Secretagogin在胃肠道类癌诊断中的作用

【关键词】 胃肠道;类癌瘤;secretagogin;嗜铬素a;突触素;磷酸丙酮酸水合酶;免疫组织化学

【摘要】 目的 探讨secretagogin在胃肠道类癌诊断中的作用。方法 采用免疫组织化学技术检测27例胃肠道类癌(6例非典型类癌)中secretagogin、嗜铬素a(cga)、突触素(syn)、神经元特异性烯醇化酶(nse)的表达，分析其表达差异性;并比较它们在典型类癌与非典型类癌中表达情况。 结果 胃肠道类癌组织中secretagogin、syn、cga、nse的阳性表达率分别为96.3%、100.0%、40.7%、81.5%，四者之间差异有统计学意义(χ2=23.7，p<0.01)。cga在非典型类癌中的表达高于典型类癌(z=-2.098，p<0.05)，其余三者均无差别。结论 在绝大多数胃肠道类癌组织中secretagogin呈阳性表达，且表达程度高于cga; secretagogin可以作为一个新的神经内分泌标记物用于临床胃肠道类癌的诊断。

【关键词】 胃肠道;类癌瘤;secretagogin;嗜铬素a;突触素;磷酸丙酮酸水合酶;免疫组织化学

　the effect of secretagogin on the diagnosis of gastrointestinal carcinoid lin dongliang, li yujun, zhao jie, et al (department of pathology, the affiliated hospital of qingdao university medical college, qingdao 266003, china); [abstract] objective to assess the value of secretagogin in the diagnosis of gastrointestinal carcinoid. methods the expressions of secretagogin, synaptophysin (syn), chromogranin a (cga) and neuronspecific enolase (nse) in 27 cases (six were untypical) of gastrointestinal carcinoid (gc) were detected immunohistochemically. results the positive expression rate of secretagogin, syn, cga and nse in carcinoid was 96.3%, 100.0%, 40.7% and 81.5%, respectively. the differences among the four items were significant (χ2=23.7,p<0.01). cga expression in untypical carcinoid was higher than that in typical one(z=-2.098,p<0.05), for the rest three markers, there was no significant difference among them. conclusion secretagogin positively expresses in the most majority of carcinoid, and its expression is stronger than that of cga. secretagogin can be used as a novel neuroendocrinal marker in the diagnosis of carcinoid of gastrointestinal tract.

　　[key words] gastrointestinal tract; carcinoid tumor; secretagogin; immunohistochemisty; chromogranin a; synaptophysin; phosphopyruvate hydratase

　　类癌属于神经内分泌肿瘤，比较少见，占全部恶性肿瘤的0.05%～0.20%，好发于消化道，占胃肠道肿瘤的0.4%～1.8%。retagogin是最近研究较热的神经内分泌标记物，最早发现于胰岛细胞，为钙离子结合蛋白，属于钙结合蛋白中的感受器家族，定位于染色体6p22.3p22.1，在神经内分泌肿瘤组织中高表达，其与传统的神经内分泌标记物嗜铬素a(cga)、突触素(syn)以及神经元特异性烯醇化酶(nse)相同，均定位于胞浆中，是一种新型神经内分泌标记物[1]。对secretagogin深入研究可能为类癌的诊断提供新的依据。

　　1 材料和方法

　　1.1 材料

　　1.1.1 标本 收集青岛大学医学院附属医院、青岛市市立医院、青岛市中心医院及中国人民解放军第401医院2006年5月—2009 年12 月保存的消化道类癌标本27例，病人中位年龄60岁。所有标本均经40 g/l中性甲醛固定，常规石蜡包埋，4 μm厚连续切片。所有类癌组织均经资深病理医师及免疫组化检查证实。

　　1.1.2 试剂 兔抗人secretagogin多克隆抗体由浙江大学来茂德教授馈赠;山羊抗兔二抗(即用型)，cga、syn、nse即用型一抗，pv6000试剂盒，dab显色试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

　　1.2 方法

　　1.2.1 检测方法 secretagogin免疫组织化学染色采用envision法,切片在ph 6.0的柠檬酸盐缓冲液中微波抗原修复，一抗1∶400稀释。cga、syn及nse免疫组织化学染色采用pv6000法，具体步骤严格按照试剂盒说明操作，dab显色试剂盒显色。阳性对照用已知阳性片(secretagogin胰岛组织);阴性对照省略一抗，以pbs 代替。

　　1.2.2 结果判断 secretagogin、cga、syn、nse均以肿瘤细胞胞浆出现棕黄色颗粒为阳性。评分参照文献[23]的方法。阳性细胞百分比评分(a):0分,无阳性细胞;1分,阳性细胞占1%～10%;2分,阳性细胞占11%～50%;3分,阳性细胞占51%～ 80%;4分, 阳性细胞占81%～100%。阳性细胞染色强度评分(b): 0分,阴性;1分,弱阳性;2分,中度阳性;3分,强阳性。a、b 两项乘积即为免疫组化检测评分：0分为-，1～4分为+,5～8分为,9～12分为。

　　1.2.3 统计学分析 采用spss 11.5统计软件包进行数据处理, secretagogin、syn、cga、nse之间的比较采用spss分析，两两比较采用查表法。不同分化程度类癌间的比较采用mannwhitney u秩和检验。p<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结 果

　　2.1 各种标记物在胃肠道类癌组织中的表达

　　secretagogin、syn、cga、nse均表达于类癌细胞胞浆中，阳性细胞为胞浆中出现棕黄色颗粒。类癌组织中secretagogin、cga、syn、nse的阳性表达率分别为96.3%、100.0%、40.7%、81.5%，四者之间差异有统计学意义(χ2=23.7，p<0.01)。其中secretagogin、syn与cga表达的差异有统计学意义(mimj=29、38，p<0.05、0.01)，其他各组间未见明显差异。

　　2.2 各种标记物在不同分化程度胃肠道类癌组织中的表达

　　cga在非典型类癌中表达高于典型类癌(z=-2.098，p<0.05)，其余三者均无差别。见表1。表1 各种标记物在不同分化程度类癌组织表达典型类癌210341401119非典型类癌610230114分化程度ncga-+nse-+典型类癌211510552410非典型类癌6111300333 讨 论 类癌secretagogin是2000年由wagner等利用免疫筛选技术从人胰腺cdna文库中筛选出来的一个新的基因，其转录产物经翻译后形成一种含276个氨基酸的蛋白。以往研究表明，secretagogin在绝大多数非神经内分泌的肿瘤及正常组织中不表达，而在大部分神经内分泌肿瘤组组织都有较高表达，在消化道类癌及肺小细胞癌组织与cga表达有明显差异[4]。本文结果显示，大多数胃肠道类癌组织secretagogin都有表达，其表达程度明显高于cga。syn、cga及nse为目前诊断神经内分泌肿瘤经典的标记物，其中cga免疫组织化学及血清学检测被认为是鉴定神经内分泌肿瘤的金标准[57]，但cga对无神经内分泌颗粒或含神经内分泌颗粒较少的神经内分泌肿瘤不是很敏感，如肺小细胞癌、垂体腺瘤、直肠和卵巢的类癌[811]。本研究表明，cga在类癌组织表达率较低，并且在部分肿瘤组织仅为局灶的阳性表达，这可能是由于部分类癌细胞含有较多的神经内分泌颗粒。本文结果显示，syn在类癌组织100%表达，明显高于cga，且大多表达强度较高。我们认为syn在类癌的诊断中是比较好的标记物，但需要注意的是，syn在无神经内分泌分化的肺癌中阳性率占62%，因而在诊断肺神经内分泌肿瘤中，syn为非特异性标记物，secretagogin可能代替syn作为可靠的确定肺肿瘤神经内分泌分化的标记物。nse可以鉴别神经内分泌肿瘤，且其不依赖于神经内分泌颗粒，虽其特异性较差[12]，结合类癌典型的镜下形态，nse可以联合其他标记物用于类癌的诊断。

　　综上所述，本研究的4种神经内分泌标记物，syn在所有类癌组织中表达;cga在非典型类癌组织中表达高于典型类癌。敏感性与特异性是评价一种标记物两个最重要方面，然而往往不存在绝对特异性标记物，况且还要求其具有高度敏感性，因此在诊断类癌过程中应同时检测多个指标，以降低误诊率。同时，应积极寻找新的、高敏感性且高特异性的标记物，secretagogin有可能作为新的标记物用于胃肠道类癌诊断。

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