为君俏颜
实验目的1、了解旋光仪的构造和旋光度的测定原理2、掌握旋光仪的使用方法和比旋光度的计算方法预习要求理解定义;了解影响因素;了解测定意义;了解碳水化合物的变旋光现象;思考本实验中如何保护旋光仪。实验原理当一束单一的平面偏振光通过手性物质时,其振动方向会发生改变,此时光的振动面旋转一定的角度,这种现象称为旋光现象。物质的这种使偏振光的振动面旋转的性质叫做旋光性,具有旋光性的物质叫做旋光性物质或旋光物质。许多天然有机物都具有旋光性。由于旋光物质使偏振光振动面旋转时,可以右旋(顺时针方向,记做“+”),也可以左旋(逆时针方向,记做“—”),所以旋光物质又可分为右旋物质和左旋物质。由单色光源(一般用钠光灯)发出的光,通过起偏棱镜(尼可尔棱镜)后,转变为平面偏振光(简称偏振光)。当偏振光通过样品管中的旋光性物质时,振动平面旋转一定角度。调节附有刻度的检偏镜(也是一个尼可尔棱镜),使偏振光通过,检偏镜所旋转的度数显示在刻度盘上,此即样品的实测旋光度α。仪器和试剂旋光仪、洗瓶、胶头滴管、滤纸;蒸馏水、5%葡萄糖溶液、未知浓度的葡萄糖溶液实验内容1.旋光仪的结构旋光度可以由旋光仪来测定。旋光仪有两种:一种是数字自动显示测定结果的自动旋光仪,另一种是目测刻度而得结果圆盘旋光仪。2.旋光度的测定(1)样品溶液的配制准确称取一定量的样品,在50ml的容量瓶中配成溶液。通常可以选用水、乙醇、氯仿作溶剂。若用纯液体样品直接测试,则测定前只需确定其相对密度即可。由于葡萄糖溶液具有变旋光现象,所以待测葡萄糖溶液应该提前24小时配好,以消除变旋光现象,否则测定过程中会出现读数不稳定的现象。(2)预热打开旋光仪电源开关,预热5~10分钟,待完全发出钠黄光后方可观察使用。(3)调零在测定样品前,必须先用蒸馏水来调节旋光仪的零点。洗净样品管后装入蒸馏水,使液面略凸出管口。将玻璃盖沿管口边缘轻轻平推盖好,不要带入气泡,旋紧(随手旋紧不漏水为止,旋得太紧,玻片容易产生应力而引起视场亮度发生变化,影响测定准确度)上螺丝帽盖。将样品管擦干后放入旋光仪,合上盖子。开启钠光灯,将刻度盘调在零点左右,会出现大于或小于零度视场的情况。如图10-3中a和b所示。旋动粗动、微动手轮,使视场内三部分的亮度一致,即为零点视场,如图10-3c所示。记下刻度盘读数,重复调零4~5次取平均值。若平均值不为零而存在偏差值,应在测量读数中将其减去或者加上。a.大于或小于零度视场 b.零度视场 c.小于或大于零度视场(4)测定样品的测定和调零方法相同。每次测定之前样品管必须先用蒸馏水清洗1~2遍,再用少量待测液润洗2~3次遍,以免受污物的影响,然后装上样品进行测定。旋动刻度盘,寻找较暗照度下亮度一致的零度视场。若读数是正数为右旋;读数是负数为左旋。读数与零点值之差,即为样品在测定温度时的旋光度。记下测定时样品的温度和样品管长度。测定完后倒出样品管中溶液,用蒸馏水把管洗净,擦干放好。按以上方法测定5%葡萄糖溶液的旋光度4~5次,测定值填入下表相应位置。再测定未知浓度的葡萄糖溶液的旋光度4~5次,测定值填入下表相应位置。(5)数据记录与处理
漳南一邺
仪器和试剂
旋光仪、洗瓶、胶头滴管、滤纸;
蒸馏水、5%葡萄糖溶液、未知浓度的葡萄糖溶液
实验内容
1.旋光仪的结构
旋光度可以由旋光仪来测定。旋光仪有两种:一种是数字自动显示测定结果的自动旋光仪,另一种是目测刻度而得结果圆盘旋光仪。
2.旋光度的测定
(1)样品溶液的配制
准确称取一定量的样品,在50ml的容量瓶中配成溶液。通常可以选用水、乙醇、氯仿作溶剂。若用纯液体样品直接测试,则测定前只需确定其相对密度即可。
由于葡萄糖溶液具有变旋光现象,所以待测葡萄糖溶液应该提前24小时配好,以消除变旋光现象,否则测定过程中会出现读数不稳定的现象。
(2)预热
打开旋光仪电源开关,预热5~10分钟,待完全发出钠黄光后方可观察使用。
实验原理
当一束单一的平面偏振光通过手性物质时,其振动方向会发生改变,此时光的振动面旋转一定的角度,这种现象称为旋光现象。物质的这种使偏振光的振动面旋转的性质叫做旋光性,具有旋光性的物质叫做旋光性物质或旋光物质。许多天然有机物都具有旋光性。由于旋光物质使偏振光振动面旋转时,可以右旋(顺时针方向,记做“+”),也可以左旋(逆时针方向,记做“—”),所以旋光物质又可分为右旋物质和左旋物质。
由单色光源(一般用钠光灯)发出的光,通过起偏棱镜(尼可尔棱镜)后,转变为平面偏振光(简称偏振光)。当偏振光通过样品管中的旋光性物质时,振动平面旋转一定角度。调节附有刻度的检偏镜(也是一个尼可尔棱镜),使偏振光通过,检偏镜所旋转的度数显示在刻度盘上,此即样品的实测旋光度α。
今天属于1
葡萄糖氧化酶法
1、原理:葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化反应中释放过氧化氢,过氧化氢在过氧化物酶催化下与色原性氧受体缩合为红色化合物,此物质在505mm处有最大吸收峰,其吸光度值和葡萄糖量成正比。
2、将血清和酶酚混合试剂混匀,置于适宜环境中保温保存,反应完毕后用调零过的分光光度计测定产物于505mm处吸光度值。根据光度值查表或计算可得到样品中葡萄糖浓度。
扩展资料
葡萄糖氧化酶法:特异性强、价廉、方法简单。其正常值:空腹全血为~毫摩尔/升(65~95毫克/分升),血浆为~毫摩尔/升(70~110毫克/分升)。
葡萄糖测定常用的两种方法中,葡萄糖氧化酶法准确度和精密度符合临床要求,操作简便,是血糖测定的常规检验方法,也可用于脑脊液葡萄糖浓度测定;己糖激酶法为国际临床化学和实验室医学联盟(IFCC)推荐的参考方法。
参考资料来源:百度百科-血糖测定
参考资料来源:百度百科-葡萄糖测定
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