PCR技术是一种体外酶促合成、扩增特定DNA片段的方法。下面是我整理的关于pcr技术论文，希望你能从中得到感悟!
技术的研究进展
摘要 PCR技术是一种体外酶促合成、扩增特定DNA片段的方法。因其高强的特异性和灵敏度以及检测速度快、准确性好等优点，已被广泛地应用于水产、微生物检测等许多领域。该文从PCR技术的原理及应用方面进行了综述，并对其发展做出了展望。
关键词 PCR技术;研究进展;应用
中图分类号 Q819 文献标识码 A 文章编号 1007-5739(2012)10-0047-02
PCR(polymerase chain reaction，PCR)即聚合酶链式反应，它是一种体外酶促合成，扩增特定DNA片段的方法。1985年，美国Karray等学者首创了PCR技术，并由美国Cetus公司开发研制[1]。随着科学技术的发展和突破，PCR技术已在多个领域得到广泛地应用，如微生物检测、兽医学、水产养殖等方面。由于该技术具有较强的灵敏度、准确度和特异性，又能快速进行检测，因而其应用领域也在不断延伸[2-3]。随着PCR技术的不断发展，在常规PCR技术的基础上又衍生出了许多技术，如多重PCR(mutiplex PCR)技术[4]、实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR，FQ-PCR)技术[5]、单分子PCR技术[6]。
1 PCR技术原理
PCR技术是根据待扩增的已知DNA片段序列、人工合成与该DNA 2条链末端互补的2段寡核苷酸引物，在体外将待检DNA序列(模板)在酶促作用下进行扩增。PCR的整个技术过程经若干个循环组成，一个循环包括连续的3个步骤：第1步是高温条件下的DNA模板变性，即模板DNA在93~94 ℃的条件下变性解链;第2步是退火，即人工合成的2个寡核苷酸引物与模板DNA链3’端经降温至55 ℃退火;第3步是延伸，即在4种dNTP底物同时存在的情况下，借助TaqDNA聚合酶的作用，引物链将沿着5’-3’方向延伸与模板互补的新链[7]。经过这个循环后，合成了新链，可将其作为DNA模板继续反应，由此循环进行。循环进程中，扩增产物的量以指数级方式增加，一般单一拷贝的基因循环25~30次，DNA可扩增l00万~200万倍[1]。PCR反应的步骤很简单，但是具体的操作是复杂的，如退火温度的确定、延伸时间的长短以及循环数等。因此，不同的反应体系应该确定适当的反应条件，以避免假阴性或假阳性等情况的产生。
2 PCR技术的分类
在传统PCR技术的基础上，根据人们的需要以及各个领域的应用要求，又衍生出很多种类的PCR技术。新技术在各领域广泛应用并逐渐改进，为进一步的研究提供了基础。
实时荧光定量PCR技术
1996年，学者经过研究，在传统PCR技术的基础上，首创了实时荧光定量PCR技术，新技术已经应用至医学领域、分子生物学和其他基础研究领域。实时荧光定量PCR技术基于传统技术的优势，还具有实时性、准确性、无污染，实现了自动化操作和多重反应，是PCR技术研究史上从定性到定量的飞跃[8]。
荧光定量PCR技术最大的特点是能将荧光基团加入到PCR反应体系中，借助于荧光信号，累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析[9]。实时监测这一特点是常规PCR技术所不具有的，因为其对扩增反应不能进行随时的检测。常规PCR技术的扩增终产物需要在凝胶电泳等条件下才能进行，无法对起始模板进行准确的定量，而荧光定量PCR技术的反应进程可以根据荧光信号的变化做出准确的判断[10-11]。一个PCR循环反应结束之后，定量PCR仪可以收集1个荧光强度信号，荧光信号强度的变化可以反映产物量的变化情况，这样就可以得到1条荧光扩增曲线[12]。荧光信号在指数扩增阶段，PCR产物荧光信号的对数值与起始模板量之间存在线性对应关系，然后进行定量分析[13]。
多重PCR技术
多重PCR(mutiplex PCR)技术是PCR技术的一种，为同一管中加入多对特异性引物，与PCR管内的多个模板反应，在一个PCR管中同时检测多个目标DNA分子。多重PCR技术可以扩增一个物种的一个片段，也可以同时扩增多个物种的不同片段[14]。
在同一反应体系中，多重PCR技术进行多个位点的特异性扩增时，引物间的配对、引物间的竞争性扩增等会对扩增效果产生重要影响。一方面，如果能选择适宜的反应体系和反应条件，可极大地提高多重PCR的扩增效果[15]。主要包括退火温度、退火及延伸时间、PCR缓冲液成分、dNTP的用量、引物及模板的量等。另一方面，DNA的抽提质量也影响多重PCR扩增效率，如DNA抽提不干净或降解都将影响PCR扩增效果[16]。
单分子PCR技术(SM-PCR)
单分子PCR技术是在传统PCR技术的基础上发展的，基本循环过程相同，但在反应条件、模板数量、DNA 聚合酶选择、引物设计方面具有不同点。该技术是以少量或单个DNA分子为模板进行的PCR[17]。
单分子PCR技术反应中，DNA 模板浓度极低，这就要求模板有较高的质量。因为这是试验成败的决定性因素。在设计引物时，应该严格控制GC的含量和Tm值，同时尽量避免引物间存在可配对序列。在反应混合物模板数极低的情况下，若引物之间存在少量配对序列，扩增时极易形成二聚体，使反应无法进行，得不到所需要的产物[18]。由于单分子PCR技术反应的变性温度(96~98 ℃)大多比常规PCR技术(94 ℃)略高，因而对DNA 聚合酶热稳定性的要求也更加严格，需要有较好的热稳定性，以防止温度过高而使其失活。其变性时间(5~15 s)、退火时间及延伸时间也短于常规PCR技术[17]。
3 PCR技术的应用
PCR技术在水产上的应用
基因表达是检测某个基因在不同发育期或不同组织中的表达量变化，或受到某种试验处理过程中的影响而出现表达量变化的情况。有学者应用real-time PCR技术研究碳水化合物含量对翘嘴红鲴糖代谢酶G6Pase、GK以及PEPCK表达量的影响[19-21]，研究结果可为翘嘴红鲴饲料配方中的最合适糖含量提供理论依据。孙淑娜等[22]研究叶酸拮抗剂对斑马鱼心脏发育相关基因BMP2b及HAS2表达的影响，表明叶酸拮抗剂对早期胚胎的心脏发育影响较大，可导致斑马鱼心脏发育延迟及心脏形态异常，并下调斑马鱼心脏发育相关基因BMP2b及HAS2的表达，这可能是叶酸生物学活性受抑后导致心脏发育异常的机制之一。Sawyer et al[23]以斑马鱼的未受精卵、胚胎、仔鱼和成鱼为研究材料，采用实时荧光定量PCR技术，检测了P450aromA和P450aromB在不同组织的表达量，表明在各组织中均有2种基因的表达，但表达量显著不同，呈现组织特异性。
PCR技术在微生物检测上的应用
1990年，Bej et al[24]在利用多重PCR的方法检测了Leg-ionella类菌种和大肠类细菌，其结果是通过点对点方法固定的多聚dT尾捕捉探针和生物素标记的扩增DNA进行杂交来检测的。张志东等检测口蹄疫病毒(FMDV)持续性感染的带毒动物，表明实时荧光定量PCR技术具有快速检测、准确、客观等优势，较优于传统的检测方法[25-26]。Metzger-Boddien et al[27]对PCR-ELISA的方法进行了评价，结果显示，样品中沙门氏菌的检出率可以达到98%。
4 展望
传统PCR技术以及衍生出来的新型PCR技术自面世以来，已被广泛应用到生命科学的各个领域。随着技术方法的不断改进与完善，荧光定量PCR技术将会逐渐完善并广泛应用。多重PCR技术在食品病原微生物、非致病微生物及环境微生物检测中具有重要作用;未来的研究主要集中在去除食品抑制因子干扰、改进样品前处理技术等方面，其次是整合应用多重PCR与其他技术，必将在未来食品微生物检测中有非常好的应用前景。
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1000-5277 福建师范大学学报(自然科学版) 1007-7146 激光生物学报 1671-167X 北京大学学报(医学版) 1000-6737 生物物理学报 1001-9626 生物数学学报 1000-3061 生物工程学报 1000-1336 生命的化学 1006-687X 应用与环境生物学报 1004-311X 生物技术 1008-9632 生物学杂志 1000-9035 分子科学学报 0001-6209 微生物学报 1672-5565 生物信息学 1009-606X 过程工程学报 1673-9108 环境工程学报 1002-6630 食品科学 1001-6325 基础医学与临床 1004-1389 西北农业学报 1674-568X 基因组学与应用生物学 1000-3282 生物化学与生物物理进展 1000-4025 西北植物学报 1000-5048 中国药科大学学报 1007-7847 生命科学研究 1007-7626 中国生物化学与分子生物学报 1001-3601 贵州农业科学 0253-2468 环境科学学报 1002-1302 江苏农业科学 1002-5464 生物技术通报 1000-1298 农业机械学报 2095-1108 植物生理学报 0513-4870 药学学报 1671-8135 中国生物工程杂志 1673-8640 检验医学 0251-0790 高等学校化学学报
昆虫知识，生命科学
有计算生物学，生物过程
李绍华出生年月：1957年9月28日 籍 贯：湖北沔阳 联系电话：62836026 Email: 专业技术职称：研究员 研究方向：果树生理及品质遗传研究 兼 职：中国园艺学会李杏分会副理事长 《果树科学》编委 《Journal of Integrative Plant Biology (植物学报) 》编委 《植物学通报》责任编辑 《落叶果树》编委个人简历： 1989年获法国Languedoc科技大学博士学位，1991年回国任北京农业大学副教授，1992年任北京农业大学果树系副主任，1994年晋升为北京农业大学教授，1995年为北京农业大学博士生指导导师，1996年5月至2003年1月任中国农业大学教务处处长(兼)。2003年入选中国科学院“百人计划”，任中国科学院植物研究所“果树生理与遗传创规律”新研究组首席研究员。主要从事果树水分生理及节水栽培的研究，同时也在果树花芽分化生理及调控，果树整形修剪及其微气候生态，果树营养、生长发育及其化控，以及果树生物技术等方面做了较多工作。10多年来，主持国家自然科学基金、中国科学院、农业部、教育部、国家攻关、及北京市等科学研究项目30余项，主持国家教育部新世纪教育教学改革工程项目教学研究项目及北京市教育教学研究项目10余项。1988年以来，发表论文140余篇，其中在英、法、德、美、荷兰、新西兰、瑞士、比利时和意大利等国家的国际学术刊物上发表论文35篇(其中SCI杂志22篇，EI杂志1篇，ISTP 4篇)。成果及获奖：1、"桃树优质、高产、高效益现代栽培技术" 联合国技术信息促进系统中国国家分部发明创新科技之星奖（1996年，第二完成人）2、入选教育部跨世纪人才计划并获该基金资助（1998年）3、"黄淮海缺水低平原区节水、高效、持久综合农业技术研究"农业部科学技术进步三等奖（1998年，第14完成人）4、"创建'两段式'培养模式和'三平台'课程体系，培养高素质的农业本科人才",国家教学成果一等奖（2001年，第二完成人）5、"园艺专业果树学骨干课程模块式组合教学体系及系列教材建设"北京市教学成果一等奖，（2001年，第一完成人）6、<<果树栽培学概论>>全国普通高等学校优秀教材二等奖（2002,第1完成人, 李绍华和罗国光系列教材总主编）7、<<果树生物学>>全国普通高等学校优秀教材二等奖（2002,第3完成人, 李绍华和罗国光系列教材总主编）8、宝钢教育基金优秀教师奖（2002年）9、入选中国科学院“百人计划” （2003年）并获择优支持（2004年）9、“‘京’字号系列早熟葡萄品种育种与推广”，北京市科技成果二等奖（2004，第1完成人） 目前承担主要项目1）定位灌溉条件下果树生长发育及果实品质形成的调控，国家自然科学基金，2004－20062）葡萄和桃的种质资源创新及其果实品质遗传规律的研究，2004－2006,中国科学院知识创新工程重要方向项目3）果树定位灌溉条件下的干旱信号传导与根系之间物质交流的研究，中国科学院院长基金特别支持项目，2004－20054)桃无公害生产关键技术引进及示范推广，农业部948重点项目，2003－2005 5)全面提升桃品质关键栽培技术的示范与推广，北京市农委，2004－20056)西洋梨优良品种引进,北京市农委, 2004－20057）杏优质稳产关键技术研究与示范，北京市重大农业技术攻关招标项目，2003－20068）有机果品栽培技术规程及示范与推广，北京市科委，2004－2006主要论文：1) Li T H, Li S H. (2005) Leaf response to water stress in micropropagated apple plants: non-structural carbohydrate composition and regulating role of metabolic enzymes. Tree Physiol,25: 495-5042）Wu B H, Quilot B, Génard M, Kervella J, Li S H. (2005) Seasonal changes of sugar and organic acid concentrations in cultivated and wild peaches, and their hybrids analyzed by Principal Component Analysis. Sci Hort, 103: ）Zhang L S, Clerc V L, Li S, Zhang D. (2005) Establishment of an effective set of simple sequence repeat markers for sunflower variety identification and diversity assessment. Can. J. 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编辑：是一种工作类别，也是一类职业身份。
指对作品等进行编写。从事此项工作的人士，中文被称为“编辑”或修改，编辑属于一种职业，其对应英文词汇为Editor。编辑工作的主要负责人为主编或总编辑（总编）。研究编辑基础理论、编辑活动规律及编辑实践管理的综合性学科，属于人文科学范畴。编辑工作是现代出版事业的中心环节。
责任编辑：至少有三大责任，其一是业务责任，亦即技术层面上的观点把握；其二是政治责任，亦即思想，层面上的观点把握；其三是经济责任，亦即利润层面上的创收指标。
除负责初审工作外，还要负责稿件的编辑加工整理、校对、标记确认、付印样的通读工作，使稿件的内容更完善，体例更严谨，材料更准确，语言文字更通达，逻辑更严密，消除一般技术性差错 ，防止出现原则性错误；并负责对编辑、设计、排版、校对、印刷等出版环节的质量进行监督。责任编辑工作完成后，协助执行编辑整理本期业务档案。责任编辑应对所负责处理的稿件承担直接责任。
编辑的分类包括两种，文字编辑(Copy Editor)和美术编辑(Art editor)。前者主要负责行文措辞、知识点描述、内容结构，后者则需要揣摩分析著作的选题、中心思想、学术真伪、理论价值，所以编辑具有专业偏向性，比如文学、教育学、哲学、生物学、计算机科学都有相关的编辑工作。
不同于文字编辑，作为一种职业岗位，编辑不仅需要读懂某一种类型的图书还要能够评审一类专业性内容。一本书、一份论文、一篇文章的出版或是发表与否，编辑有决定性作用;文字编辑只负责对选定内容进行细致化的整理和修改。
辑职业包括排版（者）、校对（者）、审稿（者）和出版制作（者）等，除电子出版物以外，还有印刷（者）。媒体出版物编辑的总负责人为总编辑（总编），次要负责人为副总编辑（副总编），属于一种头衔和职位，总编辑常由行政负责人兼任。
责任编辑负责网站频道信息内容的搜集、把关、规范、整合和编辑，并更新上线；管理和维护社区，完善网站功能，提升用户体验；收集、研究和处理用户的意见和反馈信息；组织策划社区的推广活动及相关业内文章撰写；协助完成频道管理与栏目的发展规划，促进网站知名度的提高；配合技术、市场等其他部门的工作；信息的加工，信息的采集；专业的编辑，以及网页的推广。
编辑包括责任编辑和执行编辑，编辑负责组稿、编稿、审稿等，责任编辑就是你编辑的文章你负责，有问题你承担。执行编辑就是期刊的某一期由你负责联系各个编辑开展编辑活动。
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半个月。核心类的，审稿应该较快，半个月，退稿肯定会通知你了，修改也会给你意见的。《生物技术通报》乃核心期刊，核心期刊对文章质量要求非常高，版面费应该不便宜。如果必须发核心，文章质量确实又非常不错，时间上不着急的话，可以投稿试，没有要求核心的话，建议可以安排普通期刊，或者申请专利，申请专利是十分受重视的，达到的效果有的单位是等同于核心的，操作起来却没有核心难度高。
不好中。
《生物技术通报》中华人民共和国农业部主管，是由中国农业科学院科技文献信息中心、中国农业科学院生物技术研究中心、中国农学会高新技术委员会联合主办的生物技术综合性报道刊物。以综述、论文、译文、简报、简讯、动态及文摘等多种形式报道国内外生物技术研究的最新成果和进展。
期刊简介：
内容主要有动植物 基因工程、细胞工程的基础研究及 生物技术在农业、医学、食品、环保方面的应用成果、新技术、新方法，以及有关的商品、产业化信息、政策、法规等。可供从事 生物技术研究的科技人员、高校师生、主管部门管理人员及企业有关人士的跟踪参考。
跨越世纪的1997-2007年，发表国际国内最早的转基因禽类 输卵管生物反应器（oviduct bioreactor）和 系统遗传学（以及遗传学发展三时期）概念、理论和原理的论文。
《 生物技术通报》系 中国农业科学院农业信息研究所与生物技术研究所及 中国农学会高新技术农业应用专业委员会共同主办的国家级综合性科技刊物。
2008年入选全国 中文核心期刊，2006年首批进入中国农业核心期刊。主要报道国内外农、牧、林、渔及医学、轻化等领域中 生物技术研究的新进展、新技术、新成果与发展趋势，内容包括 基因工程、 细胞工程、 酶工程、发酵工程、 蛋白质工程以及生物工程的应用、新的实验技术与方法等。
在2014年北大中文核心期刊目录未出版发行之前，还是以2011版为准。《生物技术通报》目前还在2011版北大中文核心期刊中，是国家级核心期刊。