可以上QQ搜索相关的QQ群~然后寻找帮助~~
收稿日期：2007-10-25基金项目：深圳市科技和信息局基金资助项目作者简介：王丹（1982-），女，辽宁本溪人，硕士研究生，从事植物生物技术研究。注：雷江丽为通讯作者。大花美人蕉茎尖组织培养技术研究王 丹1,2，雷江丽2，吴燕民3，吕 慧2，郁继华1(1.甘肃农业大学 农学院，甘肃 兰州 730070；2.深圳市园林科学研究所，广东 深圳 518003；3.中国农业科学院 生物技术研究所，北京 100081)摘 要：以大花美人蕉（Canna×generalis）根茎茎尖为外植体进行组织培养技术研究，筛选出芽诱导适宜的培养基为MS + 6-BA （单位下同）+ TDZ ；MS + 6-BA + TDZ + NAA 培养基能较好地诱导分化出丛生芽, 继代增殖培养中与MS + 6-BA + TDZ + NAA 培养基交替使用可减少畸形芽，增殖系数达；适宜的生根培养基为MS + 6-BA + NAA ，生根率达，且植株生长健壮，移栽易成活。关键词：大花美人蕉；茎尖；组织培养中图分类号： 文献标识码：A 文章编号：1009-7791(2008)01-0033-04Research on Shoot-tip Culture of Canna×generalisWANG Dan1,2, LEI Jiang-li2, WU Yan-min3, LÜ Hui2, YU Ji-hua1( of Agronomy, Gansu Agricultural University, Lanzhou 730070, Gansu China; Institute of LandscapeGardening, Shenzhen 518003, Guangdong China; Research Institute, Chinese Academy of AgriculturalSciences, Beijing 100081, China)Abstract: The paper mainly studied on tissue culture of Canna×generalis with the stem tips asexplants. The results showed that the bud inoculation medium was MS + 6-BA ; the best of clump shoot induction and differentiation medium was MS + 6-BA +TDZ + NAA ; using MS + 6-BA + TDZ + NAA asproliferation medium, an optimal proliferation rate was obtained. When the two kinds of mediumused alternatively, the effect was better. The optimum rooting medium was MS + 6-BA +NAA , the rate of rooting could reach , and cultured in this medium, the plant grewwell and easy to words: Canna×generalis; shoot-tip; tissue culture大花美人蕉(Canna×generalis)属美人蕉科(Cannaceae)美人蕉属(Canna)的园艺杂交种[1]，是多年生喜光宿根草本花卉，原产美洲热带和非洲等地。其枝叶茂盛、花朵艳丽、姿态优美、花期长，在深圳地区几乎全年开花，是配置大型花坛的优良品种。大花美人蕉不仅观赏价值高，而且能吸收硫、氯、氟、汞等有害物质，具有净化空气、保护环境的作用，因此，世界许多城市的园林绿化中都广泛应用。美人蕉传统的繁殖方式主要采用分切地下根茎的方法，繁殖速度慢、增殖效率低，而且连续营养繁殖造成病毒积累致使病毒病在各地相当普遍，严重影响其观赏价值。利用茎尖组织培养进行脱毒试管苗快繁，是目前大力繁殖与推广美人蕉的主要手段。关于美人蕉组织培养的研究报道较少[2,3]，本研究探索其组织培养高效的再生体系，以期为品种提纯复壮及遗传转化、性状改良奠定基础。2008,37(1): Plant Science第·34· 37 卷1 材料与方法 材料供试材料为目前城市绿化中普遍应用的大花美人蕉‘President’品种。 外植体选择与处理选择生长健壮、无病虫害的优良母株，挖取带芽胞的根茎，去除表面老皮并用肥皂水清洗。用75%乙醇棉擦拭，然后采用不同的消毒剂及处理时间（升汞10min、2%次氯酸钠10min、2%次氯酸钠20min、2%次氯酸钠 + 升汞5min、2%次氯酸钠 + 升汞10min），封闭式振摇灭菌。无菌水冲洗5 次，置于超净工作台上备用。接种前，剥去外部叶片，露出生长点，立即切取茎尖进行接种。 培养方法及培养条件试验于2006 年10 月在深圳市园林科学研究所组培室进行。诱导、增殖和生根培养基均选用MS为基本培养基，在不同培养阶段附加不同种类、不同浓度配比的植物生长调节剂（表2～表4），蔗糖3%，pH 。培养温度(28±2)℃，光照强度2 500 lx，光照周期为14h/d，相对湿度70%～80%。每处理接种30 瓶。定期观察试管苗生长与分化情况。2 结果与分析 不同消毒处理方式对外植体无菌化的影响因供试外植体取自美人蕉地下根茎，表面污染物较多，不易消毒，且不同植物及外植体的成熟度对消毒剂的反应不同，故本试验选用升汞和次氯酸钠进行灭菌效果比较，以筛选合适的消毒剂及消毒处理时间。由表1 可知，2%次氯酸钠20min 处理的无菌化效果较好，但茎尖褐化较严重，说明灭菌时间过长对去老皮后的幼嫩根茎影响较大。升汞10min 处理与2%次氯酸钠 + 升汞 10min处理，无菌化效果差异不大，但2%次氯酸钠 + 升汞 10min 处理有轻微药害。因此，后续实验选用升汞处理10min 进行外植体消毒。 不同生长调节剂配比对芽诱导的影响以MS 为基本培养基，附加不同浓度6-BA、NAA、2,4-D、KT、TDZ 等（表2），以筛选出较适宜美人蕉茎尖诱导分化的配方。因美人蕉根茎具有休眠特性，芽诱导分化较难。TDZ 具有很强的促进细胞分裂活性，～μmol/L 即可有效促进分化[4]，因此，本实验对TDZ 的诱导效果进行初步探索。试验表明，在不添加任何生长调节剂的MS 基本培养基（1 号）上，茎尖接种10d 后开始生长，叶片展开后，生长停止；15d 后转接到新的MS 培养基上无明显生长，随后叶片逐渐变黄、萎蔫，说明基本培养基中添加生长调节剂是美人蕉离体培养的必要条件。在仅添加6-BA 的2、3、4 号培养基中，高浓度的2 号培养基分化率为，明显好于3、4号培养基，说明美人蕉启动芽诱导分化需要高浓度的细胞分裂素（表2）。11～16 号培养基添加物为不同生长调节剂与TDZ 组合（表2）。仅添加TDZ 的培养基分化率为0，而多种生长调节剂配合使用分化效果更好[5]。其中15 号培养基的侧芽分化率最高，达，且每个茎尖可增殖2～3 个侧芽，但个别茎尖经多次转接后有畸形芽；与2 号培养基相比，分化率明显提高，说明添加低浓度TDZ 可促进芽诱导分化（表2）（图版-a）。5、6、7 号培养基为生根培养基，探讨NAA 对美人蕉茎尖生长和生根的影响。试验结果初步说明美人蕉在6-BA/NAA 小于2/ 时生根率可达50%以上（表2）。8、9、10 号培养基，探讨美人蕉脱分化，诱导愈伤组织，但结果均不理想。因此，建立高效的美表1 不同消毒剂及处理时间对外植体无菌化的影响处 理 接种数污染数污染率(%) 药害情况升汞10min 30 5 基本无药害2%次氯酸钠10min 30 12 无药害2%次氯酸钠20min 30 4 20%有轻微药害2%次氯酸钠+升汞5min 30 10 3%有轻微药害2%次氯酸钠+升汞10min 30 5 7%有药害第1 期 王丹,等：大花美人蕉茎尖组织培养技术研究 ·35·人蕉遗传转化再生体系还需进一步探索愈伤组织诱导途径。 芽继代增殖为了探讨优化的芽继代增殖培养基配方，按表3 设计6-BA、NAA、TDZ 的正交实验，以15 号培养基上分化出的丛生芽为接种材料，进行继代增殖培养（图版-b）。由表3 可见，除17、18 号培养基外，低浓度TDZ（）的分化促进作用较高浓度（）的效果好，说明高活性的TDZ 浓度过高反而抑制分化。当 时, NAA 促分化作用显著优于。在TDZ、NAA 浓度相同的情况下，随着6-BA 浓度的升高，分化率提高。但随着继代次数的增多，含高浓度6-BA的27 号培养基分化率略有下降，甚至有个别畸形芽产生，说明高浓度细胞分裂素对短期的分化有促进作用[9]，但继代数次后，芽已经萌动，自身具有分化能力，需适当降低6-BA 浓度进行壮苗，以避免畸形芽产生。因此，在增殖过程中交替使用分化增殖系数较高的19 号培养基和27 号培养基，既可保证较高的芽分化率，又可使继代苗生长健壮，减少畸形芽。 生根诱导增殖芽3～5cm 长时，转接到生根培养基上培养约10d 后，可见到根生成（图版-c）。接种20d 后统计生根结果（表4）。从表4可见，所用培养基上都有根生成，说明美人蕉生根较容易；结合生根率和生长势，我们认为MS + 6-BA + NAA 培养基较适宜美人蕉生根。表2 不同植物生长调节剂组合的比较植物生长调节剂(mg/L) 编号6-BA NAA 2,4-D KT TDZ分化率(%) 生根率(%) 备注1 0 0 0 0 02 9 0 0 0 0 参考[2]3 5 0 0 0 0 参考[3]4 3 0 0 0 0 2 1 0 0 0 2 0 0 0 2 0 0 0 08 0 0 4 0 09 0 0 2 1 0 参考[6]10 0 0 2 0 参考[7]11 0 0 0 0 012 0 0 0 参考[8]13 0 0 0 0 0 1 0 8 0 0 0 5 0 0 表3 不同生长调节剂配比对芽继代繁殖的影响生长调节剂(mg/L) 编号6-BA NAA TDZ接种数分化率(%)增值系数 生长势17 30 ++18 30 ++19 30 ++20 30 ++21 30 ++22 30 ++23 30 ++24 30 +25 30 ++26 30 +27 30 ++28 30 +注：++ 表示生长势强；+表示生长势弱。同列中不同字母表示差异显著(P＜＝，表4 同。表4 不同的生长调节剂配比对组培苗生根的影响生长调节剂(mg/L) 编号6-BA NAA接种数生根苗数生根率(%)植株生长势29 0 30 19 +30 0 30 21 ++31 30 20 +++32 30 16 ++注：+++ 表示生长势强；++表示生长势中等；+表示生长势弱。第·36· 37 卷3 结 论美人蕉根茎生长在土壤中，无菌化操作较困难。灭菌试验表明，升汞震荡灭菌10min 效果较好，采回的外植体应尽快处理接种，放置时间过长伤口处易染菌，导致接种后褐化较严重。MS + 6-BA + ZDT + NAA 培养基能较好地诱导分化丛生芽，MS + 6-BA + TDZ NAA 为较好的增殖培养基，在增殖培养过程中这两种配方交替使用效果更好；短时间使用高浓度生长调节剂对增殖有促进作用，但长时间使用高浓度生长调节剂会使组培苗质量下降。在试验中还发现，转接次数多的茎尖较转接次数少的分化率大，建议在接种后的10～20d 内及时转接。选用MS + 6-BA + NAA 为生根培养基，生根率较高，根系粗壮、根毛密集，植株生长健壮（图版-d），且移栽成活率较高。参考文献:[1] Segeren W, et al. The genus Canna in Northern South America[J]. Acta Bot Neerl., 1971,20(6): 663-680.[2] 刘文萍,等. 美人蕉茎尖组织培养及快繁技术[J]. 北方园艺, 2001(6): 32.[3] 丁爱萍,等. 美人蕉组织培养及快速繁殖技术[J]. 园林科技, 2006(1): 11-12.[4] Singh N D, et al. The effect of TDZ on organogenesis and somatic embryogenesis in pigeonpea (Cajanus cajan L. Millsp)[J].Plant Science, 2003,164(3): 341-347.[5] 王关林,等. 高活性细胞激动素TDZ 在植物组织培养中的应用[J]. 植物学通报, 1997,14(3): 47-53.[6] 宣朴,等. 生姜茎尖组培快繁技术研究[J]. 西南农业学报, 2004,17(4): 484-486.[7] Kromer K, et al. In vitro cultures of meristem tips of Canna indica L.[J]. Acta Horticulturace, 1985,167: 279-286.[8] Vendrame W A, et al. In vitro propagation and plantlet regeneration from Doritaenopsis Purple Gem 'Ching Hua' flowerexplants[J]. HortScience, 2007,42(5): 1 256-1 258.[9] 刘敏. 花卉组织培养与工厂化生产[M]. 北京: 地质出版社, 2002: 101-102.
体细胞克隆变异育种是将体细胞核取出导入另一个去核的卵细胞中从而培养出的后代，变异应该是因为卵细胞的细胞质中的遗传物质与原体细胞中的不同从而造成后代的性状发生了变异的育种方法。外植体选饱满未萌发侧芽应该是未萌发的侧芽的未分化程度高，用这样的芽培养更易形成愈伤组织。中部侧芽繁殖速率快应该跟激素的分泌量不同有关吧（猜测）。越冬的芽经过越冬成活率高且发育时间短应该类似种子层积的方法打破了芽休眠，调整了植物激素使其更易生长（推测）。激素对组培植物的影响无可替代，但是不同植物对激素种类和浓度要求不同，一般NAA要求的浓度不高，细胞分裂素中6-BA可能对月季组培无影响。NAA可以促进细胞增殖，是组培常用的生长素。生根阶段加活性炭是因为活性炭可以给培养物造成一种向地性生长（地面黑色的嘛），从而诱导生根，另外活性炭还有调节营养物质和激素浓度的作用。
诱导培养基：MA+糖3%+琼脂增值培养基：MS+BA1-2+(糖和琼脂同上)生根：1/2MS+(糖和琼脂同上)
月季的哪部分做外植体？月季的基因型？想获得什么，愈伤组织还是芽？先搞清楚这些才好选择激素，诱芽一般才采用细胞分裂素，愈伤组织多用2,4-4或NAA，根据不同的基因型可以调配激素的比例，可在知网中查找，相关文献很多！参考--愈伤组织：MS﹢ mg/L﹢ mg/L，MS+6-BA mg/L+NAA mg/L+GA3 mg/L 培养基配方为月季茎段诱导最佳培养基
他----石明松，仙桃市农业技术推广中心副主任，助理农艺师， 中国水稻学会会员，国家级中青年专家，国家“五·一”劳动奖章获得者；省、地、市劳动模范，优秀共产党员；“湖北光周期敏感核不育水稻”的发现者和研究者。 一九八五年十月，金秋时节，“光敏感核不育水稻”鉴定会在仙桃市召开。石明松，这个黑黑的高大汉子，走上了讲台，他侃侃而谈，细密的汗珠从他过早秃了顶的头上沁了出来…… 他的报告受到了与会的三十多位专家、学者、领导的高度评价，十位来自省内外的遗传学权威和水稻专家，在“湖北光周期敏感核不育水稻”的鉴定书上签了字。 鉴定书指出：“光周期敏感核不育水稻既便于配制杂交组合，以利用杂种优势；也可用于选育常规品种，从而有可能加速选育出高产、优质、多抗的新组合和新品种。这个项目的进一步研究，还将丰富水稻遗传育种、生理生化、光周期理论等方面的内容，是继我国水稻矮化育种，杂交水稻成功后的第三次重大发现。目前，国外尚未见报导，在国内具有先进水平。” 《文汇报》等十多家报刊、电台和电视台，相继报导了这一喜讯。 特地从北京赶来湖北仙桃参加“光周期敏感核不育水稻”成果鉴定会的农牧渔业部副部长朱荣，代表农牧渔业部向石明松表示祝贺。 此时的石明松，握着朱副部长的手，热泪盈眶，那艰难跋涉的一幕幕场景在脑海里闪过…… （一） 一九五九年，广东的黄耀祥成功地培育出矮杆系列水稻；一九七三年，湖南的袁隆平，利用自然不育株的特性，培育出籼型杂交水稻。但是，怎样利用不育株来改良粳型稻种，在国内外还是空白。虽然这是摆在专家面前的一个难题，而石明松----一个仅有中专学历的农业技术员却紧紧盯上了它。 不育株，这个水稻家族中的“怪胎”，是自然变异的产物，数量极少，多少年，多少人都难以发现一株。 从一九七一年起，石明松就开始以最密的经纬度在沙湖原种场的两千多块地，四千多亩田中仔细寻觅。 他在稻田里跋涉、寻觅。在几千亩田寻找一棵不育株，犹如大海捞针！一天、两天、三天……一个星期过去了，仍然没有结果。 他在稻田里跋涉、寻觅。四千亩田的路径有多长？仿佛一座珠穆朗玛峰。然而，他不感到疲倦，仿佛故乡的浪子寻找归家的路，处处是那样熟悉，处处是那样陌生。 一九七三年的秋天姗姗来迟，石明松又在一大片“农垦58”晚粳田里开始了“搜索”。一株水稻引起了他的注意，他走上前用手一摸，那上面稀稀疏疏地结了几颗种子，大部分没结实。这是不是不育株呢？石明松躬下腰，仔细地进行着鉴别：杆高，叶片大，谷粒干瘪瘦小，呈乳白色----典型的雄性不育株。石明松激动得仿佛父亲见到了失散的孩子，用手上下抚摸着，口里不住地唠叨：“不育株啊！不育株，我石明松找你找得好苦啊！” 这一年，他一共找到了三棵不育株，三株谷穗上才长了三十几颗种子。 这是比生命还珍贵的种子啊！他不知放哪里才好。放到柜子里，怕成了鼠爷的美餐；放到瓦罐里，担心孩子打翻；放到衣服口袋里，又怕洗衣时搓坏……他想来想去，只好用一根铁丝将种子吊在屋梁上，谁知他晚上一看，老鼠竟然顺着铁丝走了下来……老石只好把种子藏进枕套里，让那绿色的小生命，伴着他进入绿色之梦。 杨柳绽出了嫩绿的芽儿，浸种的季节到了。没有恒温箱，他又怕种子直播后被老鼠吃掉，于是，他做了三个小纱布袋子，装上三十多颗种子，湿水后，放在自己贴身的衬衣口袋里，人体成了恒温器。种子播下去了！播下了老石的希望！有人作过试验，一粒种子的力是发芽力自重的一千倍，这种潜在的顽强的生命力，多像石明松的性格。 生物的自然选择近于残酷，那三十多粒种子，并非粒粒珠玑，只有一株保持了它的不育性。 ----探索者的第一步，好艰难。 石明松穿行在三百多个小区间，记下了上万个数据，然而，五个春秋过去了，形成不育的奥秘仍像一个幽灵，飘忽不定…… 没有谁交给他这项科研项目，路是他自己选的；也没有法定的科研时间，他挤出了带着露水的早晨，挤出了闷热的中午，挤出了挂着星星的夜晚，一有空，他就蹲在田里，入迷地工作起来…… 一天深夜，电闪雷鸣，暴雨如注，只几个小时，平地积水两尺多深。天刚泛亮，石明松顾不得搬家具，抓起一个脚盆，就冲进了雨帘中----他惦记着他的不育株。秧苗才栽下去半个月呀！万一被大水带走，几年的心血就全毁了！等他赶到田边时，只见白茫茫的水一望无边。石明松差一点跌坐在水里……突然，他看见远处的水面上露出一截系着蓝布条的竹竿，那是他做的标记，那是他的试验田。他欣喜若狂地扑进水田里，在水底用手摸……秧苗还在！秧苗还在！石明松把一蔸蔸秧苗小心地拔起来，放在脚盆里。水退了，秧苗又顺顺当当地“回了娘家”，可石明松却大烧大冷了好几天，嘴唇上起了一圈圈水泡泡……经过几年的试验，探索，失败，再失败！再探索！石明松终于打开了进入绿色王国的第一道城门。经过多次测交试验，他捕捉到了产生不育遗传学的原因，是晚粳自然不育株的自身突变。 这种自身突变是受什么控制的呢？是气温？肥料？还是光照？又是三个春秋，一千多个日夜，他先后六次往返于仙桃和海南岛，做了一百多项次试验…… 经过试验，石明松排除了气温，肥料等因素对形成不育自身突变的影响，他把注意力紧紧盯在了光照上。 他火急火燎地和同伴们赶到了光照充足的海南岛。南国的育种生活十分艰苦，每年夏秋，温度常在35-40℃，人们喘气都吃力，石明松和他的同伴们每隔五天插一次秧，以验证光照对形成不育自身突变的影响……为了获得满意的材料，就是蚂蝗附在腿上吮血，他们也全然不顾。海南岛的蚊子也是凌厉可怕的。当地流传着一首歌谣：“三个蚂蝗当裤带，百个蚊子炒碗菜。”老石浑身上下被蚂蝗和蚊子咬烂了，夜里躺在床上奇痒难熬。由于过度劳累，又缺营养，他好几次晕倒在田边。同伴们把他抬到树阴下歇息，他坐一坐，喝口水，又开始了工作…… 回到原种场，为了方便观察，老石只身一人搬到了试验田边的一间牛棚里居住。肚子饿了，就到村里去吃“碰饭”；身上脏了，就在水沟里打个滚。他的时间观念极其淡薄又极其严格，常常因连续工作而误餐，而失眠，但为了实验和积累数据，又是争分夺秒，夜以继日…… 石明松，这个小小农场的技术员之所以成了闯入绿色王国的骄子，是因为----他有百折不挠的探索精神。 （二） 石明松不仅是个百折不挠的探索者，也是一个舍得一切的忘我人。 在石明松的寝室里，挂着个条幅，那是他从农校毕业时老师的赠言，多年来，他把赠言当成了自己的座右铭：“学农技的，就要在农业上干一番事业。” 为了“干一番事业”，毕业那年，石明松放弃了在荆州农展馆的舒适工作，自己挑着行李，徒步来到了联合垸农场，当了农业技术员。 为了“干一番事业”，石明松成了个忘家、忘我的人。 有一天，他在家里整理一份实验材料，妻子临出工前，把三岁的孩子交给他看管。中午妻子回家时，他才记起孩子。两人急急忙忙地开始寻找，房前，没有；房后，没有；邻居家，也没有……这下两口子着急了。突然，禾场上的草堆边传来孩子的哭声，他们循声找去，只见两头大水牛正在拼命厮打，三岁的孩子就在一头牯牛的脚边。妻子一见，瘫软在禾场上，石明松也束手无策了。多亏一位健壮的小伙，敏捷地救出了小孩……妻子因此病倒了，卧病不起。他惦记着他的试验，又怕上次的险情重演，于是他含着泪，把孩子妻子反锁在家里，向田野走去 …… 粉碎“四人帮”后的第三年，他在沙湖原种场选育了一系列矮杆材料，进行杂转新不育系的研究，但是，进展缓慢。在这需要勇气和精力克服科研上的高原现象时，他的肝病又犯了，不知在什么时候，血吸虫钻进了他的体内，悄悄地破坏着他的肝脏。石明松脸色蜡黄，头晕乏力，饭咽不下，茶水无味……妻子劝他住院治疗，他摇摇头，拖着沉重的身体，又走向那藏着钉螺的田里。 农技站向场党委反映了石明松的情况，场党委立即作出了三个决定：石明松立即住院治疗；每月补助石家粮食三十斤；配一名有实践经验的技术员，接着石明松的试验干。 石明松躺在病床上，想到党组织的关怀，哪能安心治病。在病房里，他一方面整理试验数据，一方面温习过去已学过的《生物遗传学》、《生物统计学》、《遗传育种》、《植物生理》、《作物栽培》，还潜心研读了《遗传学》、《水稻裁培学》、《水稻裁培生理》等书籍，为广泛进行杂交转育的应用研究作了理论上的准备。 凭着这种“钻、挤”精神，几年中，石明松在一盏小小的煤油灯下，系统地学完了大学的遗传育种学、植物生理学、作物栽培学、生物统计学等课程，系统地钻研了几十种国内外水稻专著和杂志，写下了三百多万字的读书笔记。 在闯入绿色王国的道路上，几乎处处挂着“红灯”。 没有科研条件，自己创造；没有实验用的去雄夹，自己做；没有杂交袋，用旧信封代替；没有遮光室，用煤油桶遮光；煤油桶坏了漏光，就用泥巴糊起来再用； 没有种子储藏室，全家五口人挤到十平方米的小房里，腾出一间来装种子…… 十月，阴雨连绵的十月，石明松望着从大田里选回来的一批单株种子犯难，要是再下几天雨，种子无法晒干，要不了几天，就要全部霉烂……要是有个烘烤箱该多好！他想到了用锅“温”……这是细活，火大了，要“温”熟；火小了，“温”不干……他叫醒了熟睡的妻子…… “你发烧，能行吗？”“不要紧！我不识字，只能帮你这点小忙。”炉火映红了石明松和他妻子的脸，这对出生在江苏如皋的夫妻，边“温”种子，边讲起故乡梁红玉在金山上为丈夫韩世宗擂鼓助威的故事。石明松动情了，激动地对妻子说：“你就是为我助威的‘梁红玉’！” 没有科研经费，从自己家庭收入里挤；他挤掉零用钱，生活过得十分节俭，却舍得花钱买试验用品。 有一天，不懂事的孩子指着囤在家里的谷种说：“爸爸，这么多谷，为什么不拿去换钱？”“那是谷种，谷种，爸爸的性命根子，不能卖！”“爸爸坏！爸爸坏！爸爸只想种子，不管儿子！” 是呀！在石明松的心里，种子比儿子贵重。 没有助手，动员全家兵上。也因此，他家里得了个“科研之家”的美称。试验面积扩大以后，石明松一个人忙不过来，就把体弱多病的妻子和三个孩子都带下田。老大、老二搞人工授粉；六七岁的小儿子扛着竹竿，跑来跑去赶麻雀，妻子负责晒种选种。 石明松的大儿子新华，八一年高中毕业后没有考取大学，儿子想复读后再跃“龙门”。此时，石明松对“光周期敏感核不育水稻”的研究已进入紧张阶段，他动员儿子放弃复读后考大学的机会，当了他的助手。儿子理解父亲，他在试验田边搭了个小窝棚，肩负起帮助父亲做观察记录的工作…… 想到这一切，石明松感到有些对不住妻子和孩子。在妻子面前，他是个不称职的丈夫；在孩子面前，他是个不合格的父亲；而在祖国母亲面前，他是个无愧的儿子。 石明松，这个硬汉子有能力忍受跋涉中的艰难困苦，进入忘我的境界，同样，他也用百倍的耐力承受着来自各方面的冷嘲热讽。一九七八年，当他向有关部门申报“晚粳两用系”的科研项目时，被以“书上没见过”的理由而拒绝。周围也有人说他“不务正业”，“想成名成家”，是“石专”。评劳模，定职称，这些都与他无缘。这当然不能怪别人！知识分子的头上都戴着“臭老九”的帽子，谁还敢问津他们科研的事。老石顾不了这些，他只有一个信念，“我的事业和生命维系在核不育水稻上，舍此无它。” 正当石明松向峰顶攀登的时候，是党组织向他伸出了温暖的手。这温暖的手，拉着他，冲向峰顶。一九八○年明媚的春天，他的科研课题得到了上级主管部门的重视和支持，省农牧渔业厅送来了三千元的科研费、一架海鸥牌相机和一个电子计算器。望着党组织送来的科研费和科研器材，石明松，这个忍受了千辛万苦的硬汉子，第一次流下了激动的泪……接着，市农牧局、地区科委、省科委也相继派来了“援兵”……不久，又成立了有湖北农科院、武汉大学、华中农学院等单位参加的协作组。协作组成了石松明向顶峰攀登的“拐杖”…… 是啊！没有党的好政策，没有党组织的鼓励和支持，我石明松浑身是铁也打不成几颗铆钉！ 石明松，这个仅有中专文凭的农技员，之所以能够突破国家级科研项目，是因为 ----他有舍得一切的忘我精神。 凭着百折不挠的探索精神和舍得一切的忘我精神，石明松在积累了20多万字试验材料的基础上，写出了《对光照长度敏感的隐性雄性不育水稻的发现与初步研究》等多篇论文，轰动了农学界，引起了各级党组织和政府的重视。 凭着百折不挠的探索精神和舍得一切的忘我精神，石明松在协作组的帮助和支持下，一连攻克了“光周期敏感核不育水稻”的四大难关。石明松终于闯入了绿色王国的宫殿…… 从开始寻找晚粳不育株起，十三年过去了。十三年，石明松在探索“光周期敏感核不育水稻”奥秘的征途上，走过了漫长而又艰难的路，留下了一串串坚实的脚印。这脚印，记载着他那辛勤的劳动和无私的奉献；这脚印，呈现出一个知识分子对党的一片赤诚。 （） （1988年2月10日，收到刊有此文的《党员生活》杂志，惊闻50岁的石明松同志于当日不幸遇难。我和本文的另一作者秦明星同志，献花圈以寄哀思，焚杂志以示痛惜。）回答者：zhou662181 - 试用期 一级 5-18 04:06评价已经被关闭 目前有 0 个人评价 好50% （0） 不好50% （0） 其他回答 共 1 条1、 整理一块不会长期潮湿，排水良好的陆地。为了日后灌溉方便，最好也要接近水源或有水管可以到达。 2、 选择适合当时天气的蔬菜种类，例如：夏天炎热天气中，杏菜及空心菜很适合。 3、 注意所选蔬菜的成长日期、收割时间是否符合需求。 4、 工具：可以挖土或翻土的锄头或铲子；可以拨土的耙子。 种子或苗种 1、 通常在专业的种子行购买种子或苗种会较便宜。 2、 如果是在园艺店或卖场所购买的种子，其包装纸上都会有种植时间的指导。 注意：上头的指示未必适合您的种植区的气候！有些包装甚至是从日本进口的其所指之种植时间当然不适用於本地。 播种 1、 先将土翻好，让土晒晒太阳。 2、 撒下种子前将翻好的土整平，并将太大的土块敲碎，使其土块直径约小於5公分，但也不要太细。 整好的土不要再踩在上头，以保持土壤的疏松、透气。 3、 将种子撒在土让上头，不要太密，以免妨碍日后成长。 4、 撒好种子后，用耙子轻轻的将土拨动，让种子可以被土轻轻的覆盖，也可防止麻雀来啄食种子。 5、 浇水 栽种 1、 有些种类的蔬菜(例如：西洋莴苣、黄秋葵等)必须间隔很大，因此在撒下种子后，幼苗长高至约10公分时，必须移植到较宽阔的土地上。 2、 也有些种类的蔬菜很难撒种发芽，可以直接购买苗栽回来栽种，例如茄子。 3、 依照播种时的整土方法，将土让整理好，有些种类的蔬菜则必须先将土整理成垄起或沟状。 4、 种植时不要太深，以可以覆盖其根部为原则。 5、 浇水 灌溉 1、 可用洒水的方式，但不要用很强的水柱冲刷土壤或植株，可接上莲蓬头状的洒水器。 此法可以让蔬菜的叶子同时洗去尘垢，也较节省水，但较不持久，所以要比淹没法次数多。 2、 也可用淹没的方式，引水将所有土壤淹没后，并立即让水退去。其目的是要让所有土壤充分潮湿。 一般种植较多时可用此法，以确保所有土壤都能同时浇湿。 3、 多久灌溉一次？要视天气与土质而定。 在炎热的天气中，若是洒水的方式可以2-3天洒水一次；淹没的方式则5-7天。冬天则分别为5-6天及7-10天。 施肥 1、 可以施用化学肥及有机肥。 2、 施用化学肥较便宜，效果短，迅速见效，但容易因为施用过量而造成植株受伤。施用时尤其不能让肥料黏附在叶面上，否则极容易造成叶面受伤。 3、 施用有机肥效果长，也较不会造成植株受伤。 可以在种植前翻土时，将有机肥料混在土壤中。 4、 也可利用自制的堆肥混入土壤中，既经济且可以改善土质。 除草 1、 在蔬菜园里很容易滋生杂草，要将杂草拔除，才不会和蔬菜夺取养分 2、 拔除杂草时，要注意有些杂草已经长出种子且已成熟，尽可能不要让这些种子又掉落在菜园中，而且也不要把这些有种子的杂草拿来制作堆肥。 病虫害 1、 种植时要慎选蔬菜种类及时机才能减少喷药。 2、 9、10月种鹅菜、格林、芥菜天气因素非常良好，不需喷药。 3、 12-2月牙虫、毛毛虫多，尤其是格林、白菜、芥菜、青江菜、包心菜等 4、 有些蔬菜天生就不容易遭受虫害，像鹅菜、莴苣、空心菜等有白色乳汁的菜类。 5、 若有足够时间，而且种植数量不大，可以用手将毛毛虫抓起来，通常在清晨很容易就可以看到毛毛虫正努力地啃食蔬菜。 6、 若非得已一定要用农药，最好到农药行问清楚用量及使用方法，并注意喷药时的措施及喷药后的安全期间。 7、 并非每一种病虫害都是毛毛虫所引起，有些是病菌所引起，若有这类的情形，可以摘取受虫害的叶子到专业的农药行询问(有些农会有附设农药行)，并要将拔除的有病植株隔离，不要用来堆肥。 sasas 收割 1、 一般蔬菜收割时是用刀子从根和叶之间切除，不能离根太远，会造成叶子脱落，也不要保留太多根部，这样下锅前就不需再切一次。 2、 收割之后要将土留在土里的根部拔除，并将土壤翻松，让太阳照射几日，有利於下一次播种。 3、 有些蔬菜可以收割多次，例如：番薯叶、龙须菜、黑迪仔、九层塔，可别一次收割之后就将它连根拔a参考资料：asasa
可以上QQ搜索相关的QQ群~然后寻找帮助~~
植物生理学通讯，园艺学报、中国蔬菜都可以，植物生理学通讯可能快一点
组培方面的一般投植物生理学通报，属中文核心期刊，不过是二级，基本上有创新点就可以接受。其它杂志好像组培方面的不多，而且组培文章发一级比较难。
论文的参考文献写法如下：
一、[序号]期刊作者。题名[J]。刊名。出版年，卷：起止页码。
二、[序号]专著作者。书名[M]。版次。出版地：出版社，出版年∶起止页码。
三、[序号]论文集作者。题名〔C〕。编者。论文集名。出版地∶出版社，出版年∶起止页码。
论文的参考文献注意事项：
1、参考文献要以序号的形式出现在正文中和文末，且序号要保持一致。序号以在文中出现的前后为序。
2、如果某文献在文中数次被参考，则几处序号要保持相同，只是页码有变化。在文末只列出该参考文献一次即可，不必多次罗列。
3、每一参考文献的所有要素必须齐全，不可残缺，具体包括：主要责任者；文献题名；文献类型及截体类型标识（如专著M、论文集C、报纸文章N、期刊文章J、学位论文D、报告R、专利P等）。
参考文献作用：
1、研究基础
参考文献可以反映出论文的真实性和研究依据，也反映出改论文的起点。我们论文中的研究都是在过去的基础上进行的，这也表明了自己论文中的研究是有价值水平和依据的。
2、研究区别
标注参考文献也是为了把前人的成果区分开来。这能表明论文的研究成果是自己写的，虽然引用了前人的观点、数据或其他资料。 但是标注出参考文献不仅能体现出自己的研究能力，也能体现自己的创新和价值。
以上内容参考：百度百科--参考文献
1、学位论文
[序号]主要责任者.文献题名[D].出版地:出版单位,出版年:起止页码(可选).
例如：[4]赵天书.诺西肽分阶段补料分批发酵过程优化研究[D].沈阳:东北大学,2013.
2、专著、论文集、报告
[序号]主要责任者.文献题名[文献类型标识].出版地:出版者,出版年:起止页码(可选).
例如：[1]刘国钧,陈绍业.图书馆目录[M].北京:高等教育出版社,1957:15-18.
3、论文集中的析出文献
[序号]析出文献主要责任者.析出文献题名[A].原文献主要责任者(可选)原文献题名[C].出版地:出版者,出版年:起止页码.
例如：[7]钟文发.非线性规划在可燃毒物配置中的应用[A].赵炜.运筹学的理论与应用——中国运筹学会第五届大会论文集[C].西安:西安电子科技大学出版社,1996:468.
扩展资料：
参考文献类型及文献类型，根据GB3469-83《文献类型与文献载体代码》规定，以单字母方式标识：
1、专著M ； 报纸N ；期刊J ；专利文献P；汇编G ；古籍O；技术标准S ；
2、学位论文D ；科技报告R；参考工具K ；检索工具W；档案B ；录音带A ；
3、图表Q；唱片L；产品样本X；录相带V；会议录C；中译文T；
4、乐谱I； 电影片Y；手稿H；微缩胶卷U ；幻灯片Z；微缩平片F；其他E。
参考文献类型：专著[M]，会议论文集[C]，报纸文章[N]，期刊文章[J]，学位论文[D]，报告[R]，标准[S]，专利[P]，论文集中的析出文献[A]，杂志[G]。
参考资料来源：百度百科——参考文献标准格式
直接百度这么方面的教程- -...一般售书的都有详细作品资料...比如这个网站就有很多书..类似淘宝上面也有...详细需要什么书子去找下吧...
[1] 胡存生等 《局域网—组网技术与维护管理》北京：电子工业出版社，[2] 谢希仁 《计算机网络》北京：电子工业出版社， 第五版 [3] 黄燕 《计算机网络教程》北京：人民邮电出版社 [4] 刘小伟 《电脑局域网全面上手》 北京：海洋出版社 [5] 黄传河等 《计算机网络应用设计》 武汉：武汉大学出版社 [6] 杜朝晖 《局域网与组网实训教程》 北京：北京邮电大学出版社
计算机论文常用参考文献
在平平淡淡的日常中，大家都有写论文的经历，对论文很是熟悉吧，论文一般由题名、作者、摘要、关键词、正文、参考文献和附录等部分组成。写论文的注意事项有许多，你确定会写吗？下面是我整理的计算机论文常用参考文献，希望能够帮助到大家。
[1]刘韬,楼兴华.SQL Server2000 数据库系统开发实例导航. 北京:人民邮电出版社,2004.
[2]丁宝康,董健全. 数据库实验教程. 北京:清华大学出版社, 2003:125-170.
[3]孙强. 基于 的专题网站的研究与设计. 东北师范大学,2006.
[4]Michele Leroux your Apps and WCF services with Windows CardSpace. MSDN Magazine,April 2007.
[5]肖建编. 编程实例与技巧集粹. 北京:北京希望电子出版社,2003.
[6]巴兹拉等. 安全性高级编程. 北京:清华大学出版社,2003.
[7]Jesse C#中文版. 电子工业出版社,2006.
[8]米切尔的等编著. 权威指南. 北京:中国电力出版社,2003.
[9]曾登高编著..NET 系统架构与开发. 北京:电子工业出版社,2003.
[10]Jeffrey Richter. Applied Microsoft .NET Framework programming.北京:清华大学出版社, 2003.
[11]张海藩. 软件工程导论. 北京:清华大学出版社, 2003.
[11]周佩德.数据库原理及应用〔M〕.北京:电子工业出版社,2004.
[12]刘炳文等.VISUAL BASIC 程序设计--数据库篇〔M〕.北京:人民邮电出版社,1999.
[13]李光明.Visual Basic 编程实例大制作〔M〕.北京:冶金工业出版社,2002.
[14]王兴晶,赵万军等.Visual Basic 软件项目开发实例[M].北京:电子工业出版社,2004.
[15]陈艳峰,高文姬等.Visual basic 数据库项目案例导航[M].北京:清华大学出版社,2004.
[16]李红等.管理信息系统开发与应用〔M〕.北京:电子工业出版社,2003.
[17]周之英.现代软件工程〔M〕.北京:科学出版社,2000.
[18]张红军,王红.Visual Basic 中文版高级应用与开发指南〔M〕.北京:人民邮电出版社,2001.
[1]孙卫琴,李洪成.《Tomcat 与 JSP Web 开发技术详解》.电子工业出版社,2003年6月:1-205
[2]BruceEckel.《JSP编程思想》. 机械工业出版社,2003年10月:1-378
[3]FLANAGAN.《JSP技术手册》. 中国电力出版社,2002年6月:1-465
[4]孙一林,彭波.《JSP数据库编程实例》. 清华大学出版社,2002年8月:30-210
[5]LEE ANNE PHILLIPS.《巧学活用HTML4》.电子工业出版社,2004年8月:1-319
[6]飞思科技产品研发中心.《JSP应用开发详解》.电子工业出版社,2003年9月:32-300
[7]耿祥义,张跃平.《JSP实用教程》. 清华大学出版社,2003年5月1日:1-354
[8]孙涌.《现代软件工程》.北京希望电子出版社,2003年8月:1-246
[9]萨师煊,王珊.《数据库系统概论》.高等教育出版社,2002年2月:3-460
[10]Brown等.《JSP编程指南(第二版)》. 电子工业出版社 ,2003年3月:1-268
[11]清宏计算机工作室.《JSP编程技巧》. 机械工业出版社, 2004年5月:1-410
[12]朱红,司光亚.《JSP Web编程指南》.电子工业出版社, 2001年9月:34-307
[13]赛奎春.《JSP工程应用与项目实践》. 机械工业出版社, 2002年8月:23-
[14]刁仁宏.网络数据库原理及应用[J].情报理论与实践,2004,(1).
[15]张莉,王强.SQL Server 数据库原理及应用教程[M].清华:清华大学出版社出版,2003.
[16]郭瑞军,李杰,初晓璐. 数据库开发实例精粹[M].西安:电子工业出 版社出版,2003.
[17]宋昕. 网络开发技术实用教程入门与提高[J].情报杂志,2005,(7).
[18]顼宇峰. Server 典型网站建设案例[M].清华:清华大学出版社出版,2006.
[1]米琦.基于多维变换的无线传感器网络定位算法研究[D].上海交通大学2007
[2]汤文亮,曾祥元,曹义亲.基于ZigBee无线传感器网络的森林火灾监测系统[J].实验室研究与探索.2010(06)
[3]宋保业.无线传感器网络关键技术研究[D].青岛科技大学2008
[4]熊俊俏,冯进维,罗帆.基于JN5139的无线传感器网络节点设计与实现[J].武汉工程大学学报.2010(05)
[5]祝勇.基于LS-SVC的传感网络链路质量评估机制研究[D].南昌航空大学2014
[6]程春蕊,刘万军.高内聚低耦合软件架构的构建[J].计算机系统应用.2009(07)
[7]孙利民等编着.无线传感器网络[M].清华大学出版社,2005
[8]甄甫,刘民,董明宇.基于面向服务架构消息中间件的业务流程系统集成方法研究[J].计算机集成制造系统.2009(05)
[9]陆莹.基于无线传感器网络的组网可靠性研究[D].天津大学2007
[10]潘虎.煤矿安全监控无线传感器网络系统研究[D].华中科技大学2007
[11]张杉.无线传感器网络通信机制的研究[D].电子科技大学2008
[12]魏宝玲.利用无线传感器网络实施道路维护与监控[D].国防科学技术大学2006
[13]吴中博,樊小泊,陈红.基于能量水平的多Sink节点传感器网络路由算法[J].计算机研究与发展.2008(01)
[14]陈伟,吴健,胡正国.分布式监控组态系统实时数据传输模型[J].计算机工程.2006(22)
[15]原羿,苏鸿根.基于ZigBee技术的无线网络应用研究[J].计算机应用与软件.2004(06)
[16]任丰原,黄海宁,林闯.无线传感器网络[J].软件学报.2003(07)
[17]张雪平.使用SecureCRT实现网络管理自动化[J].内江师范学院学报.2005(02)
[1]江群斌.我国商业银行网络银行安全性研究[D].天津大学2012
[2]翟凤航.组织系统数字档案管理系统软件的设计及实现[D].天津大学2012
[3]张兴起.基于VPX标准和多核DSP阵列的信息处理平台设计[D].天津大学2012
[4]王璐.基于1553B总线的综合航电数据加载系统的设计与实现[D].天津大学2012
[5]孙树和.电力企业绩效管理系统研究与设计[D].天津大学2012
[6]郎桐.无源自组网络输电线路实时监测技术研究与应用[D].天津大学2014
[7]郭毅.部门预算管理系统的设计与实现[D].天津大学2014
[8]李灏.软件无线电平台上空时编码的实现和测量[D].天津大学2014
[9]谢国聪.基于.NET技术和多层架构的出租屋和流动人口信息管理系统的设计与实现[D].天津大学2014
[10]高宜文.基于Wi-Fi的智能无线网络视频监控系统视频采集与处理平台的设计[D].天津大学2012
[11]毛延超.无线传感器网络中分簇多信道传输协议研究[D].天津大学2012
[12]夏梓峻.LED-AODV:基于链路预测的车辆网络路由算法研究[D].天津大学2012
[13]尹超.无线网络视频传输性能评测工具的设计与实现[D].天津大学2009
[14]童曦.基于.NET技术和多层架构的人事信息管理系统[D].天津大学2014
[15]王广彧.基于历史轨迹预测的车辆自组织网络混合路由算法[D].天津大学2014
[16]王伟海.龙口矿业集团电网调度自动化系统设计与实现[D].天津大学2012
[17]贺明.基于NC-OFDM的与ZigBee共存技术研究[D].天津大学2012
[18]叶君骄.基于SAT的长距离无线mesh网络管理平台[D].天津大学2012
[19]张松.基于的长距离无线链路性能实验研究[D].天津大学2012
[20]钟武汨.基于压缩感知的空间无线频谱感知与重构系统研究[D].天津大学2012
[21]高明飞.北皂煤矿海域下开采水情在线监测应用系统[D].天津大学2012
[22]邹宇.基于卫星授时的长距离无线Mesh网络MAC协议ST-TDMA[D].天津大学2014
[23]王为睿.山东省龙口矿业集团6000m~3/h制氧工程DCS设计与实现[D].天津大学2013
[24]莫志德.基于Web应用的停车管理系统开发和设计[D].天津大学2013
[1](美)BruceMolay着,杨宗源,黄海涛译.Unix/Linux编程实践教程[M].清华大学出版社,2004
[2]姜毅,王兆青,曹丽.基于HTTP的实时信息传输方法[J].计算机工程与设计.2008(10)
[3]崔文婧.数字娱乐产业中流行文化对于电子游戏的'影响[D].北京服装学院2010
[4]刘晓晖.SAP系统中不同物料分类的创建方法[D].上海交通大学2011
[5]封炜.基于GPS/GIS/GSM的物流信息监控系统的设计与实现[D].上海交通大学2011
[6]赵胤.基于SAP的离散制造型企业成本控制设计与实现[D].上海交通大学2011
[7]李长斌.驼峰空压站监控系统的设计与实现[D].上海交通大学2012
[8]闵国石.铁路工务作业安全控制系统的研究[D].上海交通大学2012
[9]龚俊.基于Javamail技术的企业Email安全管理系统的设计与实现[D].上海交通大学2012
[10]朱骁勇.基于SCCM的软件分发管理与软件封装模板助手[D].上海交通大学2013
[11]彭诚.基于GPS的物流车辆监控系统的设计和实现[D].上海交通大学2013
[12]苏政华.离散制造型企业的SAP系统FICO模块设计与实现[D].上海交通大学2013
[13]周昕毅.Linux集群运维平台用户权限管理及日志审计系统实现[D].上海交通大学2013
[14]徐朱平.SDP-21框架下项目管理在对日软件外包中的应用[D].上海交通大学2010
[15]刘进学.DeltaVDCS系统在丙烯均相聚合系统中的应用与研究[D].上海交通大学2010
[16]李立平.基于数据挖掘的勘探随钻分析系统[D].上海交通大学2010
[17]王平.半自动闭塞控制信息数字化传输系统的设计与实现[D].上海交通大学2012
[18]潘忠锐.铁路OA系统的设计与实现[D].上海交通大学2012
[19]黄怡君.银行业的存储虚拟化系统设计与实现[D].上海交通大学2012
[20]孙英.浅谈Flash与XML之间的通信[J].电脑知识与技术.2008(15)
[1]刘韬,楼兴华.SQL Server2000 数据库系统开发实例导航. 北京:人民邮电出版社,2004.
[2]丁宝康,董健全. 数据库实验教程. 北京:清华大学出版社, 2003:125-170.
[3]孙强. 基于 的专题网站的研究与设计. 东北师范大学,2006.
[4]Michele Leroux your Apps and WCF services with Windows CardSpace. MSDN Magazine,April 2007.
[5]肖建编. 编程实例与技巧集粹. 北京:北京希望电子出版社,2003.
[6]巴兹拉等. 安全性高级编程. 北京:清华大学出版社,2003.
[7]Jesse C#中文版. 电子工业出版社,2006.
[8]米切尔的等编著. 权威指南. 北京:中国电力出版社,2003.
[9]曾登高编著..NET 系统架构与开发. 北京:电子工业出版社,2003.
[10]Jeffrey Richter. Applied Microsoft .NET Framework programming.北京:清华大学出版社, 2003.
[11]张海藩. 软件工程导论. 北京:清华大学出版社, 2003.