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LuckyXue521
首页 > 毕业论文 > 毕业论文提取不出RNA怎么办

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kiki朱朱小猴子

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买个好的试剂盒,华越洋生物的植物RNA提取试剂盒,用了你就知道了。

124 评论

曲多多多

因为RNA容易降解,可用大公司的试剂盒。

147 评论

天生我翔2011

trizol提不出来rna的原因有可能是以下原因:

1)你的Trizol试剂核有无问题?2)研究材料是否新鲜,RNA容易降解,应妇80度保存。3)如果都没问题,你的操作有无问题?

trizol提取rna的步骤:(仅供参考)

用户需自备的试剂和材料

无水乙醇、氯仿、Glycogen(可能需要)、  Eppendorf管(RNase-free)、 Tips(RNase-free)

准备工作

RNase酶非常稳定,是导致RNA降解最主要的物质。它在一些极端的条件可以暂时失活,但限制因素去除后有迅速复性。用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂都不能是RNase完全失活。它广泛存在于人的皮肤上,因此,在与RNA制备有关的分子生物学实验时,必须戴手套。

RNase的又一污染源是取液器,根据取液器制造商的要求对取液器进行处理。一般情况下采用用DEPC配制的70%乙醇擦洗取液器的内部和外部,基本达到要求。取RNase-free的物品时必须戴手套。

料制品的处理

尽可能使用无菌,一次性塑料制品,已标明RNase-Free 的塑料制品,如没有开封使用过通常没有必要再次处理。对于国产塑料制品,原则上都必须处理方可使用。处理步骤如下:

璃玻和金属物品 250°C烘烤3小时以上。

从组织中提取总RNA

从细胞中提取总RNA

操作步骤

注:组织或细胞量过少,可酌情减少Trizol用量;组织或细胞用量过多,会引起DNA对RNA的污染;

高蛋白、脂肪或多糖类组织,肌肉组织或块状植物组织等,组织匀浆或液氮研磨后须4℃ 12,000g离心10min去掉不溶物,再进行下面操作,若顶层有脂肪物,则也须去掉;

热天提RNA,带手套是必须的,手是RNase的主要来源;

组织块用液氮研磨,效果最好,若没有液氮或电动匀浆器,可用手动匀浆器代替,此时组织块不宜过大,且需先用眼科剪刀将组织碱碱剪碎,然后再充分研磨。

217 评论

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