猪细小病毒治疗论文参考文献

根据流行病学、临床症状和病理变化可做出初步诊断，确诊需进一步做实验室诊断。实验室诊断病原分离：取流产胎儿、死产仔猪的肾等材料处理后接种细胞进行病毒分离。病原鉴定：免疫荧光试验、PCR诊断试验、分子杂交试验。病毒抗原的检查：（1）PPV荧光抗体直接染色法：在荧光显微镜下观察，若发现接种的细胞片中细胞核不着染，即可确诊。（2）PPV酶标抗体直接染色法：在普通生物显微镜下观察染色情况，若未接种PPV的正常对照细胞片中细胞核无棕色着染现象，而接种的PPV的细胞片中细胞核着染，即可确诊。（3）PPV血凝试验：若发现稀释后的样品有凝集红细胞的现象，而正常PBS红细胞对照无自凝现象，则可认为样品可疑还需用特异性的PPV标准阳性血清作血凝抑制试验，如能抑制样品的血凝现象，即可确诊为PPV。血清学检查：血凝和血凝抑制试验(最为常用)。PPV血清中和试验、酶联免疫吸附试验、免疫荧光试验。病料采集：取流产胎儿、死产仔猪的肾、睾丸、肺、肝、肠系膜淋巴结或母猪胎盘、阴道分泌物，制成无菌悬液，备用。

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猪细小病毒为细小病毒科细小病毒属成员。病毒对热具有较强抵抗力，56℃48小时或70℃2小时病毒的感染性和血凝性均无明显改变，但80℃5分钟可使感染性和血凝活性均丧失。病毒在40℃极为稳定，对酸碱有较强的抵抗力，在～之间稳定，能抵抗乙醚、氯仿等脂溶剂，但漂白粉、l%～氢氧化钠5分钟能杀灭病毒，2%戊二醛需20分钟，甲醛蒸气和紫外线需要相当长的时间才能杀死该病毒。短时间胰酶处理对病毒悬液感染性不仅没有影响，反而能提高其感染效价。在的甘油缓冲盐水中或在一20~C以下能保存一年以上毒力不会下降。

猪圆环病毒2型与猪附红细胞体混合感染的诊断与防治税光伟 韩旭 张成伟 洪洋 魏攀 指导老师：赵光伟西南大学荣昌校区动物医学系，荣昌 402460摘要:随着我国养猪业集约化程度的提高，生猪和种猪跨地域运输越来越频繁，使得猪群传染病的发生越来越复杂。在很多猪场，都同时存在多种病原的混合感染。2009年1月四川隆昌某猪场送检病猪3头。该场中部分猪只陆续发生高热、皮肤发绀、呼吸困难等症状，病程一般持续5～7天，发病猪一般以死亡为转归。不同年龄段的猪群中均有不同程度的发生，临床表现基本相似。通过临床症状和病理剖检，疑似猪蓝耳病病毒（PRRSV）、猪圆环病毒2型（PCV-2）、猪附红细胞体（）混合感染。据此笔者在西南大学荣昌校区动物疾病快速诊断中心做了确诊实验。关键词:圆环病毒2型 附红细胞体 混合感染 综合防治 Diagnosis and Treatmentof Porcine circovirus type 2 mixed infection Eperythrozoon Shui Guang WeiSouthwest China Normal University of Rongchang campus veterienary medicine department, Rongchang 402460, ChinaAbstract: Along with our country pig-breeding industry intensification degree's enhancement, the live pig and the kind of pig cross region transportation is getting more and more frequent, causes the pig group infectious disease's occurrence to be getting more and more complex. In many pig farms, simultaneously has many kinds of causes of disease the mixed infections. In January, 2009 Sichuan Longchang one pig farm deliver examines the sickness pig 3 heads. This partial pigs only one after another have symptoms and so on high fever, skin cyanosis, scant of breath, the course continue generally for 5~7 days, the morbidity pig take die generally as the extension turn over. In the disparity in age section's pig group has the varying degree occurrence, clinical manifestation basic similar. Split through the clinical symptoms and the pathology examine, I doubt that the sickness pigs mixed infection with PRRSV virus、PCV-2 virus 2 and . According to this,We decide to finish it in the southwest university of Rongchang campus animal disease fast diagnostic word: Porcine circovirus type 2 Eperythrozoon Mixed infection Integrated Control1 材料与方法1．1Bio-Rad PCR仪、菲恰尔（GL-16A）离心机、JUNYI紫外灯（JY04S-3C）、苏静安泰超净工作台、微量可调移液器等。所有实验均在西南大学荣昌校区动物疾病快速诊断中心进行。1．2猪圆环病毒（PCV）核酸扩增检测试剂盒、猪蓝耳病病毒（PRRSV）核酸扩增检测试剂盒均购自北京索奥生物技术有限公司。2 临床症状2．1病猪体温41～42℃，稽留热、精神沉郁、皮毛粗乱、心跳和呼吸加快、双侧性震颤，耳部、腹下、腹股沟、四肢出现不规则的紫斑，指压不褪色，有较浓的眼屎、眼结膜苍白、厌食或不食、呼吸困难、后躯无力、行走摇摆，病猪初期便秘，呈粪球状，小便深黄色，发病后期下痢和便秘交替出现。3 病料采集 对濒死期的或刚刚死亡的猪进行仔细剖检，无菌操作下分别采集心血、肝、脾、肾等病料，供实验室检测用。4 细菌学检查 4．1血液压片 取抗凝血或鲜血一滴，加3－4倍生理盐水稀释，盖上盖玻片，1000倍油镜下观察，可见大多数红细胞边缘呈锯齿状、星芒状或不规则状，并有微微颤动，即可诊断为附红细胞体感染阳性。判定标准:在油镜下检查20个视野，有25个以下附红细胞体的为感染+，有25－50个附红细胞体的为感染++，有50－70及70以上个附红细胞体的为感染+++。4．2组织涂片 将无菌采取的肝、脾、肾及淋巴结涂片，革兰氏染色镜检。5 PRRSV和PCV－2的PCR检测5．1核酸提取 病料RNA和DNA的提取分别用Trizol reagents(RNA提取液)和核酸提取液B（DNA）提取，按照说明书提供的方法进行。首先将血清稀释，取100ul释出血清加入500ul Trizol reagents（RNA提取液）充分震荡，混匀后室温放置5min。加入100ul氯仿，用力振荡15s，室温静置10min，4℃13，000 rpm离心5min。小心将上层水相转移到干净的离心管，加入等体积的异丙醇，充分混匀，13，000 rpm离心5min。弃上清，加入75％DEPC 乙醇，充分混匀，13，000 rpm离心5min，小心吸去大部分乙醇。将提取管口敞口在室温空气中干燥5min，待乙醇挥发干净，用20ul DEPC H2O溶解沉淀。5．2逆转录 根据标本数取逆转录反应管，取2ul上述获得的RNA并加入7ul PRRSV－SM RT MIX引物进行逆转录。PRRSV 逆转录的反应体系为25ul，反应条件为：30℃5min，42℃45 min后98℃5min灭活转录酶。PCV－2 PCR检测则省去RNA提取与逆转录步骤，直接进行相应的扩增。5．3扩增PCR PRRSV PCR扩增的反应体系为25ul。PRRSV PCR扩增反应条件为：94℃变性2min,93℃→2min，93℃ 30 s→58℃ 30s→72℃ 30s,共35个循环；PCV-2 PCR扩增反应条件为：93℃→2min，后93℃ 30s→58℃ 30s→72℃ 30s,共35个循环。5．4电泳检测 取15ul PCR扩增产物直接用加样枪点样于2％琼脂糖凝胶胶孔中，以5 v/cm电压，1 x TAE中电泳20min后，紫外灯下观察结果。用DL2000 Marker作为参照。PRRSV和PCV－2的阳性扩增带分别为396bp和143bp。6 结果6．1剖检变化 濒死期病猪的典型表现为：病猪尸体消瘦，不同程度的贫血和黄疸，体表皮肤、粘膜黄染，血液稀薄呈水样；皮下水肿，呈黄白色；体表和肠系膜淋巴结充血、出血和水肿；淋巴结肿大4～5倍，切面外翻，尤以腹股沟淋巴结、肠系膜淋巴结、气管和支气管淋巴结明显，切面多汁呈黄色；肺部的病变主要是肿胀、间质增宽，有散在的橡皮样硬块；肝脏变性且有轻微黄疸、肿大，呈黄棕色；脾脏肿大；肾脏水肿，颜色呈灰白色，覆盖有小出血点。部分病猪心肌变软，心包积液。6．2细菌学检查结果 6．2．1血液压片 1000倍油镜下观察，可见大多数红细胞边缘呈锯齿状、星芒状或不规则状,诊断为附红细胞体感染阳性，标记为：+++,结果见图2。6．2．3组织涂片 革兰氏染色镜检，未见细菌。6．3电泳检测结果：猪圆环病毒（PCV－2）为阳性；蓝耳病病毒（PRRSV）检测为阴性。结果见图1。 图1 PCV-2和PRRSV PCR检测结果 图2 血液压片油镜观察M：DL2000 Marker；1：PCV-2 PCR产物；2：PRRSV PCR产物7 防治措施7．1该病目前尚无疫苗预防，改进饲养管理，对发病严重的病猪立即淘汰，发病轻微的猪进行隔离治疗。用2％ ～3％的烧碱对猪舍进行彻底消毒，保持猪舍饲养用具的清洁卫生；切断附红细胞体病的传播途径。给予全价饲料增加机体的抗病能力，减少不良应激的发生。改进饲养管理，减少应激是控制继发感染的关键。特别是仔猪断奶后的3～4周是预防该病最关键最有效的时期，要降低饲养密度，尽量减少猪群的应激因素，做好猪瘟、猪伪狂犬病、猪细小病毒病、猪蓝耳病疫苗的接种工作，做好猪群平时药物预防工作，母猪在产前1周和产后1周在饲料中可添加土霉素等抗菌药物，仔猪在断奶前1周至断奶后1个月在饲料中可添加强力霉素等抗菌药，同时也拌料一些有预防作用的中药，如清温败毒散进行预防，以减少该病在猪群中流行。7．2猪圆环病毒是猪的免疫抑制性疾病，引起和继发感染的疾病已成为世界养猪业的大敌。目前仍无有效防治措施，采取的方法是控制继发感染，特别要加强断奶仔猪的营养和管理，采取药物预防，降低猪群死亡率，减少经济损失。7．3对症治疗 7．3．1治疗圆环病毒病目前尚无特效的治疗药物，应早发现，早确诊，早治疗。对发病不严重的猪只，选用新型的抗病毒剂如干扰素、白细胞介导素、免疫球蛋白、转移因子等进行治疗；同时采用黄芪多糖注射液并配合Vb1、Vb12、Vc肌肉注射，增强猪自身免疫力；另外，也要采用抗菌药物，控制继发感染，如氟苯尼考、阿米卡星、盐酸林可壮观霉素等配合治疗，尽量少用磺胺类药物和地塞米松进行治疗。7．3．2目前对猪附红细胞体病疗效较好的药物有长效土霉素，四环素，贝尼尔等，按说明剂量肌注24h后，可见临床症状改善，连用3～5d。另外，对阳性猪群的贫血猪，可应用铁制剂(右旋糖酐铁)、土霉素、Vb12、VC等对症治疗。8 小结与讨论8．1此次疫病根据流行病学、临床症状和剖检变化及实验室诊断，最后确诊为猪圆环病毒2型与附红细胞体混合感染。8．2猪圆环病毒病是由猪圆环病毒感染所引起的以免疫抑制为特征的一类病毒性传染病。PCV-2感染新生仔猪及断奶仔猪，使仔猪发生先天性震颤和断奶后全身消耗性综合征，是一种慢性消耗性疾病，导致断奶仔猪生长缓慢、发育障碍、机体免疫力下降、易继发其他疾病(附红细胞体病、弓形体病、猪瘟等)而加重病情。要抓住关键时期，减少应激，仔猪断奶后3～4周，是预防圆环病毒的最关键时期，最有效的方法和措施是尽可能减少断奶仔猪的应激。经分析，猪长途贩运，使动物机体产生一定的应激反应，加上抵抗力下降，特别是感染附红体和弓形体病后，进一步降低机体的免疫力，当遇到传染性疾病流行时，特别是遇到猪圆环病毒感染侵袭，就会造成病猪死亡率增高。8．3猪附红细胞体病是由猪附红细胞体引起猪的一种血液病，蚊虫是重要的传播媒介，尤其在多雨季节蚊虫易孳生，加上猪群感染圆环病毒，机体抵抗力下降，而发生猪附红细胞体病。防治该病应消灭蚊虫，切断传播途径，加强器械的消毒，提高管理水平。从现在的季节来看，正是春季，气温时高时低，忽热忽冷，春季又是病菌活动频繁季节，所以加快了疫病流行。另外，老鼠可传播多种疾病，若鼠害控制不力，则易引起疾病的发生，因此，必须控制鼠害。8．4为了减少疾病的发生，规模化养猪场必须坚持自繁自养，做到全进全出，加强平时消毒工作，这样尽可能地避免或减少疫病的传入和流行。8．5附红细胞体病的死亡率很低，但与猪圆环病毒混合感染后，死亡率就会显著上升，可达60％以上，这也是造成病猪死亡率增高的重要原因。采用综合措施后，该猪场的病情基本稳定，得到了有效控制，到2月下旬逐渐恢复正常。参考文献：[1] 马其国,商绍彬,申会刚. 猪圆环病毒2型诊断技术的研究进展[J]. 浙江畜牧兽医, 2008, 33(5): 7-9.[2] 谷训国. 猪附红细胞体病的鉴别诊断与防治[J].2008,(6): 81.[3] 苏双,吕雪峰. 猪附红细胞体病研究进展[J]. 兽医导刊,2008,(8): 25-27.[4] 孙波,王俊珍,窦续鑫. 猪附红细胞体病的诊治[J]. 湖北畜牧兽医,2007,(2): 39-40.[5] 刘殿忠. 猪圆环病毒与附红细胞体混合感染的诊治[J]. 兽医导刊，2008,(3): 43[6] 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采取综合性防制措施：细小病毒（PPV）对外界环境的抵抗力很强，要使一个无感染的猪场保持下去，必须采取严格的卫生措施，尽量坚持自繁自养，如需要引进种猪，必须从无细小病毒（PPV）感染的猪场引进。当HI滴度在1：256以下或阴性时，方准许引进。引进后严格隔离2周以上，当再次检测HI阴性时，方可混群饲养。发病猪场，应特别防止小母猪在第一胎采食时被感染，可把其配种期拖延至9月龄时，此时母源抗体已消失(母源抗体可持续平均21周)，通过人工主动免疫使其产生免疫力后再配种。疫苗预防公认使用疫苗是预防猪细小病毒病、是提高母猪抗病力和繁殖率的有效方法，已有10多个国家研制出了细小病毒（PPV）疫苗。疫苗包括活疫苗与灭活苗。活疫苗产生的抗体滴度高，而且维持时间较长，而灭活苗的免疫期比较短，一般只有半年。疫苗注射可选在配种前几周进行，以使怀孕母猪于易感期保持坚强的免疫力。为防止母源抗体的干扰可采用两次注射法或通过测定HI滴度以确定免疫时间，抗体滴度大于1：20时，不宜注射，抗体效价高于1：80时，即可抵抗PPV的感染。在生产上为了给母猪提供坚强的免疫力，最好猪每次配种前都进行免疫，可以通过用灭活油乳剂苗两次注射，以避开体内已存在的被动免疫力的干扰。将猪在断奶时从污染群移到没有细小病毒（PPV）污染地方进行隔离饲养，也有助于本病的净化。要严格引种检疫，做好隔离饲养管理工作，对病死尸体及污物、场地，要严格消毒，做好无害化处理工作。一、流行病学调查感染母猪所产的死胎、仔猪及子宫内的排泄物中均含有很高滴度的病毒，而带毒猪所产的活猪可能带毒排毒时间很长甚至终生。感染种公猪也是该病最危险的传染源，可在公猪的精液、精索、附睾、性腺中分离到病毒，种公猪通过配种传染给易感母猪，并使该病传播扩散。污染的猪舍是猪细小病毒的主要储藏所。在病猪移出、空圈个月，经彻底清扫后，再放进易感猪，仍可被感染。污染的食物及猪的唾液等均能长久地存在传染性。仔猪、胚胎、胎猪通过感染母猪发生垂直感染；公猪、肥育猪和母猪主要是经污染的饲料、环境经呼吸道、生殖道或消化道感染；初产母猪的感染多数是经与带毒公猪配种时发生的；鼠类也能传播本病。本病具有很高的感染性，易感的健康猪群—旦病毒传入，3个月内几乎可导致猪群100%感染；感染群的猪只，较长时间保持血清学反应阳性。本病多发生于春、夏季节或母猪产仔和交配季节。母猪怀孕早期感染时，胚胎、胎猪死亡率可高达80%～100%。母猪在怀孕期的前30～40天最易感染，孕期不同时间感染分别会造成死胎、流产、木乃伊、产弱仔猪和母猪久配不孕等不同症状。病毒的感染率与动物年龄呈正比。二、临床症状怀孕母猪出现繁殖障碍，如流产、死胎、产木乃伊、产后久配不孕等。其他猪感染后不表现明显的临床症状。三、诊断猪细小病毒感染可以依据临诊症状和流行病学做出初步诊断，一般认为，如果仅妊娠母猪发生流产、死胎、木乃伊胎、胎儿发育异常等繁殖障碍症状，同时有证据表明是传染性疾病时，应考虑到猪细小病毒感染的可能，但是进一步确诊必须进行实验室诊断。自从首次报道猪细小病毒病以来，国内外学者对该病的诊断方法进行了大量研究，从病毒分离鉴定、血凝及血凝抑制试验、酶联免疫吸附试验、荧光抗体试验、乳胶凝集试验等，到核酸探针、聚合酶链式反应(PCR)等，但是各种诊断方法各有利弊，其中血凝及血凝抑制试验已经得到了国内外学者的普通认可，在临诊检测中被广泛应用。病毒分离和鉴定是直接检测病原，其用于诊断的最大优点是结果准确可靠，可以作为最后确诊，但是检测结果常受胎儿死亡时间的影响。一般用于检测该病的病料为流产或死产胎儿的新鲜脏器(如脑、肾、肝、肺、睾丸、胎盘及肠系膜淋巴结等)，其中以肠系膜淋巴结和肝脏的分离率最高。间接免疫荧光技术是鉴定猪细小病毒病抗原可靠而又敏感的诊断技术。取胎猪组织制备冰冻切片，再与标准化试剂反应，在几小时内可以完成试验。免疫荧光抗体技术其有特异、敏感、快速、检出率高的特点，是实验室进行病毒分离鉴定常用的辅助方法。在猪细小病毒的血清学诊断方法中，血凝抑制(HI)试验是检测猪细小病毒抗体最常用的方法，一般采用试管法或微量法。该方法相对比较简单、方便，灵敏度也较高，不过在该方法操作中，需要对待检血清进行热灭活处理，然后用红细胞泥吸附，以除去血清中的非特异性血凝素，进而用高岭土吸附以除去或减少血清中非特异性血凝抑制因子。影响血细胞凝集的因素有：试验温度、红细胞种类、供血动物的年龄等。近些年，建立了检测PPV血清抗体的乳胶凝集诊断方法，致敏的乳胶抗原与PPV阳性血清反应，可以产生肉眼可见的凝集颗粒，其特异性较高，具有简便、快速、经济等优点，尤其适合于临诊上的现场检测和该病的早期定性诊断，被许多学者誉为“傻瓜技术”。核酸探针技术是一种分子水平的检测技术，具有快速、敏感、特异性强等特点，特别适用于疾病的早期诊断和类症鉴别诊断，是近二十年来应用较多的一项诊断技术，适宜于实验室进行猪细小病毒感染的诊断。但该方法的技术含量高，只能在专业实验室应用，不适合大面积临诊诊断和现场应用。本病应与流行性乙型脑炎、伪狂犬病、猪繁殖与呼吸障碍综合征、慢性非典型猪瘟、衣原体感染、猪布氏杆菌病等疾病进行鉴别区分。四、治疗1.肌肉注射英国意康的英国多联特配合头孢注射液，每日2次，连用3～5天。2.对延时分娩的病猪及时注射前列腺烯醇注射液引产，防止胎儿腐败，滞留子宫引起子宫内膜炎及不孕。3.对心功能差的使用强心药，机体脱水的要静脉补液。五、体会.据调查，猪细小病毒病发病率有升高趋势，可能与未经免疫或免疫程序不科学，引种不慎有关。为此要加强该病的引种检疫及免疫工作，实施科学的免疫程序。2.猪细小病毒病免疫一定要谨慎，使用不当可人为传入病情。猪场无该病感染，最好不免疫，必须免疫时，最好使用灭活苗。3.对延时分娩的猪要及时引产。实践证明，用前列腺烯醇注射液注射安全可靠，并有利于胎衣排出。猪细小病毒病，猪乙型脑炎，猪蓝耳病，猪伪狂犬病是母猪四大繁殖障碍性疾病。