植物体内的碳素营养状况以及农产品的品质性状,常以可溶性糖和淀粉的含量作为重要指标,本实验学习几种定量测定可溶性糖和淀粉的方法。(一)苯酚法测定可溶性糖【实验原理】植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。苯酚法测定可溶性糖的原理是:糖在浓硫酸作用下,脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物,在10-100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比,且在485nm波长下有最大吸收峰,故可用比色法在此波长下测定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定,方法简单,灵敏度高,实验时基本不受蛋白质存在的影响,并且产生的颜色稳定160min以上。【实验仪器及试剂】1.仪器:分光光度计、电炉、铝锅、20mL刻度试管、刻度吸管、记号笔、吸水纸适量。2.试剂:(1)90%苯酚溶液:称取90g苯酚(AR),加蒸馏水10mL溶解,在室温下可保存数月。(2)9%苯酚溶液:取3mL 90%苯酚溶液,加蒸馏水至30mL,现配现用。(3)浓硫酸(比重1.84)。(4)1%蔗糖标准液:将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重,精确称取1.000g。加少量水溶解,移入100mL容量瓶中,加入0.5mL浓硫酸,用蒸馏水定容至刻度。(5)100ug/L蔗糖标准液:精确吸取1%蔗糖标准液1mL加入100mL容量瓶中,加水定容。【实验步骤】1.标准曲线的制作: 取20mL刻度试管11支,从0-10分别编号,按表27-1加入溶液和水,然后按顺序向试管内加入1mL 9%苯酚溶液,摇匀,再从管液正面以 5-20s。加入5 mL浓硫酸,摇匀。比色液总体积为8 mL,在恒温下放置30min。显色。然后以空白为参比,在485nm波长下比色测定,以糖含量为横坐标,光密度为纵坐标,绘制标准曲线,求出标准直线方程。2.可溶性糖的提取 取新鲜植物叶片,擦净表面污物,剪碎混匀,称取0.10-0.30g,共3份,分别放入3支刻度试管中,加入5-10mL 蒸馏水,塑料薄膜封口,于沸水中提取30min(提取2次),提取液过滤入25mL容量瓶中,反复冲洗试管及残渣,定容至刻度。3.测定吸取0.5mL样品液于试管中(重复2次),加蒸馏水1.5mL,同制作标准曲线的步骤,按顺序分别加入苯酚、浓硫酸溶液,显色并测定光密度。由标准线性方程求出糖的量,按下式计算测试样品中糖含量。式中:C一标准方程求得糖量(ug)α一吸取样品液体积(mL)V-提取液量(mL)n一稀释倍数W一组织重量(g) (二) 蒽酮法测定可溶性糖【实验原理】糖在浓硫酸作用下,可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛,生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物,在一定范围内,颜色的深浅与糖的含量成正比,故可用于糖的定量。该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物,不但可以测定戊糖与己糖,而且可以测所有寡糖类和多糖类,其中包括淀粉、纤维素等(因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应X 所以用愈酮法测出的碳水化合物含量,实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下,用意酮法可以一次测出总量,省去许多麻烦,因此,有特殊的应用价值。但在测定水溶性碳水化合物时,则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中,不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与意酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外,不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同,果糖显色最深,葡萄糖次之,半乳糖、甘露糖较浅,五碳糖显色更浅,故测定糖的混合物时,常因不同糖类的比例不同造成误差,但测定单一糖类时,则可避免此种误差。糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为630nm,故在此波长下进行比色。【实验仪器及试剂】1.仪器:分光光度计、电炉、铝锅、20ml刻度试管、刻度吸管、记号笔、吸水纸适量。2.试剂:(1)蒽酮乙酸乙酯试剂:取分析纯蒽酮1g,溶于50mL乙酸乙酯中,贮于棕色瓶中,在黑暗中可保存数周,如有结晶析出,可微热溶解。(2)浓硫酸(比重1.84)【实验步骤】1.标准曲线的制作:按方法一标准曲线的制作方法加入标准的蔗糖溶液,然后按顺序向试管中加入0.5mL蒽酮乙酸乙酯试剂和5mL浓硫酸,充分振荡,立即将试管放入沸水浴中,逐管准确保温1min取出后自然冷却至室温,以空白作参比,在630nm波长下测其光密度,以光密度为纵坐标,以糖含量为横坐标,绘制标准曲线,并求出标准线性方程。2.可溶性糖的提取同方法一第二步。3.显色测定:吸取样品提取液0.5mL于20mL刻度试管中(重复2次),加蒸馏水1.5mL,以下步骤与标准曲线测定相同,测定样品的光密度。4.计算可溶性糖的含量,计算公式同方法一。 Copyright 北京农学院生物技术系 All Rights Reserved!
蒽酮比色法测定可溶性糖如下:
一、实验目的
1、掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。
2、学习植物可溶性糖的提取方法。
二、实验原理
糖在浓硫酸作用下,可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛,生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物,在一定范围内,颜色的深浅与糖的含量成正比,因此可以用于糖的定量测定。糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为620nm。
三、实验材料
任何植物鲜样或干样。
四、药品试剂
1、80%乙醇。
2、葡萄糖标准溶液(100μg/ml):准确称取100mg分析纯无水葡萄糖,溶于蒸馏水并定容至100ml,使用时再稀释10倍(100μg/ml)。
3、蒽酮试剂:称取1g葱酮,溶于80%浓硫酸(将98%浓硫酸稀释,把浓硫酸缓缓加入到蒸馏水中)1000mI中,冷却至室温,储于具塞棕色瓶内,冰箱保存,可使用2~3周。
五、实验器材
分光光度计、分析天平、离心管、离心机、恒温水浴、试管、三角瓶、移液管、剪叨瓷盘、玻棒、水浴锅、电炉、漏斗、滤纸。
六、实验方法
1、样品中可溶性糖的提取:称取剪碎混匀的新鲜样品零点五到一克,放入大试管中,加入15 ml蒸馏水,在沸水浴中煮沸20分钟,取出冷却,过滤入100 ml容量瓶中,用蒸馏水冲洗残渣数次,定容至刻度。
2、标准曲线制作:取6支大试管,从0~ 5分别编号,按表1-3加入各试剂。
注意事项
1、蒽酮试剂含有浓硫酸,使用时应小心。
2、蒽酮要全部取自同一瓶,以保证条件一致性。
测定方法有以下几种:1.蒽酮法测定可溶性糖2.苯酚法测定可溶性糖3.3 ,5 –二硝基水杨酸比色法测定还原糖4.斐林试剂比色法测定还原糖斐林试剂比色法测定还原糖步骤一、原理 植物组织中的可溶性糖可分为还原糖(主要是葡萄糖和果糖)和非还原糖(主要是蔗糖)两类。还原糖具有醛基和酮基,在碱性溶液中煮沸,能把斐林试剂中的 Cu 2+ 还原成 Cu + ,使蓝色的斐林试剂脱色,脱色的程度与溶液中含糖量成正比,在 590 nm 波长下比色测定吸光度,查标准曲线,即可计算出所测样品中还原糖的含量。本方法也可用于测定蔗糖及总糖含量。 二、实验材料、试剂与仪器设备 (一)实验材料 新鲜植物样品或烘干粉碎过的植物样品。(二)试剂 1. 斐林试剂 A 液: 40 g CuSO 4 · 5H 2 O 溶解于蒸馏水定容至 1000 mL 。 2. 斐林试剂 B 液: 200g 酒石酸钾钠( KNaC 4 H 4 O 6 · 5H 2 O )与 150g NaOH 溶于蒸馏水中,并定容至 1000 mL 。 A 、 B 两液分别贮存,使用前等体积混合。 3. 0.1 %葡萄糖标准液:取 80 ℃下烘至恒重的葡萄糖 0.1000 g ,加蒸馏水溶解,定容至 100 mL 。 4. 0.1mol/LNaOH 。 5. 甲基红指示剂: 0.1 g 甲基红溶于 250 mL 60 %乙醇中。 6. 10 % Pb(Ac) 2 。 7. 饱和 Na 2 SO 4 。(三)仪器设备 分光光度计,分析天平,离心机,水浴锅,具塞刻度试管,刻度吸管,容量瓶,研钵。 三、实验步骤 1 . 标准曲线的制作 取 7 支试管,按表 24 – 4 分别加入各溶液。 将以上各管混合后加塞,于沸水浴中加热 15 min 。取出后自来水冷却, 1500 r/min 离心 15 min 。取上清液,用分光光度计在 590 nm 波长下比色,以蒸馏水作对照,读取吸光度。用空白管的吸光度与不同浓度糖的各管的吸光度之差为横坐标,对应的糖含量为纵坐标,绘制标准曲线。 2. 样品中还原糖的提取 取新鲜的植物样品洗净、擦干、剪碎,称取 3.00 g ,放入研钵中研磨至糊状,用水洗入大试管中。体积为 10 ~ 15 mL 时,加 2 ~ 3 滴甲基红指示剂,如呈红色,可用 0.1 mol/L 的 NaOH 中和至微黄色。若用风干样品,可称取干粉 3.00 g ,先在烧杯中用少量水湿润,然后用水洗入 250 mL 容量瓶中,如显酸性,可用上法中和。 将大试管置于 80 ℃的恒温水浴中保温 30 min ,其间摇动数次,以便将还原糖充分提取出来。对含蛋白质较多的样品,此间可加 10 % Pb(Ac) 2 ,除去蛋白质,至不再产生白色絮状沉淀时,加饱和 Na 2 SO 4 除去多余的铅离子。 30 min 后取出冷却,将提取液全部转入 100 mL 容量瓶中。定容至刻度,摇匀后过滤待测。 3. 样品测定 吸取 6 mL 待测液,加 4 mL 斐林试剂,其他操作与标准曲线相同,在 590 nm 波长下读取吸光度。以不含样品的空白管的吸光度减去样品管的吸光度,在标准曲线上查出糖含量。
溶出度是固体制剂功能性评价参数,溶出首先是经历崩解(固体制剂转化成细颗粒过程),在崩解的基础上,药物以分子状态溶解于溶出介质的过程。
崩解是早期评价药物是否有效的方法,后来发现崩解良好的药物并没有药效,问题出在崩解后,药物没有溶出过程。
固体制剂共同的吸收路径是将固体制剂口服给药后,须经过药物的溶解过程,才能经胃肠道上皮细胞膜吸收进入血液循环中而发挥其治疗作用。特别是对一些难溶性药物来说,药物的溶出过程将成为药物吸收的限速过程。
Noyes-Whitney方程解释影响药物溶出速率的诸因素,表明药物从固体剂型中的溶出速度与溶出速度常数K、药物粒子的表面积S、药物的溶解度Cs成正比。故可采取以下措施来加以改善药物的溶出速度:
①增大药物的溶出面积--通过粉碎减小粒径,崩解等措施;
②增大溶解速度常数--加强搅拌,以减少药物扩散边界层厚度或提高药物的扩散系数;
③提高药物的溶解度--提高温度,改变晶型,制成固体分散物等。
对于固体制剂在体内的吸收,提高溶出速度的有效方法是增大药物的溶出表面积或提高药物的溶解度。粉碎技术、药物的固体分散技术、药物的包合技术等可以有效地提高药物的溶解度或溶出表面积。图4-2表示氯霉素颗粒大小对体内吸收以及血药浓度的影响。
参考资料来源:百度百科——固体制剂
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从体外评价药物释放过程
róng chū dù cè dìng fǎ
仪器装置
(1)转篮分篮体与篮轴两部分,均为不锈钢金属材料制成。篮体A由不锈钢丝网(丝径为0.254mm,孔径0.425mm)焊接而成,呈圆柱形,内径为22.2±1.0mm,上下两端都有金属边缘。篮轴B的直径为9.4~10.1mm,轴的末端连一金属片,作为转篮的盖;盖上有通气孔(孔径2.0mm);盖边系两层,上层外径与转篮外径同,下层直径与转篮内径同;盖上的三个弹簧片与中心呈120°角。转篮旋转时摆动幅度不得超过±1.0mm。
(2)操作容器为1000ml的圆底烧杯,内径为98~106mm,高160~175mm;烧杯上有一有机玻璃盖,盖上有2孔,中心孔为篮轴的位置,另一孔供取样或测温度用。为使操作容器保持恒温,应外套水浴;水浴的温度应能使容器内溶剂的温度保持在37±0.5℃。转篮底部离烧杯底部的距离为25±2mm。
(3)电动机与篮轴相连,转速可任意调节在每分钟50~200转,稳速误差不超过±4%。运转时整套装置应保持平稳,不得晃动或振动。
(4)仪器应装有6套操作装置,可一次测定6份供试品。取样点位置应在转篮上端距液面中间,离烧杯壁10mm处。
测定法
除另有规定外,量取经脱气处理的溶剂900ml,注入每个操作容器内,加温使溶剂温度保持在37±0.5℃,调整转速使其稳定。取供试品6片(个),分别投入6个转篮内,将转篮降入容器中,立即开始计时,除另有规定外,至45分钟时,在规定取样点吸取溶液适量,立即经0.8μm微孔滤膜滤过,自取样至滤过应在30秒钟内完成。取滤液,照各药品项下规定的方法测定,算出每片(个)的溶出量。
结果判断
6片(个)中每片(个)的溶出量,按标示含量计算,均应不低于规定限度(Q);除另有规定外,限度(Q)为标示含量的70%。如6片(个)中仅有1~2片(个)低于规定限度,但不低于Q-10%,且其平均溶出量不低于规定限度时,仍可判为符合规定。如6片(个)中有1片(个)低于Q-10%,应另取6片(个)复试;初、复试的12片(个)中仅有1~2片(个)低于Q-10%,且其平均溶出量不低于规定限度时,亦可判为符合规定。供试品的取用量如为2片(个)或2片(个)以上时,算出每片(个)的溶出量,均不得低于规定限度(Q);不再复试。
仪器装置
除将转篮换成搅拌桨(A)外,其他装置和要求与第一法同。搅拌桨的形状尺寸如图所示,由不锈钢金属材料制成。旋转时摆动幅度A、B不得超过±0.5mm。取样点应在桨叶上端距液面中间,离烧杯壁10mm处。
测定法
除另有规定外,量取经脱气处理的溶剂900ml,注入每个操作容器内,加温使溶剂温度保持在37±0.5℃。取供试品6片(个),分别投入6个操作容器内(用于胶囊剂测定时,如胶囊上浮,可用一小段耐腐蚀的金属线轻绕于胶囊外壳),立即启动旋转并开始计时,除另有规定外, 至45分钟时,在规定取样点吸取溶液适量,立即经0.8μm微孔滤膜滤过,自取样至滤过应在30秒钟内完成。取滤液,照各药品项下规定的方法测定,算出每片(个)的溶出量。
结果判断
同第一法。
仪器装置
(1)搅拌桨
形状尺寸如图所示,由不锈钢制成;桨杆上部直径为9.4~10.1mm,桨杆下部直径为6.0±0.2mm,旋转时摆动幅度A、B不得超过±0.5mm,取样点应在桨叶上端距液面中间,离烧杯壁6mm处。桨叶底部离烧杯底部的距离为15±1mm。
(2)操作容器为250ml的圆底烧杯,内径为62±3mm,高为126±6mm,烧杯上有一有机玻璃盖,盖上有一开口,为放置搅拌桨、取样及测温用。其他要求同第一法(2)。
(3)电动机与桨杆相连,转速可任意调节在每分钟25~100转,稳速误差不超过±1转。动转时整套装置应保持平稳,不得晃动或振动。
测定法
除另有规定外,量取经脱气处理的溶剂100~250ml注入每个操作容器内,以下操作同第二法。
结果判断
2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)是导致心血管疾病(cardiovascular disease,CVD)死亡的一个重要原因,传统的降糖药仅降低血糖和T2DM微血管合并症,对大血管合并症影响较少。以往大规模多中心随机双盲临床试验的证据显示,强化血糖控制仅使主要不良心血管事件(major adverse cardiac event,MACE)的危险降低9%、肾脏事件降低20%和眼合并症降低13%。
一、吡格列酮
吡格列酮属噻唑烷二酮类,是过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ,PPAR-γ)的激动剂。吡格列酮通过刺激PPAR-γ增强机体对胰岛素的敏感性。临床研究显示,吡格列酮在增加机体对胰岛素敏感性,降低血糖的同时,对心血管、心律失常和脑卒中有保护作用。
目前临床证据显示,对基线无CVD的T2DM患者,吡格列酮能预防心血管事件(cardiovascular event,CVE)和降低病死率,特别是糖尿病肾病患者;此外,缺血性脑卒中或暂时性脑缺血等高风险患者亦可获益。荟萃分析发现,吡格列酮能降低临床表现为心血管疾病患者的复发性MACE、卒中或心肌梗死的风险,对心血管有保护作用。回顾性队列研究汇总分析显示,吡格列酮显著降低心血管和非心血管死亡危险。吡格列酮可使糖尿病患者发生心房颤动(AF)的风险降低30%,而且不论是新发还是复发AF,均显著获益。吡格列酮预防糖尿病患者发生AF,可能是通过降低糖尿病诱导的心房结构和电生理重构来实现的。
此外,近期发生过缺血性卒中或暂时性脑缺血的患者,接受吡格列酮治疗可降低再发卒中或心肌梗死的风险;且卒中或心肌梗死风险越高获益越大。吡格列酮可预防胰岛素抵抗的非糖尿病的缺血性卒中风险,降低近期脑血管事件后急性冠状动脉综合征的发生率,吡格列酮在预防特发性1型心肌梗死上具有最明显的效果。
吡格列酮对心血管保护作用的可能机制:一方面可抑制糖尿病导致的血管内皮细胞炎症反应。还可通过激活血管PPAR-γ,发挥抗炎和心血管保护作用。此外,吡格列酮可通过抑制晚期糖基化终末产物受体(RAGE)信号传递系统而发挥抗动脉粥样硬化作用。还有研究显示,吡格列酮与糖尿病患者血液中的瘦素水平有关。
二、二肽基肽酶4(dipeptidyl peptidase 4,DPP-4)抑制剂
胰高血糖素样肽1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)是由空肠末端、回肠、结肠的细胞在摄食和神经内分泌刺激下分泌的一种激素,具有促进胰岛素释放的作用,当葡萄糖浓度升高时,分泌增强。食物中的糖类和脂类对GLP-1的刺激作用最强。体内GLP-1半衰期非常短,几分钟后即被DPP-4水解,降解为没有活性的物质。DPP-4抑制剂(DPP-4i)可以抑制DPP-4水解酶的活性,使GLP-1作用时间延长,通过胃肠道调节糖代谢而发挥降低血糖的作用。
目前研究发现,DPP-4i对T2DM患者的心血管作用为中性,既不增加也不降低心血管风险;而对肾脏有一定的保护作用。DPP-4i对心力衰竭的作用有一定差异,沙格列汀可使T2DM患者因心力衰竭住院的风险显著升高,而维格列汀和西格列汀不增加T2DM患者因心力衰竭住院的风险。荟萃分析发现,在短期内DPP-4i不增加T2DM患者MACE危险,并可降低T2DM患者卒中的风险。但也有研究结果显示,DPP-4i的使用与因心力衰竭住院风险增加相关,维达列汀和西他列汀相对更安全。DPP-4i对心血管的作用在基线有或无CVD的T2DM患者均一致。大规模队列研究证据显示,与磺脲类相比,DPP-4i可改善患者的心血管预后;DPP-4i对因心力衰竭住院无显著影响;对基线有心力衰竭患者的亚组分析显示,DPP-4i的使用与心力衰竭无关。
DPP-4i对心血管作用的可能机制:间质细胞趋化因子1可促使冠状动脉粥样斑块生长和不稳定,刺激有害的神经内分泌机制、促使心肌炎症和心肌纤维化。而DPP-4i可抑制干细胞化学激酶(stem cell chemokine),从而抑制间质细胞趋化因子1,这可能是DPP-4i延缓动脉粥样硬化进展,稳定斑块,减少缺血性事件发生的一个可能机制。也有研究显示,维达列汀可逆转慢性心肌梗死鼠模型的氧化应激和心肌纤维化,改善心脏功能。
三、GLP-1受体激动剂
GLP-1受体激动剂(GLP-1 RA)通过模拟天然GLP-1激活GLP-1受体而发挥作用,且不易被DPP-4快速降解,延长了半衰期,增加了活性GLP-1在体内的浓度。
研究结果证实,利西拉肽和艾塞那肽对具有心血管高危因素的T2DM患者的心血管预后无显著影响,利拉鲁肽和索马鲁肽则有显著的心血管保护作用。对于不同的结果仍需新的随机试验来证实。度拉鲁肽对糖尿病心血管预后影响研究(REWIND试验)纳入了24个国家的370个医疗中心的9901例平均糖尿病病程>10年且既往有CVD的T2DM患者,REWIND试验为国际性、女性比例高、既往有CVD、入选时糖化血红蛋白高的大规模临床试验,该研究结果最终将揭示全球范围内中年糖尿病患者使用GLP-1 RA对心血管是否有保护作用。
荟萃分析发现,GLP-1RA治疗可降低全因、心血管和心肌梗死死亡危险;但是,GLP-1RA治疗对致命性和非致命性心肌梗死、致命性和非致命性卒中、因心力衰竭和不稳定型心绞痛住院无显著影响。而利拉鲁肽可显著降低CVE、心血管死亡和全因死亡,索马鲁肽可显著降低CVE和非致命性卒中。在使用他汀治疗的日本T2DM患者中,GLP-1 RA能降低血清LDL-C。利拉鲁肽可以改善慢性心力衰竭患者的心功能。
GLP-1 RA对T2DM患者心脏保护作用的机制包括:GLP-1 RA抑制心肌缺血导致的氧化激活、炎症反应、细胞凋亡和心肌纤维化;GLP-1 RA可抑制斑块进展、改变斑块组成成分并稳定斑块。临床观察也发现,GLP-1RA通过抑制氧化应激作用,改善心房僵硬度和左心室张力。
【转下文】
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格列类药物也分好几种的。你说的大概是格列本脲、格列其特片吧,你可以试一下格列吡嗪分散片(元坦),它的副作用小一些。真的,目前格列类药物还是治疗糖尿病的主要药品。如果不是很严重的话,适当减少用药量。
bǐ gé liè tóng
Pioglitazone [湘雅医学专业词典]
吡格列酮
Pioglitazone
卡司平;安可妥;毕康;艾可拓;艾汀;Actos;Actins
内分泌系统药物 > 糖尿病及胰岛疾病用药物
15mg/片;30mg/片。室温密闭干燥保存,避免受潮。
吡格列酮为噻唑烷二酮类口服抗糖尿病药物,为高选择性过氧化物酶增殖体激活受体γ(PPARγ)的激动剂,属胰岛素增敏剂。作用机制与胰岛素的存在有关,可减少外周组织和肝脏的胰岛素抵抗,增加依赖胰岛素的葡萄糖的处理,并减少肝糖的输出。与磺酰脲类不同,吡格列酮不是胰岛素促分泌药,吡格列酮是通过提高外周和肝脏的胰岛素敏感性来控制血糖水平。吡格列酮能明显增加外周组织对葡萄糖的摄取,同时使血浆胰岛胰岛素水平下降,不增加体重,有利于血胆固醇和三酰甘油趋于正常。
每天一次给药,血药浓度在24h内保持较高水平,7天内达稳态。空腹服用,2h达到峰浓度,食物轻微延迟达峰时间至3~4h,但不改变吸收度,在体内与血清蛋白结合率为99%。通过羟基化和氧化作用代谢,代谢产物主要为羟基化合物及酮基化合物,部分转化为葡萄糖醛酸或硫酸结合物。通过肝肠循环,大部分以原形或代谢物形式经胆汁及粪便排出。吡格列酮及其活性代谢产物的平均血清半衰期为16~24h。
用于2型糖尿病(或非胰岛素依赖性糖尿病,NIDDM)。
1.对吡格列酮或制剂成分过敏者禁用。
2.哺乳期妇女不应使用吡格列酮。
3.1型糖尿病患者或糖尿病酮症酸中酮症酸中毒者禁用。
4.不能用于活动性肝病患者或丙氨酸氨基转移酶超过正常值上限2倍的肝病患者。
5.心功能Ⅲ级或Ⅳ级的患者不宜使用。
6.儿童用药的安全性和有效性尚不明确。吡格列酮不宜用于18岁以下患者。
1.吡格列酮和胰岛素或其他口服降糖药合用时,有发生低血糖症的风险,有必要降低合用药物的剂量。
2.绝经前停止排卵的胰岛素抵抗患者,用噻唑烷二酮类包括吡格列酮治疗,可导致重新排卵,这些患者有怀孕的风险。
3.除膀胱外未发现其他器官有药物诱导型肿瘤。
4.妊娠期妇女只有当对胎儿潜在的好处超过潜在风险时才能使用吡格列酮。
1.血液 可出现贫血,在临床实验中,血红蛋白平均降低2%~4%(在开始治疗的4~12周更明显)。单用吡格列酮时,贫血发生率为1%;联用二甲双胍时,贫血发生率为1.2%。导致贫血的原因可能是由于血容量增加。
2.心血管系统 可导致血容量增加,进而可因心脏前负荷增加而致心脏肥大。单用吡格列酮时,轻至中度水肿发生率为4.8%;联用胰岛素时,水肿的发生率(15.3%)高于联用磺脲类抗糖尿病药或二甲双胍。
3.神经精神系统 有资料显示,单用吡格列酮时头痛发生率为9.1%。此外,一个小规模对照实验研究发现,9%的患者出现了感觉异常。
4.代谢/内分泌系统 吡格列酮联用磺脲类抗糖尿病药治疗时,低血糖的发生率为2%;当胰岛素分别联用吡格列酮15mg和30mg治疗时,低血糖的发生率分别为8%、15%。
5.胃肠道 偶见腹部不适。
6.肝脏 尚无肝功能衰竭的报道。
7.眼 有个案报道,一例患者在治疗中(一日30mg)出现视网膜病变恶化,但与吡格列酮的关系尚不明确。
8.呼吸系统 在临床试验中发现,使用吡格列酮治疗后可出现上呼吸道感染(13.2%)、鼻窦炎(6.3%)和咽炎(5.1%)。
9.皮肤 有个案报道,一例女性患者在治疗(一日30mg)的第7日出现血管性水肿,停用吡格列酮并使用糖皮质激素治疗后,患者的症状迅速缓解,以后未再复发。
10.肌肉骨骼系统 临床试验报道,吡格列酮致肌痛的发生率为5.4%,实验室检查发现有7位患者的肌酸磷酸激酶高出正常值上限10倍,其中2位患者因此停止治疗,另5位患者坚持治疗后未发生临床后遗症。
起始剂量为每日15mg或30mg,最大剂量为45mg,在早餐前服用,如漏服1次,第2天不可用双倍剂量。
1.与葡萄甘露聚糖合用时,可增强降血糖作用。
2.与苦瓜合用时,由于肝和外周组织的血糖利用度和胰岛素活性提高,发生低血糖的风险增加。
3.与桉树属植物、葫芦巴、人参合用时,可能导致低血糖。
4.由于胍胶可延缓胃排空,故与吡格列酮合用时,导致低血糖的风险增加。
5.与车前草、圣·约翰草合用时,发生低血糖的风险增加。
6.与阔叶灌木丛类、聚合草、石蚕属植物、金不换(主要成分为左旋延胡索乙素)、卡乏椒素、薄荷、黄芩属植物、缬草合用时,可导致血清氨基转移酶水平升高。
7.在健康受试者中研究显示,吡格列酮不改变地高辛、华法林、格列吡嗪的稳态药动学指标。对单剂二甲双胍的药动学指标也没有影响。
8.吡格列酮与含乙炔雌二醇、炔诺酮的口服避孕药合用时,可使后者的血浆浓度降低约30%,这可能会使避孕作用消失。
还原糖的测定方法有:直接滴定法、高锰酸钾滴定法和比色法。
直接滴定法:
在加热条件下,以次甲基蓝为指示剂,以已除去蛋白质的被测样品溶液,直接滴定已标定过的费林氏液,样品中的还原糖与斐林试剂中的酒石酸钾钠铜络合物反应,生成红色的氧化亚铜沉淀;
氧化亚铜再与试剂中的亚铁氰化钾反应,生成可溶性化合物,到达终点时,稍过量的还原糖立即将次甲基蓝还原,使蓝色褪色,呈现出原样品溶液的颜色,即为终点。根据样品消耗体积,计算还原糖量。
本方法测定的是一大类具有还原性的糖,包括葡萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖等,只是结果用葡萄糖或其他转化糖表示而已。
本法是国家标准分析方法,适用于所有食品中还原糖的快速测定。检出限0.1mg。
高锰酸钾滴定法:
样品经除去蛋白质后,其中还原糖在碱性环境下将铜盐还原为氧化亚铜,加硫酸铁后,氧化亚铜被氧化为铜盐,以高锰酸钾溶液滴定氧化作用后生成的亚铁盐,根据高锰酸钾消耗量计算氧化亚同含量,再查表得还原糖量。
本法为国家标准方法(GB5009.7-85),适用于所有食品中还原糖的测定以及通过酸水解或酶水解转化成还原糖的非还原性糖类物质的测定。准确度和重现性均优于直接滴定法。
还原糖的测定方法食物中还原糖的测定方法:高锰酸钾滴定法和直接滴定法。一、高锰酸钾滴定法1.原理样品经除去蛋白质后,其中还原糖在碱性环境下将铜盐还原为氧化亚铜,加硫酸铁后,氧化亚铜被氧化为铜盐,以高锰酸钾溶液滴定氧化作用后生成的亚铁盐,根据高锰酸钾消耗量计算氧化亚同含量,再查表得还原糖量。2.适用范围GB5009.7-85,本法适用于所有食品中还原糖的测定以及通过酸水解或酶水解转化成还原糖的非还原性糖类物质的测定。3.仪器(1) 滴定管(2) 25ml古氏坩埚或G4垂融坩埚(3) 真空泵(4) 水浴锅4.试剂除特殊说明外,实验用水为蒸馏水,试剂为分析纯。4.1 6 mol/L盐酸:量取50ml盐酸加水稀释至100 ml。4.2 甲基红指示剂:称取10mg甲基红,用100ml乙醇溶解。4.3 5 mol/L氢氧化钠溶液:称取20g氢氧化钠加水溶解并稀释至100ml。4.4 碱性酒石酸铜甲液:称取34.639g硫酸铜(CuSO4·5H2O),加适量水溶解,加0.5ml硫酸,再加水稀释至500ml,用精制石棉过滤。4.5碱性酒石酸铜乙液:称取173g酒石酸钾钠与50g氢氧化钠,加适量水溶解,并稀释至500ml,用精制石棉过滤,贮存于橡胶塞玻璃瓶中。4.6精制石棉:取石棉先用3mol/L盐酸浸泡2~3天,用水洗净,再加2.5mol/L氢氧化钠溶液浸泡2~3天,倾去溶液,再用热碱性酒石酸铜已液浸泡数小时,用水洗净。再以3mol/L盐酸浸泡数小时,以水洗至不呈酸性。然后加水振摇,使成微细的浆状软县委,用水浸泡并贮存于玻璃瓶中,即可用做填充古氏坩埚用。4.7 0.1000mol/L高锰酸钾标准溶液。4.8 1mol/L氢氧化钠溶液:称取4g 氢氧化钠,加水溶解并稀释至100ml。4.9 硫酸铁溶液:称取50g硫酸铁,加入200ml水溶解后,慢慢加入100ml硫酸,冷却后加水稀释至1L。4.10 3mol/L盐酸:量取30ml盐酸,加水稀释至120ml。5. 操作方法5.1 样品处理:5.1.1 乳类、乳制品及含蛋白质的食品:称取约0.5~2 g固体样品(吸取2~10 ml液体样品),置于250 ml容量瓶中,加50ml水,摇匀。加入10 ml碱性酒石酸铜甲液及4ml1mol/L氢氧化钠溶液,加水至刻度,混匀。静置30min,用干燥滤纸过滤,弃去初滤液,滤液备用。(注:此步骤目的是沉淀蛋白)5.1.2 酒精性饮料:吸取100 ml样品,置于蒸发皿中,用1mol/L氢氧化钠溶液中和至中性,在水浴上蒸发至原体积1/4后(注:如果蒸发时间过长,应注意保持溶液pH为中性),移入250ml容量瓶中。加50 ml水,混匀。以下按5.1.1自"加10ml碱性酒石酸铜甲液"起依法操作。5.1.3 含多量淀粉的食品:称取2~10 g样品,置于250 ml容量瓶中,加200 ml水,在45℃水浴中加热1h,并时时振摇。(注意:此步骤是使还原糖溶于水中,切忌温度过高,因为淀粉在高温条件下可糊化、水解,影响检测结果。)冷却后加水至刻度,混匀,静置。吸取200ml上清液于另一250 ml容量瓶中,以下按5.1.1自"加10ml碱性酒石酸铜甲液"起依法操作。5.1.4 含有脂肪的食品:称取2~10g样品,先用乙醚或石油醚淋洗3次,去除醚层。加入50ml水混匀,以下按5.1.1自"加10ml碱性酒石酸铜甲液"起依法操作。5.1.5 汽水等含有二氧化碳的饮料:吸取100 ml样品置于蒸发皿中,在水浴上除去二氧化碳后,移入250ml容量瓶中,并用水洗涤蒸发皿,洗液并入容量瓶中,再加水至刻度,混匀后,备用。5.2 样品测定:吸取50ml处理后的样品溶液,于400ml烧杯中,加入25ml碱性酒石酸铜甲液及25ml乙液,于烧杯上盖一表面皿,加热,控制在4min内沸腾,再准确煮沸2min,乘热用铺好石棉的古氏坩埚或G4垂融坩埚抽滤,并用60℃热水洗涤烧杯及沉淀,至洗液不成碱性为止。(注:还原糖与碱性酒石酸铜试剂的反应一定要在沸腾状态下进行,沸腾时间需严格控制。煮沸的溶液应保持蓝色,如果蓝色消失,说明还原糖含量过高,应将样品溶液稀释后重做。)将古氏坩埚或垂融坩埚放回原400ml烧杯中,加25ml硫酸铁溶液及25ml水,用玻棒搅拌使氧化亚铜完全溶解,以0.1mol/L高锰酸钾标准液滴定至微红色为终点。同时吸取50ml水,加与测样品时相同量的碱性酒石酸铜甲、乙液,硫酸铁溶液及水,按同一方法做试剂空白实验。6. 计算:X1=(V-V0)×N×71.54 (1)式中: X1--样品中还原糖质量相当于氧化亚铜的质量,mg;V--测定用样品液消耗高锰酸钾标准液的体积,ml;V0--试剂空白消耗高锰酸钾标准液的体积,ml;N--高锰酸钾标准溶液的浓度;71.54--1ml 1mol/L高锰酸钾溶液相当于氧化亚铜的质量,mg。根据(1)式中计算所得氧化亚铜质量,查附表"氧化亚铜质量相当于葡萄糖、果糖、乳糖、转化糖的质量表",再计算样品中还原糖含量。X2=(m1×V2)∕(m2×V1)×(100∕1000) (2)式中: X2--样品中还原糖的含量,g/100g(g/100ml);m1--查表得还原糖质量,mg;m2--样品质量(或体积), g(ml);V1--测定用样品处理液的体积,ml;V2--样品处理后的总体积,ml。7.举例:称取某食物样品3.00g,经过处理后用水定容至250ml。取50ml进行测定,消耗0.1003mol/L高锰酸钾标准液5.20ml,同时测试剂空白为0.36ml,则 样品中还原糖质量相当于氧化亚铜的质量为:X1(mg) =(5.20-0.36)×0.1003×71.54 = 34.73查表得还原糖质量为相当于葡萄糖16.22 mg,样品中还原糖含量(以葡萄糖计)为:X2(g/100g)=(16.22×250)∕(3.00×50)×(100∕1000)= 2.708.注释:本法用碱性酒石酸铜溶液作为氧化剂。由于硫酸铜与氢氧化钠反应可生成氢氧化铜沉淀,氢氧化铜沉淀可被酒石酸钾钠缓慢还原,析出少量氧化亚铜沉淀,使氧化亚铜计量发生误差,所以甲、乙试剂要分别配制及贮藏,用时等量混合。二、直接滴定法1.原理样品经除去蛋白质后,在加热条件下,直接滴定已标定过的费林氏液,费林氏液被还原析出氧化亚铜后,过量的还原糖立即将次甲基蓝还原,使蓝色褪色。根据样品消耗体积,计算还原糖量。2.适用范围GB5009.7-85,本方法适用于所有食品中还原糖的检测。检出限0.1mg。3.主要仪器滴定管4.试剂除特殊说明外,实验用水为蒸馏水,试剂为分析纯。(1) 费林甲液:称取15 g硫酸铜(CuSO4·5H2O),及0.05 g次甲基蓝,溶于水中并稀释至1 L。(2) 费林乙液:称取50 g酒石酸钾钠与75 g氢氧化钠,溶于水中,再加入4 g亚铁氰化钾,完全溶解后,用水稀释至500ml,贮存于橡胶塞玻璃瓶内。(3) 乙酸锌溶液:称取21.9 g乙酸锌,加3 ml冰乙酸,加水溶解并稀释至100 ml。(4)亚铁氰化钾溶液。称取10.6g亚铁氰化钾,用水溶解并稀释至100ml。(5) 盐酸。(6) 葡萄糖标准溶液:精密称取1.000 g经过80 ℃干燥至恒量的葡萄糖(纯度在99%以上),加水溶解后加入5ml盐酸,并以水稀释至1 L。此溶液相当于1 mg/ml葡萄糖。(注:加盐酸的目的是防腐,标准溶液也可用饱和苯甲酸溶液配制)5.操作方法5.1样品处理:5.1.1乳类、乳制品及含蛋白质的食品:称取约0.5~2 g固体样品(吸取2~10 ml液体样品),置于100 ml容量瓶中,加50ml水,摇匀。边摇边慢慢加入5 ml乙酸锌溶液及5 ml亚铁氢化钾溶液,加水至刻度,混匀。静置30min,用干燥滤纸过滤,弃去初滤液,滤液备用。(注意:乙酸锌可去除蛋白质、鞣质、树脂等,使它们形成沉淀,经过滤除去。如果钙离子过多时,易与葡萄糖、果糖生成络合物,使滴定速度缓慢;从而结果偏低,可向样品中加入草酸粉,与钙结合,形成沉淀并过滤。)5.1.2酒精性饮料:吸取50 ml样品,置于蒸发皿中,用1mol/L氢氧化钠溶液中和至中性,在水浴上蒸发至原体积1/4后,移入100 ml容量瓶中。加25ml水,混匀。以下按4.1.1自"加5 ml乙酸锌溶液"起依法操作。5.1.3含多量淀粉的食品:称取2~5 g样品,置于100 ml容量瓶中,加50 ml水,在45℃水浴中加热1h,并时时振摇(注意:此步骤是使还原糖溶于水中,切忌温度过高,因为淀粉在高温条件下可糊化、水解,影响检测结果。)。冷后加水至刻度,混匀,静置。吸取50ml上清液于另一100 ml容量瓶中,以下按4.1.1自"5 ml乙酸锌溶液"起依法操作。5.1.4汽水等含有二氧化碳的饮料:吸取50 ml样品置于蒸发皿中,在水浴上除去二氧化碳后,移入100ml容量瓶中,并用水洗涤蒸发皿,洗液并入容量瓶中,再加水至刻度,混匀后,备用。(注意:样品中稀释的还原糖最终浓度应接近于葡萄糖标准液的浓度。)5. 2标定费林氏液溶液:吸取5.0 ml费林氏甲液及5.0 ml乙液,置于150ml锥形瓶中(注意:甲液与乙液混合可生成氧化亚铜沉淀,应将甲液加入乙液,使开始生成的氧化亚铜沉淀重溶),加水10ml,加入玻璃珠2粒,从滴定管滴加约9 ml葡萄糖标准溶液,控制在2min内加热至沸,趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液,直至溶液兰色刚好褪去并出现淡黄色为终点,记录消耗的葡萄糖标准溶液总体积,平行操作三份,取其平均值,计算每10ml(甲、乙液各5ml)碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量(mg)。(注意:还原的次甲基蓝易被空气中的氧氧化,恢复成原来的蓝色,所以滴定过程中必须保持溶液成沸腾状态,并且避免滴定时间过长。)5.3样品溶液预测:吸取5.0 ml费林氏甲液及5.0 ml乙液,置于150 ml锥形瓶中,加水10 ml,加入玻璃珠2粒,控制在2min内加热至沸,趁沸以先快后慢的速度,从滴定管中滴加样品溶液,并保持溶液沸腾状态,待溶液颜色变浅时,以每秒1滴的速度滴定,直至溶液兰色褪去,出现亮黄色为终点。如果样品液颜色较深,滴定终点则为兰色褪去出现明亮颜色(如亮红),记录消耗样液的总体积。(注意:如果滴定液的颜色变浅后复又变深,说明滴定过量,需重新滴定。)5.4样品溶液测定:吸取5.0 ml碱性酒石酸铜甲液及5.0 ml乙液,置于150 ml锥形瓶中,加水10 ml,加入玻璃珠2粒,在2min内加热至沸,快速从滴定管中滴加比预测体积少1ml的样品溶液,然后趁沸继续以每两秒1滴的速度滴定直至终点。记录消耗样液的总体积,同法平行操作两至三份,得出平均消耗体积。6.计算X3 =(C×v1 × V)∕(m× v2 ×1000)×100式中: X--样品中还原糖的含量(以葡萄糖计),%;C--葡萄糖标准溶液的浓度,mg/ml;v1-- 滴定10 ml费林氏溶液(甲、乙液各5 ml)消耗葡萄糖标准溶液的体积,ml;v2--测定时平均消耗样品溶液的体积,ml;V--样品定容体积,ml;m--样品质量,g;7.注意事项(1)本方法测定的是一类具有还原性质的糖,包括葡萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖等,只是结果用葡萄糖或其他转化糖的方式表示,所以不能误解为还原糖=葡萄糖或其他糖。但如果已知样品中只含有某一种糖,如乳制品中的乳糖,则可以认为还原糖=某糖。(2)分别用葡萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖标准品配制标准溶液分别滴定等量已标定的费林氏液,所消耗标准溶液的体积有所不同。证明即便同是还原糖,在物化性质上仍有所差别,所以还原糖的结果只是反映样品整体情况,并不完全等于各还原糖含量之和。如果已知样品只含有某种还原糖,则应以该还原糖做标准品,结果为该还原糖的含量。如果样品中还原糖的成分未知,或为多种还原糖的混合物,则以某种还原糖做标准品,结果以该还原糖计,但不代表该糖的真实含量。参考资料:
有;物理,化学,酶法还原法;菲林试剂法,兰爱农法,亚铁氰化钾,萨氏法,碘法,重量法,蒽酮比色法,苯酚,H2SO4比色法,半胱氨酸法,碱性酒石酸铜色谱法
1、高锰酸钾滴定法 1.原理 样品经除去蛋白质后,其中还原糖在碱性环 境下将铜盐还原为氧化亚铜,加硫酸铁后, 氧化亚铜被氧化为铜盐,以高锰酸钾溶液滴 定氧化作用后生成的亚铁盐,根据高锰酸钾 消耗量计算氧化亚同含量,再查表得还原糖 量。 2.适用范围 GB5009.7⑻5,本法适用于所有食品中还原 糖的测定和通过酸水解或酶水解转化成还 原糖的非还原性糖类物资的测定。 3.仪器 (1) 滴定管 (2) 25ml古氏坩埚或G4垂融坩埚 (3) 真空泵 (4) 水浴锅 4.试剂 除特殊说明外,实验用水为蒸馏水,试剂为 分析纯。 4.1 6 mol/L盐酸:量取50ml盐酸加水稀释 至100 ml。 4.2 甲基红唆使剂:称取10mg甲基红,用1 00ml乙醇溶解。 4.3 5 mol/L氢氧化钠溶液:称取20g氢氧化 钠加水溶解并稀释至100ml。 4.4 碱性酒石酸铜甲液:称取34.639g 查看原帖>>
以蔗糖为基质。土壤蔗糖酶的提取原理是以蔗糖为基质,酵母细胞破碎本实验采用研磨的方法,是通过固体剪切法(研磨)将酵母细胞破碎,把蔗糖酶从酵母细胞中提取出来。
土壤酶活性包括已积累于土壤中的酶活性,也包括正在增殖的微生物向土壤释放的酶活性。它主要来源于土壤中动物、植物根系和微生物的细胞分泌物以及残体的分解物。土壤酶活性和作物产量之间的相关性优于土壤养分和作物产量之间的相关性,这说明土壤酶活性和施肥方式呈密切的相关性,可将其作为评价土壤肥力的指标。------王灿,等。《长期不同施肥方式下土壤酶活性与肥力因素的相关性》土壤蔗糖酶、脲酶和碱性磷酸酶活性互呈极显著正相关,且均与速效氮及有机质呈极显著正相关。------ 刘梦云,等。《宁南山区不同土地利用方式土壤酶活性特征研究》土壤酶活性受施肥处理影响明显,其中蛋白酶、过氧化氢酶、转化酶和脲酶活性在化肥处理中均受到抑制,在有机肥中却得到大幅提升,碱性磷酸酶活性变化与之正好相反;在混施处理中各酶活性均有不同程度的增强,其中以脲酶活性增强尤为突出。土壤酶活性在各作物之间表现出一定的差异,但总的来说差异不显著。土壤各酶之间及酶与土壤肥力因素之间存在显著或极显著相关关系。------张小磊,等。《长期施肥对城市边缘区不同作物土壤酶活性的影响》