[1]刘南威.自然地理学[M].北京:科学出版社,2001:548.[2]李春华.环境科学原理[M].南京:南京大学出版社,2003,(4).[3]叶文虎.可持续发展引论[M].北京:高等教育出版社,2003:21
1、论文题目：要求准确、简练、醒目、新颖。2、目录：目录是论文中主要段落的简表。（短篇论文不必列目录）3、提要：是文章主要内容的摘录，要求短、精、完整。字数少可几十字，多不超过三百字为宜。4、关键词或主题词：关键词是从论文的题名、提要和正文中选取出来的，是对表述论文的中心内容有实质意义的词汇。关键词是用作机系统标引论文内容特征的词语，便于信息系统汇集，以供读者检索。每篇论文一般选取3-8个词汇作为关键词，另起一行，排在“提要”的左下方。主题词是经过规范化的词，在确定主题词时，要对论文进行主题，依照标引和组配规则转换成主题词表中的规范词语。5、论文正文：（1）引言：引言又称前言、序言和导言，用在论文的开头。引言一般要概括地写出作者意图，说明选题的目的和意义,并指出论文写作的范围。引言要短小精悍、紧扣主题。〈2）论文正文：正文是论文的主体，正文应包括论点、论据、论证过程和结论。主体部分包括以下内容：a.提出-论点；b.分析问题-论据和论证；c.解决问题-论证与步骤；d.结论。6、一篇论文的参考文献是将论文在和写作中可参考或引证的主要文献资料，列于论文的末尾。参考文献应另起一页，标注方式按《GB7714-87文后参考文献著录规则》进行。中文：标题--作者--出版物信息（版地、版者、版期）：作者--标题--出版物信息所列参考文献的要求是：（1）所列参考文献应是正式出版物，以便读者考证。（2）所列举的参考文献要标明序号、著作或文章的标题、作者、出版物信息。
参考文献是文章或著作等写作过程中参考过的文献。
因参考文献的著录格式各刊不尽相同，投稿前作者应注意杂志稿约的有关规定，至少得先看看有关期刊发表的论文的参考文献是如何标注的，以了解有关期刊的参考文献的著录格式，以免出错。许多作者投递的稿件书写格式包括参考文献的著录格式与杂志所要求的不同。
坦率地讲，编辑和审稿专家也是人，工作中多少也有感情因素。如果拿到手中的是一篇书写格式不合要求的文章，别的暂且不论，就书写格式不规范这一条，就足以给编辑留下不好的印象，甚至让编辑做出退稿的决定。
就算最后没有被退稿，此类稿件较书写格式规范的稿件被录用的可能性大大降低。其实作者犯的是一个很低级的错误，让编辑很自然地联想到，该作者不太尊重期刊，还有期刊的编辑以及审稿专家。
因此，作者在投稿前一定要注意期刊参考文献的著录方式，以免产生不必要的负面影响。其实，并不复杂，只要稍稍留意即可。
北京市科学技术委员会 .1997.可持续发展词语释义 ［M］ .北京: 学苑出版社
国家环境保护局自然保护司 .1995.中国生态环境补偿费的理论与实践 ［M］ .北京: 中国环境科学出版社
摆万奇 .2000.深圳市土地利用动态趋势分析 ［J］ .自然资源学报，15 (2): 112 ～116
摆万奇，赵士洞 .1997.土地利用和土地覆被变化研究模型综述 ［J］ .自然资源学报，12 (2): 169 ～175
毕晓丽，洪伟 .2001.生态环境综合评价方法的研究进展 ［J］ .农业系统科学与综合研究，17 (5): 122 ～125
卞建民，林年丰，汤洁 .2002.土地盐碱荒漠化预警理论及实证研究 ［J］ .农业环境科学学报 .22 (2): 207 ～209
蔡运龙 .2001.土地利用/土地覆被变化研究: 寻求新的综合途径 ［J］ .地理研究，20 (6): 645 ～652
常庆瑞，蒋平安，周勇等 .2004.遥感技术导论 ［M］ .北京: 科学出版社
畅军庆，张荣南 .1997.南水北调湖北库区水环境现状及问题分析 ［J］ .环境科学与技术，(2): 1 ～4
陈百明 .1997.试论中国土地利用和土地覆被变化及其人类驱动力研究 ［J］ .自然资源，(2): 31 ～36
陈国阶 .1996.对环境预警的探讨 ［J］ .重庆环境科学，18 (5): 1 ～4
陈国阶 .2002.论生态安全 ［J］ .重庆环境科学，24 (3): 1 ～4
陈国阶，何锦峰 .1999.生态环境预警的理论和方法探讨 ［J］ .重庆环境科学，21 (4): 8 ～11
陈美兰，吴延熊，周国模等 .1999.预测、监测和预警关系的初步探讨 ［J］ .浙江林学院学报，16 (1): 10 ～13
陈佑启，PeterHVerburg.2000.中国土地利用-覆被的多尺度空间分布特征分析 ［J］ .地理科学，20 (3): 197 ～65
陈治谏，陈国阶 .1992.环境影响评价的预警系统研究 ［J］ .环境科学，13 (4): 20 ～26
丁一汇，王守荣主编 .2001.中国西北地区气候与生态环境概论 ［M］ .北京: 气象出版社
窦明，左其亭，胡彩虹 .2005.南水北调工程的生态环境影响评价研究 ［J］ .郑州大学学报 (工学版)，26 (2): 63～ 66
方创琳，张小雷 .2001.干旱区生态重建与经济可持续发展研究进展 ［J］ .生态学报，21 (7): 1163 ～1170
傅伯杰 .1991.区域生态环境预警的原理与方法 ［J］ .资源开发与保护，7 (3): 138 ～141
傅伯杰，陈利顶 .1996.景观多样性的类型及其生态意义 ［J］ .地理学报，51 (5): 454 ～461
傅伯杰，陈利顶，刘国华 .1999.中国生态区划的目的、任务及特点 ［J］ .生态学报，19 (5): 591 ～595
傅伯杰，陈利顶，马克明等 .2001.景观生态学原理及应用 ［M］ .北京: 科学出版社
高更和 .2002.南水北调中线工程源头区水土流失及其治理———南阳市汉水流域研究 ［J］ .水土保持通报，(3): 65 ～68
高志强，刘纪远，庄大方 .1999.基于遥感和 GIS 的中国土地利用/土地覆盖的现状研究 ［J］ .遥感学报，3 (2): 134～ 139
顾朝林 .1999.北京市土地利用/覆被变化机制研究 ［J］ .自然资源学报，14 (4): 307 ～312
关文彬，谢春华，李春平等 .2003.荒漠化危害预警原理与评价方法 ［J］ .北京林业大学学报 .25 (3): 79 ～83
关文彬，谢春华，孙保平等 .2001.荒漠化危害预警预景指标体系研究 ［J］ .北京林业大学学报 .23 (1): 44 ～47
郭中伟 .2001.建设国家生态安全预警系统与维护体系———面对严重的生态危机的对策 ［J］ .科技导报，(1): 54 ～56
胡安焱，郭生练，刘燕等 .2006.干旱区内陆河流域生态环境质量模糊综合评价 ［J］ .地质灾害与环境保护，17 (2):69 ～ 73
黄秉维 .1996.论地球系统科学与可持续发展战略科学基础 ［J］ .地理学，51 (4): 289 ～294
惠映河，蒋晓辉 .2001.水资源承载力评价指标体系研究 ［J］ .水土保持通报，21 (1): 30 ～34
蒋国富，白耕勤 .2004.南水北调中线工程水源区生态环境问题探析 ［J］ .南阳师范学院学报 (自然科学版)，3(9): 72 ～ 76
金岚主编 .1992.环境生态学 ［M］ .北京: 高等教育出版社
靳英华，赵东升，杨青山等 .2004.吉林省生态环境敏感性分区研究 ［J］ .东北师大学报自然科学版，36 (2): 68 ～74
康慕谊，江源，石瑞香 .2000.NECT 样带 1984 ～1996 年土地利用变化分析 ［J］ .地理科学，20 (2): 115 ～120
李红鹰 .2000.层次分析法在农业生态环境质量评价中的应用 ［J］ .监测与环境，(7): 30 ～31
李峻，董立克，慕金波等 .2000.区域环境质量预警研究 ［J］ .山东环境，(3): 19 ～20
李平，李秀彬，刘学军 .2001.我国现阶段土地利用变化驱动力的宏观分析 ［J］ .地理研究，20 (2): 129 ～138
李如忠 .2001.巢湖流域生态环境质量评价初步研究 ［J］ .合肥工业大学学报 (自然科学版)，24 (5): 987 ～990
李崧，邱微，赵庆良等 .2006.层次分析法应用于黑龙江省生态环境质量评价研究 ［J］ .环境科学，27 (5): 454 ～461
李晓兵 .1999.国际土地利用/土地覆盖变化的环境影响研究 ［J］ .地球科学进展，14 (4): 395 ～399
李晓秀 .1997.北京山区生态环境质量评价体系初探 ［J］ .自然资源，(5): 31 ～35
李秀彬 .1996.全球环境变化研究的核心领域 ［J］ .地理学报，51 (6): 553 ～556
李祚泳，邓兴民 .1995.综合环境质量的 B-P 网络二级评价 ［J］ .环境科学研究，8 (3): 32 ～35
李祚泳，彭荔红 .1999.基于人工神经网络的农业病虫害预测模型及其效果检验 ［J］ .生态学报，19 (5): 759 ～762
林年丰，汤洁 .2000.GIS 与环境模拟在环境地学研究中的作用和意义 ［J］ .土壤与环境，9 (4): 259 ～262
刘昌明 .2002.南水北调工程对生态环境的影响 ［J］ .海河水利，(1): 1 ～5
刘昌明，沈大军 .1997.南水北调工程的生态环境影响 ［J］ .大自然探索，16 (2): 1 ～6
刘彦随 .2001.山地土地类型的结构分析与优化利用 ［J］ .地理学报，56 (4): 426 ～436
陆登櫆 .1997.遥感技术在农业工程中应用 ［M］ .北京: 科技出版社
罗先香，邓伟 .2000.松嫩平原西部土壤盐渍化动态敏感性分析与预测 ［J］ .水土保持学报，14 (3): 36 ～40
马乃喜 .1998.区域生态环境评价中的几个理论问题 ［J］ .西北大学学报 (自然科学版)，28 (4): 330 ～334
毛汉英 .1996.山东省可持续发展指标体系初步研究 ［J］ .地理研究，15 (4): 16 ～23
梅宝玲，陈舜华 .2003.内蒙古生态环境预警指标体系研究 ［J］ .南京气象学院学报，26 (3): 384 ～393
苗鸿，王效科，欧阳志云 .2001.中国生态环境胁迫过程区划研究 ［J］ .生态学报，21 (1): 7 ～13
牛文元 .1994.持续发展导论 ［M］ .北京: 科学出版社，13 ～16
欧阳志云，王效科，苗鸿 .2000.中国生态环境敏感性及其区域差异规律初步研究 ［J］ .生态学报，20 (1): 9 ～12
冉圣宏，金建君，薛纪渝 .2002.生态脆弱区评价的理论与方法 ［J］ .自然资源学报，17 (1): 117 ～122
任志远，张艳芳 .2003.土地利用变化与生态安全评价 ［M］ .北京: 科学出版社
邵东国，李元红，王忠静等 .1996.基于神经网络的干旱内陆河流域生态环境预警方法研究 ［J］ .中国农村水利水电，(6): 10 ～ 12
盛连喜，冯江，王娓 .2005.环境生态学导论 ［M］ .北京: 高等教育出版社
史德明，梁音 .2002.我国脆弱生态环境的评估与保护 ［J］ .水土保持学报，16 (1): 6 ～10
史培军，陈晋，潘耀忠 .2000.深圳市土地利用变化机制分析 ［J］ .地理学报，55 (2): 151 ～160
史培军，宫鹏，李小兵等著 .2000.土地利用/覆盖变化研究方法与实践 ［M］ .科学出版社
史培军，江源，王静爱等 .2004.土地利用/覆盖变化与生态安全响应机制 ［M］ .北京: 科学出版社
苏维词，李久林 .1997.乌江流域生态环境预警评价初探 ［J］ .贵州科学，15 (3): 207 ～214
孙希华 .1999.山东农业生态环境质量评价与发展策略 ［J］ .山东师范大学学报 (自然科学版)，14 (2): 161 ～165
汤洁，林年丰，卞建民 .1999.农业生态地质环境质量综合评价———以吉林省乾安县为例 ［J］ .世界地质，18 (2):89 ～ 94
汤丽妮，张礼清，王卓 .2003.人工神经网络在生态环境质量评价中的应用 ［J］ .四川环境，22 (3): 69 ～72
唐剑武，叶文虎 .1998.环境承载力的本质及其定量化初步研究 ［J］ .中国环境科学，18 (3): 227 ～230
陶骏昌主编 .1994.农业预警概论 ［M］ .北京: 北京农业大学出版社，1 ～10
王根绪，钱鞠，程国栋 .2001.区域生态环境评价 (REA)的方法与应用 ［J］ .兰州大学学报 (自然科学版)，37(2): 131 ～ 140
王立群 .1991.关于建立我国森林资源预警系统的初步研究 ［J］ .林业经济，(5): 16 ～19
王良健，刘伟，包浩生 .1999.梧州市土地利用变化的驱动力研究 ［J］ .经济地理，19 (4): 74 ～79
王龙 .1995.山西煤炭开发与生态环境预警初探 (J).生态经济，(5):
王桥，杨一鹏，黄家柱等 .2005.环境遥感 ［M］ .北京: 科学出版社
王让会，樊自立 .1998.塔里木河流域生态脆弱性评价研究 ［J］ .干旱环境监测，12 (4): 218 ～323
王思敬，戴福初 .1997.环境工程地质评价、预测与对策分析 ［J］ .地质灾害与环境保护，8 (1): 27 ～34
王秀兰 .1999.基于遥感的呼伦贝尔盟农牧业土地利用变化及其对地区农业持续发展影响 ［J］ .地理科学进展，18(4): 322 ～ 330
文传甲 .1997.三峡库区大农业的自然环境现状与预警分析 ［J］ .长江流域资源与环境 6 (4): 340 ～345
文传甲 .1998.三峡库区农业生态经济系统的预警分析 ［J］ .山地研究，16 (1): 13 ～20
伍黎芝 .2000.生态脆弱区土地资源可持续利用问题 ［J］ .中国土地科学，14 (2): 13 ～16
武永峰，任志远 .2002.陕西省脆弱生态环境定量评价研究 ［J］ .干旱区资源与环境，16 (2): 10 ～14
夏军 .1999.区域水环境及生态质量评价 ［M］ .武汉: 武汉水利电力大学出版社
谢志仁，刘庄 .2001.江苏省区域生态环境综合评价研究 ［J］ .中国人口、资源与环境，11 (3): 85 ～88
徐福留 .2001.城市环境质量多级模糊综合评价 ［J］ .城市环境与城市生态，14 (2): 13 ～15
徐正春 .1993.森林资源预警系统初步研究 ［J］ .林业经济，(1): 58 ～62
许学工 .1996.黄河三角洲生态环境的评估和预警研究: (J).生态学报，16 (5): 461 ～468
阎积惠，康慧，陈怀亮 .1995.TM 图像地质应用原理与方法 ［M］ .北京: 冶金工业出版社
颜卫忠 .2002.环境预警指标体系研究 ［J］ .长沙电力学院学报 (自然科学版)，17 (3): 87 ～90
杨桂山 .2001.长江三角洲近 50 年耕地数量变化的过程与驱动机制研究 ［J］ .自然资源学报，16 (2): 121 ～127
杨天柱 .2005.丹江口库区生态林现状与建设对策 ［J］ .河南林业科学，25 (2): 38 ～40
杨伟光，付怡 .1999.农业生态环境质量的指标体系与评价方法 ［J］ .监测与评价，(2): 42 ～43
杨志峰，徐俏等 .2002.城市生态敏感性分析 ［J］ .中国环境科学，22 (4): 360 ～364
姚建 .1998.AHP 法在县域生态环境质量评价中的应用 ［J］ .重庆环境科学，20 (2): 11 ～14
姚建，王燕，雷蕾等 .2006.岷江上游生态脆弱性的模糊评价 ［J］ .国土资源科技管理，23 (2): 90 ～92
叶文虎，栾胜基 .1994.环境质量评价学 ［M］ .北京: 高等教育出版社
叶亚平，刘鲁君 .2000.中国省域生态环境质量评价指标体系研究 ［J］ .环境科学研究，13 (3): 33 ～36
喻良，伊武军 .2002.层次分析法在城市生态环境质量评价中的应用 ［J］ .四川环境，21 (4): 38 ～40
张大任 .1991.洞庭湖生态环境预警 ［J］ .地理学与国土研究，7 (2): 42 ～44
张合平，刘云国 .2002.环境生态学 ［M］ .北京: 中国林业出版社
张明 .1999.区域土地利用结构及其驱动因子的统计分析 ［J］ .自然资源学报，14 (4): 381 ～384
张天义，张兴辽，张克伟等 .2003.遥感 .河南省国土资源综合调查与评价 ［M］ .北京: 地质出版社
张峥，张建文，李寅年等 .1999.湿地生态评价指标体系 ［J］ .农业环境保护，18 (6): 283 ～285
赵跃龙 .1999.中国脆弱生态环境类型分布及其综合治理 ［M］ .北京: 中国环境科学出版社
赵跃龙，刘燕华 .1994.中国脆弱生态环境类型划分及其范围确定 ［J］ .云南地理环境研究，6 (2): 34 ～44
赵跃龙，刘燕华 .1996.中国脆弱生态环境分布及其与贫困的关系 ［J］ .地球科学进展，11 (3): 245 ～251
赵跃龙，张玲娟 .1998.脆弱生态环境定量评价方法的研究 ［J］ .地理科学，18 (1): 73 ～79
郑新奇，王爱萍 .2000.基于 RS 与 GIS 的区域生态环境质量综合评价研究———以山东省为例 ［J］ .环境科学学报，20(4): 489 ～ 493
朱东红，上官铁梁，苏志珠等 .2000.区域生态环境质量评价方法 ［J］ .山西煤炭管理干部学院学报，(1): 64 ～67
朱发 .1999.层次分析法在石羊河流域生态环境现状评价中的应用 ［J］ .甘肃水利水电技术，(1): 66 ～68
朱晓华，杨秀春 .2002.层次分析法在区域生态环境质量评价中的应用研究 ［J］ .国土资源科技管理，18 (5): 43 ～46
庄锁法 .2000.基于层次分析法的综合评价模型 ［J］ .合肥工业大学学报 (自然科学版)，23 (4): 582 ～590
左伟，王桥，王文杰等 .2002.区域生态安全评价指标与标准研究 ［J］ .地理学与国土研究，18 (1): 67 ～71
Annemarie.1997.Land Use and Land Cover Change: the LUCC Science Plan in Europe ［M］ .LUCC new sletter，(1): 7 ～ 10
Barnthouse LW.1992.Tlne role of models in ecological risk assessment.Environ Toxicol Chem，(11): 1751 ～ 1760
Blaszczynski J S.1997.Landform Characterization with Geographic Information Systems.Photogrammetric Engineering and Remote Sensing.63 (2): 183 ～ 191
Boughton DA，Smith ER and O'Neill RV.1999.Regional vulnerability: A conceptual framework.Ecoyst Health，(5): 312 ～322
Edwards G， Lovwel.K E1996.Modeling Uncertainty in Photointerpreted Boundaries.PhotogrammetricEngineering and Remote Sensing.62 (4): 377 ～ 3
Farina A.1988.Principles and Methods in Landscape Ecology ［M］ .London: Chapman ＆ Hall，1 ～ 130
Lambin E F，Baulies X etal.1999.Land-Use and Land-Cover Change Implementation Strategy ［A］ .IGBP Report No.48 ＆ IHDP Report No.10 ［C］ .Stochkholm: IGBP，11 ～ 16
TurnerⅡBL，Skole D，Sanderson S et al.1995.Land-use and land-cover change science / research plan ［M］ .IGBP Report No.35 and HDP Report No.7.Stochkholm: IGBP
Turner I BL，David Skole， Steven， Sanderson.1995.Land Use and Land Cover Change (LUCC ): Science / Research Plan［R］ .IGBP Reports，No.35
Turner II BL.1990.Two types of global environmental changes: definitional and spatial scale issues in their human dimensions［J］ .Global Environmental Change: Humanand Policy Dimension，1 (1): 14 ～ 22
参考文献是文章或著作等写作过程中参考过的文献。
因参考文献的著录格式各刊不尽相同，投稿前作者应注意杂志稿约的有关规定，至少得先看看有关期刊发表的论文的参考文献是如何标注的，以了解有关期刊的参考文献的著录格式，以免出错。许多作者投递的稿件书写格式包括参考文献的著录格式与杂志所要求的不同。
坦率地讲，编辑和审稿专家也是人，工作中多少也有感情因素。如果拿到手中的是一篇书写格式不合要求的文章，别的暂且不论，就书写格式不规范这一条，就足以给编辑留下不好的印象，甚至让编辑做出退稿的决定。
就算最后没有被退稿，此类稿件较书写格式规范的稿件被录用的可能性大大降低。其实作者犯的是一个很低级的错误，让编辑很自然地联想到，该作者不太尊重期刊，还有期刊的编辑以及审稿专家。
因此，作者在投稿前一定要注意期刊参考文献的著录方式，以免产生不必要的负面影响。其实，并不复杂，只要稍稍留意即可。
其实你随便编个也没人知道当然不能太离谱我记得我当时写的时候还要5本外文参考文献,象我这种四级都过不了的人,只好充分发挥自己的想像能力编造了,结果居然通过了
微生物技术在城市生活垃圾处理中的应用 摘要：本文结合堆肥化、卫生填埋两种现行的城市生活垃圾处理工艺，主要介绍了城市生活垃圾生物处理过程中的微生物种群，以及通过分析开发出的新的微生物技术，指出了应用于城市生活垃圾处理的高效的微生物技术的研究方向。 关键词：城市生活垃圾 微生物 强化微生物处理技术 基因工程 ; 随着城市化进程在全球范围的加速，城市化带来的污染和人类聚居状况恶化等问题，已成为世界各国共同关心的问题。城市生活垃圾（Municipal solid waste, 简称MSW）是在城市日常生活及为城市生活提供服务的活动中产生的固体废弃物，是城市环境的主要污染物之一。目前，城市生活垃圾处理处置的方法主要包括卫生填埋（Sanitary landfill）、堆肥化(Composting)、焚烧(Incineration)三种，其中前两种处理方式均属于生物处理技术。具体来说，MSW生物处理技术就是城市生活垃圾中固有的或外添加的微生物，在一定控制条件下，进行一系列的生物化学反应，使得MSW中的不稳定的有机物代谢后释放能量或转化为新的细胞物质，从而MSW逐步达稳定化的一个生化过程。 1. 城市生活垃圾生物处理中主要的微生物。。。
以下所有文献，中国知网都能查到。[1]董利民,李璇.洱海水污染动态模型的构建及分析研究[j].生态经济(学术版),2011,02:384-388.[2]房春娟,陈晓燕.淡水污染的微生物治理[j].湖南农机,2011,11:245+247.[3]张志锋,王燕,韩庚辰.中国近海海水主要参数基线值及其污染状况探究[j].海洋环境科学,2012,02:211-215.[4]魏正明.水危机——寻找解决淡水污染的方案[j].上海环境科学,2003,01:5.[5]迟凤玲.浅淡水污染对我国食物安全的影响及解决对策[j].中国食物与营养,2006,05:14-16.[6]尚立照.风力发电对河西走廊生态环境影响初探[j].环境研究与监测,2010,01:3-5.[7]杨贵本杨丽丽.我国淡水污染问题必须加大力度解决[n].延安日报,2007-03-12002.[8]刘洪波.不同水域淡水蚌类中元素积累和分布的特征研究[d].南京农业大学,2010.[9]项继权.湖泊治理:从“工程治污”到“综合治理”——云南洱海水污染治理的经验与思考[j].中国软科学,2013,02:81-89.[10]陈登勤,方宗熙.用紫露草微核技术监测海水污染的初步研究[j].山东海洋学院学报,1981,02:80-85.[11]高圣龙,柯明德.mobilemarinegis于海上污染监控之应用[a].中国航海学会救助打捞专业委员会.救捞专业委员会2004年学术交流会论文集[c].中国航海学会救助打捞专业委员会:,2004:11.[12]高乐华.我国海洋生态经济系统协调发展测度与优化机制研究[d].中国海洋大学,2012.[13]张德君.海水入侵地下水污染对土壤生态影响研究[d].辽宁师范大学,2007美国进口普卫欣天猫
分子生物技术在微生物降解环境 污染物中的应用 [摘要〕介绍了与环境微生物关键降解酶基因的筛选、克隆及应用相关的分r生物技术，包括聚合酶链式反应技 术、基因重组技术、荧光原位杂交技术和生物信息学等技术，并对这些技术在污染物降解基因检测、筛选和克隆方 面的应用进行了阐述与探讨、 [关键词]分子生物技术;微生物;基因;环境污染物;降解 随着现代j:\地技术的发展，多环芳烃、含氯有 机物和硝基苯类化合物等人工合成井难以降解的 污染物大量排放，造成世界范围内的环境污染和生 态破坏，严重地威胁人类和其他生物的正常生存和 发展。利用微生物修复技术对受污染的水体及土 壤进行处理，凸显了其重要的意义和可行性。研究 人员发现并筛选到一些微生物，它们不仅对环境有 较高的适应性、对污染物有较高的耐受性，而且对 污染物有较强的降解效率和专一性。然而环境中 存在的大量微生物中仅有少于1%可通过传统的培 养方法进行培养、分离和纯化，绝大多数细菌需要 非常严格的营养条件川。因此，为了对修复环境有 所贡献却难以培养的微生物进行更全面了解，也为 了筛选到更多有利于降解环境污染物的微生物菌 种及其关键酶基因，分子生物技术和手段逐渐被广 泛应用到环境可降解污染物及降解机理方面的研 究中。 本文对近年来发展起来的聚合酶链式反应 (PCR)技术、基因重组技术、荧光原位杂交(FISH) 技术和生物信息学等多种分子生物技术进行了介 绍，并总结了它们在污染物降解基因检测、筛选和 克隆方面的应用。 1与环境污染物降解相关的分子生 物技术 1.1PCR及其相关技术 PCR是一种利用脱氧核糖核酸(DNA)半保留 复制原理，在体外扩增位于两段已知序列之间的 DNA区段从而得到大量拷贝的分子生物技术。根 据其模板、引物来源或扩增条件的不同，PcR技术 可分为以下几种:(l)反转录pCR(RT一PeR)技 术，将mRNA反转录为cDNA后再对其进行PCR 扩增，可用来构建cDNA文库，分析不同生长时期 的mRNA表达状况和相关性以及mRNA的定量测 定等;(2)巢式PCR技术，在扩增大片段目的DNA 时，先用非特意性引物扩增再用特意性引物对第一 次扩增产物进行第二次扩增，以获得可供分析的 DNA;(3)竞争PCR技术，是一种定量PCR，向PCR 反应体系中加人人工构建的带有突变的竞争模板， 通过控制竞争模板的浓度来确定目的模板的浓度， 对目的模板作定量研究;(4)实时荧光定量PCR技 术，在PCR反应体系中加人荧光基团，利用荧光信 号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线 对未知模板进行定量分析，该法已广泛用于基因表 达研究、转基因研究等方面;(5)扩增的rDNA限制 酶切分析技术，根据原核生物rDNA序列的保守性， 将扩增的rDNA片段进行酶切，通过酶切图谱来分 析菌间的多样性;(6)RNA随机引导PCR技术，基 于任意寡核昔酸引物与RNA之间可能的配对，在 低严谨度条件下经聚合酶催化使链延伸，将细胞总 RNA或InRNA作为反转录反应的模板，此技术结 合单链构象多态性，用非变性胶分辨大小相同而构 象不同的片段，可用于诊断遗传突变及分析污染条 件下序列的多态性;(7)随机扩增多态DNA (RAPD)技术，是一种基于PCR检测PCR引物结合 位点序列改变的方法，通常以10bp的寡核昔酸序 列为引物，对基因组DNA随机扩增，电泳分离染色 扩‘增产物，再分析多态性。 1.2FISH技术 FISH技术利用荧光标记的探针在细胞内与特 异的互补核酸序列杂交，通过激发杂交探针的荧光 来检测信号。荧光探针比放射性探针更安全，具有 较好的分辨力，不需要额外的检测步骤。近年来， 由于FISH技术具有灵敏、便捷等优点，迅速发展完 善成为研究环境微生物的有力工具。此外，可用不 同激发和散射波长的荧光染料标记探针，在一步反 应中同时检测几个靶序列。该技术主要包括试样 固定、预处理、预杂交、探针和试样变性、杂交、漂洗 去除未结合的探针、检测杂交信号等步骤。由于 165rRNA具有遗传稳定性，因此成为FISH技术检 测最常用的靶序列。 1.3基因重组技术 基因重组技术是从供体生物的基因组中通过 酶切扩增等手段获取目的基因，与载体连接形成重 组DNA分子，再导入到受体细胞中，让外源基因得 以表达。在已经分离出的许多菌株中，与降解能力 有关的基因多在质粒体上。由于质粒很容易在细 菌的繁殖过程中遗失，对细菌降解能力的长期稳定 非常不利，可将其与污染物降解有关的酶基因重组 到大肠杆菌等微生物中进行表达，以此构建的各种 生物降解特性增强的重组菌可用于污染环境的治 理修复或发酵某些废弃物。 1.4生物信息学 20世纪后期，生物学的迅猛发展，从数量上和 质量上极大地丰富了基因组数据库、蛋白质数据 库、酶数据库和文献数据库等许多生物科学的数据 资源。已有多个国家和国际科研组织建立了生物 信息数据库，如欧洲分子生物学实验室(Eur叩ean MolecularBiologyLaboratory)核酸序列数据库和美 国国家生物技术情报中心(Nationaleente:fo:Bio- technologyInformation，NCBI)基因序列数据库等。 科学家利用计算机及生物信息分析软件分析这些 数据资源，确定大分子序列、结构、表达模式和生化 途径与生物数据之间的关系，区分生物个体间遗传 差异，揭示DNA多样性。例如，基本局部比对搜索 工具(BasieLoealAlignmentSearehTool，BLAST)， 是一套在蛋白质数据库或DNA数据库中进行相似 性比较的分析工具。它基于Altschul等的方法「2〕， 在序列数据库中对查询序列进行同源性比对工作。 BLAST程序可对一条或多条、任何数量、任何形式的 序列在一个或多个核酸或蛋白序列库中进行比对，甚 至将有缺口的比对序列也考虑在内，利用比较结果中 的得分对序列进行相似性说明。基因的序列分析可 揭示出生物物种之间的关系，在污染治理研究中可用 于生物基因组特殊区域或特异基因的测序。 2分子生物技术在环境污染物降解 中的应用 2.1土壤试样总DNA的提取 用适当方法直接从土壤中提取DNA并纯化， 是从分子生物学角度对土壤微生物进行研究的前 提条件，而后可进行酶切、PCR扩增、核酸分子杂交 等分子生物学技术操作。从土壤中提取微生物 DNA主要分为汽接法和间接法}’{。直接法是在 ogram等的方法基础卜发展起来的，其主要包括2 个步骤:(l)原位细胞裂解;(2)DNA提取和纯化。 直接法提取的DNA超过细菌总DNA的60%且省 力，但提取的DNA常常有折断、腐殖酸污染、甚至 提取物中还夹杂有未知的胞外DNA和真核生物的 DNA。最先报道间接法的是Faegri等[‘〕，其主要包 括4个步骤:(l)分散土壤;(2)分离细胞与土壤; (3)细胞裂解;(4)DNA纯化。间接法提取DNA 产量低且费力，但纯度较高、DNA损伤小，提取的 大片段DNA可用来构建cos而d和细菌人工染色体 文库等。 2.2采用PCR及相关技术扩增分析DNA片段 可降解污染物的微生物必然能产生分解代谢 该污染物的酶。selvaratnam等L’l用编码苯酚单加 氧酶dmpN摹因的RT一PCR技术来检测序列间歇 式活性污泥反应器‘{一，降解酚的假单胞菌。检测结 果表明，RT一PCR技术不仅能检测微生物降解酚的 能力，还能测量dmpN基因的转录水平，从而确定假 单胞菌特殊的分解活性，发现了在转录水平下，酚 浓度与通气时间之问存在正相关关系。 将PCR技术和变性梯度凝胶电泳(DGGE)结 合起来，在变性条件适当的情况下能分辨一个碱基 对，分辨率较高。染色后的凝胶用成像系统进行分 析，可在一定程度l几反应试样的复杂性。条带的多 少能反应试样「 一 }1微生物组成的差异，条带的亮度能 反应试样中微生物的多少。基于以上优点，日前该 技术在微生物群落结构的分析和动态研究方面得 到了厂‘泛应用。DGGE可通过分析PCR扩增的基 因点突变来探索微生物的复杂性。徐玉泉等[“〕从 某废水中分离出一株能以苯酚为惟一碳源的菌株 PHEA一2，使用PCR一DGGE技术对该菌165 rDNA进行分析，发现该菌与醋酸钙不动杆菌同源。 M盯sh等r了)利用PcR一DGGE技术获得了活性污泥 中真核微生物的种群变化情况。王峰等下8〕采用 PCR一DGGE技术对城市污水化学生物絮凝处理中 活性污泥和生物膜微生物种群结构进行了分析，结 果表明活性污泥培养前后微生物种群结构发生r 很大改变。 RAPD技术也是一种应用比较广泛的以多态性 引物来扩增某些片段的技术。RAPD技术可用于检 测含有混合微生物种群的各种微生物反应器中微 生物的多样性。用RAPD技术分析检测实验室规 模的油脂淤泥培养料中的细菌菌群发现，用油脂淤 泥改良过的培养料比未改良的更适于不同的微生 物种群生长[9j。vainio等t’。〕从516种孤立的菌落 中提取出165rDNA，经PCR扩增后进行测序，检测 活性污泥中微生物种群的结构。这些组合技术的 应用显著增强r对微生物的检测和鉴定能力，为理 论研究工艺优化及提高生物处理效率提供了条件。 2.3基因重组 基因工程技术应用于环境保护起始于20世纪 80年代。其基本原理是通过基因分离和重组技术， 将目的基因片段，比如可编码降解某种污染物的 酶，转移到受体生物细胞中并表达，使受体生物具 有该目的基因表达显现的特殊性状，从而达到治理 污染的目的。找到特定污染的抗性基因，利用基因 重组技术转基因后也可获得其他抗性植株以及筛 选到可转化污染物的植物，还可开发超量积累植物 进行污染土壤的生物修复。 罗如新等L”〕用放射性同位素标记tfdc基因片 段作探针，Southemblot杂交定位Ll菌株的邻苯二 酚1，2一双加氧酶基因位于Pstl的I片段和BamH I的M、N片段，回收并将其直接克隆至表达载体 pKT230卜，获得的重组子能转化不具开环酶活性 的甲胺磷降解菌P2，得到高于天然宿主21倍的邻 苯二酚1，2一双加氧酶。stingley等{”〕通过构建基 因文库和重组质粒等基因工程方法证实了NidAB 双加氧酶是降解菲的关键酶类，并首次鉴定出此基 因通过磷苯二甲酸实现降解功能。chae等‘”}发现 不能降解苯酚的su如lobusso扣taricu、98/2菌株中 的儿茶酚2，3一双加氧酶基因与能降解苯酚的 sulfolo右u，，o如taricu、咫有[6J源区，分析得知它们 是山共同祖先进化而来。把儿茶酚2，3一双加氧酶 基因克隆到大肠杆菌中表达，可获得有较高降解活 性的双加氧酶。 重金属污染是环境污染的重要方面之一。随 着分子生物学技术的发展，越来越多的修复性蛋白 基因正被从植物、微生物和动物中陆续分离出来， 如汞离子还原酶基因、有机汞裂解酶基因、汞转运 蛋自基因、金属硫蛋白基因、植物络合素合成酶基 因、铁离子还原酶基因和锌转运蛋白基因L’‘〕。这些 基因通过基因工程的改造，重组到合适的受休细胞 中表达相应的蛋白质和酶，达到治理难以降解的有 毒有害污染物的目的。sorsa等〔”〕把MTS插人 LamB序列的153位点，在E.eoli中表达MTs，解决 r细胞内MTs对金属离子有限的吸附能力。综L 所述，基因重组技术具有快速、高效的特性，已逐渐 成为环境生物技术的研究热点。 2.4FISH技术 FISH技术利用核糖体内长度适中(约1500bp)、 高度保守的165:RNA序列作为理想的基因分类靶 序列，其中使用的165:RNA寡核普酸探针一般是 进行了荧光标记的20bp左右特异性核昔酸片段， 利用该报告分子(如生物素、地高辛)与荧光素标记 的特异亲和素之间的免疫化学反应，经荧光检测系 统对待测DNA进行定性、定量或相对定位分析。 FISH技术能提供处理过程中微生物的数量、空间分 布和原位生理学等信息。 硝化细菌是一类生理上非常特殊的化能自氧 菌，传统的研究方法要经过富集、分离、分类和鉴定 步骤，耗时长。HSH技术的引人解决了上述困难。 FlsH技术还被广泛用于活性污泥系统、硝化流化床 反应器和膜生物反应器等废水处理系统}’61。 基因工程微生物越来越多地被用于农业害虫 控制和环境污染的生物修复，对人类健康和环境的 影响引起广泛关注。1994年出现了一种新的标记 系统:绿色荧光蛋白(GFP)，由于GFP基因表达产 物对细胞没有毒害作用，且由GFP产生的荧光标记 检测卜分方便、简单。在某些被污染的环境中可分 离出降解该污染物的细菌，通过基因重组等手段使 用GFP分子标记，可更容易的分离检测被标记的 细胞叫。 Bastes等[’8]进行了苯酚降解菌染色体GFP基 因标记实验。通过PCR和Southemblot分析，证明 GFP基因已成功整合到宿主细胞的染色体中。对 标记菌与野生型的降解能力比较结果证明，GFP分 子标记的插人并不影响细胞的苯酚降解能力。 用G即标记Pseudomonasputida，研究活性淤 泥中细菌存活情况{’9飞。Pseudomonasputida被转到 活性淤泥2min后，观察到细胞在淤泥絮凝物间自 由游动;培养3d后，发现荧光细胞减少，大部分已 被合并到淤泥絮凝物中，以防止细菌被原生动物捕 食。用oFP标记石.eozi和Serraliamarceseern，考 察菌株附到絮凝物卜的过程{’()j。使用表面荧光显 微镜能将带有GFP标记的细胞从活性污泥中区分 开，井进行观察和记数。而聚焦激光扫描显微镜 (cLsM)可使GFP标记细菌产生三维轮廓，结合表 面荧光显微镜和CLSM观察GFP标记细胞，结果表 明，细胞表面疏水性在细菌附到絮凝物的过程中起 重要作用，两种细菌附在絮凝物上的模式有很大不 同，通过这种方法可更好地理解细菌赫附机理，有 助于提高废水处理效果。 3结语 分子生物技术的应用使研究人员可从微观的 角度更细致深人地了解微生物对污染物降解的具 体生理生化机制，在分子水平 _ _ [揭示生物体吸收、 迁移、积累有害物质最终被毒害，及适应、抗性等生 态问题，从而筛选到更多有利用价值的微生物。随 着越来越多微生物全部基因序列的解码，对各种细 菌体内可降解基因的分布和表达会有更深人的了 解，有关技术的发展和成熟必将对污染物的降解过 程有一个整体的、生态水平上的认识。 参考文献 l李凤，刘世贵 . 分子生物学技术在环境微生物研究中的 应用 . 世界科技研究与发展，2003，25(4):88一92 2AltsehulSF，GishW，MillerW，etal.Basieloealalign- mentsearehtool . JMolBiol，1990，215(3):403一410 3魏志琴，曾秀敏，宋培勇 . 土壤微生物DNA提取方法研 究进展 . 遵义师范学院学报，2006，8(4):53一56 4FaegriA，TorsvikVL，GoksoyrJ.Baeteria]andfunga] aetivitiesin5011:seParationofbacteriaandfungibyaraPid fraetionatedeentrifugationteehnique5011BiolBioehem， 1977，9(2):105一112 5SelvaratnamS，SehoedelBA，MeFarlandBL，etal APPlieationofreversetranseriPtasePCRformonitoring exPressionoftheeataboliedmPNgeneinaPhenol- degradingsequencingbatehreaetor . APPIEnviron Microbiol，1995，61(11):3981一3985 6徐玉泉，张维，陈明等 . 一株苯酚降解菌的分离和鉴 定 . 环境科学学报，2000，20(4):450一455 7MarshTL，LiuWT，ForneyLJ . Beginningamoleeular analysisoftheeukiU洲aleollllllunityinaetivatedsludge. WaterSeiTechnol，1998，37(4一5):455一460 8王峰，傅以钢，夏四清等.PCR一DGGE技术在城市污 水化学生物絮凝处理中的特点 . 环境科学，2004，25 (6):74一79 9涂书新，韦朝阳 . 我国生物修复技术的现状与展望 . 地 理科学进展，2004，23(6):20一31 10VainioEJ，MoilanenA，KoivulaTT，etal . ComParison ofpartial165rRNAgenesequeneesobtainedfromactiva- tedsludgebaeteria . APPIMierobiolBioteehnol，1997，48 (l):73一79 11罗如新，张素琴，李顺鹏 . 邻苯二酚1，2一双加氧酶
纳氏试剂比色法测水中氨氮常见问题探讨论文
摘要： 纳氏试剂比色法测定水中的氨氮，因方法简便、快速、灵敏度高而广泛应用于水中氨氮检测。文章初步探讨了纳氏试剂比色法测定氨氮的几个应注意的问题：预处理方法的选择；水样中干扰的消除；配制酒石酸钾钠溶液及纳氏试剂应注意的问题以及显色条件的控制等等。
关键词： 纳氏试剂比色法,预处理,纳氏试剂,显色条件
1预处理方法的选择
水样带色或浑浊以及含其他干扰物质，影响暗淡的测定，因此需要相应的预处理，对于较清洁的水样可采用絮凝沉淀法[1]，对严重污染的水或工业废水，则用蒸馏法[1]预处理以消除干扰。其中因前者更简单快捷，成为首选的方法。
1.1絮凝沉淀法及改进
1.1.1仪器
100ml具塞量筒或比色管
1.1.2试剂：
（1）10%硫酸溶液
（2）25%氢氧化钠溶液
1.1.3步骤
取100ml水样于具塞量筒或比色管中，加入1ml10%硫酸锌溶液和2~4滴25%氢氧化钠溶液,调pH值10.5左右，混匀，静置使沉淀。取适量上清液备用。在此处有一方法的改进，就是没用滤纸过滤，而是取静置后的上清液。静置的时间视取样时不能取到絮状物为准。
1.1.4讨论：《在水和废水监测分析方法》第四版中，经絮凝沉淀后的水样使用无氨水充分洗涤过的中速滤纸过滤，弃去初滤液20ml后的滤液。有实验表明,不同滤纸或同种滤纸但不同张之间铵盐含量差别很大,有些含量较高的滤纸虽多次用水洗涤,但仍达不到实验要求。因此使用前需对每一批次滤纸进行抽检,淋洗时要少量多次。也有研究发现滤纸中约有0.25%的可溶物和滤纸平均失重0.58%，这些可溶物将影响到分析结果的准确性。直接取上清液避免了这一弊端。
2水样中各种干扰的消除：
在实际工作中，由于样品千差万别，干扰物复杂多样，有时会出现样品经絮凝沉淀预处理后显色溶液浑浊的现象，严重影响透光率，造成结果偏高，这时要用蒸馏预处理法。方法参见《水和废水监测分析方法》（第四版）
2.1色（浊）度干扰的消除。
取50mL水样于50mL比色管中,加1.00mL酒石酸钾钠溶液,加1.00mL15%氢氧化钾溶液,测量吸光度(校正吸光度)，水样经纳氏试剂比色后测得吸光度减去校正吸光度。
2.2金属离子干扰的消除。
在碱性环境中，金属离子容易发生水解，一般加入酒石酸钾钠络合；含有汞盐可加少量硫代硫酸钠络合而掩蔽；含有Mn2+时，用50%酒石酸钾钠1.00mL+2%Na2EDTA1.00mL代替纯酒石酸钾钠能掩蔽Mn2+干扰[2]；含有大量Cu、Fe等金属离子，采用蒸馏法进行预处理后，再测定。
2.3有机物干扰的消除。
水样中含有甘氨酸、肼和某些胺类等有机物时，调节水样pH值到9.5左右，对其进行蒸馏处理；含有酮类、醛类和其他胺类时，在pH值较低情况下，用煮沸方法除去。
2.4显色溶液浑浊的应对措施
用絮凝沉淀法预处理后取上清液，加入酒石酸钾钠溶液和纳氏试剂后，有时会出现浑浊现象，严重影响透光率，误差非常大。笔者在测污水处理厂的'出水水样是经常会遇到此情况，不加酒石酸钾钠显色溶液不浑浊，由此可见是酒石酸钾钠的问题，可用（3.1）方法提纯后的酒石酸钾钠溶液，再不行就用蒸馏法预处理后测定。
3试剂配制应注意的问题
药品的纯度及试剂的配置方法都影响到实验结果。
3.1酒石酸钾钠纯度直接关系到测定结果，导致实验空白值高和引起实际水样浑浊,影响测定需要对其溶液进行提纯，以去除其中的铵盐。实际工作中，有两种处理方法。
①采用纳氏试剂对酒石酸钾钠溶液（50%）进行提纯，纳氏试剂加入量为酒石酸钾钠溶液体积2%，空白吸光度最小且基本稳定；
②向酒石酸钾钠溶液中加少量碱液，煮沸蒸发至50mL左右，冷却并定容至100mL。试验表明：经以上两种方法提纯后空白值也能满足分析测定要求。
3.2纳氏试剂的配制
了解纳氏试剂测氨氮的显色原理有利于理解纳氏试剂的配制方法，原理如下：2K2[HgI4]+3NaOH+NH3→NH2HgIO+3NaI+4KI+2H2O
纳氏试剂的配制有两种方法，均能产生显色基团[HgI4]2—,第一种配制方法用氯化汞和碘化钾，关键在于把HgCl2的加入量,这决定着获得显色基团含量的多少,进而影响方法的灵敏度。但方法未给出HgCl2的确切用量,需要根据试剂配制过程中的现象加以判断,经验性强,因而较难把握。有人据经验总结出HgCl2与KI的用量比为0.44∶1时(即8.8gHgCl2溶于20gKI溶液),效果很好。在此不再赘述，第二种方法用碘化汞和碘化钾：称取16g氢氧化钠，溶于50ml水中，充分冷却至室温。另称取7g碘化钾和10g碘化汞溶于水，将此溶液在搅拌下徐徐注入氢氧化钠溶液中，用水稀释至100ml。在此尤其要注意碘化汞与碘化钾的比例，I—不能过量，否则反应会逆向进行，显色基团[HgI4]2—减少，纳氏试剂颜色变浅，用此纳氏试剂做出的氨氮工作曲线低点显色不灵敏，几乎没有差别，线性很差，实验失败。碘化汞微溶于水，溶液中存在I—的碱性溶液中反应生成[HgI4]2—红色沉淀才消失，过量时以红色碘化汞沉淀的形式存在，不会使显色反应逆向进行，因此在实际工作中应使碘化汞稍稍过量，配制好的的纳氏试剂静置后弃去沉淀，小心倒入聚乙烯瓶中，密塞，低温保存。
4显色反应条件的控制
4.1 反应温度、时间。实验表明：反应温度为25℃时，显色最完全，反应时间为10～30min，溶液颜色较稳定。实际工作中，显色温度控制在20℃～25℃，时间控制在10min左右，快速测定，以确保监测数据准确可靠。
4.2反应体系pH值。水样pH值的变化对显色有显著影响,水样呈中性或碱性,测定结果相对偏差符合分析要求,水样呈酸性无可比性。实验发现[3],当水样呈酸性时测定值为0.24mg/L ,呈碱性时测定值为1.03 mg/L ,呈中性时测定值为0.92 mg/L。实验表明[4]：当溶液pH<11时,不能使溶液中nh4+全部转化为nh3,使测定结果偏低；当ph>11时,99%以上NH4+ 转化为NH3。在测定水样时先调整pH至中性，加入纳氏试剂后体系pH值在11.8～12.4为宜。实际工作中，配制较强缓冲能力的氢氧化钾-酒石酸溶液（浓度比为2.54：1），能够更好地控制体系pH值。
结论：纳氏试剂比色法测水中氨氮，灵敏度高，操作简便，易于推广，对于不同的水样要选择不同的预处理方法，否则会给结果带来很大误差，对于相对清洁，干扰较少的水样可采用简单省时的絮凝沉淀法，采用此法时可用取上清液的方法，以避免滤纸过滤引进的氨氮污染。对于污染严重，干扰物较多的水样应用蒸馏法予以预处理。针对不同的干扰物应分别采取相应的消除措施。试剂的配制也很关键，对市售酒石酸钾钠予以提纯以消除高铵盐带来的误差，纳氏试剂的配制碘化汞应稍稍过量，出现少量的红色沉淀不影响实验结果，相反，碘化钾过量会导致显色不灵敏，实验失败。控制显色的时间、温度及反应体系的pH值也结果准确可靠的重要条件。
参考文献：
[1]国家环境保护总局，《水和废水监测分析方法》编委会.水和废水监测分析方法.—4版. [M]北京:中国环境科学出版社 2002
[2]丁建森,李 凌. 饮用水中锰对氨氮检测影响的探讨[J] 上海预防医学杂志,1997 ,9 (10) :474 – 475
[3] 苏爱梅,王俊荣. 氨氮测定过程中有关问题的探讨[J] 干旱环境监测,2003，17(2):123-125
[4] 陈国强,卢明宇. 应用离子选择电极法测定生活污水中的氨氮[J].重庆环境科学,1998 ,20(3):58-90
science of the total environment期刊缩写为SCI TOTAL ENVIRON,环境科学分类下的 2 区期刊 作为参考文献时可缩写也可不用缩写,具体看期刊或者论文要求. 近四年影响因子2013年度 2012年度 2011年度 2010年度 3.163 3.258 3.286 3.19 杂志由 ELSEVIER SCIENCE BV 出版或管理。 ISSN号：0048-9697
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《环境科学与技术》由湖北省环境保护局和湖北省环境科学研究院共同主办的学术和技术类刊物，中文核心期刊，中国科技论文统计源期刊，中国科学引文数据库来源期刊和中国学术期刊综合评价数据库来源期刊。刊登环境保护领域内基础研究和应用技术研究的科研成果。
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