瘦素与端粒酶对良恶性胸腔积液的诊断价值
[摘要] 目的 探讨胸腔积液瘦素浓度、端粒酶活性对良恶性胸腔积液的诊断价值。 方法 检测29例恶性胸腔积液患者胸液中的瘦素浓度和端粒酶活性，以28例良性胸腔积液作对照。 结果 恶性胸腔积液中的瘦素浓度较良性者增高，差异有统计学意义（P < 0.05）；瘦素的敏感性82.76%， 特异性92.86%，准确率87.72%；端粒酶的敏感性89.66%，特异性82.14%，准确率85.96%。结论 瘦素与端粒酶对恶性胸腔积液的诊断与鉴别诊断有一定的临床价值，联合检测瘦素与端粒酶对恶性胸腔积液诊断具有较高的诊断价值。
[关键词] 胸腔积液；瘦素；端粒酶
[中图分类号] R730.4；R521.7 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2012）28-0135-02
胸腔积液是由多种疾病引起的常见症状，准确判断胸腔积液的性质对于治疗方案的拟定有重要临床意义。细胞学检查是判断胸腔积液性质的金标准，但其阳性率较低[1]。因此良、恶性胸腔积液的鉴别诊断在临床上十分困难，寻找血液和胸腔积液中高敏感性、高特异性的肿瘤标志物是目前研究的热点。我们对57例胸腔积液患者胸液中的瘦素（leptin）浓度和端粒酶（telomerase）活性进行检测分析，探讨瘦素和端粒酶对胸腔积液性质的诊断价值。现报道如下。
1资料与方法
1.1 一般资料
选择我院呼吸内科2009年1月～2011年12月间住院的胸腔积液患者57例，其中恶性胸腔积液29例，经胸水脱落细胞检查证实，男17例，女12例，平均年龄（69.15±5.82）岁，其中肺癌21例，胃癌胸膜转移1例，乳腺癌胸膜转移1例，宫颈癌术后胸腔转移1例，食管癌胸腔转移1例，不明原因胸腔转移癌4例。选择28例同期住院的良性胸腔积液患者作为对照组，男17例，女11例，平均年龄（67±6.33）岁，经临床、细胞学检查等排除恶性肿瘤的可能。
1.2 实验方法
于超声定位下胸腔穿刺收集胸液50 mL，30 min内4℃下1 500 rpm离心10 min，弃上清液，用冷PBS液洗涤2次后染色，血细胞计数器计数，将2×105沉渣细胞置入1.5 mL的Epppendorf管中，-70℃保存。冷冻标本测定前室温下复融，按照DNA提取试剂盒说明采用酚-氯仿法提取胸水沉渣细胞中DNA。采用逆转录多聚酶链反应-酶联免疫法（RTPCR-ELISA）测胸腔积液端粒酶的活性，以吸光度（OD值）表示，超过阴性对照孔吸光度的2倍以上为端粒酶阳性，反之为阴性。胸液瘦素浓度的检测采用双抗体夹心ELISA法，由上海泰思特临床检验所提供技术支持。
1.3 统计学方法
应用SPSS13.0统计学软件进行分析，计量资料采用t 检验，以（x±s）表示；计数资料采用χ2检验， P < 0.05为差异有统计学意义。采用受试者工作特性曲线（ROC）判定胸液瘦素的诊断效能，检验水准为α=0.05。
2 结果
2.1 胸腔积液中瘦素浓度与端粒酶活性
恶性胸腔积液组胸液瘦素浓度（42.32±12.45）ng/L，显著高于良性胸腔积液组（16.12±9.85）ng/L，两组间比较差异有统计学意义（P < 0.05）。恶性胸腔积液组胸液端粒酶活性（OD值）为（0.86± 0.26），良性胸腔积液组胸液端粒酶活性为（0.08±0.06），两组间比较差异有统计学意义（P < 0.05），见表1。恶性胸腔积液组29例中有23例检测出端粒酶基因表达，28例良性胸腔积液中有3例有端粒酶基因表达，恶性胸腔积液中端粒酶基因的表达高于良性胸腔积液组，两组间比较差异有统计学意义（χ2=39.6，P< 0.01 ）。
表1 胸腔积液中瘦素浓度与端粒酶活性比较（x±s）
注：*与良性胸腔积液组比较，P < 0.05
2.2 ROC曲线对胸液瘦素诊断价值的判断
ROC曲线下面积（AUC）为0.834，面积的标准误为0.052，综合考虑敏感性、特异性时最佳临界值选为26.5 ng/L，敏感性0.81、特异性0.76（图1）。
图1 ROC曲线对胸液瘦素诊断价值的判断
2.3 两种肿瘤标志联合检测的诊断效能
联合检测胸液中的端粒酶活性和瘦素浓度，如果以其中1项指标阳性作为对恶性胸腔积液的诊断依据（平行试验），则敏感性为96.55%、特异性为75.00%，敏感性提高，但特异性降低；若以2项指标均阳性作为对恶性胸腔积液的诊断依据（串行试验），敏感性为75.86%、特异性为96.43 %，敏感性降低，特异性提高。见表2。
表2 胸腔积液端粒酶和瘦素诊断效能的评价（%）
3 讨论
胸腔积液是临床常见的症状，多种疾病可导致胸腔积液的发生，包括恶性肿瘤、结核、肝硬化及充血性心力衰竭等。准确判断胸腔积液的性质对于选择合适的治疗方式、判断原发疾病的严重性和预后具有重要的临床价值。脱落细胞学检查作为确诊恶性胸腔积液的金标准，但其阳性率仅为30%，即使反复送检其阳性率也仅提高到50%，敏感性较低，容易漏诊。因此，本文探索联合胸腔积液中瘦素浓度、端粒酶活性检测对恶性胸腔积液的诊断与鉴别诊断价值。
目前认为端粒酶是一种最为广谱的肿瘤标记物，大约肿瘤细胞80%～90%表达端粒酶活性[2]。端粒酶是一种RNA依赖的DNA多聚酶，端粒酶以自身的RNA 为模板，合成位于染色体末端的一段富含5′-TTAGGG-3′的特异性DNA序列（端粒），以补偿细胞分裂过程中端粒的丢失，使细胞得以无限分裂。端粒酶的活性与肿瘤的发生、发展有密切关系。端粒酶在恶性肿瘤的生成和发展方面具有重要作用，端粒酶活性的表达与恶性肿瘤的侵袭转移及恶性转化有关，随着肿瘤分化程度由高到低，端粒酶阳性率呈升高趋势[3，4]。当肿瘤细胞转移至胸膜后，胸腔内便产生大量癌性胸水，癌性胸水中含有大量由恶性肿瘤细胞产生的端粒酶。本研究采用RTPCR-ELISA扩增胸液中的端粒酶，对29例恶性胸腔积液患者和28例良性胸腔积液患者进行检测，结果表明，恶性胸腔积液组较良性胸腔积液组的胸液端粒酶活性显著升高，组间差异有统计学意义（P < 0.05）。胸液端粒酶的诊断效能为敏感性89.66%、特异性82.14%、准确率85.96%，比文献报道胸水脱落细胞的诊断价值高。