反向Calmagite-EDTA比色法测定血清镁
血清镁测定常用甲基麝香草酚蓝、Calmagite及邻甲酚酞络合酮等方法,但均受脂血、胆红素等因素的干扰,致使该类标本结果偏高,本文运用Calmagite-EDTA分光光度法(反向法)克服了上述缺点。
1 原理
在碱性条件下,Calmagite与镁生成红色复合物,加入EDTA后镁与其生成EDTA-Mg络合物,使Calmagite游离,吸光度值降低,其降低值与镁离子浓度成正比,而克服了本底因素的影响。
2 材料与方法
2.1 试剂 上海Trace试剂盒(Trace公司Calmagite镁测定试剂盒),包括:
2.1.1 Calmagite试剂:含Calmagite 0.14 mmol/L,KCl 77 mmol/L,PVP 0.03 mmol/L。
2.1.2 碱性缓冲液:KCN 1.5 mmol/L,KOH 14.3 mmol/L。
2.1.3 应用液:临用前Calmagite液与碱性缓冲液等量混合即可。
2.1.4 20 mmol/L EDTANa2溶液。
2.2 仪器 751G分光光度计。
2.3 方法 测定管(U)、标准管(S)及空白管(B)中依次加血清、1.5 mmol/L镁标准液及蒸馏水各30 μl,加应用液3.0 ml,混匀,540 nm波长比色,B管调零,记录各管吸光度值(A)。各管加20 mmol/L EDTANa2溶液10 μl,混匀,B管调零,按上比色,记录吸光度值(A2)。计算:Mg mmol/L=(UA1-UA2)/(SA1-SA2)×1.5
2.4 原法按试剂说明书进行。
3 结果与讨论
3.1 EDTANa2浓度选择 空白管中加入5 mmol/L EDTANa2溶液5 μl后吸光度值轻微降低,可能系试剂中含有微量镁的缘故。1.5 mmol/L镁标准液加入10 mmol/L EDTANa210 μl后吸光度值不再降低,至100 mmol/L时仍无变化,故本文选用20 mmol/L EDTANa2溶液已能满足需要。
3.2 稳定性 镁与Calmagite的络合反应瞬间完成,吸光度值至少60 min内无变化。加入EDTANa2后其络合物立即分解,吸光度值迅速降低至本底值,60 min内无变化,其结果满意。
3.3 精密度 取2份不同浓度的血清,平行测定镁浓度10次,批内CV值分别为1=0.87 mmol/L,s1=0.028,CV1=3.22%及2=0.92 mmol/L,s2=0.039,CV2=4.24%。批间1=0.872 mmol/L,s1=0.043,CV1=4.93%及2=0.918 mmol/L,CV2=5.33%。
3.4 回收率 于镁浓度为0.92 mmol/L的混合血清中分别加入浓度分别为0.2,0.6及0.8 mmol/L的镁标准,测得回收值依次为0.195,0.602及0.825 mmol/L,回收率分别为97.5%,100.3%及103.1%。
3.5 方法学比较 用反向法及原法同时测定10份外观正常血清,其结果分别为反向法=0.884 mmol/L及原法=0.897 mmol/L,P>0.05。10份TG浓度在3.4~23 mmol/L的血清标本:(±s)反向法=0.817±0.21 mmol/L,原法=1.32±0.47,P<0.05。脂血中镁浓度原法明显高于本法。10份脂血标本用乙醚去脂后再测,其结果为(±s)原法=0.823±0.29 mmol/L,与反向法比较P>0.05。脂血所致的结果增高,是由于样本本底干扰所致。
综上所述,用反向法测定血清镁浓度方法简便、快速、可有效地排除本底对吸光度的干扰,适用于脂血、母乳、奶制品、尿液等样本镁离子浓度测定,日常工作中对不适应直接比色法的标本最好用该法求得准确结果。
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