探究罗红霉素在极端条件下的相关影响因素

摘　要：罗红霉素是由红霉素改造而成的一种衍生物，80年代初由法国Rouset- Uclaf公司开发成功，1987年首先在法国上市，迄今己在包括我国在内的世界90多个国家和地区得到了广泛的应用。罗红霉素是大环内脂类比较理想的品种，具备生物利用度高，抗菌活性广泛等优点，对呼吸道感染、五官科感染、皮肤和软组织感染、泌尿生殖系统感染疗效好、副作用小，具有广泛的临床应用前景。

关键词：罗红霉素 影响因素

一 实验部分

1 供试品批号
　　上市样品： 浙江震元制药有限公司  091009
　　自制样品： B091201
2 溶液配制
（1） 相关物质
　　供试溶液的配置：取样品适量，加流动相溶解并稀释制成每1mL中含罗红霉素2mg的溶液作为供试品溶液。
　　对照溶液的配置：精密量取1ml供试溶液置100ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀作为对照溶液。
（2 ）含量
　　标准品溶液：精密称取罗红霉素标准品于容量瓶中，以流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中约含有1mg的溶液；
　　供试品溶液1：精密称取供试品于容量瓶中，以流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中约含有1mg的溶液；
　　供试品溶液2：精密称取供试品于容量瓶中，以流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中约含有1mg的溶液。
（3）检测条件
　　色谱仪：岛津LC-10AT；
　　色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
　　缓冲液：0.067mol/L磷酸二氢铵溶液，用三乙胺调节pH至6.5；
　　流动相：乙腈∶缓冲液=2:3（v/v）
　　检测波长：211nm
　　进样量：20mL
　　流速：1.0ml/min
　　柱温：30℃
3检测内容
（1）高温试验
　　将供试品置于两个扁型称量瓶或适宜容器中，摊成≤5mm厚的薄层，开盖放置于60?C温度下，分别于第5天和第10天取样，并按表2-1考察项目进行检测。 若供试品含量低于规定限度，则在40?C条件下同法进行试验；若60?C无明显变化，则不进行40?C试验。
（.2）高湿度试验
　　将供试品置于两个扁型称量瓶或适宜容器中，摊成≤5mm厚的薄层并称取重量，开盖置于25?C，相对湿度为90%±5%（KNO3饱和溶液）的密闭容器中，于第5天和第10天取样，分别称取重量，同时对比试验前后的供试品的重量，以考察供试品的吸湿潮解性能。若吸湿增重5%以上，则在相对湿度75%±5%（NaCl饱和溶液）条件下，同法进行试验；若吸湿增重5%以下，其它考察项目符合要求，则不再进行此项试验。
（3）强光照试验
　　将供试品置于两个扁型称量瓶或适宜容器中，摊成≤5mm厚的薄层，开盖置于内装有日光灯，照度为4500lx±500lx的光照箱，分别于第5天和第10天取样.
二 .结果与讨论

1高温试验
　　结果表明，第5天与第10天的各项检测结果均达到规定的限度，因此，不再进行40?C试验。对比试验结果显示本品在高温条件下的稳定性不低于已上市样品的稳定性。
　　2高湿度试验
　　结果表明，第5天与第10天的各项检测结果均达到规定的限度。对比试验前后的供试品的重量，计算得5天试验样品吸湿增重为3.6%，10天试验样品吸湿增重为4.6%，已上市样品5天试验样品吸湿增重为3.7%，10天试验样品吸湿增重为4.9% 均小于5.0%。故不再进行相对湿度75%±5%（NaCl饱和溶液）条件下的试验。对比试验结果表明本品在高湿条件下的稳定性不低于已上市样品的稳定性。
　　3强光照试验
　　结果表明，第5天与第10天的各项检测结果均达到规定的限度。对比试验结果显示本品在强光照条件下的稳定性不低于已上市样品的稳定性。
将供试品置于两个扁型称量瓶或适宜容器中，摊成≤5mm厚的薄层，开盖置于内装有日光灯，照度为4500lx±500lx的光照箱，分别于第5天和第10天取样，并按表2-1考察项目进行检测。　
　　　
4 实验中使用的方法探讨
　　在实验中可以采用紫外分光光度法测定罗红霉素的含量，是利用罗红霉素在482nm波长处有最大吸收，而空白辅料在此处无吸收。该方法操作简便，但结果的精确度却不及HPLC。
　　而比色法已广泛用于罗红霉素体外样品的含量测定，比色法用于罗红霉素含量测定的前提条件是罗红霉素在所用介质中稳定，如不稳定则其分解产物与罗红霉素都对显色剂显同样颜色。部颁罗红霉素片标准中采用分光光度法测定罗红霉素溶出度已有文献报道，其原理是利用罗红霉素在冰醋酸中被浓盐酸降解后与咕吨氢酵溶液显色，在544 nm波长进行测定，该显色试剂需进口，价格贵，溶液配制后放置时间较长，可致待测溶液的吸收值明显减少，要求待测溶液必须在15分钟内测定完成，因此误差较大，而用HPLC法测定罗红霉素的方法简便快速，选择性较好，灵敏度高。
5 检测波长的选择
　　取罗红霉素样品用流动相溶解并制成每1ml中含0.5mg的溶液，在190～300nm的波长范围内扫描，在211nm的波长处有最大吸收，因此选择211nm为检测波长。
.6 HPLC流动相的优化
　　三乙胺的加入有效地改变了罗红霉素的强保留现象，较大地改善了色谱峰型，提高了柱效。三乙胺加入量越大，拖尾因子越小，但保留时间延长，同时基线漂移，很难平稳。流动相的pH对罗红霉素的色谱行为也有很大的影响，多次实验考察后，选择加入1％的三乙胺并用磷酸调节pH 7.2为流动相，保留时间适宜，拖尾因子小于1.5。

7偏差及异常处理

　　实验过程中未出现任何偏差或异常。

三 .分析数据

　　在实验中可以采用紫外分光光度法测定罗红霉素的含量，是利用罗红霉素在482nm波长处有最大吸收，而空白辅料在此处无吸收。该方法操作简便，但结果的精确度却不及HPLC。
　　而比色法已广泛用于罗红霉素体外样品的含量测定，比色法用于罗红霉素含量测定的前提条件是罗红霉素在所用介质中稳定，如不稳定则其分解产物与罗红霉素都对显色剂显同样颜色。部颁罗红霉素片标准中采用分光光度法测定罗红霉素溶出度已有文献报道，其原理是利用罗红霉素在冰醋酸中被浓盐酸降解后与咕吨氢酵溶液显色，在544 nm波长进行测定，该显色试剂需进口，价格贵，溶液配制后放置时间较长，可致待测溶液的吸收值明显减少，要求待测溶液必须在15分钟内测定完成，因此误差较大，而用HPLC法测定罗红霉素的方法简便快速，选择性较好，灵敏度高。
　　罗红霉素为红霉素的衍生物，中国药典2000年版已收载采用微生物效价法测定罗红霉素的含量。国内文献报道罗红霉素及其制剂含量测定采用高效液相色谱法，均为C18柱，以铵盐与溶剂(乙腈或甲醇)做流动相，在210～215nm处检测，但其色谱峰与有关物质不 能很好的分离。
     在本实验中，对罗红霉素的含量和相关物质及其他的检测项目均按照SOP-I05-002-01《罗红霉素检验操作规程》及中国药典2005版附录相关章节进行，取得的数据和效果将会有所保证。HPLC法是20世纪70年代以后发展最快的一个分析化学分支，是一种高效、快速、灵敏的分离分析手段。该法的分离和检测过程比较温和，对沸点高、分子量大、极性强、热稳定性差的化合物，尤其是有生物活性的物质具有特别的处理能力。所以适用于罗红霉素制剂和半成品的质量控制和快速分析。

四 结论

对罗红霉素进行影响因素实验，实验结果表明：
　　本品在高温60?C的条件下放置5天、10天后检测，各项结果均达到规定的限度，对比试验结果显示本品在高温条件下的稳定性不低于已上市样品的稳定性。
　　本品在相对湿度为90%±5%的条件下放置5天、10天后吸湿增重分别为3.0%、3.9%，证明本品微有引湿性，其他各项检测结果均达到规定的限度，故本品应在干燥处保存。已上市样品在相对湿度为90%±5%的条件下放置5天、10天后吸湿增重分别为3.1%、4.2%，证明本品在高湿条件下的稳定性不低于已上市样品的稳定性。
　　本品在照度为4500lx±500lx的光照条件下放置5天、10天后检测，各项结果均达到规定的限度，水分略有增高，故本品应密闭保存。对比试验结果显示本品与已上市样品的稳定性相仿。
　　罗红霉素影响因素对比研究结果表明本品的在光照、高温、高湿度条件下的稳定性不低于已上市样品的稳定性，光照、高温条件下水分有所增高，高湿度试验显示本品微有引湿性，其他检测项目均无明显变化，检测结果符合标准规定。故结合试验结果并参考已上市样品的包装情况选定本品的包装材料为：双层药用低密度聚乙烯薄膜袋包装，扎带扎口，外用圆底纸板桶包装。

参考文献
[1] 孟彩红．罗红霉素的合成方法研究[D]．北京化工大学：化学工程(专业) 硕士论文，2006
[2] 周延安，蔡鸿生．罗红霉素的药理及其临床应用[J]．医药导报，1994，1(2)：21
[3] 傅得兴，谢荣靖．罗红霉素的药理及临床应用[J]．中国新药杂志，1992，1(5)：15