竹节参总皂苷镇痛作用的实验研究
发布时间：2015-07-02 14:42
【摘要】 目的观察竹节参总皂苷的镇痛作用，以确定竹节参镇痛作用的活性部位。方法镇痛实验采用热板法和扭体法，观察灌胃不同剂量的竹节参总皂苷后小鼠的痛阈值和扭体反应的次数。结果竹节参总皂苷高、低剂量组对小鼠痛阈值明显增加，扭体次数明显减少(p<0.01)。结论竹节参总皂苷具有明显的镇痛作用，是竹节参发挥镇痛作用的主要活性部位。
【关键词】竹节参总皂苷活性部位镇痛作用药理作用
studyontheanalgesiceffectsoftotalpanaxjaponicussaponins
wendejian,zhangcuilan,chenguodong,dongxinggao,xiaobenjian
lcollegeofhubeiinstitutefornationalities,enshi445000,china；
atedhospitalofhubeiinstitutefornationalities,enshi445000,china
abstract：objectivetostudytheanalgesiceffectsoftotalpanaxjaponicussaponins(tpjs)sthehot-platemodelandbodytewereadministeredwithdifferentdosesoftpjs,sinthemiceadministeredwithhighorlowdoseoftpjs,thepainthresholdwasincreasedandthetwistingnumberwasmarkedlyreduced(p<0.01).eleadingeffectivepartofpanaxjaponicusonanalgesiceffects.
keywords：totalpanaxjaponicussaponins(tpjs);effectivepart;analgesiceffect;pharmacologicalactivities
竹节参为五加科植物竹节参.的干燥根茎，为常用中药，味甘、微苦，性温，归肝、脾、肺经，具滋补强壮，散淤止痛，止血祛痰的功效。用于病后虚弱、劳咳咯血、咳嗽痰多、跌打损伤［1］等证。研究表明竹节参复方制剂对小鼠疼痛模型具有明显的镇痛作用［2］，而关于其作用的物质基础未见相关报道。为了探讨竹节参镇痛作用的活性部位，本实验对竹节参主要成分竹节参总皂苷（totalpanaxjaponicussaponins，tpjs）进行了镇痛作用研究，以便为竹节参的临床应用和进一步研究开发提供理论依据。
1材料与方法
1.1药材竹节参由宣恩民丰药业有限公司提供。
1.2动物
昆明种小鼠，18～22g，湖北省实验动物中心提供。
1.3药物与试剂
盐酸吗啡(沈阳第一制药厂生产)；0.6%醋酸溶液的配制：取0.6ml冰醋酸(ar，武汉市江北化学试剂有限责任公司)加入100ml蒸馏水中搅匀即得，备用；其它化学试剂均为分析纯。
1.4供试药液(tpjs水溶液)的制备
将适量竹节参粉碎过40目筛，加甲醇浸泡过夜，超声提取2次，45min/次，合并滤液，将滤液蒸干，再溶于水中，用乙醚提取3次，去除脂类物质，醚液弃去，水层再用水饱和的正丁醇提取4次，合并正丁醇液，用水洗3次，最后将正丁醇液减压浓缩至干，即得tpjs。取适量tpjs加水溶解，调ph至中性，g4垂熔玻璃漏斗滤过，使成100mg/ml水溶液。冷藏备用。
1.5小鼠镇痛实验热板法
按文献［3］，取18～22g雌性昆明种小鼠，放在恒温测痛仪上(55±0.5)℃，秒表记录小鼠放入到舔后足为痛阈指标(以秒计)，对每只小鼠进行预选，将痛阈不到5s，超过30s及喜跳者剔除，将预选合格小鼠40只，随机分为4组，每组10只。a组(生理盐水组，灌胃等容积生理盐水)；b组，(吗啡组，腹腔注射0.2%吗啡10mg/kg作阳性对照)；ch组(tpjs高剂量组)；cl组(tpjs低剂量组)，高、低剂量组按2,1g/kg分别灌胃tpjs水溶液。给药前，测定各鼠痛阈值2次，取其均值为小鼠正常痛阈值，给药后于30，60，90，120min各测痛阈值一次，痛阈值超过60s者以60s计算。
1.6小鼠镇痛实验扭体法
方法按文献［4］。取小鼠40只，体重18～22g，雌雄均可，分组及给药同热板法，给药30min后，各鼠腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2ml，观察并记录15min的扭体反应次数，按下式计算抑制率，抑制率(%)=(1-给药组扭体反应次数/空白组扭体反应次数)×100%。
1.7统计方法
各组数据以±s表示，组间差异比较用t检验，由spss11.5系统完成。
2结果
2.1tpjs对热板法所致小鼠痛阈的影响
结果表明，ch，cl组小鼠在用药后30min至120min痛阈值均高于a组，有统计学意义(p<0.01，p<0.05)，给药后30min起效，60min作用达到高峰，持续至120min，表现出快速而持久的镇痛作用，但其镇痛作用与吗啡相比仍然有统计学意义(p<0.01)。结果见表1。表1tpjs对热板所致小鼠痛阈的影响(略)
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2.2tpjs对醋酸所致小鼠扭体反应的影响
结果表明，ch，cl组小鼠对醋酸所致小鼠扭体反应次数明显低于a组（p<0.01），抑制率为74.8%和47.7%，表明tpjs具有较强的镇痛作用，但其镇痛作用与吗啡相比仍然有统计学意义(p<0.01)。结果见表2。表2tpjs对醋酸所致小鼠扭体反应的影响(略)
3讨论
当前用于风湿病治疗的药物效果均不理想，而且毒性比较大。竹节参在民间主要用于风湿病的治疗，并研制了以竹节参为主
的复方制剂，以医院内部制剂的方式在湖北恩施地区使用，在临床上取得了较好的治疗效果，tpjs是竹节参的主要成分，所以本实验对tpjs进行了提取并研究其镇痛作用，以便为竹节参的临床应用和进一步的研究开发提供理论支持或参考。
小鼠热板法和扭体法镇痛实验结果表明，tpjs对物理性、化学性致痛因子所致疼痛都有明显的镇痛作用，起效较快，作用时间较长，镇痛作用随给药剂量的增加而增强，提示tpjs是竹节参发挥镇痛作用的主要有效部位。tpjs镇痛的作用机制还有待进一步研究。
【参考文献】
［1］国家药典委员会.
【关键词】竹节参总皂苷活性部位镇痛作用药理作用
studyontheanalgesiceffectsoftotalpanaxjaponicussaponins
wendejian,zhangcuilan,chenguodong,dongxinggao,xiaobenjian
lcollegeofhubeiinstitutefornationalities,enshi445000,china；
atedhospitalofhubeiinstitutefornationalities,enshi445000,china
abstract：objectivetostudytheanalgesiceffectsoftotalpanaxjaponicussaponins(tpjs)sthehot-platemodelandbodytewereadministeredwithdifferentdosesoftpjs,sinthemiceadministeredwithhighorlowdoseoftpjs,thepainthresholdwasincreasedandthetwistingnumberwasmarkedlyreduced(p<0.01).eleadingeffectivepartofpanaxjaponicusonanalgesiceffects.
keywords：totalpanaxjaponicussaponins(tpjs);effectivepart;analgesiceffect;pharmacologicalactivities
竹节参为五加科植物竹节参.的干燥根茎，为常用中药，味甘、微苦，性温，归肝、脾、肺经，具滋补强壮，散淤止痛，止血祛痰的功效。用于病后虚弱、劳咳咯血、咳嗽痰多、跌打损伤［1］等证。研究表明竹节参复方制剂对小鼠疼痛模型具有明显的镇痛作用［2］，而关于其作用的物质基础未见相关报道。为了探讨竹节参镇痛作用的活性部位，本实验对竹节参主要成分竹节参总皂苷（totalpanaxjaponicussaponins，tpjs）进行了镇痛作用研究，以便为竹节参的临床应用和进一步研究开发提供理论依据。
1材料与方法
1.1药材竹节参由宣恩民丰药业有限公司提供。
1.2动物
昆明种小鼠，18～22g，湖北省实验动物中心提供。
1.3药物与试剂
盐酸吗啡(沈阳第一制药厂生产)；0.6%醋酸溶液的配制：取0.6ml冰醋酸(ar，武汉市江北化学试剂有限责任公司)加入100ml蒸馏水中搅匀即得，备用；其它化学试剂均为分析纯。
1.4供试药液(tpjs水溶液)的制备
将适量竹节参粉碎过40目筛，加甲醇浸泡过夜，超声提取2次，45min/次，合并滤液，将滤液蒸干，再溶于水中，用乙醚提取3次，去除脂类物质，醚液弃去，水层再用水饱和的正丁醇提取4次，合并正丁醇液，用水洗3次，最后将正丁醇液减压浓缩至干，即得tpjs。取适量tpjs加水溶解，调ph至中性，g4垂熔玻璃漏斗滤过，使成100mg/ml水溶液。冷藏备用。
1.5小鼠镇痛实验热板法
按文献［3］，取18～22g雌性昆明种小鼠，放在恒温测痛仪上(55±0.5)℃，秒表记录小鼠放入到舔后足为痛阈指标(以秒计)，对每只小鼠进行预选，将痛阈不到5s，超过30s及喜跳者剔除，将预选合格小鼠40只，随机分为4组，每组10只。a组(生理盐水组，灌胃等容积生理盐水)；b组，(吗啡组，腹腔注射0.2%吗啡10mg/kg作阳性对照)；ch组(tpjs高剂量组)；cl组(tpjs低剂量组)，高、低剂量组按2,1g/kg分别灌胃tpjs水溶液。给药前，测定各鼠痛阈值2次，取其均值为小鼠正常痛阈值，给药后于30，60，90，120min各测痛阈值一次，痛阈值超过60s者以60s计算。
1.6小鼠镇痛实验扭体法
方法按文献［4］。取小鼠40只，体重18～22g，雌雄均可，分组及给药同热板法，给药30min后，各鼠腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2ml，观察并记录15min的扭体反应次数，按下式计算抑制率，抑制率(%)=(1-给药组扭体反应次数/空白组扭体反应次数)×100%。
1.7统计方法
各组数据以±s表示，组间差异比较用t检验，由spss11.5系统完成。
2结果
2.1tpjs对热板法所致小鼠痛阈的影响
结果表明，ch，cl组小鼠在用药后30min至120min痛阈值均高于a组，有统计学意义(p<0.01，p<0.05)，给药后30min起效，60min作用达到高峰，持续至120min，表现出快速而持久的镇痛作用，但其镇痛作用与吗啡相比仍然有统计学意义(p<0.01)。结果见表1。表1tpjs对热板所致小鼠痛阈的影响(略)
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2.2tpjs对醋酸所致小鼠扭体反应的影响
结果表明，ch，cl组小鼠对醋酸所致小鼠扭体反应次数明显低于a组（p<0.01），抑制率为74.8%和47.7%，表明tpjs具有较强的镇痛作用，但其镇痛作用与吗啡相比仍然有统计学意义(p<0.01)。结果见表2。表2tpjs对醋酸所致小鼠扭体反应的影响(略)
3讨论
当前用于风湿病治疗的药物效果均不理想，而且毒性比较大。竹节参在民间主要用于风湿病的治疗，并研制了以竹节参为主
小鼠热板法和扭体法镇痛实验结果表明，tpjs对物理性、化学性致痛因子所致疼痛都有明显的镇痛作用，起效较快，作用时间较长，镇痛作用随给药剂量的增加而增强，提示tpjs是竹节参发挥镇痛作用的主要有效部位。tpjs镇痛的作用机制还有待进一步研究。
【参考文献】
［1］国家药典委员会.