大肠菌群测定毕业论文

由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，即：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。因此大肠菌群的检测一般都是按照它的定义进行。国内采用的进出口食品大肠菌群检测方法主要有国家标准和原国家商检局制订的行业标准。两个标准方法在检测程序上略有不同。（一）国家标准：国家标准采用三步法，即：乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，观察菌落形态。证实试验：挑取平板上的可疑菌落，进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36±1℃培养24±2h，观察产气情况。报告：根据证实为大肠杆菌阳性的管数，查mpn表，报告每1ml（g）大肠菌群的mpn值。具体操作参见《中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验大肠菌群测定》现行有效新国标：（二）原国家商检局制订的行业标准，等效采用美国fda的标准方法，用于对出口食品中的大肠杆菌进行检测。本方法采用两步法：推测试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管lst肉汤。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。证实试验：将产气管培养物接种煌绿乳糖胆盐（bglb）肉汤管中，36±1℃培养48±2h，观察是否产气。以bglb产气为阳性。查mpn表，报告每ml(g)样品中大肠菌群的mpn值。具体操作参见sn0169-92《中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法》

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微生物一、大肠菌群的检测 第一法 大肠菌群MPN计数法 第二法 大肠菌群平板计数法 月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤:称取溶于1000ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装于有倒立发酵管的试管中，每管10ml，121℃高压灭菌15min后备用。双料除蒸馏水外其他成分加倍。 煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤：称取30g溶于1000ml蒸馏水中分装 ，经115℃15min高压灭菌备用。 无菌生理盐水：称取溶于1L蒸馏水中。分装于250ml的锥形瓶中，121℃高压灭菌15min后备用结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）：称取溶于1L蒸馏水中，充分摇匀，加热煮沸2min冷却至50℃，倾注平板。 无菌 1 mol/L NaOH：称取40 g氢氧化钠溶于1 000 mL蒸馏水中，121 ℃高压灭菌15 min。 无菌 1 mol/L HCl：移取浓盐酸90 mL，用蒸馏水稀释至1 000 mL，121 ℃高压灭菌15 min。二、大肠菌群的检测 第一法 大肠菌群MPN计数法 称取乳糖胆盐发酵培养基溶于1000ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装于有倒立发酵管的试管中，每管10ml，115℃高压灭菌15min后备用。双料除蒸馏水外其他成分加倍。 伊红美蓝琼脂平板：称取伊红美蓝琼脂溶于1000ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装、115℃高压灭菌15min后备用。 乳糖发酵管：称取乳糖发酵培养基溶于1000ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装于有倒立发酵管的试管中，每管10ml，115℃高压灭菌15min后备用 无菌生理盐水：称取溶于1L蒸馏水中。分装于250ml的锥形瓶中，121℃高压灭菌15min后备用革兰氏染色按GB/T4789-2003中2规定。

大肠菌群是指一群能发酵乳糖、产酸(培养基原来的颜色是红色的，如果产酸会变成黄色)、产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。食品检出大肠菌群，则表示该食品曾受粪便污染。结果报告为每100ml（g）样品中大肠菌群的最近似数（MPN）设备和材料：1. 温箱：36±1度2. 冰箱：0-4度3. 恒温水浴：±度4. 天平5. 显微镜6. 均质器或乳苯7. 平皿：直径为90mm8. 试管9. 吸管10. 广口瓶或三角烧瓶：容量为500ml11. 玻璃珠：直径为5mm左右12. 酒精灯13. 试管架培养基和试剂：1. 乳糖胆盐发酵管2. 伊红美蓝琼脂平板3. 乳糖发酵管4. EC肉汤5. 磷酸盐缓冲稀释液6. 生理盐水7. 革兰氏染色液操作步骤：）.检样稀释 以无菌操作将检样25ml(或g)放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释玻璃瓶内（瓶内予置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳苯内，经充分振摇或研磨作成1：10的均匀稀释液。固体检样最好用均质器，以8000-10000r/min 的速度处理min,作成1：10的均匀稀释液。 用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混均，作成1：100的稀释液 另取1ml灭菌吸管，按上条操作依次做成10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支1ml灭菌吸管。 根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种3管。 乳糖发酵试验将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1ml以上者，用双料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管，置36±1度温箱内，培养24±2小时，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，则按下列程序进行。 分离培养将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36±1度温箱内,培养18-24小时，然后取出，观察菌落形态，并做革兰色染色和验实试验。 证实试验在上述平板上，挑取可疑的大肠菌群1-2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36±1度温箱内培养24±2小时，观察产气情况凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无蚜苞杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。 报告根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每10ml(g)大肠菌群的mpn值。8 粪大肠菌群用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管培养物（见条）转种于EC肉汤管内，置±度水浴箱内（水浴箱内的水面应高于EC肉汤液面），培养24±2小时，经培养后，如所有EC肉汤管均不产气，则可报告为阴性；如有产气者，则将所有产气的EC肉汤分别转种于伊红美蓝琼脂平板上，置36±1度培养18-24小时，凡平板上有典型菌落者，则证实为粪大肠菌群阳性。 结果报告根据证实为粪大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表，报告每100ml（g）粪大肠菌群的MPN值

大肠菌群是标示食品是否被污染的指标