞代谢过程, 自噬流中的任一环节出现障碍自噬将无法完成其生物学功能。尚无某种单一方法可以绝对准确特异的检测自噬，因此应该使用组合的实验方法来评估自噬活动(自噬相关工具药物的使用，WB 检测自噬相关蛋白变化，免疫荧光共定位，以及 mCherry-eGFP-LC3B 双荧光检测等)。

原文链接： DOI: 10.1038/s41556-020-0554-4.

参考文献 

1. Ada Nowosad, et al. p27 controls Ragulator and mTOR activity in amino acid-deprived cells to regulate the autophagy-lysosomal pathway and coordinate cell cycle and cell growth. Nat Cell Biol. 2020 Aug 17.

2. Prashanta Kumar Panda, et al. Chemical Screening Approaches Enabling Drug Discovery of Autophagy Modulators for Biomedical Applications in Human Diseases. Front Cell Dev Biol. 2019 Mar 19; 7: 38.

3. Maria Condello, et al. Targeting Autophagy to Overcome Human Diseases. Int J Mol Sci. 2019 Feb 8; 20 (3): 725.

4. Liang, J. et al. Te energy sensing LKB1-AMPK pathway regulates p27kip1 phosphorylation mediating the decision to enter autophagy or apoptosis. Nat. Cell Biol. 9, 218-224 (2007)

5. Saori R Yoshii, et al. Monitoring and Measuring Autophagy. Int J Mol Sci. 2017 Aug 28; 18 (9): 1865.

6. Mizushima, N. & Klionsky, D. J. Protein turnover via autophagy: .implications for metabolism. Annu. Rev. Nutr. 27, 19-40 (2007).

7. Stefanie Jäger, et al. Role for Rab7 in maturation of late autophagic vacuoles. J Cell Sci. 2004 Sep 15; 117 (Pt 20): 4837-48.

细胞自噬研究策略

医学科研实验基础知识笔记（四）：细胞自噬研究策略

细胞自噬是指细胞在外界环境因素的影响下， 细胞利用溶酶体降解自身受损、 变性或衰老的大分子物质以及细胞器的自我消化过程。自噬是细胞的一种自我保护机制， 广泛存在于真核细胞内， 在调节细胞生存和死亡的过程中， 起着重要的作用。

当细胞发生自噬后， 在自噬相关基因的调节下， 细胞通过单层或双层膜， 包裹待降解的细胞质或细胞器， 形成囊泡状的自噬体（autophagosome） 。然后自噬体再和溶酶体（lysosome）

发生融合形成自噬溶酶体（autolysosome） ， 由溶酶体内的一系列水解酶， 降解自噬溶酶体内所包裹的内容物， 以实现细胞对自身代谢和能量的更新。

1.自噬的细胞学分类及过程

根据细胞内物质运输到溶酶体的方式以及生理功能的差异， 哺乳动物的细胞自噬可以分为三种类型：大自噬/宏自噬（macroautophagy） ， 小自噬/微自噬（microautophagy） 和分子伴侣介导的自噬（chaperone-mediated autophagy， CMA） 。

1） 大自噬/宏自噬：我们通常所说的自噬指的就是大自噬/宏自噬。在大自噬的过程中， 细胞质中可溶性的大分子物质以及变性的细胞器， 被内质网、 线粒体来源的单层或双层膜包裹形成自噬体。接着自噬体的外膜与溶酶体膜融合， 进一步形成自噬溶酶体， 自噬体内的待降解物被一系列的水解酶降解， 最终完成整个的自噬过程。

2） 小自噬/微自噬：与大自噬过程不同， 是溶酶体膜自身发生内陷， 包裹和吞噬细胞内待降解的底物， 并在溶酶体内发生降解。小自噬与大自噬的区别就在于， 在小自噬过程中胞质成份是直接被溶酶体包裹， 没有形成自噬体的过程。

3） 分子伴侣介导的自噬：在分子伴侣介导发生的自噬过程中， 其待降解的底物都是可溶性的蛋白质分子。分子伴侣蛋白识别带有特定氨基酸序列的底物蛋白质分子， 并与之结合， 然后再经溶酶体膜上的受体 Lamp2a（lysosome-associated membrane protein 2， Lamp2） 转运到溶酶体；底物蛋白分子再在溶酶体内， 被水解酶降解。因此， 分子伴侣介导的自噬与前两者不同， 在降解蛋白时具有选择性。而大自噬和小自噬现象中， 一般而言， 在降解蛋白时没有明显的选择性。

2.自噬信号通路

3.自噬与凋亡的关系

细胞凋亡也被称为 I 型程序性细胞死亡；自噬则被称为 II 型程序性细胞死亡。凋亡和自噬是两种显著不同的细胞死亡形式， 两者在形态、 生化指标以及调控细胞死亡的过程上都存在着较大的差异， 但两者又不是两个完全独立的过程。许多研究表明， 凋亡和自噬的作用以及功能在某些情况下也是相互影响和制约的。自噬和凋亡之间存在着三种不同类型的相互作用，而且每种类型都对应着相应的特定的细胞类型、 刺激和环境。

1） 自噬和凋亡互相协同， 共同促进细胞死亡。两种效应之间， 可以其中一种效应影响另一种效应；自噬也可以作为凋亡的上游调节因子， 直接调控细胞凋亡， 从而影响细胞的死亡；

2） 自噬可以通过促进细胞存活而拮抗细胞的凋亡效应。比如， 可以通过去除因氧化应激受损的细胞器， 或降解变性的大分子物质， 为饥饿的细胞提供生存所需要的营养和能量；或者通过降解未折叠的蛋白来抑制内质网应激。自噬的这些功能将会抑制促凋亡信号的产生， 从而起到拮抗细胞凋亡的作用。

3） 自噬有时虽然自身并没有导致细胞死亡， 但却参与了细胞凋亡的过程。比如自噬参与了一些 ATP 依赖的凋亡过程。

4.自噬的分子机制和特征

1） 自噬诱导阶段（induction） ：正常生理状态下， 细胞保持很低的基础自噬水平。这时细胞内能量充足，哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物 1(也就是 mTOR 复合物 1，也叫做 mTORC1)处于活化的状态。活化的 mTORC1 通过磷酸化的方式使得 ATG13 发生磷酸化反应， 从而抑制细胞的自噬。

2） 成核过程（vesicle nucleation） ：成核过程和 Vps34-ATG6 复合物密切相关。这个复合物还包含有调节性蛋白激酶 Vps15， 共同作用于膜泡的成核， 介导 PAS(也就是前自噬体结构pre-autophagosomal structure)的形成。

Vps34-ATG6 复合体还可以召集 ATG12-ATG5 和 ATG16 多聚体以及 LC3， 并通过后两者促进吞噬泡的伸展扩张。请大家注意， Vps34 在哺乳动物中的同源蛋白是 class III PI3K；ATG6在哺乳动物中的同源蛋白是 Beclin-1， 所以 Vps34-ATG6 复合体， 也被称为 PI3K-Beclin-1复合物。

3） 自噬体的延伸阶段：这个过程的分子机制是最为复杂的。哺乳动物自噬体的延伸主要依赖于两个类泛素化的系统：a） ATG12 的结合过程；b） LC3 的修饰过程。

ATG12 的结合过程是类似泛素化的过程， 需泛素活化酶 E1 和 E2 的参与。ATG12 首先由 E1样酶 ATG7 活化， 再通过 E2 样酶 ATG10 转运并结合 ATG5， 然后和 ATG16 结合， 生成ATG12-ATG5-ATG16 的多体复合物。这个复合物定位于前自噬体结构的外膜表面， 并参与前自噬体外膜的扩张。

LC3 在酵母中的同源基因是 ATG8。LC3 的修饰过程同样需要类似泛素活化酶 E1 和 E2 的参与。LC3 前体形成后被 ATG4 加工成胞浆可溶性的 LC3-Ⅰ， 然后在 E1 样酶 ATG7 和 E2样酶 ATG3 的作用下， 和磷脂酰乙醇胺(PE)共价连接成为脂溶性的 LC3-PE（也就是 LC3-II），并参与膜的延伸。LC3-Ⅱ能够与新形成的膜结合， 直到自噬溶酶体(Autolysosome)的形成。因此， LC3-Ⅱ常用作自噬形成的标识物， 也是一种重要的定位于自噬泡膜上的多信号传导调节蛋白。

哺乳动物的 ATG12-ATG5 类泛素化过程和 LC3 类泛素化过程并不是独立运行的， 它们之间可以相互作用、 相互调节。

4） 自噬体的成熟阶段：自噬体的成熟主要是指自噬体通过微管骨架在转运必须内吞体分类复合物(ESCRT)和单体 GTP 酶(Rab S)作用下， 与溶酶体融合形成自噬溶酶体的过程。参与成熟阶段的溶酶体相关蛋白还包括：LAMP1、 LAMP2、 UVRAG(紫外线抵抗相关肿瘤抑制基因)。

5） 自噬体的裂解阶段：是指自噬溶酶体膜的裂解及内容物在溶酶体水解酶的作用下降解的过程。降解过程中产生的氨基酸及部分蛋白可以为细胞提供营养、 能量或循环利用。

5.自噬诱导剂

a) Bredeldin A / Thapsigargin / Tunicamycin ：模拟内质网应激

b) Carbamazepine/ L-690，330/ Lithium Chloride（氯化锂）：IMPase 抑制剂（即Inositol monophosphatase，肌醇单磷酸酶）

c) Earle's平衡盐溶液：制造饥饿

d) N-Acetyl-D-sphingosine（C2-ceramide）：Class I PI3K Pathway抑制剂

e) Rapamycin：mTOR抑制剂

f) Xestospongin B/C：IP3R阻滞剂

6.自噬抑制剂

a) 3-Methyladenine（3-MA）：（Class III PI3K） hVps34 抑制剂

b) Bafilomycin A1：质子泵抑制剂

c) Hydroxychloroquine（羟氯喹）

除了选用上述工具药外，一般还需结合遗传学技术对自噬相关基因进行干预：包括反义RNA干扰技术（Knockdown）、突变株筛选、外源基因导入等。

7.自噬的检测手段

自噬的评估通常采用多个自噬阶段的标志物，因为自噬小体数量的增加可能是自噬上调也可能是自噬最后阶段降解被抑制所致，所以设置合适的对照很有必要。

（1）透射电镜，电镜观察自噬体和溶酶体的超微结构；

（2）WB检测标志物LC3/Atg8和p62/SQSTM1；生化检测自噬体膜标志蛋白， 特别是ATG12、 ATG5 和 LC3；荧光显微镜检测 LC3 或GFP-LC3 斑点的形成；生化检测自噬底物 p62。

（3）WB检测Lamps、Atg5、Atg14和Beclin-1。

（4）组织蛋白酶Cathepsin活力检测。

（5）IF检测自噬潮autophagic flux

自噬过程进行观察和检测 细胞经诱导或抑制后，需对自噬过程进行观察和检测，常用的策略和技术有：

（1）观察自噬体的形成

由于自噬体属于亚细胞结构，普通光镜下看不到，因此，直接观察自噬体需在透射电镜下。Phagophore的特征为：新月状或杯状，双层或多层膜，有包绕胞浆成分的趋势。自噬体（AV1）的特征为：双层或多层膜的液泡状结构，内含胞浆成分，如线粒体、内质网、核糖体等。自噬溶酶体（AV2）的特征为：单层膜，胞浆成分已降解。（autophagic vacuole，AV）

（2）在荧光显微镜下采用GFP-LC3融合蛋白来示踪自噬形成

由于电镜耗时长，不利于监测（Monitoring）自噬形成，人们利用LC3在自噬形成过程中发生聚集的现象开发出了此技术。无自噬时，GFP-LC3融合蛋白弥散在胞浆中；自噬形成时，GFP-LC3融合蛋白转位至自噬体膜，在荧光显微镜下形成多个明亮的绿色荧光斑点，一个斑点相当于一个自噬体，可以通过计数来评价自噬活性的高低。

（3）利用Western Blot检测LC3-II/I比值的变化以评价自噬形成自噬形成时，胞浆型LC3（即LC3-I）会酶解掉一小段多肽，转变为（自噬体）膜型（即LC3-II），因此，LC3-II/I比值的大小可估计自噬水平的高低。

（注意：LC3抗体对LC3-II有更高的亲和力，会造成假阳性。需要多种检测方法结合使用，同时需考虑溶酶体活性的影响。）

（4）检测长寿蛋白的批量降解：非特异

（5）MDC（Monodansylcadaverine，单丹磺酰尸胺）染色：包括自噬体，所有酸性液泡都被染色，故属于非特异性的。

（6）CellTrackerTM Green染色：主要用于双染色，但其能染所有的液泡，故也属于非特异性的。

自噬相关蛋白的定位 在研究自噬相关蛋白时，需对其进行定位。

由于自噬体与溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体关系密切，为了区别，常用到一些示踪蛋白在荧光显微镜下来共定位：

Lamp-2：溶酶体膜蛋白，可用于监测自噬体与溶酶体融合。

LysoTrackerTM 探针：有红或蓝色可选，显示所有酸性液泡。

pDsRed2-mito：载体，转染后表达一个融合蛋白（红色荧光蛋白+线粒体基质定位信号），可用来检测线粒体被自噬掉的程度（Mitophagy）。

MitoTraker探针：特异性显示活的线粒体，荧光在经过固定后还能保留。

Hsp60：定位与线粒体基质，细胞死亡时不会被释放。

Calreticulin（钙网织蛋白）：内质网腔

（注意：这些蛋白均为胞浆蛋白，爬片或胰酶消化的细胞在做免疫荧光前需先透膜（permeablize），可采用0.1%SDS处理。）

8.自噬研究常规思路

通常情况下，除了研究自噬现象本身，大家更多的是将自噬与各种生命活动或者疾病结合起来，把自噬作为这些方向的一个机制来研究。比如研究自噬如何参与肿瘤的发生发展、如何参与肿瘤的耐药性与复发转移、如何参与肿瘤免疫治疗的效果、如何参与炎症反应、如何参与氧化应激，如何参与自闭症、阿尔兹海默症的发生与治疗等，通常的研究模式：

（1）证明自噬参与了相关研究表型（电镜、LC3II/I-WB、LC3亚细胞定位、LC3荧光示踪监测自噬流等）

（2）证明自噬在表型中起到关键作用（通过自噬抑制剂、激动剂进行关联研究）找到表型与自噬桥梁分子（检测pI3K通路、Beclin-1、ATG家族各成员）

（3）在基因层面通过gain of/lost of function研究桥梁分子在自噬中的作用。

9.研究自噬的文献参考

[1]. Emerging Mechanisms in Initiating and Terminating Autophagy. Trends Biochem Sci. 2017 Jan;42(1):28-41.

[2]. Targeting autophagy in cancer. Nat Rev Cancer. 2017 Sep;17(9):528-542.

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[7]. Epigenetic Control of Autophagy: Nuclear Events Gain More Attention. Mol Cell.2017 Mar 2;65(5):781-785.

[8]. Pharmacological modulation of autophagy: therapeutic potential and persisting obstacles. Nat Rev Drug Discov.2017 Jul;16(7):487-511.

到底要阅读哪些文献？

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作为科研人员，阅读文献是必修课，但面对海量的文献，我们到底应该选择哪些文献确实是一个比较纠结的问题。

现在每天只SCI收录的文献数量就可以达到3000篇。

例如只Plos One一个杂志每天的论文数量都可以达到50篇，也就是说文献的数量增加幅度非常迅速，我们阅读的文献不仅包括新文献，也包括过去的文献，特别是经典的文献，那么在文献海洋面前，我们必须掌握和了解畅游在文献海洋中的基本游泳技巧，其中关于我们应该阅读那类文献的问题，我想谈点看法。

第一、课题相关文献

这是我们做科研的最重要信息来源，阅读这类文献必须看是少有异议的，由于和课题密切程度非常大的文献数量一般比较有限，对这类文献，应该报着研究的心态，要弄明白文献的来龙去脉，例如文献引用的参考文献都应该详细了解，文献使用的研究方法都应该熟悉，甚至文献的统计学方法都应该明白。

例如我自己，因为是作氢气生物学效应，我从2007年到现在，可以说所有相关文献全部阅读过，甚至全部都进行了分析和记录，并随时跟踪相关研究小组的进展，这样才能作到心中有数。

遇到新的文献可以马上判断其价值和意义，因为自己心里早就有一套文献的结构图，那些是已经解决的问题，那些是没有弄清楚的范围，那些是问题的关键，那些是单纯为发表论文而进行的修饰性研究和表达，基本上都心中有数。

这样也并不耗费太大精力，因为反复阅读可以明显提高阅读速度，有时候看看摘要就基本上掌握大部分信息，少量信息简单选择性看一下全文就可以。

第二、学科相关文献

我个人是从事潜水高气压医学教学和科研的，因此对潜水医学、高压氧临床等相关进展都比较关注，一般来讲这类文献主要是关注新进展。

这不仅是开展教学工作的必要，也是丰富和更新自己学科知识的重要方式，当然前提是要熟悉整个学科知识，不能在不了解全面知识的情况只追求新进展。

因此应该首先阅读一些本学科的专著，甚至是英文专著的基础上再选择性针对某些方向经常关注和了解，对某些比较重要的进展应及时进行评价。

由于是本学科方向，自己有比较全面和系统的认识，可在必要时争取发表一些评述性文章，公开自己的看法，以开展和国际同行的书面交流，这类文献阅读也可以变成一种非常好的学术交流模式。

第三、兴趣类文献

每个人都可能有除课题和学科以外信息爱好，这多属于兴趣爱好的情况，当然也不一定每个人都会有，这类文献往往包括自己过去的研究领域，参加会议和各类讨论中遇到的感兴趣的话题。

例如我过去曾经对核酸疫苗有过兴趣，曾经对MRI特别是功能成像有过兴趣，也曾经对神经发育有过兴趣，对热量限制、细胞自噬、细胞程序性坏死、低氧诱导因子等等相关文献有过兴趣，对这些文献都进行过追踪和了解。

兴趣文献也包括自己审阅别人基金和文章时，为了提高自己的判断力，临时阅读的一些文献。兴趣类文献可以不必要看过于详细，只需要对一些宏观上的进展有所了解，对一些新的趋势有所判断就可以。

由于范围比较广泛，这类文献可作为自己课题思路的借鉴，作为课题延伸文献库对待比较好，也可以找出一些上乘的文献进行欣赏性阅读。

第四、热点类文献

所以成为热点，总有其道理，这类文献可以关注从国际国内大型科技类网站和《自然》、《科学》、《细胞》、《神经元》等重要学术期刊，这些网站和期刊都会有一些热点文章的介绍，当然一般都是新的文献。

另外也可以跟踪一些大型科技奖励，例如每年的诺贝尔医学生理学奖，因为一旦获得诺贝尔奖，你往往非常容易获得相关研究背后的故事，而这些故事往往从一般文献中难以获得，这是一个学习和了解科研悟性，提高科学鉴赏能力的好机会。

例如2012年关于iPS的研究，你可以学习日本学者是如何从肿瘤细胞到干细胞再到细胞转化研究的历程，也可以了解过去几十年来这一领域的历史发展过程。

关于化学奖，你可以通过这次机会了解G蛋白的相关知识，了解这类分子的重要意义，了解早期科学家是怎么认识到这个分子，这个分子的那些重要科学问题在那个年代被认识和解决的，了解那些重要进展和突破是这些科学家获得大奖的原因。

这些关键进展往往是具有较大科学意义的研究。

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