高效液相色谱法测定复方冰替双层膜中替硝唑及

【关键词】 替硝唑 氧氟沙星 高效液相色谱法 复方冰替双层膜

复方冰替双层膜是我院研制的一种用于 治疗 口腔溃疡牙周炎等口腔疾病广谱抗菌药物的复方制剂，主要成分为替硝唑、氧氟沙星等。虽然替硝唑和氧氟沙星单方制剂的含量检测方法［1］很多，但均不适合这种复方制剂的含量检测。本研究应用高效液相色谱法检测复方冰替双层膜中替硝唑及氧氟沙星的含量，以期为其质量控制提供了一种较好的方法。现报道如下。

　 　1 仪器与试药

　　1.1 仪器美国ssi公司pc-3000高效相色谱系统，anastar色谱工作站；日本岛津uv2100紫外可见分光度计；mettler ae100型 电子 天平。

　　1.2 试药甲醇和乙晴（山东禹王实业总公司化工厂生产，均为色谱纯）；替硝唑、氧氟沙星对照品均由 中国 药品生物制品检定所提供，复方冰替双层膜由湖北省黄石市中心 医院 药制剂室提供。

　 　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件固定相为kromasilc18；色谱柱（250 mm×46 mm.5μm）；流动相为0.025mol·l1磷酸溶液（用三乙胺调ph值至3.0）甲醇乙晴（80∶10∶10）；流速为1.0 ml·min-1；压力1 000 pa；检测波长为296 nm；灵敏度：aufs0.2；进样量10μl。柱温定温；保留时间较适中，分离效果好。替硝唑峰、氧氟沙星与其它杂质分离度大于2，理论板数为3 000以上（以氧氟沙星峰 计算 ）。

　　2.2 供试品溶液的制备精密称取供试品1.0 g，加流动相约40 ml，置超声波振荡器中振荡30ml，放冷，加流动相至50 ml；摇匀，过滤，取续滤液经微孔滤膜过滤后进样（制成溶液含替硝唑浓度为3.93 mg·l-1，氧氟沙星浓度为1.89mg·l-1.

　　2.3 对照品溶液的制备精密称取氧氟沙星对照品8mg，替硝唑对照品16 mg，置100 ml量瓶中，加0.1 mg·l-1盐酸溶液20ml使溶解，用流动相稀释至刻度，精密量取3ml，置50 ml量瓶中加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照样溶液（每毫升含替硝唑9.6 mg、氧氟沙星量4.8 mg）。

　　2.4 线性关系及检测限的确定精密量取氧氟沙星对照品（86.0 mg·l-）1，2，3，4，5 ml加流动相定溶至50 ml，分别进样10μl，测定峰面积值，将各自的峰面积值与各自的浓度进行线性回归，得回归方程：y=62 876x-17 964，r=0.999 7，n=5。结果表明氧氟沙星浓度在3.44～17 mg·l-1的范围内，线性关系良好。

精密量取对照品溶液（151.0 mg·l-1）1，2，3，4，5 ml加流动相定量至50 ml，分别进样10 ml，测定峰面积值，将各自的峰面积值与各自的浓度进行线性回归，得回归方程：y=15 146x-2 334，r=0.999 9，n=5。结果表明替硝唑浓度在6.04～30.2 mg·l-1的范围内，线性关系良好。

　　2.5 空白对照试验取不含替硝唑、氧氟沙星的空白样品研细，精密称取1.0 g，量具塞锥形瓶中，加入流动相50 ml，超声处理45 min，过滤，结果空白样品色谱中，在与替硝唑、氧氟沙星相同保留时间处无色谱峰。提示，其它成分不干扰替硝唑、氧氟沙星的测定。

　　2.6 精密度实验及稳定性实验取供试品溶液，分别于0，2，4，8，12，24 h各进样一次，连续进样6次，结果氧氟沙星峰面积平均为107 643，rsd为0.32%，替硝唑峰面积平均为6 219，rsd为0.9%。表明供试品溶液在24 h内稳定，且实验精密度良好。

　　2.7 重复性实验取批号20050101的供试品约1.0 g，照含量测定方法测定6次。氧氟沙星含量为1.93 mg/片，rsd为1.5%，n=6；替硝唑含量为3.98 mg/片，rsd为1.5%，n=6。

　　2.8 回收率实验精密量取已测定含量的供试品约1 g（批号为20041001）氧氟沙星含量为0.93 mg/片，替硝唑含量为3.98 mg/片）精密加入混合对照品溶液（每1ml含氧氟沙星1.050 mg·l-1，替硝唑2.005 mg·l-1）0.8，10，12 ml（分别相当于样品含量的80%，100％，120％），照含量测定方法加流动相至50 ml，依法测定。结果氧氟沙星平均回收率为99.6%，rsd为1.1%，n=9；替硝唑平均回收率为99.5%，rsd为1.1%，n=9。见表1。表1 氧氟沙星加收实验结果（略）
　
　　2.9 样品的含量测定及含量限度取复方冰替双层膜10批，依上法制成供试品溶液，分别进样10μl，按外标法同时测定氧氟沙星和替硝唑的含量。结果见表2。表2 样品测定结果（略）

10批样品氧氟沙星均在1.7～2.3 mg/片，替硝唑含量均在3.4～4.6 mg/片，故制剂二成分含量标示量应为85～115%。

　　 3 讨论

由于本制剂成分中替硝唑、氧氟沙星均能溶于酸和碱性介质而难溶于水。故本实验中采用超声波振荡方法提取样品。流动相选用0.025mg·l-1磷酸溶液（以三乙胺调ph至3.0）配合甲醇、乙晴能使两者较好地分离，分离度达到2.2，理论板数（以氧氟沙星 计算 ）达到3 000以上，具有较好分离度，较高的柱效符合规定的要求，更改流动相比例（83∶10∶7或77∶10∶13）。更换色谱样品牌，氧氟沙星仍能与其它成分较好地分离。

替硝唑、氧氟沙星最大吸收波长分别在（250±1）nm和（296±1）nm处，由于氧氟沙星在供试品中含量较低。为提高其检测灵敏度，选择氧氟沙星最大吸收波长296 nm作为测定波长。在此波长测定替硝唑、氧氟沙星的含量，具有良好的分离度。

本制剂（供测样品）为双层膜剂，使用超声波振荡法提取样品在取样前应充分振荡使样品完全溶解后，精密取样，确保测定结果准确。

【 参考 文献 】
　　［1］国家药典委员会.