毕业论文悬挂摇床设计说明

营养条件包括碳源 氮源 生长因子 （诱导底物）等培养条件包括温度 ph 发酵时间 接种量 装液量 摇床转速等要确定最佳的条件 需要做单因素试验 查看不同物质 或者同种物质不同量对产物及生长的影响 想要确定综合条件的影响 就要根据单因素试验结果做正交试验 或者是pb试验、响应面法（响应面法是现代微生物条件优化最合理最科学的方法了），查看所有影响因素的相互作用对产物形成及生长的影响测定微生物生长 可以考虑用分光光度计法测定不同时间的生长od值测定产物的形成 就要看你希望得到的产物是什么东西了，根据物质的性质设计测定反应，如果是蛋白 或者酶 可以通过酶促反应试验测得产物的生成量。

对，对，错，对，对，错，错。培养基配制的基本过程 1.配制溶液 向容器内加入所需水量的一部分，按照培养基的配方，称取各种原料，依次加入使其溶解，最后补足所需水分。对蛋白胨、肉膏等物质，需加热溶解，加热过程所蒸发的水分，应在全部原料溶解后加水补足。 配制固体培养基时，先将上述已配好的液体培养基煮沸，再将称好的琼脂加入，继续加热至完全融化。并不断搅拌，以免琼脂糊底烧焦。 2.调节pH值 用pH试纸（或pH电位计、氢离子浓度比色计）测试培养基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH进行调节，直到调节到配方要求的pH值为止。 3.过滤 用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。用纱布过滤时，最好折叠成六层，用滤纸过滤时，可将滤纸折叠成瓦棱形，铺在漏斗上过滤。 4.分装 已过滤的培养基应进行分装。如果要制作斜面培养基，须将培养基分装于试管中。如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基，则须将培养基分装于锥形瓶内。 分装时，一手捏松弹簧夹，使培养基流出，另一只手握住几支试管或锥形瓶，依次接取培养基。分装时，注意不要使培养基粘附管口或瓶口，以免浸湿棉塞引起杂菌污染。 装入试管的培养基量，视试管和锥形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培养基时，每只15×150毫米的试管，约装3～4毫升（1/4～1/3试管高度），如制作深层培养基，每只20×220毫米的试管约装12～15毫升。每只锥形瓶装入的培养基，一般以其容积的一半为宜。 5.加棉塞 分装完毕后，需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是过滤空气，避免污染。棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作，不要用脱脂棉，以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。制作棉塞时，要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度，揪取手掌心大小一块，铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中，用右手食指插入棉花中部，同时左手食指与姆指稍稍紧握，就会形成1个长棒形的棉塞。棉塞作成后，应迅速塞入管口或瓶口中，棉塞应紧贴内壁不留缝隙，以防空气中微生物沿皱折侵入。棉塞不要过紧过松，塞好后，以手提棉塞、管、瓶不下落为合适。棉塞的2/3应在管内或瓶内，上端露出少许棉花便于拔取。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札，准备灭菌。 6.制作斜面培养基和平板培养基 培养基灭菌后，如制作斜面培养基和平板培养基，须趁培养基未凝固时进行。 (1)制作斜面培养基。在实验台上放1支长～1米左右的木条，厚度为1厘米左右。将试管头部枕在木条上，使管内培养基自然倾斜，凝固后即成斜面培养基。 (2)制作平板培养基。将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上，点燃酒精灯，右手托起锥形瓶瓶底，左手拔下棉塞，将瓶口在酒精灯上稍加灼烧，左手打开培养皿盖，右手迅速将培养基倒入培养皿中，每皿约倒入10毫升，以铺满皿底为度。铺放培养基后放置15分钟左右，待培养基凝固后，再5个培养皿一叠，倒置过来，平放在恒温箱里，24小时后检查，如培养基末长杂菌，即可用来培养微生物。一、平板划线分离法 由接种环以菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。 二、稀释倒平板法 先将待分离的材料用无菌水作一系列的稀释（如 1 ∶ 10 、 1 ∶ 100 、 1 ∶ 1000 、 1 ∶ 10000 …），然后分别取不同稀释液少许，与已溶化并冷却至 45 ℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可出出菌落。如果稀释得当，在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的。随后挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养。 三、单孢子或单细胞分离法 采取显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以获得纯培养，称为单细胞（单孢子）分离法。单细胞他离法的难度与细胞或个体的大小成反比，较大的微生物如藻类、原生动物较容易，个体较小的细菌则较难。在显微镜下使用单孢子分离器进行机械操作，挑取单孢子或单细胞进行培养。也可以采用特制的毛细管在载玻片的琼脂涂层上选取单孢子并切割下来，然后移到合适的培养基进行培养。单细胞分离法对操作技术有比较高的要求，多限于高度专业化的科学研究中采用。 四、利用选择性培养基分离法 各种微生物对不同的化学试剂、染料、抗生素等具有不同的抵抗能力，利用这些特性可配制合适某种微生物而限制其它微生物生长的选择培养基，用它来培养微生物以获得纯培养。 另外，还可以将样品预处理，消除不希望分离到的微生物。如加温杀死营养菌体而保留芽孢，过滤去除丝状菌体而保留单孢子。

northern blot是什么东西

（一）仪器恒温水浴箱，电泳仪，凝胶成像系统，真空转移仪，真空泵，UV 交联仪，杂交炉，恒温摇床，脱色摇床，漩涡振荡器，分光光度计，微量移液器，电炉（或微波炉），离心管，烧杯，量筒，三角瓶，等。（二）材料总RNA样品或mRNA样品，探针模板DNA(25 ng)，尼龙膜（三）试剂NorthernMax Kit（Cat. # 1940，Ambion, Inc.），琼脂糖，DEPC, X光底片，底片暗盒，Random Primer， dNTP Mixture，111 TBq/mmol[a-32P]dCTP，Exo-free Klenow Fragment和10 X Buffer, Sephadex G-50,SDS，双氧水, 灭菌水等。[方法与步骤]1. 用具的准备：180度烤器皿：三角锥瓶、量筒、镊子、刀片等4小时。电泳槽：清洗梳子和电泳槽，并用双氧水浸泡过夜，用DEPC水冲洗，干燥备用。处理DEPC水(2 L)备用。2．用RNAZaP去除用具表面的RNase酶污染用RNAZap擦洗梳子，电泳槽，刀片等，然后用DEPC水冲洗二次，去除RNAZap。3．制胶：1． 称取 琼脂糖加入三角锥瓶中，加入水后，微波炉加热至琼脂糖完全熔解。60℃空气浴平衡溶液 (需加DEPC水补充蒸发的水分)2． 在通风厨中加入的10＊Denaturing Gel buffer，轻轻振荡混匀。注意尽量避免产生气泡。3． 将熔胶倒入制胶板中，插上梳子如果胶溶液上存在气泡，可以用热的玻璃棒或其它方法去除，或将气泡推到胶的边缘。注：胶的厚度不能超过。4．胶在室温下完全凝固后，将胶转移到电泳槽中，加入1x MOPS Gel Running buffer盖过胶面约1cm，小心拔出梳子。（配制250ml 1＊MOPS Gel Running buffer，在电泳过程中补充蒸发的buffer。）5．检查点样孔。4. RNA样品的制备在RNA样品中加入3倍体积的formaldehyde load dye和适当的EB（终浓度为10ug/ml）。混匀后，65℃空气浴15min。短暂低速离心后，立即放置于冰上5min。5. 电泳：1. 将RNA样品小心加到点样孔中。2. 在5V/cm下跑胶（5x14cm）。在电泳过程中，每隔30min短暂停止电泳，取出胶，混匀两极的电泳液后继续电泳。当胶中的溴纷蓝（500bp）接近胶的边缘时终止电泳。3. 紫外灯下，检验电泳情况，并用尺子测量18S、28S、溴纷蓝到点样孔的距离。注意不要让胶在紫外灯下曝光太长时间。6. 转膜1．用3%双氧水浸泡真空转移仪后，用DEPC水冲洗。2．用RNAZap擦洗多孔渗水屏和塑胶屏，用DEPC水冲洗二次。3．连接真空泵和真空转移仪，剪取一块适当大小的膜（膜的四边缘应大于塑胶屏孔口的5mm），膜在Transfer buffer浸湿5分钟后，放置在多孔渗水屏的适当位置。4．盖上塑胶屏，盖上外框，扣上锁。5．将胶的多余部分切除，切后的胶四边缘要能盖过塑胶屏孔，并至少盖过边缘约2mm，以防止漏气。6．将胶小心放置在膜的上面，膜与胶之间不能有气泡。7．打开真空泵，使压强维持在50~58mbar；立即将transfer buffer加到胶面和四周。每隔10min在胶面加上1ml transfer buffer，真空转移2小时。8．转膜后，用镊子夹住膜，于1x MOPS Gel Running buffer中轻轻泡洗10秒，去除残余的胶和盐。9．用吸水纸吸取膜上多余的液体后，将膜置于UV交联仪中自动交联。10．将胶和紫外交联后的膜，在紫外灯下检测转移效率。(避免太长的紫外曝光时间)12．将膜在-20℃保存。7. 探针的制备1．在离心管中配制以下反应液：模板DNA(25 ng) 1ulRandom Primer 2ul灭菌水 11ul总体积：14ul2．95°C加热3分钟后，迅速放置于冰冷却5min。3．在离心管中按下列顺序加入以下溶液：10×Buffer Mixture TBq/mmol[a-32P]dCTP 5 ulExo-free Klenow Fragment 1 ul4．混匀后（25ul），37°C下反应30分钟。短暂离心，收集溶液到管底。5．65°C加热5min使酶失活。 8. 探针的纯化及比活性测定：1．准备凝胶：将1g凝胶加入30ml的DEPC水中，浸泡过夜。用DEPC水洗涤膨胀的凝胶数次，以除去可溶解的葡聚糖。换用新配制的TE（）。2．取1ml一次性注射器，去除内芯推扞，将注射器底部用硅化的玻璃纤维塞住，在注射器中装填Sephadex G-50凝胶。3．将注射器放入一支15ml离心管中，注射器把手架在离心管口上。1600g离心4分钟，凝胶压紧后，补加Sephadex G-50凝胶悬液，重复此步直至凝胶柱高度达注射器刻度处4．100ul STE缓冲液洗柱，1600g离心4min。重复3次。5．倒掉离心管中的溶液后，将一去盖的离心管置于管中，再将装填了Sephadex G-50凝胶的注射器插入离心管中，注射器口对准离心管。6．将标记的DNA样品加入25 ul STE，取出点样于DE8 paper上，其余上样于层析柱上。7．1600g离心4min，DNA将流出被收集在去盖的离心管中，而未掺入DNA的dNTP则保留在层析柱中。取己纯化的探针点样于． 测比活性(试剂比活要求:106cpm/ml）。 9．预杂交：1．将预杂交液在杂交炉中68℃预热，并漩涡使未溶解的物质溶解。2．加入适当的ULRAhyb到杂交管中(以100cm2 膜面积加入10mlULRAhyb杂交液)，42℃预杂交4 hr。10．探针变性：1．用10 mM EDTA将探针稀释10倍。2．90℃热处理稀释后探针10min后，立即放置于冰上5min。3．短暂离心，将溶液收集到管底。11．杂交：1．加入 ULTRAhyb到变性的探针中，混匀后，将探针加到预杂交液中。2．42℃杂交过夜（14~24hr）。杂交完后，将杂交液收集起来于－20℃保存。12．洗膜：1．低严紧性洗膜：加入Low Stringency Wash Solution#1 (100cm2膜面积加入20ml洗膜溶液)，室温下，摇动洗膜5min两次。2．高严紧性洗膜： 加入High Stringency Wash Solution#2 (100cm2膜面积加入20ml洗膜溶液)，42℃ 摇动洗膜20min两次。13．曝光：1． 将膜从洗膜液中取出，用保鲜膜包住，以防止膜干燥。2． 检查膜上放射性强度，估计曝光时间3． 将X光底片覆盖与膜上，曝光4． 冲洗X光底片，扫描记录结果。14．去除膜上的探针：将200ml （由DEPC水配制）煮沸后，将膜放入，室温下让SDS冷却到室温，取出膜，去除多余的液体，干燥后，可以保存几个月。15．杂交结果如果你只是做本科的毕业论文，这些差不多够用了，如果是做研究生论文或者是科研课题你给的条件太笼统了，你没有具体的东西怎么做计划书。如果你是专业人士建议去买本分子生物学试验指南吧，80多块钱是可以用一辈子的必备工具书。另外我northern做的比较少，westhern做的比较多一点。所以没什么太多经验给你。朋友，你只说要做个northern，有些东西怎么好给你。Northern只是一个实验步骤，和电泳、PCR一样本身没有任何意义，关键是你自己要通过northern达到一个什么目的，是通过杂交来大规模筛选你需要的RNA片断，还是通过northern来进行定性验证或者只是单纯的为了熟悉这一个实验的操作。另外你的探针和靶RNA是现成的还是需要特殊处理的也没有说，探针类型的不同在标记过程中也有区别，你的问题没有任何信息所以我也只有复制了一份基本的实验流程给你了。另外你说的试剂和价格问题，我只能这样告诉你。用什么试剂是根据你的经费情况决定的，只能根据你实际到手的经费来决定，如果钱多就多用进口的吧，不过探针标记的试剂盒一定要用好的推荐德国宝灵曼公司的地高辛试剂盒及尼龙膜。如果你是申报课题的话，往高处报吧，批下来肯定是打了很大折扣的。