摘要:目的 了解纯净水在饮用期间微生物指标的污染情况。 方法 将同批次抽检合格的纯净水放置到20个家庭饮用，同时在1d、3d、5d、7d、10d以无菌方式进行采集，取饮水机上热水端出口水（烧开）及冷水端出口水中间流水，带回实验室检验微生物各项指标。 结果 饮水机上热水端出口水符号卫生标准，而冷水端出口水的大肠杆菌及致病菌未检出，菌落总数、霉菌数、酵母菌数随着时间的延长，都有不同程度的变化，特别在5d后增加更明显，超过卫生标准，对人体有潜在的危害。 结论 建议装纯净水的塑料桶能改成10L以下为好，不喝冷水，饮用时间控制在5d之内，这样微生物污染较轻，有利于身体健康。关键词:饮水机上桶装纯净水;微生物污染状况;卫生要求为了解家庭桶装纯净水在饮用过程中微生物污染状况，提高饮用水质量，扩大服务范围，规范卫生条件，我们于2004年5月对家庭饮用过程中桶装纯净水按国家卫生标准进行了微生物指标检验，现将结果报告如下。1 材料与方法 样品来源 我们采用同批次检验合格的桶装纯净水，发放到20个家庭中，放置到饮水机上，当天开始检验，首先将饮水机上两个出水口用75%酒精棉球消毒，然后在冷水端出水口及热水端出水口（烧开）以无菌方式采取各500ml中间流水，带回实验室进行检验。 检验方法 按GB17324-1998《瓶装饮用纯净水卫生标准》进行微生物指标（菌落总数、大肠菌群、霉菌、酵母菌、致病菌）项目检验，采用GB/T4789-94食品卫生微生物学检验方法检测 ［1～4］ 。 试验用培养基 按GB/T4789-94方法配制，有普通营养琼脂、乳糖胆盐发酵液、孟加拉红培养基、琼脂培养，亚硒酸盐胱氨酸增菌液。 评价标准 依据GB17324-1998《瓶装饮用水卫生标准》进行，合格产品菌落总数≤20cfu/ml，大肠菌群≤3MPN/100ml，霉菌、酵母菌、致病菌不得检出 ［3］ 。2 结果 结果 见表1，采集20个家庭桶装饮用纯净水（同批次），通过检测微生物指标来进一步观察污染状况，结果表明在热水端出水口（烧开）采集的水经检测，微生物各项指标都在合格范围。而在冷水端出水口采集的纯净水检测，当天的样品都合格，在3d后菌落总数、霉菌数、酵母菌数均有增加，随着时间延长而增加明显，在10d内的5次检测中，大肠菌群、致病菌都未检出，符合饮用纯净水国家卫生标准，国家卫生标准规定纯净水中不得检出霉菌及酵母菌，在这次调查中菌落总数、霉菌数、酵母菌数均超标。表1 20个家庭桶装纯净水微生物污染状况调查检验结果（略）经检验，微生物检测结果有差异，有统计学意义，菌落总数检验:t=，P<，霉菌数检验:t=，P<，酵母菌数检验:t=，P<。（热水端出水口的水经检验都未检出，故不在列表）。3 讨论经检验，饮水机上桶装纯净水微生物超标项目有菌落总数、霉菌数、酵母菌数，考虑原因有三条，一是桶装纯净水的塑料桶回收反复使用，其特殊构造不利于清洗和消毒，造成水桶本身的污染，在适宜环境（光照、温度）下，少量微生物就会大量繁殖 ［4］ ;二是饮水机接口处密封不好，出水时桶内形成负压，从而将空气中的各种微生物随空气吸入水中，空气质量影响桶装水质量，因此长期饮用桶装水易受污染，微生物大量滋生繁殖;三是饮水机使用中为暴露状态，家庭又不便消毒，导致纯净水微生物指标超标。因此，我们认为，本次调查家庭饮水机桶装纯净水的检测说明，在初始阶段污染很轻，各项指标不超标，随着时间的延长，第3d菌落总数有所增加，在第5d明显增高，所有纯净水几乎都增加，霉菌和酵母菌也出现。可见，纯净水的卫生质量变化主要是菌落总数、霉菌数、酵母菌数。这对人体有潜在的危险 ［2，3］ 。我们必须加强生产和流通环节桶装饮用水的卫生监督监测指导，加强培训，严格遵守卫生规范和操作程序，在第一工序须彻底清洁塑料桶，定期消毒，洗刷饮水机各个部位，提倡喝烧开的热水端出水口的纯净水，不喝冷水，建议盛放纯净水的塑料桶尽量改造成装水10L以下的桶，饮用时间控制在5d以内，微生物污染程度轻，且卫生安全，有利于身体健康。
食品检验工需要培训什么课程 1、食品检验基础知识； 2、食品安全国家标准： （1）食品检验（理化）：GB 食品的相对密度的测定、水分的测定、灰分的测定、蛋白质的测定、脂肪的测定、还原糖的测定等； （2）食品检验（微生物学）： 菌落总数的测定、大肠菌群计数等； 3、实验室食品检验实操培训： （1）常用分析仪器的操作：阿贝折射仪、电热恒温干燥箱、天平、酸度计、电导率仪和分光光度计等； （2）分析方法实操：滴定分析法、分光光度计法等。 4、不同种类食品检测项目（如粮食加工品、肉制品、乳制品、饮料、方便食品、饼干、罐头、冷冻产品、速冻食品、薯类和膨化食品、糖果制品、茶叶及相关产品、酒类、蛋制品、炒货食品及坚果食品、蔬菜制品、水果制品、可可及焙烤咖啡产品、淀粉及淀粉制品、食糖、糕点、豆制品、水产制品、蜂产品等）。 如果有兴趣报考食品检验员，可考虑广电质量学院。 食品检验专业包括哪些课程某大学介绍[本科] 食品营养与检验教育 本专业培养具有化学、生物学和分析、检验等基本理论，食品营养学知识，食品安全与卫生学基础，食品分析与检测技能，通晓食品法规与标准，熟悉食品加工技术、食品安全评价技术、食品质量控制与管理规律的德、智、体、美全面发展的综合型应用技术人才和掌握教育教学方法、具备良好素质的教育和研究工作者。 本专业学生主要学习化学、生物学和食品科学的基本理论和基本知识，接受食品营养检验与设计、食品分析与检测、食品质量控制与管理、食品安全检测与评价、食品加工与品质评定等方面的系统训练。主干课程包括：食品化学、食品生物化学、物理化学、食品营养学、食品分析与检测、食品毒理学、食品病理检验、动植物检验检疫、仪器分析、食品安全检测技术、食品安全性评价、食品感官评定、教育学、心理学、食品微生物学、食品安全与卫生学、食品标准与法规、食品企业认证、食品质量控制与管理等。本专业通过认识实习、专业实习、毕业实习和毕业论文，课程技能训练和专业技能训练，专业实验（食品微生物学实验、食品生物化学实验、食品分析与检测实验、物理化学实验、食品化学实验、食品安全检测实验、仪器分析实验、食品毒理学实验、食品加工实验、食品感官评定实验）等实践教学环节强化实践能力培养。 本专业毕业生主要就业领域包括：在食品原辅料生产加工、流通和消费领域从事检验、品质控制、安全评价、生产管理、贸易经营、产品研发等工作；在 *** 部门从事商检、卫生防疫、技术监督、食品安全监管等工作；在中、高等职业学校从事食品营养、安全与质量控制方面教育教学及研究等工作。 考化验师资格证需要选修哪些课程 一 化验师资格证有很多种，比如食品检验员资格证、化学检验员资格证、医学检验技师回证等。 二 化学化验员答应选修的课程 1.化学检验基础;2.误差分析和数据处理;3.常用化学分析技术;4.常用仪器分析技术;5.化学危险品管理;6.仪器实操。 三 .食品检验员应选修的课程 1、法定计量单位知识和常用量的法定计量单位;2、误差和数据处理基本概念。3实验室用电常识。4、食品检测基础知识。5、化学基础知识。6、微生物检测基础知识。7、实验室安全防护知识。8、食品安全卫生基础知识。 我开学就大二了，想考食品检验员证需要考哪些科目，，各位帮帮忙呗。。。。 ①采集样品；来 ②配制标准溶液源； ③使用培养箱、显微镜等仪器设备检验样品的微生物含量； ④检验样品的微量金属元素、微量非金属元素及理化指标； ⑤记录、计算、判定检验数据； ⑥协助主检人员完成检验报告； ⑦检查、维护仪器设备； ⑧负责检验室卫生、安全工作。 食品检验员要考什么课程 食品检验类的证有几种,不同公司对这些证的要求也不同,(一般分为iso, haccp, 检验工 三种证) 你是本科学生物的话 可以直接做生物检验, 本科文凭等同于一个中级从业资格证 食品安全与检测开设拿些课程 这些是专业的专干课程 食品分析技术、仪器分析、食品化学、食品专微生物学、食品卫生微生属物学检验、食品工艺学、食品安全性评价、动植物检疫检验、食品安全导论、现代食品检测技术、食品法规与标准、食品质量控制、食品原料安全学、食品企业管理 但是还有些专业基础课程 像高等数学 大学英语 毕业生可从事食品生产，食品企业管理，食品质量控制等方面的工作。就业部门包括各级食品卫生监督部门，食品企业生产和质量控制管理部门，商检和卫生防疫部门及相关的教学和科研院所等部门。 食品营养与检测主要学哪些课程 主要课程：食品化学、化学原理与分析、仪器分析、食品理化检验、食品微生物检验、食品感官检验、食品营养与卫生、食品质量管理基础、实验室管理、功能性食品生产等。 主要技能考证：食品检验工职业资格证等 食品检测专业的课程多吗 某大学介绍[本科] 食品营养与检验教育 本专业培养具有化学、生物学和分析、检验等基本理论，食品营养学知识，食品安全与卫生学基础，食品分析与检测技能，通晓食品法规与标准，熟悉食品加工技术、食品安全评价技术、食品质量控制与管理规律的德、智、体、美全面发展的综合型应用技术人才和掌握教育教学方法、具备良好素质的教育和研究工作者。本专业学生主要学习化学、生物学和食品科学的基本理论和基本知识，接受食品营养检验与设计、食品分析与检测、食品质量控制与管理、食品安全检测与评价、食品加工与品质评定等方面的系统训练。主干课程包括：食品化学、食品生物化学、物理化学、食品营养学、食品分析与检测、食品毒理学、食品病理检验、动植物检验检疫、仪器分析、食品安全检测技术、食品安全性评价、食品感官评定、教育学、心理学、食品微生物学、食品安全与卫生学、食品标准与法规、食品企业认证、食品质量控制与管理等。本专业通过认识实习、专业实习、毕业实习和毕业论文，课程技能训练和专业技能训练，专业实验（食品微生物学实验、食品生物化学实验、食品分析与检测实验、物理化学实验、食品化学实验、食品安全检测实验、仪器分析实验、食品毒理学实验、食品加工实验、食品感官评定实验）等实践教学环节强化实践能力培养。本专业毕业生主要就业领域包括：在食品原辅料生产加工、流通和消费领域从事检验、品质控制、安全评价、生产管理、贸易经营、产品研发等工作；在 *** 部门从事商检、卫生防疫、技术监督、食品安全监管等工作；在中、高等职业学校从事食品营养、安全与质量控制方面教育教学及研究等工作。 食品质量检测需要哪些专业课知识 仪器分析、分析化学、有机化学、无机化学、物化、化工、结构，基础课程都要学、药物分析呀等等有点多，如果要考研 食品行业质检员资格证考试课程有哪些 对于食品本专业的学生来说不是很难考，而且有些学校教师会组织相关专业的考，考试的内容主内要可以分为两个方容面，一个是理论，考的书籍貌似叫食品质量检验资格证还是叫什么来着，另一个是考实操，主要考的是几种食品检验的方法，具体是什么我也不清楚，按我个人的经历来说，这个证书作用也不是非常大，而且你又是非本专业的，除非你要去一些特殊的岗位，必须要这个证，不然的话我还是建议你不用考了，如果你是在一些培训机构报名的话考这个证应该没有难度，应该比会计从业资格证简单，只是食品检验员好像还有等级之分的，你在外面考的话能不能考高级的就不知道，看看你们学校有没有食品专业，难说学校会组织考的，在学校考，不费钱，也容易一点
Fresh cut vegetables and called half processing vegetables (ever) or mild vegetables-how vegetables (Minimally processed vegetables processing), is through to the Fresh vegetables were classified, sorting, cleaning, slit, preservation and so on packing, handling, keep Fresh of the state of the products. This paper studies the following three contents: 1) the research in normal temperature (25 oC or so) and refrigerated (4 oC) storage conditions of fresh cut vegetables () some of their colonies with storage to decay time total the relationship between the changes. 2) fresh cut vegetables get research of microbial analysis identification. 3) research in different time of ultraviolet irradiation can influence whether fresh cut vegetables in the microbial growth. Conclusions are as follows: 1) in the first part of the experiment, the fresh cut vegetables in the microbial colonies with total storage time increased. 2) in the second part of the experiment, the fresh cut vegetables (wax gourd, tomatoes, pumpkin) from the fungi classics appraisal are yeast; Fresh cut tomatoes and pumpkin from the mould are penicillium. 3) in the third part of the experiments, along with the increase of ultraviolet irradiation time can inhibit microbial growth; Ultraviolet radiation on fresh pumpkin cutting of penicillium no significant inhibitory effect.
在检测结果中，复制比是最主要的指标，即总文字复制比、去除引用文献复 制比和去除本人文献复制比。无论是总检测指标还是子检测指标，这三个复制比 都是衡量检测文章结果的最重要指标。复制比反映了文章“抄袭”的文字数量比 例，一般来说，文字复制比越高，存在抄袭行为的可能性越大。各高校常把此参数作为论文检测是否通过的重要指标，个别要求严格的硕博论文还要看各段落的复制比。
总文字复制比
总文字复制比是指所检测文献总的重合字数在总的文献字数中所占的比例。 通过该指标，可以直观了解到重合字数在该检测文献中所占的比例情况。
b、去除引用文献文字复制比
去除引用文献文字复制比，是指去除了作者在文中标明了引用文献的重合文 字的复制比。
c、去除本人文献文字复制比
去除本人文献文字复制比，是去除了本人发表的文献之后，重合的文字的复 制比。
检测指标
检测指标主要包括重复字数、文献总字数、总段落数和疑似段落数等信息。
a、重复字数
检测系统使用绝对字数，即总重复字数作为检测结果的核心指标。
b、总字数
总字数是该检测文献所有包含的字数，文字复制比与总字数的乘积即为重复字数。
每个学校的要求都不同，有的是看总复制比，有的看总复制比还有引用比。
不可以了。查重系统不同，结果不一样，里面显示抄袭的文字也不一样的，所以系统不同，之间的结果没有可比性。论文查重必须按前后一致的系统进行查重，不然结果是无法保证一样的。
1.查重报告PDF解密:一般来说,我们查重后拿到的报告都是加密的,所有没发直接转换成Word档,需要先解密。大家可以自行百度一些在线解密的网站。转Word:将解除限制的PDF转换成Word文档。这里要注意找一些比较厉害...3.修改Word档参数:打开Word档,首先根据自己的需要修改报告的参数。(...4.修改论文的标记颜色:一般来说,查重报告下方都用不同颜色对论文进行标记,
目前，高校对于硕博士论文,需要通过抄袭检测系统的检测才能算过关。对本科生来说，大部分学校也采取抽查的方式对本科论文进行检测。抄袭过多，一经查出超过30%,后果严重。轻者延期毕业，重者取消学位。辛辛苦苦读个大学，学位报销了多不爽。但是，软件毕竟是人工设置的一种机制，里面内嵌了检测算法，我们只要摸清其中的机理，通过简单的修改，就能成功通过检测。本文是在网络收集的资料。整理了最重要的部分，供大家参考。论文抄袭检测算法：1.论文的段落与格式论文检测基本都是整篇文章上传，上传后，论文检测软件首先进行部分划分，上交的最终稿件格式对抄袭率有很大影响。不同段落的划分可能造成几十个字的小段落检测不出来。因此，我们可以通过划分多的小段落来降低抄袭率。2.数据库论文检测，多半是针对已发表的毕业论文，期刊文章，还有会议论文进行匹配的，有的数据库也包含了网络的一些文章。这里给大家透露下，很多书籍是没有包含在检测数据库中的。之前朋友从一本研究性的著作中摘抄了大量文字，也没被查出来。就能看出，这个方法还是有效果的。3.章节变换很多同学改变了章节的顺序，或者从不同的文章中抽取不同的章节拼接而成的文章，对抄袭检测的结果影响几乎为零。所以论文抄袭检测大师建议大家不要以为抄袭了几篇文章，或者几十篇文章就能过关。4.标注参考文献参考别人的文章和抄袭别人的文章在检测软件中是如何界定的。其实很简单，我们的论文中加了参考文献的引用符号，但是在抄袭检测软件中。都是统一看待，软件的阀值一般设定为1%，例如一篇文章有5000字,文章的1%就是50字，如果抄袭了多于50，即使加了参考文献，也会被判定为抄袭。5.字数匹配论文抄袭检测系统相对比较严格，只要多于20单位的字数匹配一致，就被认定为抄袭，但是前提是满足第4点，参考文献的标注。论文抄袭修改方法：首先是词语变化。文章中的专业词汇可以保留，尽量变换同义词；其次，改变文中的描述方式，例如倒装句、被动句、主动句；打乱段落的顺序，抄袭原文时分割段落，并重组。通过上述方法，能有效降低抄袭率。下面举几个例子，大家可以参考下：例句A：本文以设备利用率最大化为目标函数,采用整数编码与实数编码相结合的遗传算法,研究了HFS的构建问题。本文提出的染色体编码方法及相应的遗传操作方法可实现研究对象的全局随机寻优。通过对car系列标准算例的研究,显示了本文提出方法具有较高的计算重复性和计算效率。修改A：本文研究了HFS问题的构建，通过遗传算法并结合整数与实数编码，目标函数为最大化设备利用率来求解。本文的染色体编码方法与对应的遗传算法操作可有效提高算法的全局搜索能力。通过对一些列基准算例的研究，验证了本文算法的有效性，并具有较高的计算重复性和较高的运算效率。例句B：由于房地产商品的地域性强，房地产开发企业在进行不同区域投资时，通常需要建立项目公司，此时就会面临建立分公司还是子公司的选择。子公司是一个独立的法人，而分公司则不是独立法人，它们在税收利益方面存在差异。子公司是独立法人，在设立区域被视为纳税人，通常要承担与该区域其它公司一样的全面纳税义务；分公司不是独立的法人实体，在设立分公司的所在区域不被视为纳税人，只承担有限的纳税义务，分公司发生的利润与亏损要与总公司合并计算。修改B：房地产开发企业在不同区域进行投资时，由于此类商品的地域性强，因此需要建立项目公司。此时，企业需要选择建立分公司还是子公司。主要的区别是子公司具有独立的法人，分公司则不是独立法人。其次，在税收利益方面，由于分公司不是独立的法人实体，在设立分公司的所在区域不被视为纳税人，只承担纳税义务，总公司需要合并计算分公司的利润与亏损；而子公司是独立法人，在所在区域被视为法人实体，需要承担与区域其他公司一样的全面纳税义务。修改抄袭的方法不外乎这些，这里更建议同学们，先熟悉你所看的参考论文，关闭文档，用自己的话写出来，这样就不会受参考文献的太多影响。有同学这里就提出问题了，学校用的检测系统是知网的学术不端检测系统，不是淘宝几元钱买的万方数据检测。其实，各个检测系统的算法区别并不大，只是数据库有多有少，如果你没有太多，什么系统都不用怕。既然你抄了，得到检测报告的同时，先好好修改自己的文章。抄了之后，改相拟度，可以这样去头去尾留中间，意同词不同。一、查重原理1、知网学位论文检测为整篇上传，格式对检测结果可能会造成影响，需要将最终交稿格式提交检测，将影响降到最小，此影响为几十字的小段可能检测不出。对于3万字符以上文字较多的论文是可以忽略的。对比数据库为：中国学术期刊网络出版总库，中国博士学位论文全文数据库/中国优秀硕士学位论文全文数据库，国重要会议论文全文数据库，中国重要报纸全文数据库，中国专利全文数据库，个人比对库，其他比对库。部分书籍不在知网库，检测不到。2、上传论文后，系统会自动检测该论文的章节信息，如果有自动生成的目录信息，那么系统会将论文按章节分段检测，否则会自动分段检测。3、有部分同学反映说自己在段落中明明引用或者抄袭了其他文献的段落或句子，为什么没有检测出来，这是正常的。中国知网对该套检测系统的灵敏度设置了一个阀值，该阀值为5%，以段落计，低于5%的抄袭或引用是检测不出来的，这种情况常见于大段落中的小句或者小概念。举个例子：假如检测段落1有10000字，那么引用单篇文献500字以下，是不会被检测出来的。实际上这里也告诉同学们一个修改的方法，就是对段落抄袭千万不要选一篇文章来引用，尽可能多的选择多篇文献，一篇截取几句，这样是不会被检测出来的。4、一篇论文的抄袭怎么才会被检测出来？知网论文检测的条件是连续13个字相似或抄袭都会被红字标注，但是必须满足3里面的前提条件：即你所引用或抄袭的A文献文字总和在你的各个检测段落中要达到5%。二、快速通过论文查重的七大方法方法一：外文文献翻译法查阅研究领域外文文献，特别是高水平期刊的文献，比如Science，Nature，WaterRes等，将其中的理论讲解翻译成中文，放在自己的论文中。优点：1、每个人语言习惯不同，翻译成的汉语必然不同。因此即使是同一段文字，不同人翻译了之后，也 不会出现抄袭的情况。2、外文文献的阅读，可以提升自身英语水平，拓展专业领域视野。缺点：英文不好特别是专业英文不好的同学实施起来比较费劲。方法二：变化措辞法将别人论文里的文字，或按照意思重写，或变换句式结构，更改主被动语态，或更换关键词，或通过增减。当然如果却属于经典名句，还是按照经典的方法加以引用。优点：1．将文字修改之后，按照知网程序和算法，只要不出现连续13个字重复，以及关键词的重复，就不会被标红。2．对论文的每字每句都了如指掌，烂熟于心，答辩时亦会如鱼得水。缺点：逐字逐句的改，费时费力。方法三：减头去尾，中间换语序将别人论文里的文字，头尾换掉中间留下，留下的部分改成被动句，句式和结构就会发生改变，再自行修改下语病后，即可顺利躲过查重。优点：方便快捷，可以一大段一大段的修改。缺点中文没学好的，会很费劲，要想半天。方法四：转换图片法将别人论文里的文字，截成图片，放在自己的论文里。因为知网查重系统目前只能查文字，而不能查图片和表格，因此可以躲过查重。优点：比改句序更加方便快捷。缺点：用顺手了容易出现整页都是图片的情况，会影响整个论文的字数统计。方法五：插入文档法将某些参考引用来的文字通过word文档的形式插入到论文中。优点：此法比方法四更甚一筹，因为该方法日后还可以在所插入的文档里进行重新编辑，而图片转换法以后就不便于再修改了。缺点：还没发现。方法六：插入空格法将文章中所有的字间插入空格，然后将空 格 字 间距调到最小。因为查重的根据是以词为基础的，空格切断了词语，自然略过了查重系统。优点：从查重系统的原理出发，可靠性高。缺点：工作量极大，课可以考虑通过宏完成，但宏的编制需要研究。方法七：自己原创法自己动手写论文，在写作时，要么不原文复制粘贴；要么正确的加上引用。优点：基本上绝对不会担心查重不通过，哪怕这个查重系统的阈值调的再低。缺点：如果说优缺点的话，就是写完一篇毕业论文，可能会死掉更多的脑细胞。呵呵。。。知网系统计算标准详细说明：1．看了一下这个系统的介绍，有个疑问，这套系统对于文字复制鉴别还是不错的，但对于其他方面的内容呢，比如数据，图表，能检出来吗？检不出来的话不还是没什么用吗？学术不端的各种行为中，文字复制是最为普遍和严重的，目前本检测系统对文字复制的检测已经达到相当高的水平，对于图表、公式、数据的抄袭和篡改等行为的检测，目前正在研发当中，且取得了比较大的进展，欢迎各位继续关注本检测系统的进展并多提批评性及建设性意见和建议。2．按照这个系统39%以下的都是显示黄色,那么是否意味着在可容忍的限度内呢?最近看到对上海大学某教师的国家社科基金课题被撤消的消息,原因是其发表的两篇论文有抄袭行为,分别占到25%和30%. 请明示超过多少算是警戒线？百分比只是描述检测文献中重合文字所占的比例大小程度，并不是指该文献的抄袭严重程度。只能这么说，百分比越大，重合字数越多，存在抄袭的可能性越大。是否属于抄袭及抄袭的严重程度需由专家审查后决定。3．如何防止学位论文学术不端行为检测系统成为个人报复的平台？这也是我们在认真考虑的事情，目前这套检测系统还只是在机构一级用户使用。我们制定了一套严格的管理流程。同时，在技术上，我们也采取了多种手段来最大可能的防止恶意行为，包括一系列严格的身份认证，日志记录等。4．最小检测单位是句子，那么在每句话里改动一两个字就检测不出来了么？我们对句子也有相应的处理，有一个句子相似性的算法。并不是句子完全一样才判断为相同。句子有句子级的相似算法，段落有段落级的相似算法，计算一篇文献，一段话是否与其他文献文字相似，是在此基础上综合得出的。5．如果是从相关书籍上摘下来的原话，但是此话已经被数据库中的相关文献也抄了进去，也就是说前面的文章也从相关书籍上摘了相同的话，但是我的论文中标注的这段话来自相关的书籍，这个算不算学术抄袭？检测系统不下结论，是不是抄袭最后还有人工审查这一关，所以，如果是您描述的这种情况，专家会有相应判断。我们的系统只是提供各种线索和依据，让人能够快速掌握检测文献的信息。6．知网检测系统的权威性？学术不端文献检测系统并不下结论，即检测系统并不对检测文献定性，只是将检测文献中与其他已发表文献中的雷同部分陈列出来，列出客观事实，而这篇检测文献是否属于学术不端，需专家做最后的审查确认。一篇论文的抄袭怎么才会被检测出来？知网论文检测的条件是连续13个字相似或抄袭都会被红字标注，但是必须满足3里面的前提条件：即你所引用或抄袭的A文献文字总和在你的各个检测段落中要达到5%。论文查重修改的规律：1、如果是引用，在引用标号后，不要轻易使用句号，如果写了句号，句号后面的就是剽窃了（尽管自已认为是引用），所以，引用没有结束前，尽量使用分号。有些人将引用的上标放在了句号后面，这是不对的，应该在句号之前。2、可以将文字转换为表格，将表格边框隐藏。3、如果你看的外文的多，由外文自己翻译过来引用的，个人认为，不需要尾注，就可以当做自己的，因为查重的数据库只是字符的匹配，无法做到中文和英文的匹配。4、查重是一个匹配的过程，是以句为单位，如果一句话重复了，就很容易判定重复了，所以：的确是经典的句子，就用上标的尾注的方式，在参考文献中表达出来，或者是用：原文章作者《名字》和引号的方式，将引用的内容框出来。引号内的东西，系统会识别为引用如果是一般的引用，就采用罗嗦法，将原句中省略的主语、谓语、等等添加全，反正哪怕多一个字，就是胜利，也可以采用横刀法，将一些句子的成分，去除，用一些代词替代。或者是用洋鬼子法，将原文中的洋名，是中文的，就直接用英文，是英文的直接用中文，或是哦中文的全姓名，就用中文的名，如果是中文的名，就找齐了，替换成中文的姓名。故意在一些缩写的英文边上，加上（注释）(画蛇添足法），总之，将每句话都可以变化一下，哪怕增加一个字或减少一个字，都是胜利了。特别注意标点符号，变化变化，将英文的复合句，变成两个或多个单句，等等，自己灵活掌握。因为真正写一篇论文，很罕见地都是自己的，几乎不可能，但大量引用别人的东西，说明你的综合能力强，你已经阅读了大量的资料，这就是一个过程，一个学习、总结的过程。所有的一切，千万别在版面上让导师责难，这是最划不来的。导师最讨厌版面不规范的，因为他只负责内容，但又不忍心因为版面问题自己的弟子被轰出来。5、下面这一条我傻妞试过的，决对牛B：将别人的文字和部分你自己的文字，选中，复制（成为块，长方形），另外在桌面建一个空文件，将内容，复制到文件中，存盘，关闭。将这个文件的图标选中，复制，在你的正文中的位置上，直接黏贴，就变成了图片了，不能编辑的。这个操作事实上是将内容的文件作为一个对象插入的，所以是图片。这个操作事实上是将内容的文件作为一个对象插入的。所以是图片。以上那些东西再次总结一下：查重是一个匹配的过程，是以句为单位，如果一句话重复了，就很容易判定重复了，所以：1）如果的确是经典的句子，就用上标的尾注的方式，在参考文献中表达出来。2）如果是一般的引用，就采用罗嗦法，将原句中省略的主语、谓语、等等添加全，反正哪怕多一个字，就是胜利。3）也可以采用横刀法，将一些句子的成分，去除，用一些代词替代。4）或者是用洋鬼子法，将原文中的洋名，是中文的，就直接用英文，是英文的直接用中文，或是中文的全姓名，就用中文的名，如果是中文的名，就找齐了，替换成中文的姓名。5）故意在一些缩写的英文边上，加上（注释）(画蛇添足法），总之，将每句话都可以变化一下，哪怕增加一个字或减少一个字，都是胜利了。6）如果是引用，在引用标号后，不要轻易使用句号，如果写了句号，句号后面的就是剽窃了（尽管自已认为是引用），所以，引用没有结束前，尽量使用分号。有些人将引用的上标放在了句号后面，这是不对的，应该在句号之前。7）可以将文字转换为表格、表格基本是查重不了的，文字变成图形、表格变成图形，一目了然，绝对不会检查出是重复剽窃了。论文查重修改学校的要求：1、论文题目：要求准确、简练、醒目、新颖。2、目录：目录是论文中主要段落的简表。（短篇论文不必列目录）3、提要：是文章主要内容的摘录，要求短、精、完整。字数少可几十字，多不超过三百字为宜。4、关键词或主题词：关键词是从论文的题名、提要和正文中选取出来的，是对表述论文的中心内容有实质意义的词汇。关键词是用作机系统标引论文内容特征的词语，便于信息系统汇集，以供读者检索。 每篇论文一般选取3-8个词汇作为关键词，另起一行，排在“提要”的左下方。主题词是经过规范化的词，在确定主题词时，要对论文进行主题，依照标引和组配规则转换成主题词表中的规范词语。5、论文正文：（1）引言：引言又称前言、序言和导言，用在论文的开头。 引言一般要概括地写出作者意图，说明选题的目的和意义, 并指出论文写作的范围。引言要短小精悍、紧扣主题。〈2）论文正文：正文是论文的主体，正文应包括论点、论据、 论证过程和结论。主体部分包括以下内容：a.提出-论点；b.分析问题-论据和论证；c.解决问题-论证与步骤；d.结论。6、一篇论文的参考文献是将论文在和写作中可参考或引证的主要文献资料，列于论文的末尾。参考文献应另起一页，标注方式按《GB7714-87文后参考文献著录规则》进行。中文：标题--作者--出版物信息（版地、版者、版期）：作者--标题--出版物信息所列参考文献的要求是：（1）所列参考文献应是正式出版物，以便读者考证。（2）所列举的参考文献要标明序号、著作或文章的标题、作者、出版物信息。
您使用的是不是万方检测系统，万方检测适合前期修改，检测结果0是很常见的，要看您学校用的是什么检测系统了，如果是万方检测系统，那您就可以交论文了
看学校要求吧，达到学校要求就行了，毕竟降重真的很难，当然最好还是1%～2%，因为避免换个查重软件导致查重率变高达不到学校要求
知网硕士论文查重规则。
1、知网硕士论文查重是全文上传，格式对检测结果可能会造成影响（影响很小，不会超过5%），需要将最终交稿格式提交检测，将影响降到最小，对于3万字符以上的论文格式的影响是可以忽略的。
需要注意的是，一般重复率指的是正文，摘要、目录、参考文献只要格式正确检测系统会自动删除。此外，段落标题以及图表标题是会算重复的。至于论文致谢，有人说也要检测，有人说不用检测，具体要问导师，不过致谢部分应该没人会抄袭吧。
2、上传论文后，系统会自动检测该论文的章节信息，如果有自动生成的目录信息，那么系统会将论文按章节分段检测，否则会自动分段检测。整篇的结果是用你重的字符数比上你全篇的字符数 每一章节的重复率是用这章重的字符数比上这一章的总字符数。
3、知网论文检测的条件是连续13个字相似或抄袭都会被红字标注。但有部分同学反映说自己在段落中明明引用或者抄袭了其他文献的段落或句子，为什么没有检测出来，这是正常的。中国知网对该套检测系统的灵敏度设置了一个阀值，该阀值为5%，以段落计，低于5%的抄袭或引用是检测不出来的，这种情况常见于大段落中的小句或者小概念。
举个例子：假如检测段落1有4000字，那么引用单篇文献200字以下，是不会被检测出来的。实际上这里也告诉同学们一个修改的方法，就是对段落抄袭千万不要选一篇文章来引用，尽可能多的选择多篇文献，一篇截取几句，这样是不会被检测出来的。
菌落计数 GB
器材及培养
材料和试剂蒸馏水, 自来水, 取自儿童公园的湖水, 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基.仪器或其他用具灭菌三角烧瓶, 灭菌带玻璃塞瓶, 灭菌培养皿, 灭菌吸管, 灭菌量筒. 研究方法采用平板菌落记数技术测定水中细菌总数.
水样的采取 自来水先将自来水水龙头用火焰灼烧3 min 灭菌, 再开放水龙头5 min 后, 以灭菌三角烧瓶接取水样, 以待分析. 公园的湖水应取距水面10~ 15 cm 的深层水样, 先将灭菌的带玻璃塞瓶, 瓶口向下浸入水中, 然后翻过来, 除去玻璃塞, 水即流入瓶中, 盛满后, 将瓶塞盖好, 再从水中取出, 最好立即检查, 否则需放入冰箱中保存. 细菌总数的测定
菌落记数方法1) 计算相同稀释度的平均菌落数. 若有大片菌苔生长时, 弃用; 以无片菌苔生长的培养皿记数. 若片状菌苔大小不到培养皿的一半, 其余一半分布均匀, 将此一半计数@ ) 选择平均菌落数在30~ 300 之间的平板. 只有一个符合此范围时, 以该平均菌落数@ 稀释倍数. 有两个在30~ 300 之间时, 按两者菌落总数比值决定, 比值小于2, 取平均; 比值大于2, 取较小的菌落数.3) 若所有稀释度的平均菌落数均大于300, 则应按稀释度最高的平均菌落数@ 稀释倍数.4) 若所有稀释度的平均菌落数均小于30, 则按稀释度的平均数@ 倍数.5) 若所有稀释度的平均菌落数均不在30~ 300 之间, 则以最近30 或300 的平均菌落数@ 稀释倍数.
微生物的含量能否反应水的营养化程度？
能
欢迎采纳 希望帮到你
*菌落总数肠菌群食品卫程度指示性指标菌落总数肠菌群越高代表食品腐败程度越高越卫
生活饮用水卫生标准总大肠菌群（MPN/100mL或CFU/100mL） 不得检出 耐热大肠菌群（MPN/100mL或CFU/100mL）不得检出 大肠埃希氏菌（MPN/100mL或CFU/100mL）不得检出 菌落总数（CFU/mL） 100
生物强化脱色处理印染废水的中试研究 (国家环境保护水污染控制工程技术<浙江>中心,浙江杭州310007)摘要:为解决印染废水生化处理效果差的难题,开发了复合水解酸化/悬浮生物滤池的印染废水生化处理工艺,并在此基础上投加专性脱色菌进行生物强化脱色处理。结果表明,在稳定运行条件下,系统对色度的去除率提高了10% ~20%,对色度的总去除率达到80%以上,对COD的去除率达到90%左右。可见,通过生物强化技术提高生化处理的脱色能力是可行的。关键词:印染废水;复合水解酸化;悬浮生物滤池;脱色 中图分类号: X703文献标识码: C文章编号:1000-4602(2010)23-0091-03印染废水成分复杂、生物降解性差,用传统的生物法处理难度大,因此开发新工艺及新技术提高生物降解效率是印染废水处理的研究热点[1~4]。生物处理效果取决于有效微生物的活性和数量,生物强化技术通过向生物处理系统内引入具有特定功能的微生物,能提高有效微生物的浓度,增强对难降解污染物的降解能力,提高降解速率[5]。 复合厌氧反应器(AHR)是在第二代反应器的基础上开发的第三代水解厌氧反应器,AHR反应器的下部是高浓度的颗粒污泥,上部是由填料及附着的生物膜组成的滤料层,二者的结合很大程度上提高了反应器的有效容积、降低了污泥流失、提高了处理效率[6];悬浮生物滤池采用悬浮生物填料,对微生物具有良好的吸附和网捕作用,能有效减少微生物的流失,具有广泛的应用前景[7]。笔者选用复合水解酸化/悬浮生物滤池作为生化处理工艺,并在此基础上投加专性脱色菌种,同时采用脉冲布水技术,强化了布水过程中废水与微生物的接触,提高了传质效率,且不增加额外的运行费用,将该工艺应用于实际印染废水处理中试,取得了较好的处理效果。1材料和方法1·1废水水质及菌种 废水取自绍兴某棉布印染企业调节池,该废水成分复杂、污染物浓度高、可生化性差,废水中含有活性染料、还原染料、直接染料等多种染料及助剂,其pH值为12~14、水温约为40℃,为保证进水水质稳定,采用延时继电器控制提升泵每隔1 h采水1次,其综合水质如下: COD为1 000~2 800 mg/L、BOD5为300~500 mg/L、SS为150~200 mg/L、色度为300~1 000倍。接种污泥取自绍兴污水处理厂的污泥浓缩池。专性菌种是从印染废水及工业废水处理厂的活性污泥中筛选、分离得到的高效脱色菌株,对印染废水具有良好的脱色效果[7]。1·2试验装置与方法 中试采用复合水解(A) /悬浮生物滤池(O)串联工艺(见图1),用延时继电器控制提升泵,将调节池废水泵入储水池,不同时间段的废水在储水池内均匀水质、水量,并调节其pH≤10后泵至脉冲布水器。后者储存3~5 min的水量后将水瞬间布入水解酸化池底部,与厌氧菌及兼氧菌充分接触,将不溶性颗粒分解为可溶性物质、大分子物质分解为小分子物质,从而提高废水的可生化性,为后续好氧处理奠定基础,同时破坏染料的发色基团,去除废水的色度。A段出水溢流到O段,在O段填料与充氧废水充分接触,利用生物膜上微生物的新陈代谢作用,将废水中的有机物去除。 复合水解酸化池的总有效容积为2 m3,填充区容积为1m3,填充尺寸为1 cm×1 cm×1 cm的立方体悬浮生物填料;悬浮生物滤池的有效容积为,填充尺寸为2 cm×2 cm×2 cm的填料。1·3取样及分析方法 定期取组合工艺的进水、A池及O池出水,分析COD、色度、pH的变化情况。COD:重铬酸钾法;BOD5:微生物膜法; pH:便携式pH计;色度:稀释倍数法。2结果与讨论2·1生物强化对去除COD及色度的影响 试验考察了生物强化脱色前、后系统对COD及色度的去除效果(见图2)。在稳定运行阶段,A段的停留时间为14 h,O段的停留时间为10. 5 h,中试分两个阶段进行:第一阶段未投加脱色菌(18~34d),第二阶段为脱色菌强化处理期(35~52 d),其中前5 d为挂膜阶段。 由图2可以看出,在中试期间,进水COD浓度波动较大,生物强化前好氧出水的COD浓度基本稳定在150 mg/L左右,强化后出水COD浓度稳定在100 mg/L左右,略低于强化前的。进水色度为300~1 000倍,强化脱色后好氧出水色度由110~180倍逐渐降低到100倍以下。 投加脱色菌后,系统对COD的去除率未发生明显变化,而对色度的去除率由70%左右提高到80%以上,最高达到90%。可见,脱色菌可有效提高生化系统对色度的去除率,但对COD的去除无明显促进作用。2·2生物强化脱色的机理分析 图3为A段及O段生物强化脱色前、后系统对COD及色度的去除率变化曲线。 由图3可以看出, A段未投加脱色菌时,对COD和色度的去除率曲线基本重合,而投加脱色菌后A段的脱色率提高,且对COD和色度的去除率曲线分离。这是由于未投加脱色菌时,A段对COD的去除主要是通过去除非溶解性SS而实现的[6、8],而SS浓度的高低与表观色度的大小成正比,因此对COD与色度的去除率基本重合;投加脱色菌后,由于投加的脱色菌不能以染料分子作为直接碳源,而只能破坏其发色基团,将其还原分解为苯胺类化合物,再通过好氧工艺使这些物质矿化,且脱色率对SS去除率的依赖性降低,因此脱色率曲线与COD去除率曲线分离。 由图3还可知,生物强化脱色前、后O段的脱色率无明显变化,而对COD的去除率却略微增加,这符合脱色菌将染料分解为苯胺类化合物,再通过好氧工艺降解的推测。同时也反映出废水中残留的染料量占全部COD浓度的比例较低,而这也符合印染废水的特点。3结论①采用复合水解酸化/悬浮生物滤池作为生化处理工艺,并在此基础上投加专性微生物菌种,同时采用脉冲布水技术,当A段停留时间为14 h、O段停留时间为10. 5 h时,系统对色度的去除率可达到80%以上,对COD的去除率为90%左右。②生物强化脱色后,系统脱色率提高了10%~20%,且脱色菌不能以染料为直接碳源,只能将其还原分解为苯胺类化合物,再经好氧工艺使其矿化,故对COD的去除率提高不明显。③采用生物强化脱色技术能有效提高生化处理的脱色率,可有效降低深度处理费用,为废水的资源化利用奠定了基础。参考文献:[1]谢春生,黄瑞敏,肖继波,等.曝气生物滤池—纳滤深度处理印染废水的研究[J].中国给水排水, 2007, 23(15): 69-72.[2]洪俊明,洪华生.厌氧—好氧MBR组合工艺处理蒽醌活性染料废水[J].中国给水排水, 2008, 24(1): 51-53.[3]王白杨,张卓,何慧.生物/化学/物理联合工艺处理高温印染废水并回用[J].中国给水排水, 2008, 24(17):75-78.[4]尤隽,任洪强,严永红.厌氧/缺氧/好氧工艺处理印染废水[J].中国给水排水, 2007, 23(18): 63-64.[5]马放,郭静波,赵立军,等.生物强化工程菌的构建及其在石化废水处理中的应用[ J].环境科学学报,2008, 28(5): 885-891.[6]李晓东,孙铁珩,李海波,等.低温处理生活污水的复合厌氧工艺研究[J].安全与环境学报, 2008, 8(1):40-43.[7]白俊跃,徐灏龙.悬浮生物滤池A/O工艺处理印染废水[J].印染, 2008, (9): 31-33.[8]杨健,居志华,吴敏.复合式厌氧反应器预处理低温城市合流制污水中试[J].中国给水排水, 2007, 23(5):58-61.
1、查找乳酸菌的筛选培养基配方（特别是乳酸菌的最适生长pH，一定要严格控制，能筛掉好多杂菌）2、取粪便3、将粪便稀释至多个稀释度，再涂平板至筛选培养基，长出来的就是疑似目标菌株，一般会有多个不同菌种，分别挑取后纯培养4、翻阅细菌分类手册，看乳酸菌菌落特点和显微特点，又可以筛掉很多杂菌5、剩下的几株菌就是目标菌注意：不推荐你做菌种分类鉴定实验，太繁杂，工作量极大，初学者太容易出错顶多顶多做一下vp实验，产酸产气实验和血清实验至于浙大阿米巴先生说的测16sRNA，GC含量之类的，想都不用想，大学没那个设备，你也没那个技术，而且成本高，导师不会让你去浪费材料的，不要妄想能筛出新种来一般大学做毕业论文的话都是用斜面低温保存，以便导师下一年用你筛出来的菌让你的师弟师妹做后续试验。我的本科毕业论文就是筛菌的，欢迎交流讨论
微生物技术在城市生活垃圾处理中的应用 摘要：本文结合堆肥化、卫生填埋两种现行的城市生活垃圾处理工艺，主要介绍了城市生活垃圾生物处理过程中的微生物种群，以及通过分析开发出的新的微生物技术，指出了应用于城市生活垃圾处理的高效的微生物技术的研究方向。 关键词：城市生活垃圾 微生物 强化微生物处理技术 基因工程 ; 随着城市化进程在全球范围的加速，城市化带来的污染和人类聚居状况恶化等问题，已成为世界各国共同关心的问题。城市生活垃圾（Municipal solid waste, 简称MSW）是在城市日常生活及为城市生活提供服务的活动中产生的固体废弃物，是城市环境的主要污染物之一。目前，城市生活垃圾处理处置的方法主要包括卫生填埋（Sanitary landfill）、堆肥化(Composting)、焚烧(Incineration)三种，其中前两种处理方式均属于生物处理技术。具体来说，MSW生物处理技术就是城市生活垃圾中固有的或外添加的微生物，在一定控制条件下，进行一系列的生物化学反应，使得MSW中的不稳定的有机物代谢后释放能量或转化为新的细胞物质，从而MSW逐步达稳定化的一个生化过程。 1. 城市生活垃圾生物处理中主要的微生物。。。
分子生物技术在微生物降解环境 污染物中的应用 [摘要〕介绍了与环境微生物关键降解酶基因的筛选、克隆及应用相关的分r生物技术，包括聚合酶链式反应技 术、基因重组技术、荧光原位杂交技术和生物信息学等技术，并对这些技术在污染物降解基因检测、筛选和克隆方 面的应用进行了阐述与探讨、 [关键词]分子生物技术;微生物;基因;环境污染物;降解 随着现代j:\地技术的发展，多环芳烃、含氯有 机物和硝基苯类化合物等人工合成井难以降解的 污染物大量排放，造成世界范围内的环境污染和生 态破坏，严重地威胁人类和其他生物的正常生存和 发展。利用微生物修复技术对受污染的水体及土 壤进行处理，凸显了其重要的意义和可行性。研究 人员发现并筛选到一些微生物，它们不仅对环境有 较高的适应性、对污染物有较高的耐受性，而且对 污染物有较强的降解效率和专一性。然而环境中 存在的大量微生物中仅有少于1%可通过传统的培 养方法进行培养、分离和纯化，绝大多数细菌需要 非常严格的营养条件川。因此，为了对修复环境有 所贡献却难以培养的微生物进行更全面了解，也为 了筛选到更多有利于降解环境污染物的微生物菌 种及其关键酶基因，分子生物技术和手段逐渐被广 泛应用到环境可降解污染物及降解机理方面的研 究中。 本文对近年来发展起来的聚合酶链式反应 (PCR)技术、基因重组技术、荧光原位杂交(FISH) 技术和生物信息学等多种分子生物技术进行了介 绍，并总结了它们在污染物降解基因检测、筛选和 克隆方面的应用。 1与环境污染物降解相关的分子生 物技术 及其相关技术 PCR是一种利用脱氧核糖核酸(DNA)半保留 复制原理，在体外扩增位于两段已知序列之间的 DNA区段从而得到大量拷贝的分子生物技术。根 据其模板、引物来源或扩增条件的不同，PcR技术 可分为以下几种:(l)反转录pCR(RT一PeR)技 术，将mRNA反转录为cDNA后再对其进行PCR 扩增，可用来构建cDNA文库，分析不同生长时期 的mRNA表达状况和相关性以及mRNA的定量测 定等;(2)巢式PCR技术，在扩增大片段目的DNA 时，先用非特意性引物扩增再用特意性引物对第一 次扩增产物进行第二次扩增，以获得可供分析的 DNA;(3)竞争PCR技术，是一种定量PCR，向PCR 反应体系中加人人工构建的带有突变的竞争模板， 通过控制竞争模板的浓度来确定目的模板的浓度， 对目的模板作定量研究;(4)实时荧光定量PCR技 术，在PCR反应体系中加人荧光基团，利用荧光信 号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线 对未知模板进行定量分析，该法已广泛用于基因表 达研究、转基因研究等方面;(5)扩增的rDNA限制 酶切分析技术，根据原核生物rDNA序列的保守性， 将扩增的rDNA片段进行酶切，通过酶切图谱来分 析菌间的多样性;(6)RNA随机引导PCR技术，基 于任意寡核昔酸引物与RNA之间可能的配对，在 低严谨度条件下经聚合酶催化使链延伸，将细胞总 RNA或InRNA作为反转录反应的模板，此技术结 合单链构象多态性，用非变性胶分辨大小相同而构 象不同的片段，可用于诊断遗传突变及分析污染条 件下序列的多态性;(7)随机扩增多态DNA (RAPD)技术，是一种基于PCR检测PCR引物结合 位点序列改变的方法，通常以10bp的寡核昔酸序 列为引物，对基因组DNA随机扩增，电泳分离染色 扩‘增产物，再分析多态性。 技术 FISH技术利用荧光标记的探针在细胞内与特 异的互补核酸序列杂交，通过激发杂交探针的荧光 来检测信号。荧光探针比放射性探针更安全，具有 较好的分辨力，不需要额外的检测步骤。近年来， 由于FISH技术具有灵敏、便捷等优点，迅速发展完 善成为研究环境微生物的有力工具。此外，可用不 同激发和散射波长的荧光染料标记探针，在一步反 应中同时检测几个靶序列。该技术主要包括试样 固定、预处理、预杂交、探针和试样变性、杂交、漂洗 去除未结合的探针、检测杂交信号等步骤。由于 165rRNA具有遗传稳定性，因此成为FISH技术检 测最常用的靶序列。 基因重组技术 基因重组技术是从供体生物的基因组中通过 酶切扩增等手段获取目的基因，与载体连接形成重 组DNA分子，再导入到受体细胞中，让外源基因得 以表达。在已经分离出的许多菌株中，与降解能力 有关的基因多在质粒体上。由于质粒很容易在细 菌的繁殖过程中遗失，对细菌降解能力的长期稳定 非常不利，可将其与污染物降解有关的酶基因重组 到大肠杆菌等微生物中进行表达，以此构建的各种 生物降解特性增强的重组菌可用于污染环境的治 理修复或发酵某些废弃物。 生物信息学 20世纪后期，生物学的迅猛发展，从数量上和 质量上极大地丰富了基因组数据库、蛋白质数据 库、酶数据库和文献数据库等许多生物科学的数据 资源。已有多个国家和国际科研组织建立了生物 信息数据库，如欧洲分子生物学实验室(Eur叩ean MolecularBiologyLaboratory)核酸序列数据库和美 国国家生物技术情报中心(Nationaleente:fo:Bio- technologyInformation，NCBI)基因序列数据库等。 科学家利用计算机及生物信息分析软件分析这些 数据资源，确定大分子序列、结构、表达模式和生化 途径与生物数据之间的关系，区分生物个体间遗传 差异，揭示DNA多样性。例如，基本局部比对搜索 工具(BasieLoealAlignmentSearehTool，BLAST)， 是一套在蛋白质数据库或DNA数据库中进行相似 性比较的分析工具。它基于Altschul等的方法「2〕， 在序列数据库中对查询序列进行同源性比对工作。 BLAST程序可对一条或多条、任何数量、任何形式的 序列在一个或多个核酸或蛋白序列库中进行比对，甚 至将有缺口的比对序列也考虑在内，利用比较结果中 的得分对序列进行相似性说明。基因的序列分析可 揭示出生物物种之间的关系，在污染治理研究中可用 于生物基因组特殊区域或特异基因的测序。 2分子生物技术在环境污染物降解 中的应用 土壤试样总DNA的提取 用适当方法直接从土壤中提取DNA并纯化， 是从分子生物学角度对土壤微生物进行研究的前 提条件，而后可进行酶切、PCR扩增、核酸分子杂交 等分子生物学技术操作。从土壤中提取微生物 DNA主要分为汽接法和间接法}’{。直接法是在 ogram等的方法基础卜发展起来的，其主要包括2 个步骤:(l)原位细胞裂解;(2)DNA提取和纯化。 直接法提取的DNA超过细菌总DNA的60%且省 力，但提取的DNA常常有折断、腐殖酸污染、甚至 提取物中还夹杂有未知的胞外DNA和真核生物的 DNA。最先报道间接法的是Faegri等[‘〕，其主要包 括4个步骤:(l)分散土壤;(2)分离细胞与土壤; (3)细胞裂解;(4)DNA纯化。间接法提取DNA 产量低且费力，但纯度较高、DNA损伤小，提取的 大片段DNA可用来构建cos而d和细菌人工染色体 文库等。 采用PCR及相关技术扩增分析DNA片段 可降解污染物的微生物必然能产生分解代谢 该污染物的酶。selvaratnam等L’l用编码苯酚单加 氧酶dmpN摹因的RT一PCR技术来检测序列间歇 式活性污泥反应器‘{一，降解酚的假单胞菌。检测结 果表明，RT一PCR技术不仅能检测微生物降解酚的 能力，还能测量dmpN基因的转录水平，从而确定假 单胞菌特殊的分解活性，发现了在转录水平下，酚 浓度与通气时间之问存在正相关关系。 将PCR技术和变性梯度凝胶电泳(DGGE)结 合起来，在变性条件适当的情况下能分辨一个碱基 对，分辨率较高。染色后的凝胶用成像系统进行分 析，可在一定程度l几反应试样的复杂性。条带的多 少能反应试样「 一 }1微生物组成的差异，条带的亮度能 反应试样中微生物的多少。基于以上优点，日前该 技术在微生物群落结构的分析和动态研究方面得 到了厂‘泛应用。DGGE可通过分析PCR扩增的基 因点突变来探索微生物的复杂性。徐玉泉等[“〕从 某废水中分离出一株能以苯酚为惟一碳源的菌株 PHEA一2，使用PCR一DGGE技术对该菌165 rDNA进行分析，发现该菌与醋酸钙不动杆菌同源。 M盯sh等r了)利用PcR一DGGE技术获得了活性污泥 中真核微生物的种群变化情况。王峰等下8〕采用 PCR一DGGE技术对城市污水化学生物絮凝处理中 活性污泥和生物膜微生物种群结构进行了分析，结 果表明活性污泥培养前后微生物种群结构发生r 很大改变。 RAPD技术也是一种应用比较广泛的以多态性 引物来扩增某些片段的技术。RAPD技术可用于检 测含有混合微生物种群的各种微生物反应器中微 生物的多样性。用RAPD技术分析检测实验室规 模的油脂淤泥培养料中的细菌菌群发现，用油脂淤 泥改良过的培养料比未改良的更适于不同的微生 物种群生长[9j。vainio等t’。〕从516种孤立的菌落 中提取出165rDNA，经PCR扩增后进行测序，检测 活性污泥中微生物种群的结构。这些组合技术的 应用显著增强r对微生物的检测和鉴定能力，为理 论研究工艺优化及提高生物处理效率提供了条件。 基因重组 基因工程技术应用于环境保护起始于20世纪 80年代。其基本原理是通过基因分离和重组技术， 将目的基因片段，比如可编码降解某种污染物的 酶，转移到受体生物细胞中并表达，使受体生物具 有该目的基因表达显现的特殊性状，从而达到治理 污染的目的。找到特定污染的抗性基因，利用基因 重组技术转基因后也可获得其他抗性植株以及筛 选到可转化污染物的植物，还可开发超量积累植物 进行污染土壤的生物修复。 罗如新等L”〕用放射性同位素标记tfdc基因片 段作探针，Southemblot杂交定位Ll菌株的邻苯二 酚1，2一双加氧酶基因位于Pstl的I片段和BamH I的M、N片段，回收并将其直接克隆至表达载体 pKT230卜，获得的重组子能转化不具开环酶活性 的甲胺磷降解菌P2，得到高于天然宿主21倍的邻 苯二酚1，2一双加氧酶。stingley等{”〕通过构建基 因文库和重组质粒等基因工程方法证实了NidAB 双加氧酶是降解菲的关键酶类，并首次鉴定出此基 因通过磷苯二甲酸实现降解功能。chae等‘”}发现 不能降解苯酚的su如lobusso扣taricu、98/2菌株中 的儿茶酚2，3一双加氧酶基因与能降解苯酚的 sulfolo右u，，o如taricu、咫有[6J源区，分析得知它们 是山共同祖先进化而来。把儿茶酚2，3一双加氧酶 基因克隆到大肠杆菌中表达，可获得有较高降解活 性的双加氧酶。 重金属污染是环境污染的重要方面之一。随 着分子生物学技术的发展，越来越多的修复性蛋白 基因正被从植物、微生物和动物中陆续分离出来， 如汞离子还原酶基因、有机汞裂解酶基因、汞转运 蛋自基因、金属硫蛋白基因、植物络合素合成酶基 因、铁离子还原酶基因和锌转运蛋白基因L’‘〕。这些 基因通过基因工程的改造，重组到合适的受休细胞 中表达相应的蛋白质和酶，达到治理难以降解的有 毒有害污染物的目的。sorsa等〔”〕把MTS插人 LamB序列的153位点，在中表达MTs，解决 r细胞内MTs对金属离子有限的吸附能力。综L 所述，基因重组技术具有快速、高效的特性，已逐渐 成为环境生物技术的研究热点。 技术 FISH技术利用核糖体内长度适中(约1500bp)、 高度保守的165:RNA序列作为理想的基因分类靶 序列，其中使用的165:RNA寡核普酸探针一般是 进行了荧光标记的20bp左右特异性核昔酸片段， 利用该报告分子(如生物素、地高辛)与荧光素标记 的特异亲和素之间的免疫化学反应，经荧光检测系 统对待测DNA进行定性、定量或相对定位分析。 FISH技术能提供处理过程中微生物的数量、空间分 布和原位生理学等信息。 硝化细菌是一类生理上非常特殊的化能自氧 菌，传统的研究方法要经过富集、分离、分类和鉴定 步骤，耗时长。HSH技术的引人解决了上述困难。 FlsH技术还被广泛用于活性污泥系统、硝化流化床 反应器和膜生物反应器等废水处理系统}’61。 基因工程微生物越来越多地被用于农业害虫 控制和环境污染的生物修复，对人类健康和环境的 影响引起广泛关注。1994年出现了一种新的标记 系统:绿色荧光蛋白(GFP)，由于GFP基因表达产 物对细胞没有毒害作用，且由GFP产生的荧光标记 检测卜分方便、简单。在某些被污染的环境中可分 离出降解该污染物的细菌，通过基因重组等手段使 用GFP分子标记，可更容易的分离检测被标记的 细胞叫。 Bastes等[’8]进行了苯酚降解菌染色体GFP基 因标记实验。通过PCR和Southemblot分析，证明 GFP基因已成功整合到宿主细胞的染色体中。对 标记菌与野生型的降解能力比较结果证明，GFP分 子标记的插人并不影响细胞的苯酚降解能力。 用G即标记Pseudomonasputida，研究活性淤 泥中细菌存活情况{’9飞。Pseudomonasputida被转到 活性淤泥2min后，观察到细胞在淤泥絮凝物间自 由游动;培养3d后，发现荧光细胞减少，大部分已 被合并到淤泥絮凝物中，以防止细菌被原生动物捕 食。用oFP标记石.eozi和Serraliamarceseern，考 察菌株附到絮凝物卜的过程{’()j。使用表面荧光显 微镜能将带有GFP标记的细胞从活性污泥中区分 开，井进行观察和记数。而聚焦激光扫描显微镜 (cLsM)可使GFP标记细菌产生三维轮廓，结合表 面荧光显微镜和CLSM观察GFP标记细胞，结果表 明，细胞表面疏水性在细菌附到絮凝物的过程中起 重要作用，两种细菌附在絮凝物上的模式有很大不 同，通过这种方法可更好地理解细菌赫附机理，有 助于提高废水处理效果。 3结语 分子生物技术的应用使研究人员可从微观的 角度更细致深人地了解微生物对污染物降解的具 体生理生化机制，在分子水平 _ _ [揭示生物体吸收、 迁移、积累有害物质最终被毒害，及适应、抗性等生 态问题，从而筛选到更多有利用价值的微生物。随 着越来越多微生物全部基因序列的解码，对各种细 菌体内可降解基因的分布和表达会有更深人的了 解，有关技术的发展和成熟必将对污染物的降解过 程有一个整体的、生态水平上的认识。 参考文献 l李凤，刘世贵 . 分子生物学技术在环境微生物研究中的 应用 . 世界科技研究与发展，2003，25(4):88一92 2AltsehulSF，GishW，MillerW， mentsearehtool . 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