应用黄连进行体外抑菌方法的研究

摘　要：目的 对应用中药黄连进行体外抑菌常用方法的适用性进行比较。方法先将中药黄连制成水煎剂做为实验用药，分别应用杯碟法、试管法和平板法来对标准金黄色葡萄球菌进行体外抑制试验，并对三种抑菌方法的抑菌效果进行比较。结果 在三种体外抑菌方法中平板法的抑菌效果最好。结论 平板法是应用黄连进行体外抑菌研究的理想试验方法。

关键词：黄连 体外抑菌 方法比较

  　　黄连为毛茛科植物黄连、三角叶黄连的肝脏根茎。其药性苦寒，归于心、脾、肺、胆、大肠经。因具有清热燥湿、泻火解毒、清心除烦之功效，故被中医广泛用于临床各种热毒之症的治疗。现代研究发现，黄连中含多种生物碱, 主要是小檗碱，又称黄连素，其次为黄连碱、甲基黄连碱、掌叶防己碱、药根碱、非洲防己碱。另外还含黄柏酮、黄柏内酯、木兰花碱等。研究表明这些生物碱，特别是黄连素（Berberine）具有很好的体外抑菌作用，且在体外病原菌很少能对其产生抗药性，因此目前人们开始越来越多的选择黄连作为体外抑菌试研究的实验药物。当下配合黄连进行体外抑菌试验的方法大致有三种，分别是杯碟法、试管法和平板法。为筛选出更适于黄连体外抑菌的研究方法，我们对三种的体外抑菌效果进行了比较，现报道如下：
1实验资料与方法
1. 1 实验菌种 试验所用标准金葡菌菌株来源于上海川翔生物科技有限公司（菌株批号：ATCC 25923）。用北京索莱宝科技有限公司生产的L1010 LB 液体作为培养基，对金葡菌进行培养，菌液达到对数生长期后，根据麦氏计数法将其调制合适浓度。
1. 2 实验制剂 称取黄连150 g，充分浸泡30 min后加水1 L煎煮2次，每次30 min，合并2次滤液，文火浓缩至200 mL生药（mg﹒mL﹣?），用孔径为0.22 μm的Millex-Gp滤器进行过滤除菌，并于4℃保存备用。临用前用无菌蒸馏水倍比稀释成以下 8 个浓度:0.1、0.05、0.025、0.0125、0.006、0.003、0.0015、0.00075g/ml。
1. 3 培养基的制备 首先按比例配置LB 液体1000ml，并将LB液体PH值调整为7.6。在上述LB液体培养中基加入1-2%的琼脂粉，就可制备为LB固体培养基。随后取 9 支 15ml 试管，将上述已稀释好的8 个不同浓度的黄连水煎液加入其中即可制备LB药物平板，再在剩余的1个试管中加入蒸馏水以备对照。实验试管加入LB固体培养基后，予以加热及高压灭菌，并置板，用于随后 MIC 值的测定。
1. 4 抑菌试验
1.4.1平板法.中国中医药科技，2011,18（5）：419-420.