甲醛复制小鼠输卵管炎性不孕症动物模型的构建

据资料显示，由于输卵管因素所致的不孕占不孕症的30%～50%，其中非特异性慢性输卵管炎又占输卵管因素的50%，可见慢性输卵管炎是女性不孕症的重要原因之一。本实验拟通过向小鼠输卵管内注射适量甲醛溶液，探索复制输卵管炎性不孕动物模型，为人类输卵管炎性不孕的研究提供疾病动物模型。现将结果报道如下。
　　1资料与方法
　　1.1一般资料
　　1.1.1动物 清洁级成年育龄雌性KM(昆明)种小鼠75只，体重28～32 g，随机分为生理盐水组、高剂量甲醛组、中剂量甲醛组、低剂量甲醛组和细菌感染组，每组各15只；成熟雄性小鼠25只，体重32～36 g，均由广西医科大学动物实验中心提供（实验动物号SCXK2009-0002）。
　　1.1.2细菌 菌种由广西医科大学微生物学教研室培养和提供，以大肠埃希菌、金葡菌、链球菌按2∶1∶1比例用无菌生理盐水稀释，配成浓度约为3×109/mL混合菌。
　　1.1.3仪器 光学显微镜：OlympusCX41奥林巴斯显微镜,日本奥林巴斯株式会社生产。
　　1.2方法 用一次性黄色塑料移液管剪去适量末端自制小鼠"扩阴器"以将雌性小鼠的阴道撑开，然后将注射器针头缓缓插入子宫体腔，分别在两侧输卵管的开口处进针，向输卵管到卵巢方向缓慢注射；为防止注射液返流回子宫腔，注射时小鼠的头位朝下，阴道口朝上，并且在注入液体稍滞留片刻后再慢慢将针头拔出，防止液体倒流。高剂量甲醛组、中剂量甲醛组、低剂量甲醛组分别注射用无菌生理盐水配制的3%、2%、1.5%的甲醛溶液0.02 mL（左右侧输卵管各注入0.01 mL）；方法同上，细菌感染组则注入现配好的细菌混悬液0.02 mL，生理盐水组则注入无菌生理盐水0.02 mL。
　　1.5合笼配种 造模后第10 d，各组雌鼠与成熟公鼠按3∶1于晚上20∶00关灯合笼过夜，次日晨8∶00检查，阴道口有阴道栓者判为已孕，无阴道栓为未孕。未孕雌鼠则继续合笼同上，连续3 d，最后统计各组小鼠受孕率，公式：受孕率=(组内受孕鼠数/组内配种雌鼠总数)×100%。
　　1.6形态学观察 配种结束时，每组随机抽取5只雌鼠脱臼处死，剖腹观察输卵管大体病理学改变，包括输卵管形状、色泽改变情况，与周围组织有无粘连，是否增粗或变细，弹性变化，以及有无积水、化脓等。然后各取小块组织用10%中性甲醛溶液固定，作常规病理切片和H.E.染色，光镜下观察其形态学改变。
　　1.7统计学方法 各组受孕率比较采用χ2检验，使用SPSS 13.0统计分析软件进行统计学分析，以P<0.05为差异有统计学意义。
　　2结果
　　2.1小鼠受孕情况 受孕情况，见表1。
　　2.2一般情况和大体病理 实验中，高、中、低剂量甲醛组小鼠因严重感染分别死亡了2只、3只、1只，皆死于术后1 w内。生理盐水组小鼠剖腹可见输卵管外观粗细均匀、光滑圆润，色泽红润，富有弹性，与周围组织无粘连，无积水或化脓现象。与生理盐水组比较，高、中、低剂量甲醛组和细菌组小鼠输卵管均见到不同程度色泽苍白，明显变细，粗糙，弹性差，脆而易损，与周围组织或多或少有粘连，个别输卵管及其周围组织可见积水或积脓。
　　2.3光镜观察病理学改变 常规切片H.E染色镜下观可见生理盐水组小鼠输卵管管壁组织结构清晰，管腔通畅，黏膜上皮呈柱状，有纤毛，见图1:a,f。高剂量甲醛组、中剂量甲醛组、低剂量甲醛组和细菌感染组小鼠输卵管管壁结构分界不清晰，管腔变窄甚至阻塞，纤维组织明显增生，血管扩张充血，全层可见淋巴细胞、浆细胞及少量酸性粒细胞等炎性细胞浸润，见图1:b,c,d,e,g,h。
　　
　　图1 甲醛处置对小鼠输卵管内膜的影响
　　3讨论
　　在小鼠，输卵管是胚胎种植处，任何影响输卵管生理功能的因素均可能导致不孕。研究表明，人类输卵管及小鼠输卵管病理上出现炎症渗出、积水、积脓、粘连，以及产生纤维疤痕、管壁变硬、增厚，可导致输卵管或输卵管狭窄、阻塞，妨碍受精或种植可造成不孕。
　　有关生殖道炎症复制不孕动物模型，国内徐桂中等用金黄色葡萄球菌制作小鼠慢性输卵管性不孕模型；黄河玲等用苯酚胶浆剂注射制作兔子慢性输卵管炎模型；李祥云等用β溶血性链球菌制作兔子输卵管阻塞模型；刘丽等用混合菌金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、大肠杆菌等制作大鼠输卵管不孕模型。国外，Pearlman MD等用大肠杆菌制作家兔不孕动物模型，Patton DL等则用衣原体复制猴的不孕动物模型。但对于小鼠用甲醛损伤输卵管造成炎症从而复制不孕动物模型尚未见有文献报道。本实验采用自制"扩阴器"在非麻醉状态下进行输卵管甲醛注射，对小鼠创伤小，操作简便并易于推广；再者，造成的炎症效果和细菌制作输卵管炎症模型相似，不孕情况相近。故我们认为通过输卵管注入适量甲醛损伤输卵管致炎性损伤，是一种简便易行的不孕动物模型制作方法。
　　参考文献：
　　佟慕光.不孕不育.第一版.上海科学技术出版社,1984:7-8.
　　李栓,于英奇.男女不孕育诊治汇萃.北京：中国中医药出版社,1993:89.
　　徐桂中,张欣,侯一平,等.金黄色葡萄球菌致小鼠慢性输卵管炎性不孕模型制作.中国比较医学杂志,2011,21（3）:6-9.
　　黄河玲,吴高媛.兔慢性输卵管炎动物模型的建立.现代中西医结合杂志,2000,9（20）:1982-1983.
　　李祥云,胡晓梅,李路,等."峻竣煎"对输卵管炎变阻塞动物模型影响的实验研究.上海中医药杂志,1997,（10）:41-43.
　　刘丽,谷娜,张轶群,等.解毒除湿化瘀止痛法对输卵管炎性阻塞性不孕大鼠模型作用机理的研究.世界中西医结合杂志,2010,5（2）:117-119.
　　Pearlman MD,McNeeley SG,Frank TS,et dotoxin antibody is protective against tubal damage in an Escherichia coli rabbit salpingitis J Obstet Gynecol,1997,171(6):1588-1593.