几分钟就好，只要你给钱就行了。
无论用什么网站进行论文查重都是很快的，几万字一般也就也就三四分钟而已，有时甚至一两分钟就出查重报告了。毕竟是机器计算嘛，相当快的。
知网查重结果时间半小时到一小时左右。
如果是自费通过知网查重，一般检测时间半小时到一小时左右，如果是通过学校的知网检测系统查重，一般检测时间需要1-4天左右，因为是等待学校统一出结果。知网检测时间为早上8点到晚上10点，夜里提交的一般需要次日上午10点左右出结果。
社会评价
从本质看，主打知识服务的知网，和其他学术期刊库一样，都是学术生态圈的重要组成部分，其性质属于对知识生产起帮扶作用的臂肘羽翼，但绝不是控制知识生产的大脑中枢。
其功能体现在服务知识创新上，是衬托红花的绿叶，而不应是垄断知识、借机牟利的“链顶猎食者”。羊毛出在羊身上，不把羊拖垮是最起码的底线。
当我们把论文提交到查重系统后，我们可以不用管它，系统会自动检测论文的重复性，并生成一份查重报告，这个过程需要一定的时间，通常需要30分钟来完成检测。但是论文的查重时间也会受到很多因素的影响，如有论文字数，系统数据库，查重人数，提交论文的时间等。
查重的时候可能会遇到很多问题，这些问题对于第一次写论文的同学来说可能很难轻松解决。比如为什么查重的时候一直显示在检测中？接下来，paperfree小编给大家讲解。 第一，论文查重正在在检测为什么 1.以学校内部查重为例介绍:论文查重可能需要很多时间，所以会一直处于检测状态。造成这种现象的主要原因是查重系统的数据库很大，所以比较核对每个人的论文和数据库中的各种内容需要很长时间，但从查重系统获得的查重报告会相对准确可靠。 2.除了数据库丰富造成的查重时间长之外，还可能是因为提交的论文格式错误，容易导致局部甚至整体检测错误，导致查重难以正常进行。 3、论文查重时一直处于检测状态，一般需要10-30分钟检测时间，高峰期，可能需要的时间会更长，大家的论文多数情况下必须在调查后再次修改，考虑到调查所需的时间，提前调查 第二，论文查重解析错误的原因 1.如果查重时检测错误，可能是字符过多或信息不全造成的。这时候就要求大家适当删除补充论文。 2.此外，这也可能是由于个人提交的论文都是空文档造成的，这很可能是由于每个人在论文处于编辑状态时提交的。
问题一：在知网上查重论文一般需要多长时间 可以问问期刊编辑部能不能交加急费，加急费大约一千左右。 问题二：知网查重要多久啊 不是都说15分钟么 这个是最快是半小时，论文检测高峰期的话是2个小时左右，如果晚上9点以后提交那么第二天才可以出来结果。 问题三：paperpass 论文查重要多长时间 具体可以要你看你论文的字数长度的 常德话可能会久点 你可以用PR(paperrater)论文查重系统试试 这个查重检测差不多是2-5分钟左右查重检测结果出来 问题四：论文检测需要多长时间 一般情况下，用论文检测系统检测论文在20分钟内就会出检测结果和检测报告，大部分情况下几分钟就可以检测完成。然而，随着论文检测高峰期的到来，很多学生在使用格子达免费论文检测系统进行检测时，发现论文一直处于检测中，检测时页面一直刷新也没什么作用？ 论文检测系统在高峰期进行检测时，由于检测人数很大（80%的毕业生都会优先选择格子达免费论文检测系统进行检测）可能需1-2个小时，大家一定一要耐心等待检测结果。尤其在检测英文论文时，由于需要链接国外服务器时间可能会更长。 问题五：论文检测一般需要多长时间出结果 我这个论文修改专家提醒你，除了知网检测时间较长，小时之间，其他检测都很快，几十秒到十几分钟！ 另外强烈提醒： 1、学校要求用什么检测，就用什么检测。不然用了其他检测，实际标红文字不一样，修改起来南辕北辙，事倍功半！现在高校多以知网（小时）、维普（10分钟左右）、PP（10分钟左右）为准！ 2、尽量不要用非正规检测，不然，你觉得你的论文上传后会安全吗？ 问题六：知网论文检测一般需要多长时间 paperRater一般是2-5分钟的样子就要可以出查重报告结果的 但也有看你讠仑文的长度的 如果你的讠仑文很长的话查重结果可能出来的结果就慢些 只要稍稍耐心就是啦，老子这也可以安排。 问题七：知网查重要多长时间？ 一般5分钟以内就能完成。 我记得去年我毕业查重的时候，等上一两分钟就出结果了。 问题八：论文查重paperpass需要多久 论文查重paperrater一般是在2-5分钟就能检测完成的 不过论文查重是系统进行自动识别的 根据你的论问长度篇幅是有关系的i 如果论文长的话有可能会需要等待时间长一点的 paperrater论文查重是很精准的论文查重软件 问题九：检测一篇硕士论文一般需要多长时间？ 硕士论文一般是用知网系统，检测时间通常在半小时到一小时之间，高峰期间可能在一小时以上，早检测的时间是如此。 问题十：论文查重系统检测正在解析需要多久 这个不一定的，要看是哪家的产品，也要看在线人数，不过一般的检测系统几分钟都行了，免费的就久一点了！你可以去gocheck，或者格子达看看
无论用什么网站进行论文查重都是很快的，几万字一般也就也就三四分钟而已，有时甚至一两分钟就出查重报告了。毕竟是机器计算嘛，相当快的。
知网查重结果时间半小时到一小时左右。如果是自费通过知网查重，一般检测时间半小时到一小时左右，如果是通过学校的知网检测系统查重，一般检测时间需要1-4天左右，因为是等待学校统一出结果。知网检测时间为早上8点到晚上10点，夜里提交的一般需要次日上午10点左右出结果。
知网的优势
查重检测中国知网论文拥有最丰富、最核心的文献对比资源。“中国知网”查重系统每天更新超过百万篇文献，并以万计的速度不断更新，各种教育数据库也被导入其中，使高校用知网检测更加全面，毕竟有中国知网这个超级数据库做支撑。
其它类型的检测系统，往往检测时间较长，而知网的服务器每秒可达五千次，这是因为知网有庞大的服务器作为支持，而且系统快速响应的先进技术作为优化的手段，使知网检测论文能快速得出查重报告，绝对不会耽误用户的时间。知网论文查重系统具有非常科学的比对算法，能准确识别抄袭行为。
几分钟就好，只要你给钱就行了。
终于写完了论文，但是迎来了论文查重。论文一提交，满屏都是红色的。很多不知道从哪里开始，也找不到正确的修改方法。这种情况再多检测也是徒劳的。如何快速通过论文查重系统检测？ 这里总结一下修改方法： 1.当整个句子的意思不变时，打乱句子的结构顺序，改变描述方式，如将原句改为倒装句、被动句、主动句等。 2.用同义词代替或直接删除里面的关键词和词，删除原作者观点鲜明的关键句； 3.有些学生认为漂浮的红色字数很多，所以直接删除，小编认为这不能降低重复率，相反，只能越来越高，这些措施下文章的整体字数减少。 4.引用时尽量不要大面积引用，这也是为什么有同学说我抄袭了文献中的段落和句子，却没有被检测到的原因，因为每个检测系统都设置了一个阀值，知网的阀值是5％，也就是1万字以内，检测部门不要超过500字；但是每个系统的阀值是不一样的。建议先找一个比较严格的系统进行自测检测，这样最后查重的时候就不会过关毕业。paperfree等系统非常准确严格。 5.我们应该注意最后一件事。遇到红色时，不要打乱文章的整体组织和大纲，尽量在文字、单词、句子、描述等范围内进行修改。
要想快速的通过论文检测，那只能让机器被圈了，机器人要是被圈的话，那速度非常快的，但是也有弊端，就是机器人不只重视一下程序，没有感情，不会有感情色彩，所以批的论文也可能是理论性比较强，也不容易
一般论文查重需要多长时间可以出结果?
提醒：全文2000+字，阅读需要2-5分钟。
郑重提醒：收藏的同时，请不要忘记点赞。
内容包含：花了一个晚上整理出来写论文必须要用到的网站
全文不看完，损失百万！
看完不点赞，必定后悔！
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毕业季到了，又到了写论文的时候，你们开始动手写论文了吗？笔者从12月份的时候已经开始动笔了，现在放假在家一天就只干这五件事情：睡觉、吃饭、拉（粗）屎（鲁）、看电视剧、写论文。
最近在好奇一件事情，论文查重一次要多久？因为我的论文没写完，强大的好奇心与求知精神驱使我去找到答案~所以我就上网查了一下这个问题。不查不知道，一查吓一跳（emmmm哪有那么夸张.....）
以知网为例，知网论文检测要多久呢？估计很多同学都不知道，下面我就来说说在知网查重的时间和要注意的问题。
1、知网查重的速度的基于查重人数有多少
如果知网查重的人数多，那么检测速度就比较慢，特别是到了4月至6月的这段时间，查重的速度就会比较慢了，因为全国那么多毕业生需要查重，想一下这时间肯定会很慢的呀。
平常检测一个本科论文的时间只需要30分钟左右，4月至6月这段时间就可能遇到1-2个小时才行。
2、知网查重需要注意格式
我们上传到知网查重的时候，它会默认word文档的格式进行检测。如果你的文档用pdf或者其他格式上传的话，它会自动帮你转换成word文档的格式，这个会影响你的论文最后的查重结果哦～（敲重点！一定要使用word文档格式上传查重！）
如果你是晚上九点后上传到知网进行论文查重，那么就要在第二天早上九点才可以拿到你的论文检测结果。这个是论文检测的规定，大家一定要把握好时间，不要晚上九点之后上传一直等报告出来哦～
花了我一个晚上整理的一些关于写论文时必须要用到的实用干货，也一并分享给大家了～（免费查重/翻译/外文文献都有哟）
整理不易，希望大家给我点赞和收藏！！谢谢大家！
一、查重的公众号和网站有哪些？
1、查重的公众号
（1）Paperdd
新用户会赠送四块五毛抵用券进行查重，但是我还没有用，用过之后再来反馈给大家 ~
（2）Paper YY
查重时间比较快，大概5分钟之内就会出查重结果。
（3）Paper OK
新用户可以享受两次免费使用的机会，但是检测时间要半个小时左右，有一点点的慢。
（4）Paper free
新用户可以领取一万字的免费查重，同时可以做任务分享领取更多查重机会。查重时间也是比较快的，也是五分钟之内出结果。
1、寻找查重系统在检查论文的时候，必须要搜索那些论文查重系统。 现在有很多论文查重网站。 一般的学校使用的是中国知网，在中国知网上查重比较有效，但是在互联网上有很多有名的网站。如果需要，也可以选择这些网站进行论文的初稿检测。2、论文查重入口选择论文检查网站后，学生们应该在网站上提交论文进行论文检查。 一般来说，学生们在网上检查的时候，主页上有检查论文的入口，论文在检查的时候，本科、硕博、期刊的论文再检查。 同学们必须根据实际情况来选择。一般的本科生选择plmc本科的就可以了。3、上传论文在上传论文之前，毕业生必须修改论文的格式，论文的格式必须按照系统指定的论文格式执行。如果发生错误，则可能重复率过高。这要求毕业生仔细检查他们的论文，以防止出错。否则，这次检查是没有作用的，浪费了钱。4、下载论文查重检测报告最后，他们必须先看自己的论文报告。 总之，论文的查重报告你论文的各方面都有详细的解释。 毕业生可以根据报告书来修改论文。
对于毕业生来说，除了要考虑自己毕业之后是考研还是工作之外，还有一个让人头疼的问题就是毕业论文的查重，而且论文查重之后还面临降重，很多同学对于这一部分还是不太了解的。那么接下来针对毕业论文自己查重和降重的问题，跟大家一起交流一下。很多地方高校对于毕业生毕业论文的查重，是有一定要求的。比如说学校只是给每个人两次免费查重的机会，之后再查重就需要交钱，然而网站查重的花费时间还是比较大的，所以这两次免费的机会就显得比较具有重要，但担心的是，如果第一次论文检测完，修改过后，第二次还是不合格怎么办？在这种情况下，很少有同学们再见提前进行检测。其实这样的方法也是可以的，毕竟目前市面上比较权威的查重网站还是存在很多的。毕业生接触的查重网站并不是很多，而且有的查重网站花费也比较多，那么自己想要查重的时候。其实首先要看一下这个网站的权威性，然后看一下这个网站的数据库是不是足够大，这样检测的准确性就会高很多，最后就是结合自己的财力了，如果花费太高的话，可能根本接受不了，给大家推荐的论文检测系统PaperTime，从这里查重还有免费的机会，对学生来说十分友好。在说降重的方法之前，首先需要建议大家的是，在撰写论文的时候，多一些撰写论文的自主性，提高自己的学术能力。在降重的时候，特别是像医学这样的专业，专业术语有非常多，在用近义词等替换的时候，也是极其耗费功夫的，当然除了用词语代替之外，还可以巧妙的使用一些标点符号，通过断句让查重率降低一些，这些方法目前都是十分有效的。
数据库以及算法都存在较大的区别，所以检测结果是存在差异的，这就是它们之前最大的区别。
论文是作者的心血和智慧的结晶，在进行论文写作时，虽有痛苦，却能带给很多快乐和收获，特别是当发现自己顺利通过查重的时候。一篇论文的完成，至少要经过三次查重，但许多人对论文相似度的检测都不太清楚，那么论文的相似度是什么？怎么进行查重呢？ 一、论文相似度是什么 论文相似性是指查重系统对学生提交的论文与数据库中的内容进行比对，即我们常说的查重率，一般情况重复率要求在30%之内。大家应该注意到，不同的查重系统判断重复的方式不同，知网认定重复的计算方法是文章中连续13个字的出现与数据库中相同，所以可以通过近义词的替换来降低相似度。 二、论文查重怎么查？ 1、进入自己选择的查重系统官网，选择注册或登陆，进入查重系统； 2、进入查重系统，查找在线相似性检测入口，点击进入； 3、根据系统提示输入自己相关信息，找出类似于“上传论文”的标识后点击，要注意，要确保自己填写的信息准确填写； 4、选择文档中需要查重的论文进行上传并付费； 5、等待30分钟至1小时左右，查重系统会自动给出查重报告，从而完成对试卷相似度的在线检测。但是，具体的等待时间取决于系统是否繁忙，如果遇到查重高峰，等待时间会比较长。
汽车检测是指为了确定汽车技术状况是否达到标准或工作能力是否正常而进行的检查和测量。下面是我为大家精心推荐的汽车检测技术论文，希望能够对您有所帮助。
国内汽车检测技术概况
[摘 要]本文通过了解我国国内汽车检测技术的概念及其分类，介绍了我国一些先进前沿的汽车检测技术，阐述了我国汽车检测技术的发展概况，针对我国汽车检测技术中的不足之处，结合我国汽车检测技术的具体发展形势，提出了我国汽车检测技术的发展方向，这对我国汽车检测技术的发展具有一定的现实指导意义。
[关键词]汽车检测;检测技术;国内现状;发展概况
中图分类号： 文献标识码：A 文章 编号：1009-914X(2015)03-0056-01
1.汽车检测的概念
汽车检测是指为了确定汽车技术状况是否达到标准或工作能力是否正常而进行的检查和测量。汽车检测技术则是指在汽车检测这一过程中所有与之相关的检测硬件和检测软件的研发和使用技术。
2.汽车检测技术的分类
安全环保检测
安全环保检测主要是针对汽车的安全运行和环境保护方面的检测，这种检测又分为定期检测和不定期检测。该检测的目的是为了确定车辆是否具备符合要求的外观容貌以及良好的安全性能，同时对汽车的环境污染程度进行有效控制。在汽车不解体的情况下，对汽车建立安全监控体系，确保汽车能高效、安全和低污染的运行。
综合性能检测
综合性能检测是指对汽车的综合性能实行定期或者不定期的检测。该检测的目的是为了确定汽车是否具有良好的动力性、可靠性、安全性、噪声污染性以及排气净化性。该检测主要针对汽车的故障及其原因或隐患部位实行质量监督和检测，从而建立汽车质量监控体系，来达到该检测技术的目的。
3.国内汽车检测技术的发展情况
国内汽车检测技术的发展历程
(1)20世纪60年代，我国汽车检测技术处于起步阶段。我国开始研究汽车检测技术开始于20世纪60年代，为了满足当时的汽车维修需要，我国交通部门研究和开发了发动机汽缸漏气量检测仪以及点火正时灯等一些基本的检测仪器。
(2)20世纪70年代，我国汽车检测技术进入发力发展阶段。随着我国汽车生产技术以及人们汽车使用率的飞速增长，我国交通部门开始进入大力发展汽车检测技术的阶段。汽车检测的仪器设备增多，检测项目增多，检测标准和规则也得到进一步的完善，建立了汽车性能综合检验台。
(3)20世纪80年代，我国汽车检测技术进入快速发展阶段。随着我国科学技术和国民经济的飞速发展，我国汽车制造业和交通运输业也得到了飞速发展。因此，对汽车检测技术和设备的需求也日益增涨。我国汽车检测技术因此进入其发展的蓬勃向上时期。
(4)20世纪90年代至今，我国汽车检测技术已经发展相对成熟。迈入90年代后，我国汽车检测技术从其设备的研制、开发以及生产都有了自身的一套运作体系。90年代是我国汽车检测技术的发展高潮时期。虽然目前我国的汽车检测技术与外国仍存在一定的差距，其发展的过程中也存在有一些问题和不足，但我国汽车检测技术也在不断的吸收借鉴完善自己，保证自身良好的发展态势，努力为其创造广阔的发展前景。
目前国内具有代表性的先进前沿的汽车检测技术
(1)虚拟仪器检测技术
虚拟仪器检测技术是指通过自由增减测试系统配置，利用系统配置单元器件，按照每一个项目测试的要求标准，可以直观和有效的得出监测结果，从而提高测试技术的效率。
(2)将GPS技术与车辆检测相结合
该技术主要是利用了能够接受卫星定位信号的GPS系统，将其与汽车检测技术系统相结合，从而达到快捷有效的检测过程。
(3)利用汽车四轮定位进行检测
四轮定位仪主要是依据车轮定位得到检测数据，它利用图像显示并记录汽车四轮的运作情况，与汽车检测数据结果分析相结合，从而达到检测目的。
4.国内汽车检测技术发展过程中存在的问题
国内汽车检测站的经营管理过程中存在行政干预问题
在我国，安全检测是由公安部门来建立管理的。因此我国的综合性能检测站都由交通部门直接建立并管理或者由地方企业建立但仍由交通部门管理。这种行政管理形式，往往造成了检测结果的不真实、检测过程的不规范或者检测项目不完善的情况，甚至是伪造一些监测数据。
我国汽车检测存在重复检测的问题
目前，我国有权对汽车进行检测的机构至少有三种，即安检站、机动车尾气排放检测站以及汽车综合性能检测站。这三个机构又分别归隶属于公安、环保、和交通管理部门。这些部门从各自的职能要求出发对车辆进行必要的检查和监测，容易造成车辆的重复检查，在加大汽车检测工作量的同时，给车主也带来不便。
检测技术有待进一步完善
目前，我国的进口汽车检测标准体系主要依赖于外国检测标准，因此针对我国汽车具体发展情况，我国的汽车检测技术有待进一步提高和完善。例如，我国目前的技术可以对车辆的正面、侧面、追尾等事故进行检测，但对侧面碰撞、追尾碰撞等事故却缺乏相关的检测标准。这也急需我国汽车检测技术的提高和完善。
我国汽车检测人员的整体专业能力和专业素质有待提高
一方面，我国的汽车检测人员的专业检测能力有待提高。一些检测人员本身缺乏基本的汽车知识，检测操作不规范，对检测结果的分析能力不够，不能很好的判断汽车是否达到检测标准。另一方面，我国汽车检测人员的自身素质不够，一些检测人员故意抬高检测收费标准，为了个人利益不顾集体利益，甚至为一些没有达到标准的车辆伪造数据。这些都是造成安全隐患的个人因素，也不利于我国检测技术的研发和推广。
5.解决国内汽车检测技术发展过程中的问题的有效 措施
汽车检测技术基础实现规范化
在我国汽车检测技术的发展过程中，汽车检测的硬件技术一直以来都比汽车检测技术中的软件技术更受重视。这种想法往往会导致对一些基础性技术研究的忽略。因此，我国汽车检测技术的发展方向应该注重与硬件配套的软件检测技术的完善和提高。这方面主要做到三点：一，制定并完善汽车检测项目的限值标准和检测 方法 ;二，完善汽车技术状况检测的评定细则，将全国各地的检测要求和具 体操 作技术进行统一和规范化;三，严格执行综合性能检测站对大型检测设备的认证规则，确保综合性能检测站有能力胜任并履行其检测职责。
汽车检测设备实现智能化
虽然目前我国的汽车检测技术以及检测设备的智能化与国外的检测存在一定的差距，但是我国汽车检测设备正积极学习并通过进口一些外国先进检测设备来提高并完善我国汽车检测设备的智能化。检测设备的智能化使检测设备具有专家检测和诊断系统以及智能化的功能，可以在较短时间较快较准确的对汽车状况进行检测，并诊断出汽车发生故障的部位以及故障原因，从而让维修人员能够迅速解除故障。节约了劳动成本，提高了劳动效率。
汽车检测管理实现网络化
随着计算机和 网络技术 的飞速发展，我国各个行业都在逐步实现其管理的网络化，汽车检测行业也不例外。目前，虽然我国的部分汽车综合性能检测站已经实现了计算机管理系统检测，但计算机监控系统并不完善，而且各个检测站之间采用的计算机检测方式也都一致。为了逐步实现我国汽车检测管理的一致性和有效性，我国汽车检测应该积极推进其管理的网络化。
6. 总结
随着我国经济和社会的进步以及汽车工业的发展，我国汽车检测技术也必须不断的提高和完善。为了使汽车维修人员的工作越来越轻松，提高汽车检测结果准确性，我国汽车检测技术的发展越来越趋向于自动化、网络化和智能化。汽车检测技术的完善和提高有利于我国交通事业以及环保事业的发展，从而为我国经济和社会的发展提供良好的外在环境。
参考文献
[1] 初君浩;浅析汽车检测技术的发展[J];科技致富向导;2014(08)25.
[2] 王洪亮;汽车检测技术的若干问题的思考[J];无线互联科技;2013(12)15.
作者简介
张彦(1975-)女，汉族，山东菏泽人，助理工程师，大学学历， 毕业 于山东省委党校经济管理专业，研究方向为车辆检测、维修。
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PCR技术是一种体外酶促合成、扩增特定DNA片段的方法。下面是我整理的关于pcr技术论文，希望你能从中得到感悟!
技术的研究进展
摘要 PCR技术是一种体外酶促合成、扩增特定DNA片段的方法。因其高强的特异性和灵敏度以及检测速度快、准确性好等优点，已被广泛地应用于水产、微生物检测等许多领域。该文从PCR技术的原理及应用方面进行了综述，并对其发展做出了展望。
关键词 PCR技术;研究进展;应用
中图分类号 Q819 文献标识码 A 文章编号 1007-5739(2012)10-0047-02
PCR(polymerase chain reaction，PCR)即聚合酶链式反应，它是一种体外酶促合成，扩增特定DNA片段的方法。1985年，美国Karray等学者首创了PCR技术，并由美国Cetus公司开发研制[1]。随着科学技术的发展和突破，PCR技术已在多个领域得到广泛地应用，如微生物检测、兽医学、水产养殖等方面。由于该技术具有较强的灵敏度、准确度和特异性，又能快速进行检测，因而其应用领域也在不断延伸[2-3]。随着PCR技术的不断发展，在常规PCR技术的基础上又衍生出了许多技术，如多重PCR(mutiplex PCR)技术[4]、实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR，FQ-PCR)技术[5]、单分子PCR技术[6]。
1 PCR技术原理
PCR技术是根据待扩增的已知DNA片段序列、人工合成与该DNA 2条链末端互补的2段寡核苷酸引物，在体外将待检DNA序列(模板)在酶促作用下进行扩增。PCR的整个技术过程经若干个循环组成，一个循环包括连续的3个步骤：第1步是高温条件下的DNA模板变性，即模板DNA在93~94 ℃的条件下变性解链;第2步是退火，即人工合成的2个寡核苷酸引物与模板DNA链3’端经降温至55 ℃退火;第3步是延伸，即在4种dNTP底物同时存在的情况下，借助TaqDNA聚合酶的作用，引物链将沿着5’-3’方向延伸与模板互补的新链[7]。经过这个循环后，合成了新链，可将其作为DNA模板继续反应，由此循环进行。循环进程中，扩增产物的量以指数级方式增加，一般单一拷贝的基因循环25~30次，DNA可扩增l00万~200万倍[1]。PCR反应的步骤很简单，但是具体的操作是复杂的，如退火温度的确定、延伸时间的长短以及循环数等。因此，不同的反应体系应该确定适当的反应条件，以避免假阴性或假阳性等情况的产生。
2 PCR技术的分类
在传统PCR技术的基础上，根据人们的需要以及各个领域的应用要求，又衍生出很多种类的PCR技术。新技术在各领域广泛应用并逐渐改进，为进一步的研究提供了基础。
实时荧光定量PCR技术
1996年，学者经过研究，在传统PCR技术的基础上，首创了实时荧光定量PCR技术，新技术已经应用至医学领域、分子生物学和其他基础研究领域。实时荧光定量PCR技术基于传统技术的优势，还具有实时性、准确性、无污染，实现了自动化操作和多重反应，是PCR技术研究史上从定性到定量的飞跃[8]。
荧光定量PCR技术最大的特点是能将荧光基团加入到PCR反应体系中，借助于荧光信号，累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析[9]。实时监测这一特点是常规PCR技术所不具有的，因为其对扩增反应不能进行随时的检测。常规PCR技术的扩增终产物需要在凝胶电泳等条件下才能进行，无法对起始模板进行准确的定量，而荧光定量PCR技术的反应进程可以根据荧光信号的变化做出准确的判断[10-11]。一个PCR循环反应结束之后，定量PCR仪可以收集1个荧光强度信号，荧光信号强度的变化可以反映产物量的变化情况，这样就可以得到1条荧光扩增曲线[12]。荧光信号在指数扩增阶段，PCR产物荧光信号的对数值与起始模板量之间存在线性对应关系，然后进行定量分析[13]。
多重PCR技术
多重PCR(mutiplex PCR)技术是PCR技术的一种，为同一管中加入多对特异性引物，与PCR管内的多个模板反应，在一个PCR管中同时检测多个目标DNA分子。多重PCR技术可以扩增一个物种的一个片段，也可以同时扩增多个物种的不同片段[14]。
在同一反应体系中，多重PCR技术进行多个位点的特异性扩增时，引物间的配对、引物间的竞争性扩增等会对扩增效果产生重要影响。一方面，如果能选择适宜的反应体系和反应条件，可极大地提高多重PCR的扩增效果[15]。主要包括退火温度、退火及延伸时间、PCR缓冲液成分、dNTP的用量、引物及模板的量等。另一方面，DNA的抽提质量也影响多重PCR扩增效率，如DNA抽提不干净或降解都将影响PCR扩增效果[16]。
单分子PCR技术(SM-PCR)
单分子PCR技术是在传统PCR技术的基础上发展的，基本循环过程相同，但在反应条件、模板数量、DNA 聚合酶选择、引物设计方面具有不同点。该技术是以少量或单个DNA分子为模板进行的PCR[17]。
单分子PCR技术反应中，DNA 模板浓度极低，这就要求模板有较高的质量。因为这是试验成败的决定性因素。在设计引物时，应该严格控制GC的含量和Tm值，同时尽量避免引物间存在可配对序列。在反应混合物模板数极低的情况下，若引物之间存在少量配对序列，扩增时极易形成二聚体，使反应无法进行，得不到所需要的产物[18]。由于单分子PCR技术反应的变性温度(96~98 ℃)大多比常规PCR技术(94 ℃)略高，因而对DNA 聚合酶热稳定性的要求也更加严格，需要有较好的热稳定性，以防止温度过高而使其失活。其变性时间(5~15 s)、退火时间及延伸时间也短于常规PCR技术[17]。
3 PCR技术的应用
PCR技术在水产上的应用
基因表达是检测某个基因在不同发育期或不同组织中的表达量变化，或受到某种试验处理过程中的影响而出现表达量变化的情况。有学者应用real-time PCR技术研究碳水化合物含量对翘嘴红鲴糖代谢酶G6Pase、GK以及PEPCK表达量的影响[19-21]，研究结果可为翘嘴红鲴饲料配方中的最合适糖含量提供理论依据。孙淑娜等[22]研究叶酸拮抗剂对斑马鱼心脏发育相关基因BMP2b及HAS2表达的影响，表明叶酸拮抗剂对早期胚胎的心脏发育影响较大，可导致斑马鱼心脏发育延迟及心脏形态异常，并下调斑马鱼心脏发育相关基因BMP2b及HAS2的表达，这可能是叶酸生物学活性受抑后导致心脏发育异常的机制之一。Sawyer et al[23]以斑马鱼的未受精卵、胚胎、仔鱼和成鱼为研究材料，采用实时荧光定量PCR技术，检测了P450aromA和P450aromB在不同组织的表达量，表明在各组织中均有2种基因的表达，但表达量显著不同，呈现组织特异性。
PCR技术在微生物检测上的应用
1990年，Bej et al[24]在利用多重PCR的方法检测了Leg-ionella类菌种和大肠类细菌，其结果是通过点对点方法固定的多聚dT尾捕捉探针和生物素标记的扩增DNA进行杂交来检测的。张志东等检测口蹄疫病毒(FMDV)持续性感染的带毒动物，表明实时荧光定量PCR技术具有快速检测、准确、客观等优势，较优于传统的检测方法[25-26]。Metzger-Boddien et al[27]对PCR-ELISA的方法进行了评价，结果显示，样品中沙门氏菌的检出率可以达到98%。
4 展望
传统PCR技术以及衍生出来的新型PCR技术自面世以来，已被广泛应用到生命科学的各个领域。随着技术方法的不断改进与完善，荧光定量PCR技术将会逐渐完善并广泛应用。多重PCR技术在食品病原微生物、非致病微生物及环境微生物检测中具有重要作用;未来的研究主要集中在去除食品抑制因子干扰、改进样品前处理技术等方面，其次是整合应用多重PCR与其他技术，必将在未来食品微生物检测中有非常好的应用前景。
5 参考文献
[1] 常世敏.PCR在食品微生物检测中的应用[J].邯郸农业高等专科学校学报，2004，21(4)：23-25.
[2] 唐永凯，俞菊华，徐跑，等.实时荧光定量PCR技术及其在水产上的应用[J].中国农学通报，2010(21)：422-426.
[3] 吴学贵.LPS刺激点带石斑鱼免疫相关基因的克隆与组织表达差异性分析[D].海口：海南大学，2011.
[4] 侯立华，黄新，朱水芳，等.双色荧光多重PCR技术及在禽流感病毒检测中的应用[J].生物技术通报，2010(1)：168-172.
[5] 查锡良.生物化学[M].7版.北京：人民卫生出版社，2009：483-485.
[6] 张杰道.生物化学实验技术PCR技术及应用[M].北京：科学出版社，2005：12-18.
[7] 谢海燕.黑线仓鼠LHR部分序列克隆及组织器官的表达差异[D].曲阜：曲阜师范大学，2011.
[8] KUBISTA M，ANDRADE J M，BENGTSSON M，et real-time pol-ymerase chain reaction[J].MoLecular Aspects of Medicine，2006，27(2-3)：95-125.
[9] AGINDOTAN B O，SHIEL P J，BERGER P detection of potato viruses，PLRV，PVA，PVX and PVY from dormant potato tubers by TaqMan real-timeRT-PCR[J].J Virol Methods，2007，142(1-2)：l-9.
[10] 李丽平.小麦慢锈品种叶片受条锈菌侵入后的木质素合成及调控研究[D].雅安：四川农业大学，2009.
[11] 薛霜，独军政，高闪电，等.实时荧光定量PCR技术研究进展及其在兽医学中的应用[J].中国农学通报，2010(7)：11-15.
[12] SCHUBERT J，FOMITCHEVA V，SZTANGRET-WISNIEWSKA J. Dif-ferentiation of Potato virus Y strains using improvedsets of diagnostic-PCR-primers [J].J Virol Methods，2007，140(1-2)：66-74.
[13] 袁继红.实时荧光定量PCR技术的实验研究[J].现代农业科技，2010(13)：20-22.
[14] 朱善元.生物检测技术PCR及其在兽医微生物检测中的应用[J].黑龙江畜牧兽医，1999(11)：21-22.
[15] 黄银花，胡晓湘，李宁，等.影响多重PCR扩增效果的因素[J].遗传，2003，25(1)：65-68.
[16] 陈诺，唐善虎，岑璐伽，等.多重PCR技术在食品微生物检测中的应用进展[J].生物技术，2010，37(10)：72-75.
[17] 刘连生.常规PCR技术与单分子PCR技术[J].医学信息，2010，23(11)：4379-4380.
[18] 顾超颖.汗孔角化病的临床分析，SSH1、ARPC3基因突变检测和表达谱分析[D].上海：复旦大学，2008.
[19] 唐永凯，俞菊华，刘波，等.翘嘴红鲌肝脏G6Pase催化亚基的克隆以及摄食和饲料中碳水化合物对其表达的影响[J].水产学报，2007，31(1)：45-53.
[20] 刘波，谢骏，苏永腾，等.高碳水化合物日粮对翘嘴红鲌生长、GK及GK mRNA表达的影响[J].水生生物学报，2008，32(1)：47-53.
[21] 俞菊华，戈贤平，唐永凯，等.碳水化合物、脂肪对翘嘴红鲌PEPCK基因表达的影响[J].水产学报，2007，31(3)：369-373.
[22] 孙淑娜，桂永浩，宋后燕，等.叶酸拮抗剂甲氨喋呤导致斑马鱼心脏发育异常及BMP2bHAS2表达下调[J].中国当代儿科杂志，2007，9(2)：159-163.
[23] SAWYER S J，GERSTNER K A，CALLARD PCR analysis of cytochrome P450 aromatase expression in zebrafish：gene specific tissue disyribution，sex differences，developmental programming，and estrogen regulation[J].General and comparative endocrinology，2006，147(2)：108-117.
[24] BEJ A K，MAHBUBANI M H，MILLER R，et PCR amplif-ication and immobilized capture probes for detection of bacterial patho-gens and indicators in water[J].Mol Cell Probes，1990，4(5)：353-365.
[25] ZHANG Z D，ALEXANDERSEN of carrier cattle and sheep persistently infected with foot-and-mouth disease virus by a rapid real-time RT-PCR assay[J].Journal of Virological Methods，2003，111(2)：95-100.
[26] ZHANG Z D，BASHIRUDDIN J analysis of foot-and-mouth disease virus RNA duration in tissues of experimentally infected pigs[J].TheVeterinary Journal，2009，180(1)：130-132.
[27] METZGER-BODDIEN C，BOSTEL A，KEHLE for analysis of food samples[J].J Food Prot，2004，67(8)：1585-1590.
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