论文的参考文献格式怎么写
按照学校要求的参考文献的标准来进行就可以了。
期刊论文的是：主要责任者.文献题名[文献类型标识].刊名,年,卷(期):起止页码如果是电子文献的话应该是：主要责任者.文献题名.电子文献出处或可获得地址,发表或更新日期或者引用日期
引用国家标准一般列于文末并与参考文献分列或置于当页脚。
根据《中国学术期刊（光盘版）检索与评价数据规范（试行）》和《中国高等学校社会科学学报编排规范（修订版）》的要求，很多刊物对参考文献和注释作出区分，将注释规定为“对正文中某一内容作进一步解释或补充说明的文字”，列于文末并与参考文献分列或置于当页脚地。
2008年起开始部分刊物开始执行新的规范“综合性期刊文献引证技术规范”。该技术规范概括了文献引证的“注释”体例和“著者—出版年”体例。
不再使用“参考文献”的说法。这两类文献著录或引证规范在中国影响较大，后者主要在层次较高的人文社会科学学术期刊中得到了应用。
书写技巧：
把光标放在引用参考文献的地方，在菜单栏上选“插入|脚注和尾注”，弹出的对话框中选择“尾注”，点击“选项”按钮修改编号格式为阿拉伯数字，位置为“文档结尾”，确定后Word就在光标的地方插入了参考文献的编号，并自动跳到文档尾部相应编号处请你键入参考文献的说明，在这里按参考文献著录表的格式添加相应文献。
参考文献标注要求用中括号把编号括起来，以word2007为例，可以在插入尾注时先把光标移至需要插入尾注的地方，然后点击 引用-脚注下面的一个小箭头，在出现的对话框中有个自定义，然后输入中括号及数字，然后点插入，然后自动跳转到本节/本文档末端，此时再输入参考文献内容即可。
在文档中需要多次引用同一文献时，在第一次引用此文献时需要制作尾注，再次引用此文献时点“插入|交叉引用”，“引用类型”选“尾注”，引用内容为“尾注编号（带格式）”，然后选择相应的文献，插入即可。
以上内容参考：百度百科-参考文献
对于常见的各类参考文献标注方法如下：
1）著作：作者姓名，题名[M].出版地：出版者，出版年.
2）期刊论文：作者姓名.题名[J].期刊名称，年，卷（期）：页码.
3）会议论文集：作者姓名.题名[C]//论文集名称，会议地点，会议日期.
4）学位论文：作者姓名.题名[D].出版地：出版者，出版年.
5）专利文献：专利申请者或所有者姓名.专利题名：专利国别，专利号[P].公告日期或公开日期.获取路径.
6）电子文献：作者姓名.题名[文献类型标志（含文献载体标志）见其它].出版地：出版者，出版年（更新或修改日期），获取路径.
7）报告：作者姓名.题名[R].出版地：出版者，出版年.
8）标准：标准号.题名[S].出版地：出版者，出版年.
专著、论文集、学位论文、报告
[序号]主要责任者.文献题名[文献类型标识].出版地：出版者，出版年.
[1]刘国钧，陈绍业，王凤者.图书馆目录[M].北京：高等教育出版社，1957.
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参考资料来源：百度百科-参考文献标准格式
按照学校要求的参考文献的标准来进行就可以了。
参考文献标准格式
参考文献类型：专著［M］，论文集［C］，报纸文章［N］，期刊文章［J］，学位论文［D］，报告［R］，标准［S］，专利［P］，论文集中的析出文献［A］
电子文献类型：数据库［DB］，计算机［CP］，电子公告［EB］
电子文献的载体类型：互联网［OL］，光盘［CD］，磁带［MT］，磁盘［DK］
A：专著、论文集、学位论文、报告
［序号］主要责任者.文献题名［文献类型标识］.出版地：出版者，出版年.起止页码（可选）
如：［1］刘国钧，陈绍业.图书馆目录［M］.北京：高等教育出版社，.
B:期刊文章
［序号］主要责任者.文献题名［J］.刊名，年，卷（期）：起止页码
如：［1］何龄修.读南明史［J］.中国史研究，1998,(3):167-173.
［2］OU J P，SOONG T T，et advance in research on applications of passive energy dissipation systems［J］.Earthquack Eng,1997,38(3):358-361.
C:论文集中的析出文献
［序号］析出文献主要责任者.析出文献题名［A］.原文献主要责任者（可选）.原文献题名［C］.出版地：出版者，出版年.起止页码
如： ［7］钟文发.非线性规划在可燃毒物配置中的应用［A］.赵炜.运筹学的理论与应用——中国运筹学会第五届大会论文集［C］.西安：西安电子科技大学出版社，.
D：报纸文章
［序号］主要责任者.文献题名［N］.报纸名，出版日期（版次）
如： ［8］谢希德.创造学习的新思路［N］.人民日报，1998-12-25（10）.
E：电子文献
[文献类型/载体类型标识]：[J/OL]网上期刊、[EB/OL]网上电子公告、
[M/CD]光盘图书、[DB/OL]网上数据库、[DB/MT]磁带数据库
［序号］主要责任者.电子文献题名［电子文献及载体类型标识］.电子文献的出版或获得地址，发表更新日期/引用日期
如：［12］王明亮.关于中国学术期刊标准化数据库系统工程的进展［EB/OL］.http://，1998-08-16/1998-10-01.
［8］万锦.中国大学学报文摘（1983-1993）.英文版［DB/CD］.北京：中国大百科全书出版社，1996.
参考文献的分类
按参考文献的提供目的划分，可分为引文文献、阅读型文献和推荐型文献3大类.
①引文文献是著者在撰写或编辑论著的过程中，为正文中的直接引语（如数据、公式、理论、观点、图表等）或间接引语而提供的有关文献信息资源.
②阅读型文献是著者在撰写或编辑论著的过程中，曾经阅读过的文献信息资源.
③推荐型文献通常是专家或教师为特定读者、特定目的而提供的、可供读者查阅的文献信息资源.
由于新冠疫情的再次到来，有很多省市开始启动了新冠疫苗第三针的接种。对于接种新冠疫苗加强针，有不少小伙伴心里会有所犹疑，担心新冠疫苗加强针接种以后会给自己造成什么不好的副作用，就针对大家的这些担心，有关专家也是给出了建议。
有关专家表示新冠疫苗加强针给人体带来的副作用很小，不需要过分担心。同时还表示新冠疫苗第三针建议与前两针保持一致，也就是说尽量不要混着打，比如之前打的是科兴，第三针还是建议接种科兴。
由于旅游团的传播链，造成我国11省出现了新冠病毒的确诊患者，在这个大背景下，很多省市也是安排大家开始接种新冠疫苗的加强针。但是对于新冠疫苗加强针是否会对人体产生什么不好的副作用，很多人都存有疑虑，针对这些疑虑，有关专家也是给出了建议。专家表示新冠疫苗加强针带来的副作用很小，不需要过于担心，同时建议加强针接种与之前两种同类型的疫苗。
随着冬季的到来，对于新冠疫情的防范就更加不可以松懈了。首先我们尽量不要前往有疫情发生的省市，若实在要前往也一定要按照当地的疫情防控规定执行，切不可随性而为。此外，我们外出依然要做好防护措施，尽量不前往人群过于密集的地方。
对于满足接种新冠疫苗加强针的人员可以前往疫苗接种点进行接种，不需要过分担心副作用。如果在接种加强针以后感觉自己有不舒服的情况要及时就医，切不可凭自己主观意识判定，避免对自身造成不好的后果。
医学论文的参考文献 医学论文一般需要引用参考文献，其目的是给读者提供检索信息，尊重他人或自己以往的科研成果，方便同行们进行深入 研究 .在实际工作中发现，诸多稿件的参考文献著录不规范，差错较多，现就医学论文参考文献著录中存在的 问题 进行 总结 分析 .1 不循规矩，引用不当 参考文献的著录格式及标注均有较严格的规定，医学期刊一般采用改良的温哥华格式著录参考文献.近年来发现，一些具有较高学术价值的论文因参考文献著录格式的不规范或引用不当而延期发表或遭到退稿，分析其原因主要有如下几点：1）著录中的作者名缺少，稿约中明确规定，参考文献中的前3位作者应全部列出，3位以上者只列前3位，后加“等”字或相应的外文.在不少来稿中发现只写1位作者后加“等”的情况，因其他作者无从查证而耽搁了及时发表；2）著录项目残缺不全，有些论文缺少题名（书名），亦有缺少刊名、年或卷、期及页码等；3)在正文中未标注参考文献序号，无法证实参考文献的实际用途；4）引用不当.未公开发表的观察资料、内部交流资料及涉及保密的资料等均不宜作参考文献.由于内部资料尚未得到公认且不够成熟，其原理、论点、论据及论证尚需修改、变更或充实，又因其发行量很少，读者面窄，无从查考，起不到参考作用［1］. 2 不求甚解，重复堆砌 主要表现为参考文献著录与使用不对应，标引参考文献过多，规模庞大，而在文内不完全使用；或是文内使用很多，文后又不标明；或是不按出现顺序排列而颠倒使用等.这都是论文完稿后未对参考文献进行认真整理所致.一般而言，论著类论文的参考文献数目要控制在15条以内，综述类文章可略多，但不宜超过25条，且要有明确的引证目的.此外，同篇文章在参考文献著录时反复使用现象亦应引起重视，尤其在综述类文章中屡见不鲜.同篇文献固然可以在文内引用多次，但无必要每引一次均重新著录，即不管文内引用多少次，该篇引文在参考文献栏内只能占一个位置. 3 年代久远，可信度低 根据普赖斯指数的原理，相对而言，引用5年内的文献越多，则普赖斯指数越高，过时的文献越少，说明论文所涉及的问题越接近当前的前沿课题.实验性文章的年代距离越远，参考价值可能越低，因此一般要求所引用文献的50%～70%应为近5年内发表的文献［2］.若老化的文献所占比例较大，则说明论文 内容 也较陈旧，如果论文所涉及的问题是 目前 国内外正在研究的.热门课题，则近5年内的文献引用比例应较高，这可反映作者对同行的研究成果了解和掌握的程度.如果发现所引文献确实过于老化，编辑有责任建议作者查阅较新近的文献，因为作者在接受新文献后可能会改变原来的认识或结论.如果所研究的问题的确很有价值，且很难查找到近5年内的相关文献，当然有必要引用5年前，甚至是几十年前的文献.如果在整个研究期间不追踪查阅有关文献，就可能忽视近几年来已被同行证实或解决的某些重大问题，而自己仍停留在课题研究时的认识水平，可见查阅近期文献和尽可能著录近期文献的重要性.有些作者甚至以为引用的文献越老，越能说明自己的研究结果可靠，这是一种误解。 请继续阅读相关推荐：
郭敬,白杨，迟艺萌.供应室管理系统在消毒供应管理工作中应用与体会［J］. 中国护理管理，2012，8：68－69.
百度学术可以找到参考文献,输入关键词，在输入年份，就能找到相对应的参考文献。如果不知道参考文献格式要求，可以百度搜，参考文献自动生成器。直接按着填就出来了。百度搜索参考文献自动生成器，按着里面填，点生成参考文献就出来了。作者.题名[D].所在城市:保存单位,发布年份.李琳.住院烧伤患者综合健康状况及其影响因素研究[D].福州:福建医科大学,2009.其他的：作者.题名[J].刊名,年,卷(期):起止页码.沈平,彭湘粤,黎晓静,等.临床路径应用于婴幼儿呼吸道异物手术后的效果[J].中华护理杂志,2012,47(10):930-932.作者.书名[M]. 版次.出版地: 出版者,出版年:起止页码.胡雁.护理研究[M].第4版.北京:人民卫生出版社,2012:38.作者.题名[N].报纸名,出版日期(版次).丁文祥.数字革命与国际竞争[N].中国青年报,2000-11-20(15).作者.题名[EB/OL].网址,发表日期/引用日期(任选).世界卫生组织.关于患者安全的10个事实 [EB/OL].其他： [R]、[P]、[A]、[C]、[Z]等。1、论文题目：要求准确、简练、醒目、新颖。2、目录：目录是论文中主要段落的简表。（短篇论文不必列目录）3、提要：是文章主要内容的摘录，要求短、精、完整。字数少可几十字，多不超过三百字为宜。4、关键词或主题词：关键词是从论文的题名、提要和正文中选取出来的，是对表述论文的中心内容有实质意义的词汇。关键词是用作机系统标引论文内容特征的词语，便于信息系统汇集，以供读者检索。 每篇论文一般选取3-8个词汇作为关键词，另起一行，排在“提要”的左下方。主题词是经过规范化的词，在确定主题词时，要对论文进行主题，依照标引和组配规则转换成主题词表中的规范词语。5、论文正文：（1）引言：引言又称前言、序言和导言，用在论文的开头。 引言一般要概括地写出作者意图，说明选题的目的和意义, 并指出论文写作的范围。引言要短小精悍、紧扣主题。〈2）论文正文：正文是论文的主体，正文应包括论点、论据、 论证过程和结论。主体部分包括以下内容：a.提出-论点；b.分析问题-论据和论证；c.解决问题-论证与步骤；d.结论。6、一篇论文的参考文献是将论文在和写作中可参考或引证的主要文献资料，列于论文的末尾。参考文献应另起一页，标注方式按《GB7714-87文后参考文献著录规则》进行。中文：标题--作者--出版物信息（版地、版者、版期）：作者--标题--出版物信息所列参考文献的要求是：（1）所列参考文献应是正式出版物，以便读者考证。（2）所列举的参考文献要标明序号、著作或文章的标题、作者、出版物信息。
［1］祝惠民.内科学［M］.第3版.人民卫生出版社，1998：142�151.这是标准的论文参考文献的格式。[1]是参考文献序列号，祝惠民是作者，内科学是署名，[M]代表书籍，第三版代表书的版本序号，人民卫生出版社是出版社名称，“1998：142 151.” 是书的出版年份，142-151是说本论文的写作参考了这本书的第142-151页的内容。
学前卫生学课程改革探究论文
［ 摘要 ］《学前卫生学》作为学前教育专业的一门专业必修课，应切实以学生掌握相应的保教知识与技能为课程教学的目标。针对本门课程传统教学中存在的问题，从改革课程内容、教学方法、考核方式三个方面入手进行探索，最终取得了一定的效果，与同行分享的同时也希望得到指导和帮助。
［ 关键词 ］课程改革;学前卫生学;改革探索
一、《学前卫生学》课程内容及目标
《学前卫生学》是学前教育专业的一门专业必修课，其基本的理论与实践知识与托幼机构的工作需求密切相关。该课程的教学目标为使学生具备正确的健康观念，熟悉学前儿童解剖生理特点以及身体发展的规律，掌握有关营养学、心理卫生、常见疾病预防与处理、急救措施等学前儿童卫生保育基本知识，并在幼儿园保教活动中能够运用相应的知识解决幼儿园的保育问题，促进幼儿的健康。其重要内容及教学目标为:(一)学前儿童的解剖生理特点与保健1．了解人体的基本结构;2．掌握学前儿童身体各系统、各器官(神经系统、感觉器官、运动系统、循环系统、呼吸系统、消化系统、泌尿系统、皮肤、内分泌系统、生殖系统)的组成及其生理特点;3．掌握学前儿童各系统、器官的保健措施，在幼儿园保育过程中能够采取有效的措施对幼儿进行身体护理与保健。(二)学前儿童营养卫生1．了解各种营养素及热能对学前儿童生长发育的重要价值，掌握学前儿童的合理膳食要求;2．了解幼儿园膳食营养管理、食品卫生管理的具体内容及要求;3．能够根据学前儿童生长发育需要合理配膳，促进幼儿的健康成长。(三)幼儿园保教活动安排的卫生1．了解幼儿园的一日生活制度，熟悉一日生活卫生要求;2．了解幼儿园日常生活照料的内容，掌握日常生活照料的卫生要求与方法，能够做好幼儿园日常生活的照料工作;3．了解幼儿学习教育活动的内容，掌握相应的卫生要求方法，能够做好幼儿学习教育活动的卫生保健工作。(四)学前儿童意外事故的预防与急救1．理解安全教育的内涵，了解学前儿童安全教育的意义、内容、方法与途径;2．了解幼儿园的安全要求，掌握学前儿童意外事故的急救原则和几种重要的急救法;3．能够在幼儿园工作过程中做好常见意外事故的预防，对出现的意外事故进行急救处理。(五)学前儿童常见疾病及传染病的预防与处理1．了解有关疾病的基本知识，能够根据学前儿童的表现判别生病与否，掌握基本的疾病护理技能;2．了解学前儿童常见传染病的类型，熟悉学前儿童常见传染病的一般特征和常见传染病的病因、症状，掌握常见传染病的预防及护理方法，能够在幼儿园保教活动中识别传染病，并进行有效预防和处理;3．了解学前儿童常见疾病的类型及特征，熟悉常见疾病的病因、症状，掌握学前儿童常见疾病的预防及护理，能够在幼儿园保教活动中做好疾病的预防和护理工作。(六)学前儿童的心理卫生1．理解学前儿童心理卫生的重要性，了解影响学前儿童心理卫生的因素;2．了解学前儿童心理卫生工作的内容;3．了解学前儿童常见的心理问题，掌握相应的预防措施。(七)学前教育机构的物质环境卫生1．理解学前教育机构物质环境卫生的重要性和功能;2．了解幼儿园的选址、用地、总平面布置等卫生要求，掌握幼儿园房舍的卫生要求，在幼儿园工作中做好房舍的卫生工作;3．了解和掌握学前教育机构常用设备与用具的卫生要求，在准备和组织幼儿园活动过程中严格按照要求做好相应的卫生工作。
二、本课程传统教学问题分析
为了实现这一本课程的总体教学目标及各章节小目标，适宜的课程教学模式无疑是一有力载体，然而在本课程传统实施过程中，却存在着以下几方面的问题:(一)课程教学方法落后，教学手段单一，主要采用集中讲授式，教师讲，学生听。学生处于被动的地位，被当做知识灌输的对象。久而久之，学生的听课积极性明显下降，学生逃课率上升，即使来上课，也较多出现说话、玩手机、睡觉等现象。这不利于教学目标的实现，更不利于培养学生的创新意识和实践能力。(二)课程考核方式单一，期末考试占的比例较大，导致学生“平时不用功，临时抱佛脚”的现象凸显。一些学生平时不怎么听课，但只要期末恶补也可以出成绩，反而有些平时很努力的学生，期末考试成绩不佳。这不利于学生积极性和主动性的发挥，也使以考试成绩为依据的考核评定失去了公平性。另外就是在考核过程中，偏重于对理论知识的考核，而对学生的实践能力则兼顾较少。
三、课程改革力图解决的关键问题
为了改变传统教学中存在的问题，我尝试不断创新教学方法，改革教学内容，建设多维的评价体系，力求形成特色鲜明的学前卫生学教学模式。《学前卫生学》课程改革拟解决的关键性问题有以下几个方面:(一)提高学生的课堂积极性，减少学生缺课、上课玩手机、说话、睡觉等现象。(二)通过教师集中理论讲解、幼儿园教师专题性实践汇报、学生知识点汇报、学小组情境演绎等环节，多角度、全方位的将幼儿园相关的保教情况真实展现在学生面前，使学生真正理解并掌握所学内容，减少学习过程中的“夹生”现象。(三)改变传统的“教师主动、学生被动”的现象，使学生和老师都能够在课堂教学中找到自己合适的位置，体现应有的能力和价值。
四、课程改革的具体内容
此次教学改革内容主要集中于以下三个方面:教学内容改革、教学方法改革和考核方式改革。(一)改革教学内容《学前卫生学》这门课程包含的内容比较多，涉及范围广。如果在有限的学期时间里，各个方面都“面面俱到”的'话，容易出现“眉毛胡子一把抓”、“贪多不求精”的问题。为了精准把握住课程的核心内容，真正实现学生所学与幼儿园所需的契合。在实际的课程实施中，我采用的做法为:在结合《学前卫生学》教学大纲的基础上，通过与幼儿园专家特别是一线教师的访谈，了解幼儿园保教实践中急需教师具备的相关知识和技能，对课程内容进行组织和整合，努力做到“重点突出、层次分明”。如第四章“托幼机构的卫生保健制度”中，则注重对幼儿园的生活制度进行了讲解，除了教材中(所使用教材为教育科学出版社出版，唐林兰、于桂萍主编的《学前儿童卫生与保健》一书)提到的在一日生活各环节中教师该注意的事项进行讲解之外，对各环节中幼儿的卫生要求也进行了补充性的讲解。并且在此基础上，编写了各环节中教师保健情况观察记录表及幼儿卫生行为观察记录表，供学生在实习及见习中使用，以进一步加深对所学知识的理解和运用。在第五章中，考虑到培养实践性人才的目标要求，则将重点放在第二节“学前儿童意外事故的处理”上，除了教材上列举的常见的12种意外事故外，又结合对幼儿园常见意外事故的调查，增加了诸如溺水、触电等急救措施讲解。而在第六章幼儿园常见的传染病、常见的疾病及第七章中常见的心理问题讲解中，则做了“减法”，即并没有将教材中提到所有常见疾病、传染病、心理问题进行一一讲授，而是结合幼儿园中儿童的实际，针对性地对比较普遍的一些疾病、传染病和心理问题进行了讲解，其余的则让学生作为课外知识进行自主学习。这样既实现了课程内容的精准、又体现了课程内容的层次性。(二)改革课程教学方法和手段在教学实践中，我把重点放在了那些能够真正提高学生的积极性、参与性以及对学生真正掌握知识和技能有明显效果的方法上。具体我采用了教师集中理论讲解、学生根据教育实践(如实习、见习)进行知识汇报以及学生小组情境演绎等方法以替代传统式的教师讲授为主，学生被动学习的方式。如本课程大部分章节(第一章、第二章、第三章等)的理论知识内容，我会通过讲授法、案例法等讲授给学生，以帮助学生建构起完整的理论知识体系。而一些实践性、操作性比较强的内容(第四章、第五章、第六章)，我会采用学生实践性自主学习为主、教师补充为辅的形式展开。如在第四章“托幼机构的生活制度”这一节，我会根据本节课的知识内容，编制一些幼儿园一日生活各环节教师保健情况及幼儿卫生行为表现观察记录表(如入园环节教师保健情况观察记录表及入园环节幼儿卫生行为观察记录表等)，然后以作业的形式布置给学生，让学生在实习的过程中(本课程基本大都开设在学生有教育实习的学期)自己结合所见所闻进行观察记录，然后回校后在课堂上进行汇报，与其他同学进行分享交流。这不仅实现了学生所学知识与幼儿园实际的高度吻合，也充分促进了学生的“自主———合作———探索”式学习。而在第五章“常见意外事故的处理”、第六章“常用护理技术”这些操作性知识的学习上，我则创新的采用了学生小组情境演绎的方式进行。具体操作为:我事先根据大纲及实际的调查，将幼儿园常见的意外事故及切实需要的护理技术进行整理，让学生自由结合成小组认领他们想要讲授的内容。在充分准备的基础上，将所要讲授的知识(如某种常见意外事故出现的原因、会有什么症状、特别是该如何进行急救处理等)以情景剧表演的方式展现出来。我则根据学生的表演，进行适当的补充或纠正。这种寓教于乐的方式，使学生在快乐的氛围中自主掌握了“活的”知识与技能。另外，为了进一步多途径、有效落实实践性人才培养的目标，领导与学前教研室的各位老师也一直致力于加强与幼儿园的合作，努力促进“双导师制”的人才培养模式，将幼儿园一线的优秀教师也纳入学前教育专业课程的教学中。具体到《学前卫生学》这门课程中，则体现为:将一些幼儿园保教实践内容交于幼儿园一线优秀教师以讲座汇报的形式进行讲授。比如第四章“幼儿园的一日生活制度”、第六章“幼儿园常见的传染病、疾病”、第七章“幼儿常见的心理及行为问题”等这形式既能够有效避免“象牙塔”式的知识学习，又能够在最大程度上促进学生掌握准确、急需的幼儿园保教技能。(三)改革考核方式考核是评估学生能力和学习情况的主要方式，考评是否科学与教师教学、学生学习、学院教学质量、人才培养的素质和能力密切相关。《学前卫生学》的考核改革主要从以下几个方面进行:在考试目的上，从注重学生的知识习得转变为注重学生知识与技能的全面发展;在考试内容上，从“注重理论知识”转向“理论与实践并重”;特别是在考核方式上，从“注重结果性评价”转向“结果与过程并重”。具体做法为:一方面，增大了平时表现成绩在期末成绩中所占的比例，由20%增加到30%，即在传统考核中只有“出勤”、“作业”这两项的基础上，增加了“小组知识点汇报”这一计分项，实现了学生在课堂中的过程参与和自主学习。另一方面，在“作业”这一项上，也与传统的理论知识阐述不同，转变为实践知识的考核，即对上面提到的学生在实习过程中填写的观察记录表的准确度、全面性、深入性等各方面进行综合评定。
五、课程改革的效果
以上是我在为期3年半的《学前卫生学》教学的过程中，尝试根据学生学习特点及课程内容进行的改革，在实施过程，初步达到以下了以下效果:(一)学生真正明白本门课程的重要性，不再把自己定位为课堂上的“局外人”，课堂积极性明显提高，学生缺课、上课玩手机、说话、睡觉等现象基本消失，在课堂上真正的动起来。(二)通过高校教师集中理论讲解、学生知识点汇报、学小组情境演绎，学生真正理解并掌握了所学内容，学习过程中的“夹生”现象消失。(三)学生的学习效果好，对幼儿园的保育工作有了更深入的认识，能够用所学的知识和技能做好保育方面的工作，这在以后的教育实践得到了很好的体现。
参考文献:
［1］唐林兰，于桂萍．学前儿童卫生与保健［M］．北京:教育科学出版社，2012．
医学专业参考文献
参考文献是指为撰写或编辑论著而引用的有关图书资料。那么，关于医学专业论文的参考文献有哪些?
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关于医学论文参考文献
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分子生物技术在微生物降解环境 污染物中的应用 [摘要〕介绍了与环境微生物关键降解酶基因的筛选、克隆及应用相关的分r生物技术，包括聚合酶链式反应技 术、基因重组技术、荧光原位杂交技术和生物信息学等技术，并对这些技术在污染物降解基因检测、筛选和克隆方 面的应用进行了阐述与探讨、 [关键词]分子生物技术;微生物;基因;环境污染物;降解 随着现代j:\地技术的发展，多环芳烃、含氯有 机物和硝基苯类化合物等人工合成井难以降解的 污染物大量排放，造成世界范围内的环境污染和生 态破坏，严重地威胁人类和其他生物的正常生存和 发展。利用微生物修复技术对受污染的水体及土 壤进行处理，凸显了其重要的意义和可行性。研究 人员发现并筛选到一些微生物，它们不仅对环境有 较高的适应性、对污染物有较高的耐受性，而且对 污染物有较强的降解效率和专一性。然而环境中 存在的大量微生物中仅有少于1%可通过传统的培 养方法进行培养、分离和纯化，绝大多数细菌需要 非常严格的营养条件川。因此，为了对修复环境有 所贡献却难以培养的微生物进行更全面了解，也为 了筛选到更多有利于降解环境污染物的微生物菌 种及其关键酶基因，分子生物技术和手段逐渐被广 泛应用到环境可降解污染物及降解机理方面的研 究中。 本文对近年来发展起来的聚合酶链式反应 (PCR)技术、基因重组技术、荧光原位杂交(FISH) 技术和生物信息学等多种分子生物技术进行了介 绍，并总结了它们在污染物降解基因检测、筛选和 克隆方面的应用。 1与环境污染物降解相关的分子生 物技术 及其相关技术 PCR是一种利用脱氧核糖核酸(DNA)半保留 复制原理，在体外扩增位于两段已知序列之间的 DNA区段从而得到大量拷贝的分子生物技术。根 据其模板、引物来源或扩增条件的不同，PcR技术 可分为以下几种:(l)反转录pCR(RT一PeR)技 术，将mRNA反转录为cDNA后再对其进行PCR 扩增，可用来构建cDNA文库，分析不同生长时期 的mRNA表达状况和相关性以及mRNA的定量测 定等;(2)巢式PCR技术，在扩增大片段目的DNA 时，先用非特意性引物扩增再用特意性引物对第一 次扩增产物进行第二次扩增，以获得可供分析的 DNA;(3)竞争PCR技术，是一种定量PCR，向PCR 反应体系中加人人工构建的带有突变的竞争模板， 通过控制竞争模板的浓度来确定目的模板的浓度， 对目的模板作定量研究;(4)实时荧光定量PCR技 术，在PCR反应体系中加人荧光基团，利用荧光信 号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线 对未知模板进行定量分析，该法已广泛用于基因表 达研究、转基因研究等方面;(5)扩增的rDNA限制 酶切分析技术，根据原核生物rDNA序列的保守性， 将扩增的rDNA片段进行酶切，通过酶切图谱来分 析菌间的多样性;(6)RNA随机引导PCR技术，基 于任意寡核昔酸引物与RNA之间可能的配对，在 低严谨度条件下经聚合酶催化使链延伸，将细胞总 RNA或InRNA作为反转录反应的模板，此技术结 合单链构象多态性，用非变性胶分辨大小相同而构 象不同的片段，可用于诊断遗传突变及分析污染条 件下序列的多态性;(7)随机扩增多态DNA (RAPD)技术，是一种基于PCR检测PCR引物结合 位点序列改变的方法，通常以10bp的寡核昔酸序 列为引物，对基因组DNA随机扩增，电泳分离染色 扩‘增产物，再分析多态性。 技术 FISH技术利用荧光标记的探针在细胞内与特 异的互补核酸序列杂交，通过激发杂交探针的荧光 来检测信号。荧光探针比放射性探针更安全，具有 较好的分辨力，不需要额外的检测步骤。近年来， 由于FISH技术具有灵敏、便捷等优点，迅速发展完 善成为研究环境微生物的有力工具。此外，可用不 同激发和散射波长的荧光染料标记探针，在一步反 应中同时检测几个靶序列。该技术主要包括试样 固定、预处理、预杂交、探针和试样变性、杂交、漂洗 去除未结合的探针、检测杂交信号等步骤。由于 165rRNA具有遗传稳定性，因此成为FISH技术检 测最常用的靶序列。 基因重组技术 基因重组技术是从供体生物的基因组中通过 酶切扩增等手段获取目的基因，与载体连接形成重 组DNA分子，再导入到受体细胞中，让外源基因得 以表达。在已经分离出的许多菌株中，与降解能力 有关的基因多在质粒体上。由于质粒很容易在细 菌的繁殖过程中遗失，对细菌降解能力的长期稳定 非常不利，可将其与污染物降解有关的酶基因重组 到大肠杆菌等微生物中进行表达，以此构建的各种 生物降解特性增强的重组菌可用于污染环境的治 理修复或发酵某些废弃物。 生物信息学 20世纪后期，生物学的迅猛发展，从数量上和 质量上极大地丰富了基因组数据库、蛋白质数据 库、酶数据库和文献数据库等许多生物科学的数据 资源。已有多个国家和国际科研组织建立了生物 信息数据库，如欧洲分子生物学实验室(Eur叩ean MolecularBiologyLaboratory)核酸序列数据库和美 国国家生物技术情报中心(Nationaleente:fo:Bio- technologyInformation，NCBI)基因序列数据库等。 科学家利用计算机及生物信息分析软件分析这些 数据资源，确定大分子序列、结构、表达模式和生化 途径与生物数据之间的关系，区分生物个体间遗传 差异，揭示DNA多样性。例如，基本局部比对搜索 工具(BasieLoealAlignmentSearehTool，BLAST)， 是一套在蛋白质数据库或DNA数据库中进行相似 性比较的分析工具。它基于Altschul等的方法「2〕， 在序列数据库中对查询序列进行同源性比对工作。 BLAST程序可对一条或多条、任何数量、任何形式的 序列在一个或多个核酸或蛋白序列库中进行比对，甚 至将有缺口的比对序列也考虑在内，利用比较结果中 的得分对序列进行相似性说明。基因的序列分析可 揭示出生物物种之间的关系，在污染治理研究中可用 于生物基因组特殊区域或特异基因的测序。 2分子生物技术在环境污染物降解 中的应用 土壤试样总DNA的提取 用适当方法直接从土壤中提取DNA并纯化， 是从分子生物学角度对土壤微生物进行研究的前 提条件，而后可进行酶切、PCR扩增、核酸分子杂交 等分子生物学技术操作。从土壤中提取微生物 DNA主要分为汽接法和间接法}’{。直接法是在 ogram等的方法基础卜发展起来的，其主要包括2 个步骤:(l)原位细胞裂解;(2)DNA提取和纯化。 直接法提取的DNA超过细菌总DNA的60%且省 力，但提取的DNA常常有折断、腐殖酸污染、甚至 提取物中还夹杂有未知的胞外DNA和真核生物的 DNA。最先报道间接法的是Faegri等[‘〕，其主要包 括4个步骤:(l)分散土壤;(2)分离细胞与土壤; (3)细胞裂解;(4)DNA纯化。间接法提取DNA 产量低且费力，但纯度较高、DNA损伤小，提取的 大片段DNA可用来构建cos而d和细菌人工染色体 文库等。 采用PCR及相关技术扩增分析DNA片段 可降解污染物的微生物必然能产生分解代谢 该污染物的酶。selvaratnam等L’l用编码苯酚单加 氧酶dmpN摹因的RT一PCR技术来检测序列间歇 式活性污泥反应器‘{一，降解酚的假单胞菌。检测结 果表明，RT一PCR技术不仅能检测微生物降解酚的 能力，还能测量dmpN基因的转录水平，从而确定假 单胞菌特殊的分解活性，发现了在转录水平下，酚 浓度与通气时间之问存在正相关关系。 将PCR技术和变性梯度凝胶电泳(DGGE)结 合起来，在变性条件适当的情况下能分辨一个碱基 对，分辨率较高。染色后的凝胶用成像系统进行分 析，可在一定程度l几反应试样的复杂性。条带的多 少能反应试样「 一 }1微生物组成的差异，条带的亮度能 反应试样中微生物的多少。基于以上优点，日前该 技术在微生物群落结构的分析和动态研究方面得 到了厂‘泛应用。DGGE可通过分析PCR扩增的基 因点突变来探索微生物的复杂性。徐玉泉等[“〕从 某废水中分离出一株能以苯酚为惟一碳源的菌株 PHEA一2，使用PCR一DGGE技术对该菌165 rDNA进行分析，发现该菌与醋酸钙不动杆菌同源。 M盯sh等r了)利用PcR一DGGE技术获得了活性污泥 中真核微生物的种群变化情况。王峰等下8〕采用 PCR一DGGE技术对城市污水化学生物絮凝处理中 活性污泥和生物膜微生物种群结构进行了分析，结 果表明活性污泥培养前后微生物种群结构发生r 很大改变。 RAPD技术也是一种应用比较广泛的以多态性 引物来扩增某些片段的技术。RAPD技术可用于检 测含有混合微生物种群的各种微生物反应器中微 生物的多样性。用RAPD技术分析检测实验室规 模的油脂淤泥培养料中的细菌菌群发现，用油脂淤 泥改良过的培养料比未改良的更适于不同的微生 物种群生长[9j。vainio等t’。〕从516种孤立的菌落 中提取出165rDNA，经PCR扩增后进行测序，检测 活性污泥中微生物种群的结构。这些组合技术的 应用显著增强r对微生物的检测和鉴定能力，为理 论研究工艺优化及提高生物处理效率提供了条件。 基因重组 基因工程技术应用于环境保护起始于20世纪 80年代。其基本原理是通过基因分离和重组技术， 将目的基因片段，比如可编码降解某种污染物的 酶，转移到受体生物细胞中并表达，使受体生物具 有该目的基因表达显现的特殊性状，从而达到治理 污染的目的。找到特定污染的抗性基因，利用基因 重组技术转基因后也可获得其他抗性植株以及筛 选到可转化污染物的植物，还可开发超量积累植物 进行污染土壤的生物修复。 罗如新等L”〕用放射性同位素标记tfdc基因片 段作探针，Southemblot杂交定位Ll菌株的邻苯二 酚1，2一双加氧酶基因位于Pstl的I片段和BamH I的M、N片段，回收并将其直接克隆至表达载体 pKT230卜，获得的重组子能转化不具开环酶活性 的甲胺磷降解菌P2，得到高于天然宿主21倍的邻 苯二酚1，2一双加氧酶。stingley等{”〕通过构建基 因文库和重组质粒等基因工程方法证实了NidAB 双加氧酶是降解菲的关键酶类，并首次鉴定出此基 因通过磷苯二甲酸实现降解功能。chae等‘”}发现 不能降解苯酚的su如lobusso扣taricu、98/2菌株中 的儿茶酚2，3一双加氧酶基因与能降解苯酚的 sulfolo右u，，o如taricu、咫有[6J源区，分析得知它们 是山共同祖先进化而来。把儿茶酚2，3一双加氧酶 基因克隆到大肠杆菌中表达，可获得有较高降解活 性的双加氧酶。 重金属污染是环境污染的重要方面之一。随 着分子生物学技术的发展，越来越多的修复性蛋白 基因正被从植物、微生物和动物中陆续分离出来， 如汞离子还原酶基因、有机汞裂解酶基因、汞转运 蛋自基因、金属硫蛋白基因、植物络合素合成酶基 因、铁离子还原酶基因和锌转运蛋白基因L’‘〕。这些 基因通过基因工程的改造，重组到合适的受休细胞 中表达相应的蛋白质和酶，达到治理难以降解的有 毒有害污染物的目的。sorsa等〔”〕把MTS插人 LamB序列的153位点，在中表达MTs，解决 r细胞内MTs对金属离子有限的吸附能力。综L 所述，基因重组技术具有快速、高效的特性，已逐渐 成为环境生物技术的研究热点。 技术 FISH技术利用核糖体内长度适中(约1500bp)、 高度保守的165:RNA序列作为理想的基因分类靶 序列，其中使用的165:RNA寡核普酸探针一般是 进行了荧光标记的20bp左右特异性核昔酸片段， 利用该报告分子(如生物素、地高辛)与荧光素标记 的特异亲和素之间的免疫化学反应，经荧光检测系 统对待测DNA进行定性、定量或相对定位分析。 FISH技术能提供处理过程中微生物的数量、空间分 布和原位生理学等信息。 硝化细菌是一类生理上非常特殊的化能自氧 菌，传统的研究方法要经过富集、分离、分类和鉴定 步骤，耗时长。HSH技术的引人解决了上述困难。 FlsH技术还被广泛用于活性污泥系统、硝化流化床 反应器和膜生物反应器等废水处理系统}’61。 基因工程微生物越来越多地被用于农业害虫 控制和环境污染的生物修复，对人类健康和环境的 影响引起广泛关注。1994年出现了一种新的标记 系统:绿色荧光蛋白(GFP)，由于GFP基因表达产 物对细胞没有毒害作用，且由GFP产生的荧光标记 检测卜分方便、简单。在某些被污染的环境中可分 离出降解该污染物的细菌，通过基因重组等手段使 用GFP分子标记，可更容易的分离检测被标记的 细胞叫。 Bastes等[’8]进行了苯酚降解菌染色体GFP基 因标记实验。通过PCR和Southemblot分析，证明 GFP基因已成功整合到宿主细胞的染色体中。对 标记菌与野生型的降解能力比较结果证明，GFP分 子标记的插人并不影响细胞的苯酚降解能力。 用G即标记Pseudomonasputida，研究活性淤 泥中细菌存活情况{’9飞。Pseudomonasputida被转到 活性淤泥2min后，观察到细胞在淤泥絮凝物间自 由游动;培养3d后，发现荧光细胞减少，大部分已 被合并到淤泥絮凝物中，以防止细菌被原生动物捕 食。用oFP标记石.eozi和Serraliamarceseern，考 察菌株附到絮凝物卜的过程{’()j。使用表面荧光显 微镜能将带有GFP标记的细胞从活性污泥中区分 开，井进行观察和记数。而聚焦激光扫描显微镜 (cLsM)可使GFP标记细菌产生三维轮廓，结合表 面荧光显微镜和CLSM观察GFP标记细胞，结果表 明，细胞表面疏水性在细菌附到絮凝物的过程中起 重要作用，两种细菌附在絮凝物上的模式有很大不 同，通过这种方法可更好地理解细菌赫附机理，有 助于提高废水处理效果。 3结语 分子生物技术的应用使研究人员可从微观的 角度更细致深人地了解微生物对污染物降解的具 体生理生化机制，在分子水平 _ _ [揭示生物体吸收、 迁移、积累有害物质最终被毒害，及适应、抗性等生 态问题，从而筛选到更多有利用价值的微生物。随 着越来越多微生物全部基因序列的解码，对各种细 菌体内可降解基因的分布和表达会有更深人的了 解，有关技术的发展和成熟必将对污染物的降解过 程有一个整体的、生态水平上的认识。 参考文献 l李凤，刘世贵 . 分子生物学技术在环境微生物研究中的 应用 . 世界科技研究与发展，2003，25(4):88一92 2AltsehulSF，GishW，MillerW， mentsearehtool . 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