猪丹毒病在临床上易与猪瘟、猪链球菌病、最急性猪肺疫、急性猪副伤寒相混淆，应仔细鉴别。
（1）猪瘟
猪瘟呈流行性发生，发病率和死亡率极高，药物治疗无效，皮肤上有较多的出血点，指压不褪色，病猪常昏睡。死亡剖检脾有出血性梗死灶，回盲肠口有扣状溃疡，淋巴结有出血，呈大理石状花纹，肾呈灰黄色，并有许多出血点，大肠充血、出血。
（2）猪链球菌病
败血性链球菌病与急性猪丹毒极相似，应考虑病猪是否做过免疫，必要时进行实验室检查。
（3）最急性猪肺疫
猪肺疫与饲养条件有密切关系，病猪咽喉部急性肿胀，呼吸困难，口鼻流泡沫样分泌物。死后剖检，肺充血水肿，脾不肿大。
（4）急性猪副伤寒
多发生于2～4月龄小猪，阴雨潮湿季节多发，先便秘后下痢，胸腹部皮肤呈蓝紫色。死后剖检，见肠系膜淋巴结显著肿大，肝有小点状坏死灶，大肠壁的淋巴结肿大或有溃疡，脾肿大。
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防寒保温、防冻防压。仔猪生后24小时内产房要保证35℃左右温度，为此：①堵塞风洞(门窗)，铺垫草保持室内干燥是基本保温措施。②设护仔栏、安装红外线灯泡。在母猪圈内靠墙角的地方，用砖修一个长1米、宽0．80米、高0．70米的护仔栏(下边开有可关开的仔猪出入小洞)，护仔栏中上方安装一个可调控高低的250瓦红外线灯泡，距地面约50厘米左右(冬低，春秋稍高)，既可取暖又能杀菌消毒。 2．3 固定乳头、吃足初乳。①固定乳头：试验证明母猪前两对乳头的泌乳量约占7对乳头的47％，后两对仅占13％。因而，要把弱小仔猪放在前边乳头，让其吃到充足而营养丰实的初乳，强壮的放在后边乳头，这样每次吃奶时都坚持人工辅助固定，2--3天即可习惯固定乳头吃奶，以保证每窝仔猪均衡生长。②吃足初乳：初乳和常乳比较，初乳的蛋白质含量是常乳的4倍，乳脂率是常乳的2倍，干物质含量比常乳高1．50倍，且含丰富的矿物质、维生素，其中大量镁元素可促使胎粪排出。初乳中还含有仔猪建立自身免疫的抗体，吃足初乳能提高抵抗疾病的能力，保证生长发育良好。 2．4 剪獠牙防止仔猪互相咬伤。仔猪出生时有成对上下门齿和犬齿(俗称獠齿)共8枚，此牙有害无益，因牙齿发痒互相咬斗，伤其母猪乳头和同窝仔猪的尾、耳。所以，在仔猪生后打耳号的同时用尖钳子或指甲剪从牙根部切除獠牙，以不伤其牙床为好，大型猪场早已推行这一措施。 2．5 补铁、补硒。①补铁：仔猪生后体内约有50毫克的铁，而每日就需要7毫克，母乳中含铁量很少，仔猪每天从母乳中仅可获1毫克的铁，若不补铁出生后3--4天即出现贫血。食欲减退、腹泻等证状。生后2--3天补铁，每头猪注射“血多素”1毫升或“补铁王”1毫升。②补硒：对于缺硒地区还应对每头仔猪肌肉注射亚硒酸钠E1毫升或0．10％亚硒酸钠溶液0．50毫升。 3、及早补料 母猪产奶高峰21天左右，以后产奶逐渐少，而仔猪生长较快，食量日增。试验证明，初生重越大，生活力越强生长越快，断奶体重越高，育肥增重越快，饲料消耗少经济效益高(仔猪饲料报酬最高，约为1．50--2：1)。因此，给仔猪提前补料至关重要。补料应在生后5日开始。前3天应人工强制补料，购买营养丰富、易于消化吸收的仔猪颗粒料，用手捏些放入仔猪口中，连续饲喂2--3天。7日后可把颗粒料放在护仔栏内让自由采食。也可用炒熟的大麦、玉米、大豆等粉成大颗粒加少量食盐饲喂。仔猪生后5--7天补料，60天断奶重可达20千克左右，而20日龄补料仅为15千克。 4、过好断奶关 正确的断奶方法是减少仔猪早期断奶应激的有效措施。一般农村仔猪断奶时间45天，大型良种场约在35--40天。断奶时，应采用“三不变”，即环境不变，采用赶母留仔法，把仔猪放在原圈饲养，把母猪调圈；饲料不变，断奶前喂啥料，断奶时仍喂啥料；饲喂方式不变，奶断前后饲喂次数方式不变。 5、搞好疫病防治 ①20--21日龄猪瘟首免，60日龄猪瘟二免，61--65日龄注射猪丹毒与肺疫病苗。②仔猪排粪呈灰白色时，可能母猪饲料营养过高，应减少精料，加喂青绿料，多饮水。③猪舍地面最好用1％--4％火碱消毒。④每隔3--4天喂1次0．05％高锰酸钾水。⑤保持舍内空气新鲜、温暖、干燥。 712100，杨凌示范区科技信息中心，许丰、刘志刚 摘自2003年第11期《农业科技与信息》提高仔猪成活率和断奶体重的技术措施 仔猪应包括哺乳仔猪与断奶仔猪，仔猪具有生长发育快、可塑性大、饲料利用效率高等特点，提高哺乳仔猪的成活率和断奶重、断奶窝重、缩短仔猪体重达25kg的时间是养猪生产中重要技术环节，现将哺乳仔猪有关内容做以下论述。 1 新生仔猪的环境变化与特点 1.1新生仔猪的环境变化 仔猪出生是生命进程中的重大转折时期，所处环境发生了巨大变化。胎儿在母体内靠母体血液通过胎盘进行气体交换，供给氧气，排出二氧化碳，摄取营养，排出废物。出生后即刻转变为自行呼吸、采食（即哺乳）、排泄。在母体子宫内温度恒定（特殊情况例外）、环境稳定，出生后转变为直接与复杂的外界环境接触。在子宫内处于安全环境，并受母体保护，出生后处于有害菌的袭击，因抵抗力低，易患病死亡。 1.2新生仔猪的特点 新生仔猪生长发育快和生理上的不成熟，导致易病难养，增重慢，死亡率高，其主要特点： 1.2.1生长发育快，物质代谢旺盛。仔猪出生重一般为1.2 kg左右，不到成年猪体重的1%，但生长发育迅速，10日龄体重可达出生时的2～3倍，30日龄达5～6倍。仔猪的强烈生长，是以旺盛的物质代谢为基础，20日龄的仔猪，每千克体重需沉积蛋白质9～14 g，相当于成年猪的30多倍，每千克体重所需代谢净能为成年猪的3倍左右，矿物质代谢也高于成年猪。可见，仔猪对营养物质的需要，在数量和质量上都相当高，对营养不全极为敏感。 1.2.2消化器官不发达，消化腺机能不全。新生仔猪消化器官的重量和容积都小，但增长很快，出生时胃重4～8 g，容纳乳汁25～50 mL，20日龄的仔猪胃重35 g左右，容积扩大3～4倍。新生仔猪食物进入胃内到排空（通过幽门进入十二指肠）的速度快，10日龄的仔猪排空时间约为1.5 h，30日龄的仔猪为3～5 h。新生仔猪缺乏反射性的胃液分泌，食物进入胃内直接刺激胃壁，才能分泌胃液，5日龄左右才能形成反射性的胃液分泌。仔猪的消化酶随日龄增长其活性逐渐增强，新生仔猪唾液中淀粉酶活性很低，由于胃内酸性较弱，唾液淀粉酶在胃内仍能进行作用。胃液中的消化酶主要是凝乳酶和胃蛋白酶，凝乳酶可起到凝固乳汁和改善乳蛋白的消化作用。胃蛋白酶是以胃蛋白酶原状态存在，由于新生仔猪胃底腺不发达，缺乏游离的盐酸，不能将其激活为胃蛋白酶，不能消化蛋白质。仔猪胃内有乳酸存在，在5日龄内可水解部分动物蛋白。仔猪胃内的消化作用很小，主要在小肠内靠肠液和胰液进行消化，仔猪的肠腺和胰腺发育较完全，乳糖酶、淀粉酶、胰蛋白酶、胰脂肪酶都有一定活性，新生仔猪主要靠胰蛋白酶消化蛋白质，21日龄后胰淀粉酶的活性增强。蔗糖酶和麦芽糖酶活性很低，新生仔猪可充分利用乳糖，对果糖、蔗糖、木糖等消化率很低。新生仔猪溆惺 拷隙嗟囊戎 久福 捎诘ㄖ 置诹可伲 挂戎 久讣せ钍艿较拗疲 跋炝酥 镜南 眨 兄?1日龄左右胆汁分泌量增加。新生仔猪对乳化状态存在的脂肪利用率较高，对长链脂肪酸的消化吸收能力很低。 1.2.3调节体温的机能不全，对寒冷的应激力差。猪是恒温动物，在正常情况下，环境温度发生变化时，可通过神经系统的调节，经一系列的应激反应，维持正常体温。新生仔猪的大脑皮层发育不全，垂体和下丘脑的反应能力以及为下丘脑所必须的传导结构机能尚低，特别是5日龄以内的仔猪对寒冷的应激力差。由于仔猪被毛稀疏，皮下脂肪少，保温隔热的能力差，又由于新生仔猪大脑皮层调节体温的机制不完善，不能有效地进行化学性调节，同时，新生仔猪体内能源贮备有限，每100 mL血液中含血糖100 mg左右，吮食初乳后虽得到营养物质的补充，但脂肪尚不能作为能源直接利用。刚出生的仔猪处于13～24℃的环境中，1 h后体温下降3℃左右，尤其在生后20 min内，由于羊水的蒸发，体温下降更多，吃上初乳的健壮仔猪，约2 d以后方可恢复到正常体温，如将刚出生的仔猪裸露在1℃的环境中，2 h可冻昏、冻死。 1.2.4缺乏先天免疫力，容易得病死亡。免疫抗体是一种大分子结构的球蛋白，由于母体血管和胎儿脐血管之间被6～7层组织隔开，限制了抗体通过血液转移给胎儿，使新生仔猪缺乏先天免疫力，抗病能力低，易患各种疾病。初乳中含免疫抗体，其含量变化很大，母猪分娩24 h以后明显下降，新生仔猪对初乳中抗体的最大吸收是在24h以内，因此，让新生仔猪尽快吃到初乳是保健的重要措施。仔猪一般在10日龄以后自体产生抗体，至21日龄仍属免疫球蛋白青黄不接阶段，35～45日龄的仔猪自体产生抗体逐步达到成熟水平。再加上新生仔猪胃液中游离的盐酸很少，抑菌作用很低，故易患病。 2 哺乳仔猪的死亡分析 2.1死亡损失 仔猪从出生至断奶死亡率20%左右，严重影响猪群的发展，造成经济损失重大。据报道，出生时死亡1头仔猪约损失63 kg饲料，10周龄死亡1头约损失110 kg饲料。一头母猪年提供的断奶仔猪头数越多，每头断奶仔猪应负担的饲料越少。因此，提高哺乳仔猪的成活率是降低成本、提高经济效益的重要措施。 2.2死亡原因 仔猪出生后，生存环境发生了巨大变化，又具有多方面的特点，如饲养不当，护理不周，就会引起患病和死亡。 2.2.1出生死亡:有些胎儿因脐带围绕颈部，造成死胎或生后即死；有些胎儿在产道内因粘膜破裂过早，缺氧窒息而死；近亲交配易造成先天不足或畸形，导致死亡；或因感染猪瘟、细小病毒等，造成死胎或生后死亡。 2.2.2代谢失常:仔猪生后表现正常，24 h后发生颤抖、萎靡、发出微弱的尖叫声、停止哺乳、转入昏迷而死亡，大多由于低血糖而致。经血糖测定，正常仔猪每100 mL液中血糖含量为100～130 mg，低于60 mg，易造成死亡。正常仔猪每100 mL血液中乳酸为32～40 mg，死胎猪高达159 mg，据报道，每100 mL血液中乳酸超过70 mg，就会因乳酸浓度过高而使仔猪死亡。另外环境温度偏低或甲状腺素、肾上腺素的活动，仔猪释放胰岛素的数量增加，体液失去平衡或造成甲状腺机能亢进，也常会造成仔猪死亡。 2.2.3仔猪下痢:因母猪奶水不足或过浓，乳质突变或品质差，易造成下痢而死亡；新生仔猪铁的贮存量很少，乳汁中铁的含量很低，仔猪常因缺铁造成食欲减退、贫血、抵抗力下降、生长停滞，致下痢死亡。舍内卫生状况差，天气骤变或舍内潮湿，场内有传染性致痢的病史，没有严格消毒，仔猪易下痢死亡。仔猪补饲具有重要作用，不根据仔猪的生理特点和特殊要求进行补饲，常引起仔猪下痢。 2.2.4仔猪水肿:新生仔猪常因皮下水肿或浆 液过多造成死亡，可能是溶血性大肠杆菌所致或因缺碘、血液中蛋白质过低而引起的。 2.3死亡分析 2.3.1病因和非病因死亡:据赵式文分析，病因死亡占仔猪死亡总数的24.1%，其中下痢死亡占死亡总数的13.7%，肺炎占3.3%，其他占7.1%；非病因死亡占死亡总数的75.9%，其中压死、踩死的占死亡总数的33.1%，弱小或先天不足占17.3%，缺奶占5.7%，淹死占2.7%，冻死占2.8%，咬死占5.3%，其他占9.0%。随着产房环境温度的改善，非病因死亡可能减少，如忽视防疫消毒，可能加大仔猪的因病死亡。 2.3.2死亡时间:据王清兰分析，体大膘肥的母猪易造成临产时胎儿死亡，死亡占出生仔猪总数的9.2%，占哺乳仔猪死亡总数的69.2%。又据河南正阳猪场的分析，3日龄以内死亡的仔猪占死亡总数的26.63%，4～7日龄占29.27%，8～15日龄占20.21%，16～20日龄占9.92%，21～25日龄占7.27%，26～35日龄占2.17%，36～45日龄占1.15%，46～60日龄占3.02%。加拿大对6 890头仔猪的分析，从出生到20日龄，仔猪死亡率为25.6%，其中分娩时死亡占死亡总数的15.3%，7日龄以内死亡占43.7%。可见，仔猪日龄越小，死亡率越高。 2.3.3死亡体重:据笔者的资料分析，仔猪初生重0.5 kg以下，哺乳期间死亡占死亡总数的80%以上，0.6～1.0kg占13%，1.1 kg以上占6%。。可见，仔猪初生重越小，死亡率越高。 3提高仔猪成活率和断奶重的途径 根据仔猪的特点和死亡原因分析，抓住初生、补料和断奶三个关键时期，加强饲养管理，减少仔猪死亡，加快仔猪增重。 3.1安全接产提高存活率 安全接产是减少出生死亡提高仔猪存活率的有效措施，前文已述及。 3.2保温防压 新生仔猪怕冷，常被母猪压死或冻死，适宜于新生仔猪的环境温度是35℃，生后至3日龄可控制在32℃，4～7日龄30～28℃，15～30日龄26～22℃，对新生仔猪的保温是提高哺育率的重要措施。将7日龄的仔猪分别置于环境8.3℃和7.2℃，前者日耗奶量为854 g，后者974 g，环境温度降低，耗奶量增加，代谢效率降低，影响了仔猪的增重。 采用全年分娩制的猪场，宜用封闭式产房，以火炉、火坑、暖气供暖。适合母猪的环境温度，并不符合仔猪的要求，为此，应给仔猪增加保暖设施，如保温灯、暖床、电热板等。 3.3吃足初乳 在正常情况下，仔猪生后靠触觉寻找乳头吮乳，并具有固定奶头吮乳习性，自行固定需时较长，弱小仔猪常被健壮仔猪挤掉，母猪的乳房没有乳池，不能随时排乳，且放乳时间很短，仔猪因争斗而影响哺乳，宜于仔猪出生后自选并加以人工辅助，尽快固定奶头吃奶。 初乳中含有免疫抗体，母猪分娩后24h以内乳汁中免疫抗体和抗蛋白分解酶含量最高，人工辅助固定奶头，让仔猪尽快吃到初乳，得到免疫抗体，提高抵抗力，摄取营养，补充水分，增强体力，恢复体温。 3.4及时补铁 铁是造血和防止营养性贫血的营养物质，新生仔猪体内铁的贮存量一般为50 mg，每日生长代谢约需消耗7 mg，从100 mL的母乳中仅得到0.2 mg左右的铁，可见，仔猪得不到铁的补充，可于7日龄左右出现缺铁性贫血，生长发育受阻，食欲减退，抵抗力下降，易患白痢。广西西江农场对2日龄的仔猪注射培亚铁针剂（主要成分为葡聚糖铁）1 mL（含铁100 mg），10日龄再注射2 mL，与对照组相比，成活率提高7.62个百分点，增重提高37个百分点。广西农垦畜牧研究所对3～5日龄的仔猪肌注牲血素每头1 mL，增重比对照组提高10.99%，成活率提高15.78%。亦应注意铜和钴的补充。 硒是仔猪生长发育不可缺少的微量元素，仔猪缺硒时突然发病，食欲下降，精神不振，关节肿大，瘫痪，严重者突然死亡，剖检时可见肝坏死，肌肉苍白、萎缩，心包积水等病变。发病特点是营养状况良好、生长发育快的仔猪最先发病。仔猪3～5日龄肌注亚硒酸钠0.5 mL，断奶时再注射1 mL。 3.5重视补水 水是动物血液和体液的重要组成成分，是消化、吸收、运送养分、排出废物的溶剂，对调节体温和调节体液电解质平衡起着重要作用。由于新生仔猪体温高、呼吸快、生长发育快、代谢旺盛，母猪乳汁浓（乳脂率8%左右），故仔猪需水量大，如得不到水的补充会造成食欲下降，失水，消化作用减缓，常因口渴而饮污水或尿液，损害健康，引起下痢，为保证仔猪饮水，最好采用自动饮水。 3.6适时补料 母猪的泌乳量于分娩后逐渐增加，至21 d左右达到泌乳高峰，后逐渐下降，哺乳仔猪生长迅速，对营养物质的需求与日俱增，母猪的奶水已不能满足需要，对哺乳仔猪必须进行补料，提前补料具有促长的作用。仔猪由于牙床发痒而啃咬硬物或拱掘地面，常引起下痢，提前补料有益于保健。仔猪开食早，哺乳期间日采食饲料量高，增重亦快，据报道，7日龄训练仔猪吃料，30日龄日采食量为0.24 kg，14日龄训练吃料，30日龄日采食量为0.18 kg；7日龄训练吃料，60日龄个体重15.0 kg，20日龄训练吃料，60日龄个体重13.5 kg，30日龄训练吃料，60日龄个体重10.0 kg。 饲料形态和适口性、环境温度是仔猪认料开食的重要前提，训练方法有多种，可利用仔猪出外活动时，让日龄大已开食的仔猪诱导采食，或在饲喂母猪时在地面上撒些饲料让仔猪认食，最有效的方法是强制补料，仔猪7日龄时，定时将产床的母猪限位区与仔猪活动区封闭，在仔猪补料槽内加料，仔猪因饥饿而找寻食物，然后解除封闭，让仔猪哺乳，短期内即可达到提前开食的目的。 饲料形态以膨化颗粒料为优，应选用和配制适口性、安全性、营养性、消化性好的仔猪料，确保仔猪料的质量，宜采用自由采食，仔猪开食后，随着消化机能的日趋完善和体重的迅速增加，食量逐渐增大，即进入旺食阶段。影响仔猪断奶体重的主要因素有仔猪的初生重，母猪的泌乳量和仔猪哺乳期间的饲料采食量，可见，抓旺食加大补料量，是养好哺乳仔猪、提高断奶重的有效措施。 在配制仔猪料时，应注意氨基酸、维生素、微量元素、有机酸、香味剂、益生素等的添加。 3.7提高母猪的泌乳力 新生仔猪主要靠母乳维持生存和增重，提高母猪的泌乳力对促进仔猪生长发育和提高哺育率的影响很大。饲料品质和营养成分、饮用水数量和质量是影响泌乳量的重要因素，按营养需要进行饲养，通常情况下，要做好母猪产前减料和产后逐步加料的工作，泌乳母猪应适当增加青绿多汁饲料的喂量，蛋白质饲料种类要多，必需氨基酸含量高。泌乳母猪的管理程序要有条不紊，以保证正常泌乳，要创造安静的环境，保持圈舍的清洁干燥，注意乳房卫生，经常供给清洁的饮水，适当增加日喂次数，切忌突然变更饲料。 3.8加强疫病防制 提高仔猪的成活率和断奶重，猪群保健与疫病防制尤为重要，应做好消毒和免疫，好的疫苗只有与良好的饲养管理相结合，才能产生好的免疫应答反应，对母猪和哺乳仔猪要认真进行免疫。 3.9提高仔猪的初生重 仔猪的初生重与存活率、哺育率和断奶重密切相关，初生重大，存活率、哺育率高、断奶体重亦大，初生重1.3～1.5 kg与1.0 kg相比，前者断奶重提高2.5 kg。提高仔猪初生重应重视种猪的选择，加强妊娠母猪的饲养管理（前文已述及）。由于繁殖性状的遗传力低，可采用不同品种或品系间的杂交，以提高仔猪的初生重和生活力。
团体标准T/CVMA 5—2018非洲猪瘟病毒实时荧光PCR检测方法Real-time PCR assay for detection ofAfrican swine fever virus中国兽医协会发布前言本标准按 GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本标准由中国兽医协会提出并归口。本标准起草单位： 中国动物疫病预防控制中心、中国兽医药品监察所、中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、中国农业科学院兰州兽医研究所、北京海关。本标准主要起草人： 倪建强、王传彬、王琴、仇华吉、殷宏、杨林、辛盛鹏、刘艳华、刘洋、宋晓晖、赵启祖、罗玉子、刘志杰、张乾义、乔彩霞、夏应菊、杨吉飞、徐璐、顾小雪、亢文华、李硕、毕一鸣。1、范围本标准规定了非洲猪瘟病毒实时荧光PCR检测方法的试剂、仪器和耗材、操作步骤、结果判定、实验室生物安全等技术要求。本标准适用于猪脾脏、淋巴结、血液等组织和血粉中非洲猪瘟病毒核酸的检测。2、规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 19489 实验室 生物安全通用要求NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范3、试剂3.1 DNA提取试剂DNA提取试剂的配制见附录A，或选取商品化的病毒DNA提取试剂盒并参照说明书进行DNA提取。3.2 2 × PCR缓冲液2 × PCR缓冲液的配制见附录A。3.3 引物探针3.3.1 采用针对非洲猪瘟病毒VP72基因（核苷酸序列见附录B）的引物及探针：上游引物ASF-CADC-rPCRF：5'-1528-ATAGAGATACAGCTCTTCCAG-1548-3'下游引物ASF-CADC-rPCRR：5'-1660-GTATGTAAGAGCTGCAGAAC-1679-3'荧光探针ASF-CADC-Probe：5'-1638-FAM-TATCGATAAGATTGAT-MGB-1653-3'3.3.2 可以使用世界动物卫生组织（OIE）在陆生动物诊断技术和疫苗手册（Manual of Diagnostic Tests andVaccines for Terrestrial Animals）第2.8.1章African Swine Fever中提供的引物和探针，并按照手册中规定的检测程序和判定标准操作：上游引物ASF-OIE-rPCRF：5'-1627-CTGCTCATGGTATCAATCTTATCGA-1651-3'下游引物ASF-OIE-rPCRR：5'-1857-GATACCACAAGATCRGCCGT-1876-3'荧光探针ASF-OIE-Probe：5'-1761-FAM-CCACGGGAGGAATACCAACCCAGTG-TAMRA-1785-3'3.3.3 使用国家农业行政主管部门批准的其他引物、探针，应对检测程序和判定标准作相应调整。3.4 阴性及阳性对照阴性及阳性对照的制备方法见附录C。3.5 其他试剂消毒液、5U/μLTaq DNA聚合酶、无菌无核酸酶水、0.01mol/L PBS（pH7.2）。消毒液配制见附录A， 0.01mol/L PBS配制见附录A。4、仪器和耗材分析天平（感量0.1mg）、高速台式冷冻离心机（最高离心速度不低于12 000r/min）、冰盒、实时荧光PCR仪及配套反应管（板）、组织研磨器、-20℃冰箱、可调移液器（2 μL，20 μL，200μL，1 000 μL）、1.5mL离心管（无核酸酶）。5、操作步骤5.1 样品采集及运输样品采集及运输按照NY/T541的规定执行，采集猪的脾脏、淋巴结、血液等组织材料或血粉用于检测，样品应在冷藏条件下尽快运输至实验室，避免反复冻融。采样时应穿戴个人生物安全防护装备，实施现场消毒和废弃物处理。5.2 样品处理检测前样品应在二级生物安全柜中处理。取0.1g～0.2g组织或血粉，经研磨破碎后加1mL的0.01mol/L PBS（pH7.2）制成匀浆，经12 000 r/min离心2Min取上清；全血、血清样品直接取1mL，置于1.5 mL离心管内盖紧管帽。将上述处理的样品置于60℃条件下灭活30min。5.3 样品保存采集或处理好的样品在2℃～8℃条件下保存应不超过24 h；如需长期保存，应放置-70℃冰箱，但应避免反复冻融（冻融不超过3次）。5.4 病毒DNA提取5.4.1 DNA提取应在样本制备区内采用以下方法进行，若使用其他等效的病毒DNA提取试剂，则按照试剂说明书操作。5.4.2 待检样品、阳性对照和阴性对照的份数总和用n表示，取n个灭菌1.5 mL离心管，逐管编号。5.4.3 每管加入200μL DNA提取液1，然后分别加入待测样品、阴性对照和阳性对照各200μL，1份样品换用1个吸头，混匀器上震荡混匀5s。于4℃～25℃条件下，13 000 r/min离心10 min。DNA提取液1见附录A。5.4.4 尽可能吸取上清、弃去，吸头不要碰到沉淀，再加入10 μL DNA提取液2，混匀器上震荡混匀5 s。于4℃～25℃条件下，2 000 r/min离心10s。DNA提取液2见附录A。5.4.5 100℃干浴或沸水浴10 min。5.4.6 加入90μL无DNA酶的灭菌去离子水，13 000 r/min离心10 min，上清即为提取的DNA，-20℃保存备用。无DNA酶的灭菌去离子水见附录A。5.5 实时荧光PCR操作5.5.1 在反应混合物配制区、样品制备区和检测区分别进行5.5.2～5.5.4。5.5.2 每个检测反应体系需使用20μL实时荧光PCR反应液。根据5.4.2中设定的n值，按附录D配制反应液，充分混匀后分装，每个PCR反应管20μL。转移PCR反应管至 样品制备区 。5.5.3 在上述5.5.2的反应管中分别加入5.4中提取的DNA溶液5μL，使每管总体积达到25 μL，记录反应管对应的样品编号。盖紧管盖后，瞬时离心。5.5.4 将5.5.3加样后的反应管放入实时荧光PCR检测仪内，记录反应管摆放顺序。选定5-羧基荧光素（FAM）作为报告基团，小沟结合物（MGB）为淬灭基团，反应参数设置如下： 预变性95℃/3 min；95℃/15 s，52℃/10 s，60℃/35 s，45个循环； 在每次循环的60℃退火延伸时收集荧光。试验结束后，根据收集的Ct值和荧光曲线判定结果。6、结果判定6.1 结果分析条件设定实时荧光PCR检测阈值设定原则：阈值线超过阴性对照扩增曲线的最高点，且相交于阳性对照扩增曲线进入指数增长期的拐点，或根据仪器噪声情况进行调整。每个样品反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数即为Ct值。6.2 结果描述及判定当阳性对照Ct值≤28.0且出现典型扩增曲线，阴性对照无Ct值无扩增曲线时，实验成立，实例参考附录E。 当被检样品出现典型的扩增曲线且Ct值≤38.0时，判为非洲猪瘟病毒核酸阳性 ； 被检样品无Ct值，判为非洲猪瘟病毒核酸阴性；对于Ct值＞38.0的样品且出现典型的扩增曲线，应重检，重检仍出现上述结果的判为阳性，否则判为阴性。7、实验室生物安全要求7.1 本方法涉及非洲猪瘟感染性样品的实验操作应在（动物）生物安全三级试验室中进行，实验室生物安全管理要求见GB 19489。国家农业行政主管部门另有规定的，按其规定执行。7.2 使用过的实验器材和液体废弃物应先经过消毒液浸泡处理，再经高温高压处理后废弃。剩余样品等固体废弃物应在生物安全柜中密封包装，经表面消毒后移出，再经高温高压处理后废弃。一附录 A (规范性附录) 试剂的配制A.1 DNA提取液1PEG8000晶体20.74g，NaCL17.53g，加去离子水定容到100 mL。A.2 DNA提取液21mol/LTris.Hcl 2 mL，2 mol/L KCL5 mL，0.5 mol/L EDTA 0.5 mL，NP-40 1 mL，加去离子水定容到100 mL。即KCL14.912g，Tris碱12.114g，1.2068 mL浓HCl，EDTA14.612g，NaOH 6g, 加去离子水定容到100 mL。A.3 2×PCR缓冲液灭菌去离子水 70 mL三羟甲基氨基甲烷（Tri s） 0.79 g氯化钾 1.865 g曲拉通X-100 0.5 mLdATP (100mmol/L) 2.5 mLdTTP (100mmol/L) 2.5 mLdGTP (100mmol/L) 2.5 mLdCTP (100mmol/L) 2.5 mL六水氯化镁 0.61 g盐酸 调pH至9.0灭菌去离子水 加至100 mLA.4 消毒液8‰氢氧化钠或3‰福尔马林或3%邻苯基苯酚或碘化合物等其他消毒试剂均可。A.5 磷酸盐缓冲液（PBS）的配方A.5.1 A液0.2mol/L磷酸二氢钠水溶液：NaH2PO4·H2O 27.6 g，溶于蒸馏水中，最后定容至1 000 mL。A.5.2 B液0.2mol/L磷酸氢二钠水溶液：Na2HPO4·7H2O 53.6 g（或Na2HPO4·12H2O 71.6 g或Na2HPO4·2H2O 35.6 g），加蒸馏水溶解，最后定容至1 000 mL。A.5.3 0.01 mol/L、pH 7.2 磷酸盐缓冲液（PBS）的配制取A液14 mL、B液36 mL，加NaCl 8.5 g，用蒸馏水定容至1 000 mL。经过滤除菌后，无菌条件下分装。A.6 无DNA酶的灭菌去离子水无DNA酶的灭菌去离子水是用1 %DEPC处理后的去离子水，电阻应该大于18.2mΩ。二附录B （资料性附录）非洲猪瘟病毒VP72基因参考序列1ATGGCATCAG GAGGAGCTTT TTGTCTTATT GCTAACGATG GGAAGGCCGA CAAGATTATA61TTGGCCCAAG ACTTGCTGAA TAGCAGGATC TCTAACATTA AAAATGTGAA CAAAAGTTAT121GGGAAACCCG ATCCCGAACC CACTTTGAGT CAAATCGAAG AAACACATTT GGTGCATTTT181AATGCGCATT TTAAGCCTTA TGTTCCAGTA GGGTTTGAAT ACAATAAAGT ACGCCCGCAT241ACGGGTACCC CCACCTTGGG AAACAAGCTT ACCTTTGGTA TTCCCCAGTA CGGAGACTTT301TTCCATGATA TGGTGGGCCA TCATATATTG GGTGCATGTC ATTCATCCTG GCAGGATGCT361CCGATTCAGG GCACGTCCCA GATGGGGGCC CATGGGCAGC TTCAAACGTT TCCTCGCAAC421GGATATGACT GGGACAACCA AACACCCTTA GAGGGCGCCG TTTACACGCT TGTAGATCCT481TTTGGAAGAC CCATTGTACC CGGCACAAAG AATGCGTACC GAAACTTGGT TTACTACTGC541GAATACCCCG GAGAACGACT TTATGAAAAC GTAAGATTCG ATGTAAATGG AAATTCCCTA601GACGAATATA GTTCGGATGT CACAACGCTT GTGCGCAAAT TTTGCATCCC AGGGGATAAA661ATGACTGGAT ATAAGCACTT GGTTGGCCAG GAGGTATCGG TGGAGGGAAC CAGTGGCCCT721CTCCTATGCA ACATTCATGA TTTGCACAAG CCGCACCAAA GCAAACCTAT TCTTACCGAT781GAAAATGATA CGCAGCGAAC GTGTAGCCAT ACCAACCCGA AATTTCTTTC ACAGCATTTT841CCCGAGAACT CTCACAATAT CCAAACAGCA GGTAAACAAG ATATTACTCC TATCACGGAC901GCAACGTATC TGGACATAAG ACGTAATGTT CATTACAGCT GTAATGGACC TCAAACCCCT961AAATACTATC AGCCCCCTCT TGCGCTCTGG ATTAAGTTGC GCTTTTGGTT TAATGAGAAC1021GTGAACCTTG CTATTCCCTC AGTATCCATT CCCTTCGGCG AGCGCTTTAT CACCATAAAG1081CTTGCATCGC AAAAGGATTT GGTGAATGAA TTTCCTGGAC TTTTTGTACG CCAGTCACGT1141TTTATAGCTG GACGCCCCAG TAGACGCAAT ATACGCTTTA AACCATGGTT TATCCCAGGA1201GTCATTAATG AAATCTCGCT CACGAATAAT GAACTTTACA TCAATAACCT GTTTGTAACC1261CCTGAAATAC ACAACCTTTT TGTAAAACGC GTTCGCTTTT CGCTGATACG TGTCCATAAA1321ACGCAGGTGA CCCACACCAA CAATAACCAC CACGATGAAA AACTAATGTC TGCTCTTAAA1381TGGCCCATTG AATATATGTT TATAGGATTA AAACCTACCT GGAACATCTC CGATCAAAAT1441CCTCATCAAC ACCGAGATTG GCACAAGTTC GGACATGTTG TTAACGCCAT TATGCAGCCC1501ACTCACCACG CAGAGATAAG CTTTCAGGAT AGAGATACAG CTCTTCCAGA CGCATGTTCA1561TCTATATCTG ATATTAGCCC CGTTACGTAT CCGATCACAT TACCTATTAT TAAAAACATT1621TCCGTAACTG CTCATGGTAT CAATCTTATC GATAAATTTC CATCAAAGTT CTGCAGCTCT1681TACATACCCT TCCACTACGG AGGCAATGCG ATTAAAACCC CCGATGATCC GGGTGCGATG1741ATGATTACCT TTGCTTTGAA GCCACGGGAG GAATACCAAC CCAGTGGTCA TATTAACGTA1801TCCAGAGCAA GAGAATTTTA TATTAGTTGG GACACGGATT ACGTGGGGTC TATCACTACG1861GCTGATCTTG TGGTATCGGC ATCTGCT三附录C （规范性附录）非洲猪瘟病毒核酸阳性及阴性对照C.1阳性对照阳性对照制备方法：人工合成非洲猪瘟病毒VP72基因片段，序列参见附录B，将VP72基因连接于pMD20-T载体制成阳性质粒pMD20-T-VP72，使用非洲猪瘟病毒阴性猪的组织研磨液将质粒稀释至浓度为10 000copies/L，保存于-20℃备用。C.2 阴性对照阴性对照为非洲猪瘟病毒阴性猪的组织研磨液。四附录D （规范性附录）实时荧光PCR反应液配方实时荧光PCR反应液配方见表D.1。表D.1 实时荧光PCR反应液配方组 分1个检测体系的加入量2×PCR 缓冲液a12.5μLdNTP（2.5 mmol/L）1.0 μL上游引物（10 μmol/L）1.0 μL下游引物（10 μmol/L）1.0μL探针（10 μmol/L）1.0 μLTaq 酶b（5U/μL）0.5μL去离子水3μL总体积20μL2×PCR 缓冲液a: 参见附录A.1配方。Taq 酶b：具有5’→3’外切活性。五附录 E （资料性附录）非洲猪瘟病毒实时荧光PCR扩增实例参考图D.1给出了非洲猪瘟病毒实时荧光PCR扩增实例。图E.1 非洲猪瘟病毒核酸实时荧光PCR典型扩增曲线示意图(资料来源：中国兽医协会）
黄芪 1 斤连翘 2 斤大青叶2斤板蓝根 1斤金银花0.5 斤黄芩 1斤鱼腥草 1斤玄参 1 斤甘草0.3斤石榴皮1斤黄柏1斤熬药，连渣滓喂猪 （也可以打粉拌料喂食（未实验，理论上效果会更好））可以喂30-50头猪 一顿，一天两顿 ，连喂三天（一头猪一顿总药量100克-150克）本猪场发现疑似飞猪，解剖下来确诊，未报，用此方熬药喂一窝有发病的猪，九头猪已经发病的两头未控制住，已经死亡，同窝其他猪全部控制住，年前因为快递中断，临近一窝猪发现病情未用此方治疗，现全部陆续死亡。此药方的药物都可以到淘宝上批发，比实体店划算，效果也不错，价格300元左右即可买到（店家不同价格左右相差50-80左右），我买的是260看到转发出去， 希望大家减少亏损猪到了200斤左右的时候，一定要再喂一次（理论，未实践），这个时候很多疫苗的免疫期过去了，容易抵抗力下降，应该容易感染大家试试吧，现在全国到处飞猪，周围都是这个，很少有人上报，多转发点群，老百姓养猪不容易！
荧光定量 PCR 方法，该方法是将光谱技术引入到PCR 反应中，通过荧光信号的强弱变化定量测定特异性扩增产物的量，解决了常规 PCR 方法敏感性低和电泳检测中溴化乙锭对环境的污染问题。
等温扩增法，该方法是一种新兴的分子生物学检测方法，等温扩增方法不需要 PCR 中的变性、退火步骤，即可完成对靶序列的循环扩增，大幅缩短了时间，整个扩增反应时间一般少于 60 min，而常规PCR 方法的反应时间一般需要 2 h 以上。等温扩增试剂盒适合现场检测，灵敏度高，能够大幅提高猪瘟防控的可行性。
要减少场外人员和车辆进入猪场，要对人员和车辆入场前彻底消毒，要对猪群实施全进全出饲养管理，要对新引进生猪实施隔离，要按规定申报检疫。
非洲猪瘟防控注意事项
养殖场应该坚持全进全出，自繁自育的养殖模式，构建完善的封锁隔离措施，避免猪和野猪直接接触。养殖场在生猪调运过程中，尽量不要跨省引进种猪，必须引种时，一定要进行严格的产地检疫、疫情检测，严格执行落地报告制度和隔离观察制度。
殖场内部如果发现非洲猪瘟可疑疫情，严格按照《非洲猪瘟疫情应急预案》进行处置，迅速采取应急措施，预防疫情传播和蔓延。
团体标准T/CVMA 5—2018非洲猪瘟病毒实时荧光PCR检测方法Real-time PCR assay for detection ofAfrican swine fever virus中国兽医协会发布前言本标准按 GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本标准由中国兽医协会提出并归口。本标准起草单位： 中国动物疫病预防控制中心、中国兽医药品监察所、中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、中国农业科学院兰州兽医研究所、北京海关。本标准主要起草人： 倪建强、王传彬、王琴、仇华吉、殷宏、杨林、辛盛鹏、刘艳华、刘洋、宋晓晖、赵启祖、罗玉子、刘志杰、张乾义、乔彩霞、夏应菊、杨吉飞、徐璐、顾小雪、亢文华、李硕、毕一鸣。1、范围本标准规定了非洲猪瘟病毒实时荧光PCR检测方法的试剂、仪器和耗材、操作步骤、结果判定、实验室生物安全等技术要求。本标准适用于猪脾脏、淋巴结、血液等组织和血粉中非洲猪瘟病毒核酸的检测。2、规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 19489 实验室 生物安全通用要求NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范3、试剂3.1 DNA提取试剂DNA提取试剂的配制见附录A，或选取商品化的病毒DNA提取试剂盒并参照说明书进行DNA提取。3.2 2 × PCR缓冲液2 × PCR缓冲液的配制见附录A。3.3 引物探针3.3.1 采用针对非洲猪瘟病毒VP72基因（核苷酸序列见附录B）的引物及探针：上游引物ASF-CADC-rPCRF：5'-1528-ATAGAGATACAGCTCTTCCAG-1548-3'下游引物ASF-CADC-rPCRR：5'-1660-GTATGTAAGAGCTGCAGAAC-1679-3'荧光探针ASF-CADC-Probe：5'-1638-FAM-TATCGATAAGATTGAT-MGB-1653-3'3.3.2 可以使用世界动物卫生组织（OIE）在陆生动物诊断技术和疫苗手册（Manual of Diagnostic Tests andVaccines for Terrestrial Animals）第2.8.1章African Swine Fever中提供的引物和探针，并按照手册中规定的检测程序和判定标准操作：上游引物ASF-OIE-rPCRF：5'-1627-CTGCTCATGGTATCAATCTTATCGA-1651-3'下游引物ASF-OIE-rPCRR：5'-1857-GATACCACAAGATCRGCCGT-1876-3'荧光探针ASF-OIE-Probe：5'-1761-FAM-CCACGGGAGGAATACCAACCCAGTG-TAMRA-1785-3'3.3.3 使用国家农业行政主管部门批准的其他引物、探针，应对检测程序和判定标准作相应调整。3.4 阴性及阳性对照阴性及阳性对照的制备方法见附录C。3.5 其他试剂消毒液、5U/μLTaq DNA聚合酶、无菌无核酸酶水、0.01mol/L PBS（pH7.2）。消毒液配制见附录A， 0.01mol/L PBS配制见附录A。4、仪器和耗材分析天平（感量0.1mg）、高速台式冷冻离心机（最高离心速度不低于12 000r/min）、冰盒、实时荧光PCR仪及配套反应管（板）、组织研磨器、-20℃冰箱、可调移液器（2 μL，20 μL，200μL，1 000 μL）、1.5mL离心管（无核酸酶）。5、操作步骤5.1 样品采集及运输样品采集及运输按照NY/T541的规定执行，采集猪的脾脏、淋巴结、血液等组织材料或血粉用于检测，样品应在冷藏条件下尽快运输至实验室，避免反复冻融。采样时应穿戴个人生物安全防护装备，实施现场消毒和废弃物处理。5.2 样品处理检测前样品应在二级生物安全柜中处理。取0.1g～0.2g组织或血粉，经研磨破碎后加1mL的0.01mol/L PBS（pH7.2）制成匀浆，经12 000 r/min离心2Min取上清；全血、血清样品直接取1mL，置于1.5 mL离心管内盖紧管帽。将上述处理的样品置于60℃条件下灭活30min。5.3 样品保存采集或处理好的样品在2℃～8℃条件下保存应不超过24 h；如需长期保存，应放置-70℃冰箱，但应避免反复冻融（冻融不超过3次）。5.4 病毒DNA提取5.4.1 DNA提取应在样本制备区内采用以下方法进行，若使用其他等效的病毒DNA提取试剂，则按照试剂说明书操作。5.4.2 待检样品、阳性对照和阴性对照的份数总和用n表示，取n个灭菌1.5 mL离心管，逐管编号。5.4.3 每管加入200μL DNA提取液1，然后分别加入待测样品、阴性对照和阳性对照各200μL，1份样品换用1个吸头，混匀器上震荡混匀5s。于4℃～25℃条件下，13 000 r/min离心10 min。DNA提取液1见附录A。5.4.4 尽可能吸取上清、弃去，吸头不要碰到沉淀，再加入10 μL DNA提取液2，混匀器上震荡混匀5 s。于4℃～25℃条件下，2 000 r/min离心10s。DNA提取液2见附录A。5.4.5 100℃干浴或沸水浴10 min。5.4.6 加入90μL无DNA酶的灭菌去离子水，13 000 r/min离心10 min，上清即为提取的DNA，-20℃保存备用。无DNA酶的灭菌去离子水见附录A。5.5 实时荧光PCR操作5.5.1 在反应混合物配制区、样品制备区和检测区分别进行5.5.2～5.5.4。5.5.2 每个检测反应体系需使用20μL实时荧光PCR反应液。根据5.4.2中设定的n值，按附录D配制反应液，充分混匀后分装，每个PCR反应管20μL。转移PCR反应管至 样品制备区 。5.5.3 在上述5.5.2的反应管中分别加入5.4中提取的DNA溶液5μL，使每管总体积达到25 μL，记录反应管对应的样品编号。盖紧管盖后，瞬时离心。5.5.4 将5.5.3加样后的反应管放入实时荧光PCR检测仪内，记录反应管摆放顺序。选定5-羧基荧光素（FAM）作为报告基团，小沟结合物（MGB）为淬灭基团，反应参数设置如下： 预变性95℃/3 min；95℃/15 s，52℃/10 s，60℃/35 s，45个循环； 在每次循环的60℃退火延伸时收集荧光。试验结束后，根据收集的Ct值和荧光曲线判定结果。6、结果判定6.1 结果分析条件设定实时荧光PCR检测阈值设定原则：阈值线超过阴性对照扩增曲线的最高点，且相交于阳性对照扩增曲线进入指数增长期的拐点，或根据仪器噪声情况进行调整。每个样品反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数即为Ct值。6.2 结果描述及判定当阳性对照Ct值≤28.0且出现典型扩增曲线，阴性对照无Ct值无扩增曲线时，实验成立，实例参考附录E。 当被检样品出现典型的扩增曲线且Ct值≤38.0时，判为非洲猪瘟病毒核酸阳性 ； 被检样品无Ct值，判为非洲猪瘟病毒核酸阴性；对于Ct值＞38.0的样品且出现典型的扩增曲线，应重检，重检仍出现上述结果的判为阳性，否则判为阴性。7、实验室生物安全要求7.1 本方法涉及非洲猪瘟感染性样品的实验操作应在（动物）生物安全三级试验室中进行，实验室生物安全管理要求见GB 19489。国家农业行政主管部门另有规定的，按其规定执行。7.2 使用过的实验器材和液体废弃物应先经过消毒液浸泡处理，再经高温高压处理后废弃。剩余样品等固体废弃物应在生物安全柜中密封包装，经表面消毒后移出，再经高温高压处理后废弃。一附录 A (规范性附录) 试剂的配制A.1 DNA提取液1PEG8000晶体20.74g，NaCL17.53g，加去离子水定容到100 mL。A.2 DNA提取液21mol/LTris.Hcl 2 mL，2 mol/L KCL5 mL，0.5 mol/L EDTA 0.5 mL，NP-40 1 mL，加去离子水定容到100 mL。即KCL14.912g，Tris碱12.114g，1.2068 mL浓HCl，EDTA14.612g，NaOH 6g, 加去离子水定容到100 mL。A.3 2×PCR缓冲液灭菌去离子水 70 mL三羟甲基氨基甲烷（Tri s） 0.79 g氯化钾 1.865 g曲拉通X-100 0.5 mLdATP (100mmol/L) 2.5 mLdTTP (100mmol/L) 2.5 mLdGTP (100mmol/L) 2.5 mLdCTP (100mmol/L) 2.5 mL六水氯化镁 0.61 g盐酸 调pH至9.0灭菌去离子水 加至100 mLA.4 消毒液8‰氢氧化钠或3‰福尔马林或3%邻苯基苯酚或碘化合物等其他消毒试剂均可。A.5 磷酸盐缓冲液（PBS）的配方A.5.1 A液0.2mol/L磷酸二氢钠水溶液：NaH2PO4·H2O 27.6 g，溶于蒸馏水中，最后定容至1 000 mL。A.5.2 B液0.2mol/L磷酸氢二钠水溶液：Na2HPO4·7H2O 53.6 g（或Na2HPO4·12H2O 71.6 g或Na2HPO4·2H2O 35.6 g），加蒸馏水溶解，最后定容至1 000 mL。A.5.3 0.01 mol/L、pH 7.2 磷酸盐缓冲液（PBS）的配制取A液14 mL、B液36 mL，加NaCl 8.5 g，用蒸馏水定容至1 000 mL。经过滤除菌后，无菌条件下分装。A.6 无DNA酶的灭菌去离子水无DNA酶的灭菌去离子水是用1 %DEPC处理后的去离子水，电阻应该大于18.2mΩ。二附录B （资料性附录）非洲猪瘟病毒VP72基因参考序列1ATGGCATCAG GAGGAGCTTT TTGTCTTATT GCTAACGATG GGAAGGCCGA CAAGATTATA61TTGGCCCAAG ACTTGCTGAA TAGCAGGATC TCTAACATTA AAAATGTGAA CAAAAGTTAT121GGGAAACCCG ATCCCGAACC CACTTTGAGT CAAATCGAAG AAACACATTT GGTGCATTTT181AATGCGCATT TTAAGCCTTA TGTTCCAGTA GGGTTTGAAT ACAATAAAGT ACGCCCGCAT241ACGGGTACCC CCACCTTGGG AAACAAGCTT ACCTTTGGTA TTCCCCAGTA CGGAGACTTT301TTCCATGATA TGGTGGGCCA TCATATATTG GGTGCATGTC ATTCATCCTG GCAGGATGCT361CCGATTCAGG GCACGTCCCA GATGGGGGCC CATGGGCAGC TTCAAACGTT TCCTCGCAAC421GGATATGACT GGGACAACCA AACACCCTTA GAGGGCGCCG TTTACACGCT TGTAGATCCT481TTTGGAAGAC CCATTGTACC CGGCACAAAG AATGCGTACC GAAACTTGGT TTACTACTGC541GAATACCCCG GAGAACGACT TTATGAAAAC GTAAGATTCG ATGTAAATGG AAATTCCCTA601GACGAATATA GTTCGGATGT CACAACGCTT GTGCGCAAAT TTTGCATCCC AGGGGATAAA661ATGACTGGAT ATAAGCACTT GGTTGGCCAG GAGGTATCGG TGGAGGGAAC CAGTGGCCCT721CTCCTATGCA ACATTCATGA TTTGCACAAG CCGCACCAAA GCAAACCTAT TCTTACCGAT781GAAAATGATA CGCAGCGAAC GTGTAGCCAT ACCAACCCGA AATTTCTTTC ACAGCATTTT841CCCGAGAACT CTCACAATAT CCAAACAGCA GGTAAACAAG ATATTACTCC TATCACGGAC901GCAACGTATC TGGACATAAG ACGTAATGTT CATTACAGCT GTAATGGACC TCAAACCCCT961AAATACTATC AGCCCCCTCT TGCGCTCTGG ATTAAGTTGC GCTTTTGGTT TAATGAGAAC1021GTGAACCTTG CTATTCCCTC AGTATCCATT CCCTTCGGCG AGCGCTTTAT CACCATAAAG1081CTTGCATCGC AAAAGGATTT GGTGAATGAA TTTCCTGGAC TTTTTGTACG CCAGTCACGT1141TTTATAGCTG GACGCCCCAG TAGACGCAAT ATACGCTTTA AACCATGGTT TATCCCAGGA1201GTCATTAATG AAATCTCGCT CACGAATAAT GAACTTTACA TCAATAACCT GTTTGTAACC1261CCTGAAATAC ACAACCTTTT TGTAAAACGC GTTCGCTTTT CGCTGATACG TGTCCATAAA1321ACGCAGGTGA CCCACACCAA CAATAACCAC CACGATGAAA AACTAATGTC TGCTCTTAAA1381TGGCCCATTG AATATATGTT TATAGGATTA AAACCTACCT GGAACATCTC CGATCAAAAT1441CCTCATCAAC ACCGAGATTG GCACAAGTTC GGACATGTTG TTAACGCCAT TATGCAGCCC1501ACTCACCACG CAGAGATAAG CTTTCAGGAT AGAGATACAG CTCTTCCAGA CGCATGTTCA1561TCTATATCTG ATATTAGCCC CGTTACGTAT CCGATCACAT TACCTATTAT TAAAAACATT1621TCCGTAACTG CTCATGGTAT CAATCTTATC GATAAATTTC CATCAAAGTT CTGCAGCTCT1681TACATACCCT TCCACTACGG AGGCAATGCG ATTAAAACCC CCGATGATCC GGGTGCGATG1741ATGATTACCT TTGCTTTGAA GCCACGGGAG GAATACCAAC CCAGTGGTCA TATTAACGTA1801TCCAGAGCAA GAGAATTTTA TATTAGTTGG GACACGGATT ACGTGGGGTC TATCACTACG1861GCTGATCTTG TGGTATCGGC ATCTGCT三附录C （规范性附录）非洲猪瘟病毒核酸阳性及阴性对照C.1阳性对照阳性对照制备方法：人工合成非洲猪瘟病毒VP72基因片段，序列参见附录B，将VP72基因连接于pMD20-T载体制成阳性质粒pMD20-T-VP72，使用非洲猪瘟病毒阴性猪的组织研磨液将质粒稀释至浓度为10 000copies/L，保存于-20℃备用。C.2 阴性对照阴性对照为非洲猪瘟病毒阴性猪的组织研磨液。四附录D （规范性附录）实时荧光PCR反应液配方实时荧光PCR反应液配方见表D.1。表D.1 实时荧光PCR反应液配方组 分1个检测体系的加入量2×PCR 缓冲液a12.5μLdNTP（2.5 mmol/L）1.0 μL上游引物（10 μmol/L）1.0 μL下游引物（10 μmol/L）1.0μL探针（10 μmol/L）1.0 μLTaq 酶b（5U/μL）0.5μL去离子水3μL总体积20μL2×PCR 缓冲液a: 参见附录A.1配方。Taq 酶b：具有5’→3’外切活性。五附录 E （资料性附录）非洲猪瘟病毒实时荧光PCR扩增实例参考图D.1给出了非洲猪瘟病毒实时荧光PCR扩增实例。图E.1 非洲猪瘟病毒核酸实时荧光PCR典型扩增曲线示意图(资料来源：中国兽医协会
生物技术作为一门高新技术学科，必须经过长期培养才能在实际应用中显示出一定的效果，生物技术研究的范围也很广。生物技术专业的论文怎么写呢?下面我给大家带来生物技术专业论文选题题目_生物专业论文题目参考，希望能帮助到大家!
生物论文题目
[1]不同温度下制备的生物炭对水相Cu~(2+)的吸附表现
[2]新型冠状病毒肺炎疫情下治疗药物监测实验室的感染防控策略
[3]脱毒地黄试管苗的微扦插快繁技术研究
[4]水产蛋白源生物活性肽的研究进展
[5]杉木ClSAUR25基因5’侧翼序列的克隆与生物信息学分析
[6]芒果MiTFL1-4基因启动子克隆与生物信息学分析
[7]乳酸菌调控骨骼肌线粒体生物发生的机制研究进展
[8]基于模拟胃肠道消化的云南民族乳制品蛋白肽研究
[9]肠道派氏结M细胞在淋巴传递中的生物功能及靶向载体研究进展
[10]家禽肠道健康的生物标志物研究进展
[11]生物素对动物毛发生长的影响及其应用
[12]Bacillus asahii OM18菌剂载体筛选及其对玉米的促生效果
[13]江苏省湖泊水生植物优势种对氮、磷去除效果比较研究
[14]三维荧光分析评价腐殖酸高级氧化前处理效果的研究
[15]生物炭对铜污染土壤的修复及水稻Cu累积的影响
[16]基于鱼类需求的淮河上游息县枢纽工程闸下河段环境流量研究
[17]基于高通量测序探讨大宁河不同水华期真核浮游生物群落组成
[18]裂解温度对不同原材料生物炭理化特性的影响
[19]山楂鲨烯合酶CpSQS1，CpSQS2的基因克隆及原核表达分析
[20]甜菜素合成相关基因BvDDC1的克隆与表达分析
[21]“伞形集团”典型国家LULUCF林业碳评估模型比较研究
[22]小麦和苜蓿套作 种植 对土壤水分及作物水分利用效率的影响
[23]黄土高原刺槐人工林根际和非根际土壤磷酸酶活性对模拟降水变化的响应
[24]重庆都市区生态系统服务价值时空演变及其驱动力
[25]黄土高原降雨梯度对刺槐不同器官内源激素分布格局及生长的影响
[26]基于改进参数的长三角城市生态足迹分析及其可持续性评价
[27]黄土丘陵区退耕草地群落盖度与地上生物量关系
[28]模拟降雨量变化与CO_2浓度升高对小麦光合特性和碳氮特征的影响
[29]黑色地膜覆盖土壤水热效应及对玉米产量的影响
[30]生物土壤结皮生态修复功能研究及对石漠化治理的启示
[31]__核电厂邻近海域大型底栖动物群落变化和污染指数评价
[32]鸡和鸭对山苍子果渣养分和能量利用率的研究
[33]多级AO+潜流湿地对生活污水中的EDCs及常规污染物的去除试验研究
[34]人类生物医学干预是合法的政策监管手段吗?
[35]Rev-erbα在心血管疾病中的研究进展
[36]医用生物胶体分散剂在1064 nm Nd:YAG激光治疗婴幼儿血管瘤术后的应用
[37]茶黄素双没食子酸酯的生物活性及其作用机制
[38]化学动力学疗法:芬顿化学与生物医学的融合
[39]金银花和蒲公英对肉源性假单胞菌生物被膜的清除作用
[40]5.5亿年前动物“临终遗迹”的发现将分节动物的祖先推前了一千万年
[41]趋磁细菌磁小体合成的相关操纵子和基因
[42]霉菌毒素的生物脱除 方法 及机理研究进展
[43]内蒙古巴彦淖尔市畜禽寄生虫病调查
[44]基于O_2/Ar比值估算海洋混合层群落净生产力的研究进展
[45]海岸线的溢油环境敏感性评价研究进展
[46]海洋中挥发性卤代烃的研究进展
[47]海水养殖生境中硫化物污染及控制技术研究进展
[48]紫檀芪改善睡眠限制小鼠运动耐力的作用及其机制
[49]华癸中慢生根瘤菌多铜氧化酶基因mco的功能研究
[50]中南民族大学教师团队在自然指数期刊《Analytical Chemistry》发表研究成果
生物专业 毕业 论文题目
1、基于多元相场理论的细菌生物膜生长动力学建模及其数值模拟
2、血管紧张素II经酸性鞘磷脂酶/神经酰胺通路致动脉内皮功能障碍的作用
3、盐胁迫对鹅耳枥生长及生理生化特性的影响
4、2种应激诱导大鼠迷走复合体神经元的Fos表达
5、重组大肠杆菌SAHN和Lu_S蛋白表达及群感效应分析
6、基于线粒体控制区Dloop序列的长臀(鱼危)种群遗传结构分析
7、喉功能保留外科的喉功能解剖
8、褪黑素通过减轻内质网应激抗心肌缺血/再灌注损伤的作用及机制
9、生长分化因子-11促进小鼠诱导性多能干细胞向心肌细胞定向分化的研究
10、脂肪因子CTRP3的认识及研究现状
11、治疗性血管化策略研究进展
12、SD大鼠绝经后骨质疏松疾病动物模型的构建
13、牛血清在百日咳毒素CHO细胞簇聚试验中的影响
14、番茄黄化曲叶病毒的鉴定与群体进化分析
15、B细胞受体核心岩藻糖基化调节成熟B细胞的信号转导
16、NaHS对慢性间歇性低氧大鼠胸主动脉血管张力的影响
17、利用果蝇模型探讨SCA3/MJD与PD发病机制的相关性
18、纳米金属氧化物对耐药基因水平转移的影响
19、果胶酶液体发酵条件优化与酶学特性研究
20、丛枝菌根真菌根外菌丝形成时间及对牧草的促生长效应
21、左心耳形态和功能影像学评估的研究进展
22、金胺O荧光染色在结核病病理诊断中的应用价值
23、上海常绿树种固碳释氧和降温增湿效益研究
24、我国生态文明建设试点的问题与对策研究
25、城镇化对物流业碳排放变动影响研究
26、干扰素γ增强脂肪间充质干细胞对淋巴细胞的免疫调节作用
27、血脑屏障的研究进展
28、南北贸易、产权维护不对称与发展中国家生态资源贫瘠化
29、朱溪流域植被覆盖变化与居民点的空间关系
30、布氏田鼠秋季家群数量与捕食风险的关系
31、圆蟾舌蛙鸣声特征分析
32、大渡河流域黄石爬鮡的年龄与生长
33、雅砻江短须裂腹鱼胚胎和卵黄囊仔鱼的形态发育
34、基因序列的搜索与相似性比对
35、阿尔茨海默病早期生物标记物及其检测方法的研究进展
36、促红细胞生成素衍生肽抑制细胞自噬减轻小鼠心肌缺血/再灌注损伤
37、类风湿关节炎并发心血管损害的临床特点与相关因素
38、华卟啉钠的光漂白性质研究
39、采用蚕豆根尖细胞微核技术检测核设施周围水域的遗传毒性
40、鲤鱼墩遗址史前人类行为模式的骨骼生物力学分析
41、稳定微环境微流控细胞培养芯片的设计与制备
42、国产与进口心脏单腔起搏器临床应用比较
43、心房电极导线脱位到心室致反复心室安全起搏一例
44、谷氨酸受体在实验性青光眼视网膜细胞损伤中的作用
45、基于恢复动力学生态系统恢复建设的研究
46、Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗毒种的遗传稳定性
47、一株鸡源乳酸菌FCL67的鉴定及其生物学特性
48、人凝血/抗凝血因子类产品蛋白含量快速检测方法的建立及验证
49、肺孢子菌肺炎相关细胞因子的研究进展
50、气象因素与发热伴血小板减少综合征关联研究
生物技术毕业论文选题
[1]生物技术本科拔尖创新型人才培养模式的探索与实践
[2]禽源HSP70、HSP40和RPL4基因的克隆和表达
[3]中间锦鸡儿CiNAC038启动子的克隆及对激素响应分析
[4]H9和H10亚型禽流感病毒二重RT-PCR检测方法的建立
[5]单细胞测序相关技术及其在生物医学研究中的应用
[6]动物细胞工程在动物生物技术中的应用
[7]现代生物化工中酶工程技术研究与应用
[8]GIS在生物技术方面的应用概述
[9]现代生物技术中酶工程技术的研究与应用
[10]两种非洲猪瘟病毒检测试剂盒获批
[11]基因工程技术在生物燃料领域的应用进展
[12]基于CRISPR的生物分析化学技术
[13]生物信息技术在微生物研究中的应用
[14]高等工科院校创新型生物科技人才培养的探索与实践
[15]生物技术与信息技术的融合发展
[16]生物技术启发下的信息技术革新
[17]日本生物技术研究开发推进管理
[18]中国基因技术领域战略规划框架与研发现状分析及建议
[19]鸡细小病毒与H_9亚型禽流感病毒三重PCR检测方法的建立
[20]基于化学衍生-质谱技术的生物与临床样本中核酸修饰分析
[21]合成生物/技术的复杂性与相关伦理 政策法规 研究的科学性探析
[22]合成生物学技术发展带来的机遇与挑战
[23]应用型本科高校生物技术专业课程设置改革的思考
[24]知识可以改变对转基因食品的态度吗?——探究科技争议下的极化态度
[25]基因工程在石油微生物学中的研究进展
[26]干细胞技术或能延缓人类衰老速度
[27]生物技术复合应用型人才培养模式的探索与实践
[28]动物转基因高效表达策略研究进展
[29]合成生物学与专利微生物菌种保藏
[30]加强我国战略生物资源有效保护与可持续利用
[31]微生物与细胞资源的保存与发掘利用
[32]颠覆性农业生物技术的负责任创新
[33]生物技术推进蓝色经济——NOAA组学战略介绍
[34]人工智能与生物工程的应用及展望
[35]中国合成生物学发展回顾与展望
[36]桓聪聪.浅谈各学科领域中生物化学的发展与应用
[37]转基因成分功能核酸生物传感检测技术
[38]现代化技术在农业种植中的应用研究
[39]生物技术综合实验及其考核方式的改革
[40]生物技术处理船舶舱底含油污水
[41]校企合作以产学研为平台分析生物技术类人才培养
[42]生物技术专业“三位一体”深化创新创业 教育 改革
[43]基于环介导等温扩增技术的生物传感器研究进展
[44]分子生物学技术在环境工程中的应用
[45]生物有机化学课程的优化与改革
[46]地方农业高校生物技术专业“生物信息学”课程的教学模式探索
[47]不同育种技术在乙醇及丁醇高产菌株选育中的应用
[48]探秘生命的第三种形式——我国古菌研究之回顾与展望
[49]适应地方经济发展的生物技术专业应用型人才培养模式探索
[50]我国科研人员实现超高密度微藻异养培养
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生物学是一门能打通很多跨界知识的学科。相比物理学等自然科学，生物学更深刻地揭示了世界的底层规律，其思想放之四海而皆准。下面我给大家带来生物类专业的论文题目及选题方向，希望能帮助到大家!
生物技术 毕业 论文选题
[1]生物技术本科拔尖创新型人才培养模式的探索与实践
[2]禽源HSP70、HSP40和RPL4基因的克隆和表达
[3]中间锦鸡儿CiNAC038启动子的克隆及对激素响应分析
[4]H9和H10亚型禽流感病毒二重RT-PCR检测 方法 的建立
[5]单细胞测序相关技术及其在生物医学研究中的应用
[6]动物细胞工程在动物生物技术中的应用
[7]现代生物化工中酶工程技术研究与应用
[8]GIS在生物技术方面的应用概述
[9]现代生物技术中酶工程技术的研究与应用
[10]两种非洲猪瘟病毒检测试剂盒获批
[11]基因工程技术在生物燃料领域的应用进展
[12]基于CRISPR的生物分析化学技术
[13]生物信息技术在微生物研究中的应用
[14]高等工科院校创新型生物科技人才培养的探索与实践
[15]生物技术与信息技术的融合发展
[16]生物技术启发下的信息技术革新
[17]日本生物技术研究开发推进管理
[18]中国基因技术领域战略规划框架与研发现状分析及建议
[19]鸡细小病毒与H_9亚型禽流感病毒三重PCR检测方法的建立
[20]基于化学衍生-质谱技术的生物与临床样本中核酸修饰分析
[21]合成生物/技术的复杂性与相关伦理 政策法规 研究的科学性探析
[22]合成生物学技术发展带来的机遇与挑战
[23]应用型本科高校生物技术专业课程设置改革的思考
[24]知识可以改变对转基因食品的态度吗?——探究科技争议下的极化态度
[25]基因工程在石油微生物学中的研究进展
[26]干细胞技术或能延缓人类衰老速度
[27]生物技术复合应用型人才培养模式的探索与实践
[28]动物转基因高效表达策略研究进展
[29]合成生物学与专利微生物菌种保藏
[30]加强我国战略生物资源有效保护与可持续利用
[31]微生物与细胞资源的保存与发掘利用
[32]颠覆性农业生物技术的负责任创新
[33]生物技术推进蓝色经济——NOAA组学战略介绍
[34]人工智能与生物工程的应用及展望
[35]中国合成生物学发展回顾与展望
[36]桓聪聪.浅谈各学科领域中生物化学的发展与应用
[37]转基因成分功能核酸生物传感检测技术
[38]现代化技术在农业 种植 中的应用研究
[39]生物技术综合实验及其考核方式的改革
[40]生物技术处理船舶舱底含油污水
[41]校企合作以产学研为平台分析生物技术类人才培养
[42]生物技术专业“三位一体”深化创新创业 教育 改革
[43]基于环介导等温扩增技术的生物传感器研究进展
[44]分子生物学技术在环境工程中的应用
[45]生物有机化学课程的优化与改革
[46]地方农业高校生物技术专业“生物信息学”课程的教学模式探索
[47]不同育种技术在乙醇及丁醇高产菌株选育中的应用
[48]探秘生命的第三种形式——我国古菌研究之回顾与展望
[49]适应地方经济发展的生物技术专业应用型人才培养模式探索
[50]我国科研人员实现超高密度微藻异养培养
生物教学论文题目
1、本地珍稀濒危植物生存现状及保护对策
2、中学生物实验的教学策略
3、如何上好一节生物课
4、中学生生物实验能力的培养
5、激活生物课堂的教学策略
6、中学生物课堂教学中存在的问题及对策
7、中学生物教学中的创新教育
8、本地生物入侵的现状及其防控对策
9、论生物多样性与生态系统稳定性的关系
10、室内环境对人体健康的影响
11、糖尿病研究进展研究及策略
12、心血管病研究进展研究及策略
13、 儿童 糖尿病的现状调查研究
14、结合当地遗传病例调查谈谈对遗传病的认识及如何优生
15、“3+X”理科综合高考试题分析
16、中学生物教学中的差生转化教育
17、中学生物学实验教学与学生创新能力的培养
18、在当前中学学科分配体制下谈谈如何转变学生学习生物学的观念
19、中学生物教学中学生科学素养的提高
20、直观教学在中学生物学教学中的应用
21、中学生物学实验教学的准备策略
22、编制中学生物测验试题的原则与方法
23、浅析生态意识的产生及其培养途径
24、生物入侵的危害及防治对策
25、城镇化建设对生态环境的影响
26、生态旅游的可持续发展-以当地旅游区为例
27、城市的生态环境问题与可持续发展
28、农村的生态环境问题及其保护对策-以当地农村为例
29、全球气候变化与低碳生活
30、大学与高中生物学教育的内容与方法衔接的初步研究
31、国内、国外高中生物教材的比较研究
32、中学生物实验教学模式探索
33、河北版初中生物实验教材动态分析研究 “
34、幼师生物学教材改进思路与建议
35、中学生物学探究性学习的课堂评价体系研究及实践
36、中学生物双语教材设计编写原则探索与研究
37、信息技术应用于初中生物课研究性学习的教学模式构想
38、生物学课堂教学中学生创新能力培养的研究与实践
39、中学生物学教学中的课程创生研究初探
40、信息技术与中学生物学教学的整合
41、中学生物学情境教学研究
42、游戏活动在高中生物学教学中的实践与思考
43、合作学习在高中生物教学中的实践性研究
44、尝试教学法在高中生物教学中的应用与研究
45、生物科学探究模式的研究与实践
46、生物课堂教学引导学生探究性学习的实践与探索
47、白城市中学生物师资队伍结构现状的调查及优化对策
48、结合高中生物教学开展环境教育的研究
49、让人文回归初中生物教育
50、课程结构的变革与高中生物新课程结构的研究
51、在中学生物教学中，如何培养学生的创新能力
52、在中学生物教学中如何激发学生的学习兴趣
53、实验在中学生物教学中的重要性探讨
54、中学生物教学现状研究
55、中学生物课堂教学艺术探讨
56、“生态系统”一节的 教学方法 探讨
57、中学生物教学中的学生科学素质培养
58、初中生物教学中观察能力的培养
59、浅谈生物教学中的科学素质教育
60、中学生物探究性教学的实践与思考
生物技术本科毕业论文题目
1、生物反馈技术在运动性疲劳监控中的应用研究
2、微流控生物催化技术酶促合成天然产物的增效机理研究
3、海洋生物污损过程的分子标记技术研究
4、浮游生物多样性高效检测技术的建立及其在渤海褐潮研究中的应用
5、基于QCM生物传感器技术的组氨酸标签蛋白芯片和悬浮细胞芯片的研制及其应用
6、蛋白核小球藻油脂检测技术评价及光生物反应器培养的研究
7、基因工程制备微藻生物柴油中两项关键技术的研究
8、农业水污染治理环节中的生物技术应用问题研究
9、人工构建耐热大肠杆菌的分子设计与应用
10、我国合成生物技术产业发展战略及政策分析
11、基于原子力显微镜的细胞生物特征识别技术研究
12、利用菊粉和木薯淀粉生产高浓度山梨醇和葡萄糖酸的生物技术
13、转基因生物安全评价中的非科学因素探究
14、面向分子生物系统的计算技术应用研究
15、大规模生物数据中的生物信息挖掘技术研究
16、电化学生物传感技术用于重金属和蛋白质的检测
17、电化学生物传感技术用于单碱基突变与蛋白质的检测
18、基于功能核酸的生物传感技术的研究
19、论我国生物技术专利保护
20、纳米生物相关技术专利分析系统设计与开发
21、生物技术发展困境及其人文 反思
22、基因发明专利制度相关问题分析
23、转基因动物专利研究
24、GAPDH作为原核及真核生物通用型内标蛋白的研究及相关生物技术研发
25、基于生物信息与影像技术识别材料缺陷的研究
26、基于金属纳米材料的光学生物传感技术用于酶活性的检测
27、DNA assembler技术在顺
28、晋西黄土高原生物农业发展初探
29、睡眠剥夺差异表达基因的筛选及生物信息学分析
30、太赫兹时域光谱技术对生物组织的初步研究
31、我国农业转基因生物技术安全管理研究
32、人类基因专利战略布局
33、Web Services和XML技术在生物信息数据发布及整合中的应用
34、面向快速成型技术高分子生物医学材料的研究
35、化学修饰电极与液相色谱-电化学检测技术联用在生物分析中的应用
36、小型底栖生物样品自动分离技术研究
37、激光诱导荧光技术及其在生物仪器中的应用
38、强电场常压离子注入方法研究
39、生物信息学中的模式发现算法研究
40、聚类和分类技术在生物信息学中的应用
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主编《人与动物共患病》等著作5部，参编26部；在《EmergingInfectiousDiseases》等学术期刊发表SCI论文33篇，其中第一作者和通讯作者21篇，发表于《PLoSone》关于高致病性猪蓝耳病病因确诊的论文被《Science》等学术刊物他引270次。获国家科技进步奖二等奖一项；省部级科技进步一等奖以上成果3项；获国家级新兽药证书8个；主持制定兽药国家标准13项，参与制定11项；获发明专利21项，其中1项为美国发明专利。先后荣获“国务院特殊津贴专家”、“农业部有突出贡献的中青年专家”、“新中国60年畜牧兽医科技创新贡献奖（杰出人物）”、“科学中国人2011年度人物”、“全国农业科研杰出人才”、“全国优秀科技工作者”、“中原学者”、2014年入选“国家百千万人才工程”，同时获“有突出贡献中青年专家”等荣誉称号。2015年11月，获得第八届“谈家桢生命科学奖”产业化奖。
2011年2月，我市某养猪场50公斤左右的育肥猪出现食欲减退，体温升高（41℃左右），呼吸困难，呈腹式呼吸，全身皮肤发红、发紫，有的下腹部皮肤呈现皮下弥散性、针尖大小的紫色斑点，严重的乳头发紫，眼睑水肿，行走缓慢或不愿站立，弓背收腹，跛行、疼痛（触诊或驱赶时尖叫），共济失调而走路摇晃似醉汉，间断或持续咳嗽，嗜睡，身体逐渐消瘦，后期卧地不起，四肢、关节肿大，双耳、嘴唇或皮肤红紫，最后衰竭死亡。多数病猪粪便秘结，喜卧扎堆，尿液发黄、浓茶样。症状明显的病猪大多数体表淋巴结肿大，特别是腹股沟淋巴结，个别病猪有黄疸、皮肤发白现象。病死猪多呈败血症变化。经剖检、临床症状分析和实验室检测，确定为猪蓝耳病和副嗜血杆菌混合感染。 一、剖检病变 剖检可见：病死猪消瘦，皮肤发紫，全身淋巴结肿大，特别是腹股沟淋巴结和肺门淋巴结，呈灰白色或暗红色，切面外翻且有大理石样花纹；关节肿大，关节腔内有浆液性、纤维素性炎症渗出物；胸腔积有大量浑浊、黄色液体，肺脏、胸膜、心包膜表面有大量淡黄色纤维素性或化脓性纤维蛋白渗出物，表现为“绒毛心”，各脏器之间发生粘连，肺的心叶、尖叶、部分隔叶呈肉变，肺脏肿大，间质增宽，整个肺脏有黑色点状沉积；心变大，淤血，冠状动脉胶样浸润；肾脏稍肿，表面有少量白色坏死灶和针尖状出血点；脾脏肿大呈蓝紫色，边缘有梗死灶；肝脏肿大，呈黄色；膀胱积尿，有出血点；胃粘膜点状出血；气管内充满泡沫状物。 二、实验室检验 （一）涂片镜检 无菌取肺、胸腔积液涂片，革兰氏染色镜检均可见革兰氏呈阴性，带荚膜的菌株呈球杆状，无荚膜的菌株呈杆形。 （二）猪蓝耳病琼脂扩散试验 无菌取肺脏、淋巴结等组织，研磨制成混悬液，低温反复冻融，离心，取上清液，用标准阳性血清进行琼脂扩散试验，结果为阳性，说明病猪内脏组织中有蓝耳病病毒。 三、确诊 根据本病特点、临床症状、剖检变化和实验室诊断，综合分析，最后确诊为猪蓝耳病和副嗜血杆菌混合感染。 四、原因分析 本次发病的主要原因是由于新购入带有蓝耳病的猪，没有经过隔离、观察饲养，直接与其他猪混群饲养。首先造成蓝耳病的流行，使猪群的免疫抵抗力下降，从而使副嗜血杆菌乘虚而入，继发感染而致病。 五、治疗措施 （一）及时隔离病猪和感染猪，处理病死猪。 （二）紧急预防接种，对病猪立即进行猪瘟疫苗接种，三天后每头猪再注射2份蓝耳病疫苗。 （三）对症治疗。上午：每头猪肌肉注射信必妥15毫升+珠康2毫升，头孢噻呋5毫升。下午：每头猪肌肉注射氟乐健10毫升，附炎宁15毫升。在饮水中添加：口服葡萄糖500克+电解多维50克+维生素C20克（100斤水中），在饲料中添加：支原净10克+氟乐健50克+炎可舒50克（100斤饲料中）。 （四）搞好消毒工作，改善卫生状况。加强消毒，使用二氧化氯消毒剂按1：800的比例全场每天进行一次彻底消毒。 （五）加强饲养管理，控制好温度、相对湿度、饲养密度，搞好通风，减少各种应激。同时加强灭鼠、灭虫工作，防止传染疾病。 六、治疗效果 通过电话回访得知：经过三天的治疗后未见有死猪，一周后猪群逐渐稳定，二周后猪群恢复正常。 七、体会 （一）本例发病猪场发病快，需要快速、准确查出病原，及时对症治疗，以免贻误病情。猪蓝耳病发病率高，死亡率高，损失惨重，猪蓝耳病病毒可使猪免疫功能受损，易引起细菌继发感染，当猪蓝耳病和副嗜血杆菌混合感染时，病情会难以控制且病程较长，从而给治疗增加难度。所以，应早发现、早确诊、早治疗，治疗方法得当的情况下，可大大降低猪的死亡率。 （二）坚持自繁自养的原则，不要随便从外地购买牲猪，自繁自养是猪场发展的方向。如果必须购买牲猪时，一定要从实力强、质量优、信誉好、售后服务完善的正规猪场购买。购买牲猪前，一方面加强圈舍的卫生、消毒工作，先用3%的NaOH喷洒地面和栏壁，2天后用清水冲洗、晾干，然后用二氧化氯消毒剂按1：1000的比例消毒，待干燥后进猪。另一方面要严格检疫，血清学阳性的猪，严禁引入，血清学阴性的猪至少隔离观察3周以上，才可混入猪群。 （三）加强饲养管理是健康养猪的保证，好的饲养管理可以使猪发挥遗传优势，增强机体抵抗力，减少疾病发生。首先要控制好温度、湿度、猪只饲养密度，搞好通风换气，减少舍内有害气体的含量。其次是搞好猪舍清洁卫生和防疫消毒，要树立“防重于治”“消毒胜过投药”“消毒减少投药”“投药代替不了消毒”的观念。消毒剂要选择高效、低毒的。第三是保证有足够的清洁饮水，饲喂营养全面易消化的饲料，以提高猪群免疫水平。第四是实行全进全出，减少各种应激。全进全出可以减少疾病的水平传播，减少应激可以避免猪只免疫抵抗力下降。第五，勤观察猪群，做到“平时看精神，喂料看食欲，清扫看粪便”，发现问题及时解决。 （四）药物保健是健康养猪的辅助条件，选择适当的药物对猪群进行保健，可以减少疫病的发生。药物的选择一定要合理、符合猪群的实际情况，可以利用药敏试验结果来选择敏感药物，同时也要加入增强免疫力和提高抵抗力的增强剂（比如黄芪多糖、左旋米唑等）。在疫病来临之际，一定要把握“大群优先”的原则，首先考虑对未见临床症状的猪进行用药、消毒、接种疫苗，其次，对已表现症状的猪进行隔离、观察、治疗、淘汰。 （责任编辑文思）
[1]付新梅 戴树桂 张余.离子液体与传统有机溶剂萃取性能的比较研究[J].分析化学，2006，34(5)：598～[2]赵乐军 戴树桂 吴彩霞 闫澍旺 曹永华 刘润.不同添加剂改善脱水污泥填埋特性的正交试验研究[J].给水排水，2006，32(1)：11～[3]汪磊 吴颖虹 孙红文 戴树桂.黄河兰州段悬浮颗粒物对菲的吸附行为研究[J].环境科学与技术，2006，29(4)：1～[4]刘春光 金相灿 孙凌 钟远 孙红文 戴树桂 庄源益.水体pH和曝气方式对藻类生长的影响[J].环境污染与防治，2006，28(3)：161～[5]刘春光 金相灿 孙凌 孙红文 朱琳 于洋 戴树桂 庄源益.不同氮源和曝气方式对淡水藻类生长的影响[J].环境科学，2006，27(1)：101～[6]刘春光 孙红文 朱琳 李健 牛倩 庄源益 戴树桂.两种无机盐形成的盐度对淡水藻类生长的影响[J].环境科学学报，2006，26(1)：157～[7]高敏苓 戴树桂.土壤中有机污染物生物可利用性研究进展[J].华中农业大学学报，2006，25(3)：334～[8]高敏苓 戴树桂 马永民 张平.氮肥对绿麦隆在土壤中吸附-解吸作用的影响[J].农业环境科学学报，2006，25(3)：694～[9]付新梅 戴树桂 傅学起.液膜萃取技术在环境样品前处理中的应用[J].分析测试学报，2006，25(2)：126～[10]张彦峰 张清敏 高志贤 戴树桂.用于测定多环芳烃的酶联免疫吸附分析法的研究[J].农业环境科学学报，2006，25(2)：537～[11]孙凌 金相灿 钟远 张冬梅 朱琳 戴树桂 庄源益.不同氮磷比条件下浮游藻类群落变化[J].应用生态学报，2006，17(7)：1218～[12]王平 徐建 钟霞 戴树桂 孙红文.半透膜被动采样装置（SPMDs）对PAHs和壬基酚类的静态富集[J].生态环境，2006，15(3)：475～[13]徐建 钟霞 王平 汪磊 董军兴 戴树桂.利用半透膜被动采样技术监测黄河兰州段典型有机污染物[J].生态环境，2006，15(3)：481～[14]高敏苓 戴树桂 张平.绿麦隆、阿特拉津单一与复合污染对蚯蚓的毒性效应研究[J].生态环境，2006，15(3)：525～[15]高志贤 王艳 房彦军 周焕英 王涛 王红勇 王升启 戴树桂.小分子阿特拉津和罂粟碱检测的免疫芯片技术研究[J].分析化学，2005，33(4)：455～[16]张丽 戴树桂.多介质环境逸度模型研究进展[J].环境科学与技术，2005，28(1)：97～[17]刘春光 金相灿 邱金泉 孙凌 戴树桂 庄源益.光照与磷的交互作用对两种淡水藻类生长的影响[J].中国环境科学，2005，25(1)：32～[18]赵文岩 韩萌 戴树桂.离子液体1-甲基-3-己基咪唑六氟磷酸用于水中多环芳烃萃取的研究[J].环境化学，2005，24(4)：467～[19]徐建 戴树桂.表面活性剂SDBS对甘薯吸收涕灭威的影响[J].农业环境科学学报，2005，24(3)：490～[20]侯绍刚 徐建 汪磊 孙红文 戴树桂 刘昕宇.黄河（兰州段）水环境中壬基酚及壬基酚聚氧乙烯醚污染的初步研究[J].环境化学，2005，24(3)：250～[21]刘春光 金相灿 孙凌 钟远 戴树桂 庄源益.pH值对淡水藻类生长和种类变化的影响[J].农业环境科学学报，2005，24(2)：294～[22]赵乐军 戴树桂 闫澍旺 曹永华 刘润.掺添加剂改善脱水污泥填埋特性研究[J].中国给水排水，2005，21(2)：47～[23]郭炜锋 戴树桂.水环境多环芳烃源解析研究进展[J].环境污染治理技术与设备，2005，6(10)：8～[24]刘宪华 宋文华 戴树桂.呋喃丹水解酶的分离纯化及性质[J].上海交通大学学报，2004，38(5)：834～[25]刘春光 金相灿 孙凌 邱金泉 王雯 戴树桂 庄源益.城市小型人工湖围隔中生源要素和藻类的时空分布[J].环境科学学报，2004，24(6)：1039～[26]徐建 袁旭 戴树桂.涕灭威在土壤溶液中的降解研究[J].农业环境科学学报，2004，23(6)：1168～[27]赵乐军 戴树桂 辜显华.污泥填埋技术应用进展[J].中国给水排水，2004，20(4)：27～[28]赵文岩 戴树桂 韩萌.绿色化学研究与生态环境保护[J].生态环境，2004，13(3)：425～[29]刘宪华 冯炘 宋文华 戴树桂.假单胞菌AEBL3对呋喃丹污染土壤的生物修复[J].南开大学学报：自然科学版，2003，36(4)：63～[30]钱芸 戴树桂 刘广良 葛卫东 庄源益.硝酸镧对铜绿微囊藻生长特性的影响[J].中国环境科学，2003，23(1)：7～[31]刘宪华 宋文华 戴树桂.呋喃丹降解菌AEBL3的筛选及特性研究[J].上海环境科学，2003，22(11)：743～[32]金朝晖 曹骥赟 李铁龙 周欣 戴树桂 王玲艳.农药涕灭威在土壤中的移动性及地下水影响研究[J].农业环境科学学报，2003，22(4)：480～[33]冯炘 刘宪华 宋文华 戴树桂.假单胞菌AEBL3对土壤中呋喃丹的生物降解[J].城市环境与城市生态，2003，16(6)：144～[34]李阳 张清敏 戴树桂.涕灭威及其复合污染对斑马鱼胚胎DNA的影响[J].应用生态学报，2003，14(6)：982～[35]戴树桂 王玉秋 等.三丁基锡在水—脂质体间的分配行为[J].环境科学，2002，23(4)：97～[36]戴树桂 承雪琨 等.SDBS及腐殖酸对涕灭威及其氧化产物水解的影响[J].中国环境科学，2002，22(3)：193～[37]刘广良 戴树桂 等.毛细管柱气相色谱—火焰光度检测器分析环境样品中的递灭威[J].环境化学，2002，21(5)：517～[38]戴树桂 徐建 等.农药涕灭威在甘薯中的消解特性[J].农业环境保护，2002，21(3)：248～[39]戴树桂 孙玉宝 等.涕灭威污染体系研究现场土壤生态系统表征[J].城市环境与城市生态，2002，15(3)：1～[40]孙咏梅 戴树桂 等.大气混杂污染物诱导8—羟基脱氧鸟苷的形成及机理[J].城市环境与城市生态，2002，15(1)：23～[41]徐建 戴树桂 等.土壤和地下水中污染物迁移模型研究进展[J].土壤与环境，2002，11(3)：299～[42]钱芸 戴树桂 等.富营养化淡水水体中微囊藻毒素的研究进展[J].环境污染治理技术与设备，2002，3(8)：13～[43]袭著革 戴树桂 等.典型醛类污染物与细胞DNA分子的结合作用[J].环境科学，2001，22(1)：19～[44]孙咏梅 戴树桂 等.DNA加合物8-氢基脱氧鸟苷特性研究[J].上海环境科学，2001，20(9)：409～[45]孙咏梅 戴树桂 等.香烟烟雾成分分析及其对DNA生物氧化能力研究[J].环境与健康杂志，2001，18(4)：203～[46]戴树桂 刘广良 等.土壤多介质环境污染研究进展[J].土壤与环境，2001，10(1)：1～[47]戴树桂 张东梅.固相萃取技术预富集环境水样中邻苯二甲酸酯[J].环境科学，2000，21(2)：66～[48]董亮 戴树桂.憎水性污染物在表面活性剂溶剂中的增溶动力学[J].环境科学，2000，21(1)：27～[49]刘广良 戴树桂.农药涕灭威在土壤中的不可逆吸附行为[J].环境科学学报，2000，20(5)：597～[50]袭著革 戴树桂.DNA链断裂作为醛类污染物接触标志物的研究[J].中国环境科学，2000，20(5)：441～[51]戴树桂 温妥江.偶氮染料脱色优势菌的特性及基因定位初步研究[J].南开大学学报：自然科学版，1999，32(1)：113～[52]戴树桂 董亮.表面活性剂在土壤颗粒物上的吸附行为[J].中国环境科学，1999，19(5)：392～[53]戴树桂 董亮.表面活性剂对受污染环境修复作用研究进展[J].上海环境科学，1999，18(9)：420～[54]袭著革 戴树桂.醛类化合物—DNA加合物研究进展[J].上海环境科学，1999，18(6)：286～[55]戴树桂 陈慰国.湖泊水环境中湖流及其风效应研究[J].南开大学学报：自然科学版，1998，31(3)：22～[56]张林 戴树桂.室内空气中芳香烃的测定与污染源模拟[J].环境科学，1998，19(5)：63～[57]张智超 戴树桂.海河河口水和新港港湾水中α—六六六对映本选择性降解及α,β,γ, …[J].中国环境科学，1998，18(3)：197～[58]戴树桂 刘小琴.污染土壤的植物修复技术进展[J].上海环境科学，1998，17(9)：25～[59]戴树桂 宋文华.有机污染物生物降解途径控制反应的预测与优势菌选择模型的建立[J].环境化学，1998，17(6)：547～[60]戴树桂 宋文华.有机化合物动态定量结构—生物降解关系（QSBR）模型研究[J].环境化学，1998，17(2)：105～[61]戴树桂 宋文华.偶氮染料定量结构—生物降解关系（QSBR）研究[J].环境化学，1998，17(2)：115～[62]戴树桂 袭著革.DNA加合物研究进展[J].中国公共卫生，1998，14(11)：697～[63]戴树桂 张林.论城市室内环境中气溶胶污染问题[J].城市环境与城市生态，1998，11(1)：55～[64]戴树桂 张进.有机化合物动态定量结构—生物降解关系模型研究[J].环境科学进展，1998，6(1)：1～[65]戴树桂 张林.室内空气中苯系物的测定与模拟研究[J].中国环境科学，1997，17(6)：485～[66]戴树桂 孙红文.河口及藻类对三丁基锡的降解作用[J].中国环境科学，1997，17(2)：146～[67]戴树桂 赖城明.有机污染物生物降解途径的理论预测[J].环境化学，1997，16(5)：399～[68]戴树桂 陈晓军.生物降解途径的理论预测与QSBR研究[J].环境化学，1997，16(5)：403～[69]郁建栓 戴树桂.天然湖水表面微层砷,磷酸盐,悬浮颗粒物及藻类富集现象的研究[J].环境化学，1997，16(4)：359～[70]张林 戴树桂.城市室内环境多环芳烃污染与源的相关性[J].城市环境与城市生态，1997，10(4)：43～[71]庄源益 戴树桂.新型絮凝剂凝集水中染料的研究[J].城市环境与城市生态，1997，10(2)：1～[72]戴树桂 庄源益.两种假单孢菌中二氯酚降解酶活性及其定域研究[J].环境科学学报，1996，16(2)：173～[73]戴树桂 宋文华.偶氮染料结构与其生物降解性关系研究进展[J].环境科学进展，1996，4(6)：1～[74]戴树桂.环境分析领域的主攻方向[J].国际学术动态，1996，(5)：7～
这个得具体问题具体分析。看你想达到什么检测目的了，另外还得看是什么病毒，存在于动植物什么部位。最简单的就是沉积实验：用标准抗原免疫鼠或兔等使其产生抗体，再用其血清作个沉积实验就可以了。这个实验不敏感，需要抗原抗体量较大，如果是特殊病毒或是感染初期，则检测不到。如果你有条件的话可以做ELISA，这个实验敏感性强。一,基本原理它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接,然后通过酶与底物产生颜色反应,用于定量测定.测定的对象可以是抗体也可以是抗原.在这种测定方法中有3种必要的试剂:①固相的抗原或抗体(免疫吸附剂)②酶标记的抗原或抗体(标记物)③酶作用的底物(显色剂)测量时,抗原(抗体)先结合在固相载体上,但仍保留其免疫活性,然后加一种抗体(抗原)与酶结合成的偶联物(标记物),此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性,当偶联物与固相载体上的抗原(抗体)反应结合后,再加上酶的相应底物,即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色.其所生成的颜色深浅与欲测的抗原(抗体)含量成正比.这种有色产物可用肉眼,光学显微镜,电子显微镜观察,也可以用分光光度计(酶标仪)加以测定.其方法简单,方便讯速,特异性强.二,酶及其底物酶结合物是酶与抗体或抗原, 半抗原在交联剂作用下联结的产物.是ELISA成败的关键试剂,它不仅具有抗体抗原特异的免疫反应,还具有酶促反应,显示出生物放大作用,但不同的酶选用不同的底物 ,将得到不同的颜色反应.360,450420 荧光黄色 甲基伞酮基半乳糖苷(4MuG)硝基酚半乳糖苷(ONPG) β-D-半乳糖苷酶 405420 黄色深蓝色 ABTS+HRP+葡萄糖葡萄糖+甲硫酚嗪+噻唑兰 葡萄糖氧化酶 400500 黄色红色 4-硝基酚磷酸盐(PNP)萘酚-AS-Mx磷酸盐+重氮盐 碱性磷酸酯酶 492460449425642橘红色黄色棕色兰色蓝绿色邻苯二胺四甲替联苯胺氨基水杨酸邻联苯甲胺2,2'-连胺基-2(3-乙基-并噻唑啉磺酸-6)铵盐 辣根过氧化物酶 测定波长 显色反应 底 物酶 ELISA的种类和变化 (一)双抗体夹心法(二)间接法(三)竞争法 (四)双位点一步法(五)捕获法测IgM抗体(六)应用亲和素和生物素的ELISA (一)双抗体夹心法此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原获得待分析物的未标定抗体将特异性抗体与固相载体连接形成固相抗体 洗涤除去未结合的抗体及杂质 加入封闭蛋白溶液以封闭载体表面残留的蛋白结合位点洗涤并除去未结合的封闭蛋白加受检标本(抗原)形成固相抗体-抗原复合物 洗涤除去其他未结合的物质 加酶标抗体生成抗体—待测抗原—酶标记抗体的复合物 彻底洗涤未结合的酶标抗体 加底物进行酶催化反应 根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量测定间接法是检测抗体最常用的方法,其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体,故称为间接法.(二)间接法包被固相载体: 用已知抗原包被固相载体 加待检标本: 使相应抗体与固相抗原结合洗涤,除去无关的物质 加酶标抗抗体:与固相载体上抗原抗体复合物结合;洗涤,除去未结合的酶标抗抗体 加底物显色 根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量测定(三)竞争法 此法可用于抗原和半抗原的定量测定,也可用于测定抗体 .用已知特异性抗体包被固相载体 测定管加待测抗原和一定量的酶标抗原使二者与固相抗体竞争结合 对照管只加一定量酶标抗原与固相抗体直接结合 分别洗涤除去未结合的成分 加底物显色分别测定两管的吸光度值,根据对照管与测定管吸光度值之比,计算标本中待测抗原含量对照管由于只加酶标抗原,与固相抗体充分结合,故分解底物显色深;测定管的显色程度则随待测抗原和酶标抗原与固相抗体竞争结合的结果而异.如待测抗原量多,竞争性地抑制酶标抗原与固相抗体结合,使固相上结合的酶标抗原量减少.因此,加入底物后显色反应较弱. 特点一:灵敏性该测定法的灵敏度来自作为报告集团的酶.众所周知, 酶是一种有机催化剂,很少量的酶即可诱导大量的催化反应 ,产生可供观察的显色反应现象.因此该体系常被称为酶放大体系.ELISA实现了在细胞或亚细胞水平上示踪抗原或抗体的所在部位,或在微克,甚至纳克水平上对其进行定量.例如,在测定血清中某一物质的含量时,化学比色法的敏感度为mg/ml水平,酶反应测定法的敏感度约为5~10μg/ml . 特点二:特异性其特异性来自抗体或抗原的选择性.抗原抗体的结合实质上只发生在抗原的抗原决定簇与抗体的抗原结合位点之间.由于两者在化学结构和空间构型上呈互补关系,所以抗原抗体反应具有高度的特异性.例如乙肝病毒中的表面抗原(HBsAg),e抗原(HBeAg)和核心抗体(HBcAg),虽来源于同一病毒,但仅与其相应的抗体结合,而不与另外两种抗体反应.抗原抗体反应的这种特异性使免疫测定能在一非常复杂的蛋白质化合物(例如血清)中测定某一特定的物质,而不需先分离待检物.ELISA应用实例饲料中盐酸克伦特罗的测定饲料中毒素的测定(主要包括黄曲霉毒素, 简曲霉毒素 ) 饲料中有害微生物的快速筛检 (如沙门氏菌 )甲胺磷残留分析 甲基对硫磷残留分析 呋喃丹残留分析 ELISA在饲料安全检测中的应用ELISA用于农药残留的检测河豚毒素 植物毒素如罂粟碱,吗啡,藻类毒素 苯并芘 主要有除草剂与杀虫剂两大类例如杀暝松( FN ),甲氟磷酸异已酶( SOMAN ),草不绿( Alachor ),西维因( Carbaryl ),多菌灵及克菌丹( Captan )等.农药的检测:ELISA检测 "非典型肺炎"冠状病毒 ELISA在结缔组织病早期诊断中的应用检测抗异质性胞核核糖蛋白A2(hnRNPA2)/类风湿性关节炎(PtA)33抗体ELISA在疾病诊断中的作用ELISA法检测幽门螺杆菌抗体ELISA试剂盒商业资讯ELISA试剂盒酶联免疫井DNM-9602G酶标分析仪DNM-9602 标配酶标分析仪 DNM-9602A酶标分析仪几种酶标分析仪(一) 原理 ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、牵9体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体——聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法(图a)、用于检测抗原的双抗体夹心法(图b)以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。 (二) 操作步骤 方法一 用于检测未知抗原的双抗体夹心法: 1. 包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。 2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。 3. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。 4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。 5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。 6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。 方法二 用于检测未知抗体的间接法： 用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,最后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。(三) 试剂器材 1. 试剂 (1) 包被缓冲液(PH9.6 0.05M碳酸盐缓冲液): NaCO31.59克 NaHCO3 2.93克 加蒸馏水至1000ml (2) 洗涤缓冲液(PH7.4 PBS)：0.15M KH2PO4 0.2克 Na2HPO4·12H2O 2.9克 NaCl 8.0克KCl 0.2克 Tween-20 0.05％ 0.5ml 加蒸馏水至1000ml (3) 稀释液:牛血清白蛋白(BSA) 0.1克 加洗涤缓冲液至100ml 或以羊血清、兔血清等 血清与洗涤液配成5～10％使用。 (4) 终止液(2M H2SO4）：蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸(98％)21.7ml。 (5) 底物缓冲液(PH5.0磷酸枣柠檬酸):0.2M Na2HPO4(28.4克／L) 25.7ml 0.1M 柠檬酸(19.2克／L) 24.3ml 加蒸馏水50ml。 (6) TMB(四甲基联苯胺)使用液:TMB(10mg／5ml无水乙醇) 0.5ml底物缓冲液(PH5.5) 10ml0.75％H2O2 32μl (7) ABTS使用液:ABTS 0.5mg 底物缓冲液(PH5.5) 1ml 3％H2O2 2μl (8) 抗原、抗体和酶标记抗体。 (9) 正常人血清和阳性对照血清。 2. 器材: (1) 聚苯乙烯塑料板(简称酶标板)40孔或96孔，ELISA检测仪，50μl及100μl加样器，塑料滴头，小毛巾，洗涤瓶。 (2) 小烧杯、玻璃棒、试管、吸管和量筒等。 (3) 4℃冰箱，37℃孵育箱。(四) 注意事项 1. 正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。 2. 在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括: (1) 固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。 （2) 包被抗体(或抗原)的选择：将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18～24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg／ml等)进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg／ml。 (3) 酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。 (4) 酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。
1.速测技术检测原理 目前食菜中毒主要是由有机磷和氨基甲酸酯类农药引起，特别是甲胺磷最易引起急性中毒，它会抑制人体中枢和周围神经系统中乙酰胆碱酯酶的活性，造成神经传导介质乙酰胆碱的积累，影响正常传导，使人致死。农药残留速测法就是基于有机磷或氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶的强烈抑制作用，利用这种毒理学反应的共性，能使显色剂正常显色的为安全菜，被抑制不能显色的表明农药残留超过了标准。2.只测这两类农药行吗？有机磷和氨基甲酸酯类农药是当前生产量最大，蔬菜上使用最多，也最容易引起中毒的两大类农药，是国家重点监控的目标。有机氯农药因其难以降解，早已禁止生产和使用。而一些除草剂因其除草机理与人体亲缘较远，对人体危害不大，还有一类杀菌剂大多数属于低毒农药。为此只要监管好这两类农药，就基本可避免食菜中毒事件发生。3.农药残留速测法依据的标准2001年10月1日，国家质量技术监督局正式颁布了“农产品安全质量”标准，在标准的5.2.2条中明文规定了酶抑制法的快速检测技术。2003年3月，国家质量技术监督局又颁布了“蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯的快速检测方法”，纸片速测法作为第一方法被选用。我们采用的纸片法是通过选择酶的活性和量来控制其灵敏度，考虑到有些农药国家明令禁止在蔬菜上不得使用，如甲胺磷、氧化乐果、呋喃丹等，而有些农药可以用在蔬菜上，但不能超过一定的限量标准，如敌敌畏是0.2ppm，乐果是1.0ppm，因为该速测法是针对有机磷和氨基甲酸酯两大类农药的，无法准确判定是那一种农药，所以，为了避免误判，我们将其灵敏度定为1.0ppm，即超过此限量，速测卡就显阳性，农药残留一定超标。
微生物
总大肠菌群（MPN/100mL或CFU/100mL） 不得检出
耐热大肠菌群（MPN/100mL或CFU/100mL） 不得检出
大肠埃希氏菌（MPN/100mL或CFU/100mL） 不得检出
菌落总数（CFU/mL） 100
毒理指标
砷（mg/L） 0.01
镉（mg/L） 0.005
铬（六价，mg/L） 0.05
铅（mg/L） 0.01
汞（mg/L） 0.001
硒（mg/L） 0.01
氰化物（mg/L） 0.05
氟化物（mg/L） 1.0
硝酸盐（以N计，mg/L） 10
地下水源限制时为20
三氯甲烷（mg/L） 0.06
四氯化碳（mg/L） 0.002
溴酸盐（使用臭氧时，mg/L） 0.01
甲醛（使用臭氧时，mg/L） 0.9
亚氯酸盐（使用二氧化氯消毒时，mg/L） 0.7
氯酸盐（使用复合二氧化氯消毒时，mg/L） 0.7
化学指标
色度（铂钴色度单位） 15
浑浊度（NTU-散射浊度单位） 1
水源与净水技术条件限制时为3
臭和味无异臭、异味
肉眼可见物 无
pH （pH单位） 不小于6.5且不大于8.5
铝（mg/L） 0.2
铁（mg/L） 0.3
锰（mg/L） 0.1
铜（mg/L） 1.0
锌（mg/L） 1.0
氯化物（mg/L） 250
硫酸盐（mg/L） 250
溶解性总固体（mg/L） 1000
总硬度(以CaCO3计，mg/L） 450
耗氧量（CODMn法，以O2计，mg/L） 3
水源限制，原水耗氧量>6mg/L时为5
挥发酚类（以苯酚计，mg/L） 0.002
阴离子合成洗涤剂（mg/L） 0.3
放射性
总α放射性（Bq/L） 0.5
总β放射性（Bq/L） 1
①MPN表示最可能数；CFU表示菌落形成单位。当水样检出总大肠菌群时，应进一步检验大肠埃希氏菌或耐热大肠菌群；水样未检出总大肠菌群，不必检验大肠埃希氏菌或耐热大肠菌群。
②放射性指标超过指导值，应进行核素分析和评价， [3] 判定能否饮用。
表2 饮用水中消毒剂常规指标及要求
消毒剂名称 与水接触时间 出厂水
中限值 出厂水
中余量 管网末梢水中余量
氯气及游离氯制剂（游离氯,mg/L） 至少30min 4 ≥0.3 ≥0.05
一氯胺（总氯，mg/L） 至少120min 3 ≥0.5 ≥0.05
臭氧（O3，mg/L） 至少12min 0.3 0.02
如加氯，
总氯≥0.05
二氧化氯（ClO2，mg/L） 至少30min 0.8 ≥0.1 ≥0.02
非常规
编辑
指 标 限 值
微生物
贾第鞭毛虫（个/10L） <1
隐孢子虫（个/10L） <1
毒理指标
锑（mg/L） 0.005
钡（mg/L） 0.7
铍（mg/L） 0.002
硼（mg/L） 0.5
钼（mg/L） 0.07
镍（mg/L） 0.02
银（mg/L） 0.05
铊（mg/L） 0.0001
氯化氰（以CN-计，mg/L） 0.07
一氯二溴甲烷（mg/L） 0.1
二氯一溴甲烷（mg/L） 0.06
二氯乙酸（mg/L） 0.05
1,2-二氯乙烷（mg/L） 0.03
二氯甲烷（mg/L） 0.02
三卤甲烷（三氯甲烷、一氯二溴甲烷、二氯一溴甲烷、三溴甲烷的总和） 该类化合物中各种化合物的实测浓度与其各自限值的比值之和不超过1
1,1,1-三氯乙烷（mg/L） 2
三氯乙酸（mg/L） 0.1
三氯乙醛（mg/L） 0.01
2,4,6-三氯酚（mg/L） 0.2
三溴甲烷（mg/L） 0.1
七氯（mg/L） 0.0004
马拉硫磷（mg/L） 0.25
五氯酚（mg/L） 0.009
六六六（总量，mg/L） 0.005
六氯苯（mg/L） 0.001
乐果（mg/L） 0.08
对硫磷（mg/L） 0.003
灭草松（mg/L） 0.3
甲基对硫磷（mg/L） 0.02
百菌清（mg/L） 0.01
呋喃丹（mg/L） 0.007
林丹（mg/L） 0.002
毒死蜱（mg/L） 0.03
草甘膦（mg/L） 0.7
敌敌畏（mg/L） 0.001
莠去津（mg/L） 0.002
溴氰菊酯（mg/L） 0.02
2,4-滴（mg/L） 0.03
滴滴涕（mg/L） 0.001
乙苯（mg/L） 0.3
二甲苯（mg/L） 0.5
1,1-二氯乙烯（mg/L） 0.03
1,2-二氯乙烯（mg/L） 0.05
1,2-二氯苯（mg/L） 1
1,4-二氯苯（mg/L） 0.3
三氯乙烯（mg/L） 0.07
三氯苯（总量，mg/L） 0.02
六氯丁二烯（mg/L） 0.0006
丙烯酰胺（mg/L） 0.0005
四氯乙烯（mg/L） 0.04
甲苯（mg/L） 0.7
邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（mg/L） 0.008
环氧氯丙烷（mg/L） 0.0004
苯（mg/L） 0.01
苯乙烯（mg/L） 0.02
苯并(a)芘（mg/L） 0.00001
氯乙烯（mg/L） 0.005
氯苯（mg/L） 0.3
微囊藻毒素-LR（mg/L） 0.001
化学指标
氨氮（以N计，mg/L） 0.5
硫化物（mg/L） 0.02
钠（mg/L） 200