edta研究生论文

近日，我校理学院薛绍林教授课题组与香港城市大学合作，在制备高质量的光催化剂及光催化降解四环素水污染领域取得新进展。相关成果以《制备主要曝露{110}晶面的四方棱柱形γ-In2Se3及其光催化降解四环素》(Synthesis of Tetragonal Prismatic γ-In2Se3 Nanostructures with Predominantly {110} Facets and Photocatalytic Degradation of Tetracycline, DOI: 10.1016/j.apcatb.2019.118218)为题，发表于环境、化工领域著名期刊《应用催化B-环境》（Applied Catalysis B - Environmental）。该论文第一作者为硕士研究生魏晓帆，通讯作者为薛绍林教授。近年来，社会快速发展，一系列环境污染问题涌现。其中倍受关注的问题之一是抗生素造成的水污染。例如，四环素（TC），一种典型的抗生素，由于其能够治疗细菌性疾病，被广泛应用到药物和饲料添加剂中，在抗生素生产和使用中排名第二。但是，只有很小一部分四环素会被人或动物吸收代谢，其余全部以排泄物或本身存在于环境中，对生态系统造成严重威胁。因此去除多余四环素，保护环境刻不容缓。研究表明半导体催化剂可以利用太阳能对四环素进行彻底降解，无二次污染，可长效多次使用。因此，寻找高效的半导体催化剂是解决四环素污染引起的环境问题的关键。γ-In2Se3纳米材料具有良好的可见光和紫外光的光学吸收性能，关于其在光催化降解水污染领域的研究并不多见。此外，由于晶体生长过程的驱动力来自于总表面能的降低，自然条件下晶体倾向于沿高能晶面方向生长以降低其表面能，导致高能晶面的含量通常较低，而高能晶面通常具有较高的光催化活性。因此，对半导体材料进行晶面调控，曝露晶体特定晶面以增大纳米材料的光催化活性，可以通过此策略调整光催化剂表面原子结构，而进一步增强、优化光催化性能，引起了科研人员关注。研究课题组通过EDTA（ethylenediaminetetraacetic acid）辅助，合成了主要曝露{110}晶面的四方棱柱形γ-In2Se3，如图1所示。EDTA在水中作为桥状络合物，当其加入反应体系后会迅速电离成阴阳离子。在In2Se3纳米颗粒聚集并沿高能晶面生长的过程中，溶液中由EDTA电离形成的阴离子－COO-可以与In3+结合形成络合物，γ-In2Se3{110}晶面最外层原子为In3+，EDTA可以吸附在{110}晶面，当EDTA的量充分时，可以有效抑制晶体沿{110}面的生长，使{110}晶面得到曝露。

1. Degradability of n-hexadecane by Bacillus cereus DQ01 isolated from oil contaminated soil from Daqingoil field, China Int. J. Environment and Pollution,2009 (通讯作者)2. Isolation and characterization of gasoline-degrading bacteria from gas station leaking-contaminated soils. Journal of Environmental Sciences，2006 (通讯作者)3. Relation between the Distribution and the Degradation Rate inside and outside a Bacteria Strain The Proceeding of the China Association for Science Flavobacterium and Techonlogy，20074. EDTA-enhanced phytoremediation of lead contaminated soil by Bidens maximowicziana Journal of Environmental Sciences，20075. A Study on Green Olympics’ Impact On Public Environmental Awareness in Beijing Environmental Education Research, 2011 (通讯作者)6. Number Size Distribution of Particles Emitted from Two Kinds of Typical Boilers in a Coal-Fired Power Plant in China Energy Fuels, 2010 (通讯作者)7. Agricultural utilization of Maoming oil shale, ash Oil Shale，1998, 15(4) (第3作者)8. An united model and simulation of nitrogen transport, uptake and transformation in soil-crop system，Journal of Environmental Sciences, 1998, 10(1)9. Experimental analysis of a nitrogen removal process simulation of wastewater land treatment under three different wheat planting densities， Journal of Environmental Sciences, 2002，14(3):317-32410. Numerical model of compressible gas flow in soil pollution control，Journal of Environmental Sciences 2002，14(2):239-244 (第2作者)11. Intergrated numerical model of nitrogen transportation, absorption and transformation by two-dimension in soil-crop system, Journal of Environmental Sciences, 2005,17(4)12. A simulation analysis of the migration and of pollutants contained in landfill leachate，Journal Environmental Sciences, 2003, 15（6）：827-835 13. 苯在一株黄杆菌细胞内外的分布与降解率的关系 中国环境科学,200614. 鼠李糖脂对微生物降解正十六烷以及细胞表面性质的影响 环境科学，2007 (通讯作者)15. Effect of Surfactant SDS, Tween 80, Triton X-100 and Rhamnolipid on Biodegradation of Hydrophobic Organic Pollutants The 2nd International Conference on Bioinformatics and Biomedical Engineering,2008 (通讯作者)16. Study on the Mechanism of Transport of Hexadecane by Two Strains The 2nd International Conference on Bioinformatics and Biomedical Engineering, 200817. Distribution of heavy metal contents of soils in an industrial area of Zibo, China. The International conference on Environmental Pollution and Public Health.2009.(通讯作者)18. Activation of Lead (Pb) in Soil by Bacteria. The International conference on Environmental Pollution and Public Health. 2009. (通讯作者)19. Study of Petroleum Hydrocarbons under Chemical-biological Degradation in Contaminated Soils. International Conference on Environmental Science and Information Application Technology . 2009 (通讯作者)20. Carbon Dioxide Sequestration with Flue Gas Desulfurization (FGD)Gypsum. International Conference on Environmental Science and Information Application Technology, 200921. Study on Micro-Biological Degradation of Diesel Oil cooperated with Plants . The 3nd International Conference on Bioinformatics and Biomedical Engineering. 2009.(通讯作者)22. Water Resources Risk Assessment Based on Rough Set and Extension Theory. Seventh International Conference on Fuzzy Systems and Knowledge Discovery. 201023. Screening and Identification and Characteristics of Cadmium-Tolerant Bacteria in Polluted Soil. The 2nd Conference on Environmental Science and Information Application Technology. 201024. Combined Effect of Lead and Benzo(a)pyrene on Dehydrogenase Activity in Soil. The 2nd Conference on Environmental Science and Information Application Technology, 2010. (通讯作者)25. Study on the Mechanisms of Transportation and Accumulation of n-Hexadecane by Microorganism. The 4th International Conference on Bioinformatics and Biomedical Engineering. 201026. Safety evaluation of wellhead areas based on grey correlation analysis International Symposium on Environmental Science and Technology, 2009 (通讯作者)27. 焦化厂污染土壤中多环芳烃降解菌群解析 化工学报, 2010. (通讯作者)28. An Analysis of Some Changes in Public Environmental Awareness In Beijing. The International Conference on Remote Sensing, Environment and Transportation Engineering ,2011 . (通讯作者)29. 土壤铅-苯并[a]芘复合污染对小麦种子生长的影响研究 环境科学，201130. Modeling nitrogen transport，uptake and transformation in soil-crop system under the condition of wastewater irrigation，Proceedings of Workshop on Transport of Contaminants in Vadose and Reversion of Groundwater Pollution; Southeast University Press, 199931. Modeling Nitrogen Transport, Uptake and Transformation by Two Dimension in Soil-Crop System, Proceedings of 15th Conference of the International Soil Tillage Research Organizaton, USA,200032. 铅抗性细菌的筛选及其对铅活化的研究. 东北农业大学学报. 2010, 41(6).33. 不同温度下石油污染土壤中石油降解菌群的实验研究. 石油学报（石油加工）. 2010, 26(1). 34. 垃圾堆放场对地质环境影响模拟分析，地球学报, 1998年第3期35. 填埋场释放气体运移数学模型研究，环境科学，1999, 20(5): 93-96.36. 污水土地处理模拟试验比较分析，上海环境科学，2000年，19（6）37. 大庆油田开发中石油类污染物对地下水环境影响分析，应用生态学报，2000年11(6)38. ，数值模拟在土壤环境影响评价中的应用，中国环境科学，1999，19(3) ：234-23739. 填埋场释放气体运移数值模型及应用，环境科学学报，2000年20(3)40. 微生物处理土壤石油污染的研究进展 上海环境科学, 2002，21（3）177-18041. 土壤石油生物降解影响影子正交实验，重庆环境科学, 2002，24（2）：29-3242. 含磷污水淋滤体条件下土壤中磷迁移转化模拟实验，环境科学学报2002，21（6）：737-74143. 土壤石油微生物降解影响因子的正交实验分析，地球学报2003，24(3): 279-28444. 土壤中石油污染物微生物降解及其降解去向，中国工程科学，2003，5(8): 70-7545. 土壤中石油污染物微生物降解过程中各石油烃组分的演变规律，环境科学学报，2003，23（6）：834-83646. 土壤石油污染物中正构烷烃降解特性研究，上海环境科学，2004，23（3）：93-9547. 油污土壤中微生物数量变化与原油降解速率关系的实验研究，环境污染治理技术与设备，2004，5（1）：36-3948. 城市污水土地处理系统优化管理模型初探（1）--理论推导与设计，北京师范大学学报（自然科学版），2004，40（4）：554-56049. 地理信息系统在环境保护领域的应用分析. 环境保护, 2002, (1): 30-32.50. 污水土地处理磷污染物迁移转化模拟讨论分析. 城市环境与城市生态, 2002, l5(4): 36-38.51. 污水土地处理磷迁移转化模拟模型与检验. 环境污染与防治, 2003, 25(3): 179-182.52. 解读《中小学生环境教育专题教育大纲》. 环境教育, 2003, (4), 3-6.53. 土壤正构完烃微生物降解变化实验分析. 环境科学研究, 2003, 16(5): 24-28.54. B/S模式下的社区再就业管理信息系统探讨与实践. 情报杂志, 2004, (5): 55-56, 60.55. 油污土壤中微生物数量变化与原油降解速率关系的实验研究. 环境污染治理技术与设备, 2004, 5(1): 36-39.56. 油田开发土壤环境影响评价方法的研究. 农业环境科学学报, 2004, 23(6), 1235-1240.57. 土壤石油污染物中正构完烃降解特性研究. 上海环境科学, 2004, 23(3): 93-95.58. 立体化教学在环境教育中的应用--以土壤环境学教学为例. 环境教育, 2004, (5): 42-44.59. 城市污水土地处理系统优化管理模型初探. 世界地质, 2004, 23(2): 153-157.60. 土壤环境学研究生教学改革探讨. 理工高教研究, 2004, 23(3): 88-89.61. 城市污水土地处理系统优化管理模型初探(Ⅰ)--理论推导与设计. 北京师范大学学报(自然科学版), 2004, 40(4): 554-560.62. 环境教育与可持续发展. 北京师范大学学报(社会科学版), 2004, (6): 114-120.63. 污染土壤植物修复中螯合诱导和转基因技术的应用现状与前景，地学前缘，2005，12（1）64. 羽叶鬼针草对Pb的吸收特性及修复潜力，环境科学，2005，26（3）65. 土壤微生物对苯的降解研究，环境科学，2005，26（3）66. 用改性膨润土作垃圾填埋场底部衬里的试验，中国环境科学，2005，25（4）67. 环境影响二级模糊综合评价法的研究--以宋芳屯油田为例. 水文地质工程地质, 2002, (2): 38-41, 48.68. 土壤石油污染物微生物降解机理与修复技术研究，地学前缘，2006，13（1）69. 石油污染土壤中苯降解菌的筛选及降解特性研究，农业环境科学学报，2006（6）70. 苯在一株黄杆菌细胞内外的分布与降解率的关系，中国环境科学，2006（5）71. 环境科学研究，2006，0472.污染地下水原位治理技术——透水性反应墙法，环境污染与防治，200673. 土壤中耐低温石油降解菌的优选、鉴定及降解性能分析. 北京师范大学学报(自然科学版). 2009.74. 正十六烷微生物吸附降解的荧光显微研究. 污染防治技术. 2010, 23(2).75.郝旭光, 孙寓姣, 王红旗等. PCR-酶切技术在石油烃降解菌筛选鉴定中应用. 环境工程学报. 2010, 4(2).76.中国における环境教育実施の道筋と教育方策, 环境教育/日本，200877. 基于网络游戏的环境教育， 社会科学研究/美国，2006 1、王红旗、鞠建华, 城市环境氮污染模拟与防治, 北师大出版社, 19982、李韵珠、李保国、王红旗等. 土壤溶质运移, 科学出版社, 1998.3、王红旗, 刘新会, 李国学等. 土壤环境学, 高等教育出版社, 20074、张宝森，王红旗. 绿色奥运改变生活: 一部荟萃北京人与环境变迁的真实记忆, 新华出版社, 2010.5、杨志峰，刘静玲、王红旗、刘新会，《环境学概论》教学系统(多媒体教学系统) ，高等教育出版社，20066、李瑞敏，鞠建华，王红旗等， 生态环境地质指标研究， 中国大地出版社，20097、张泽，王红旗，伍新春， 全国义务教育教材《科学》3-6年级，大象出版社，2003-20088、王红旗等，我们如何与环境相处,社会科学出版社，2006 ,中宣部农村丛书9、 陈鸿汉，张永祥，王新民，任仲宇，王红旗，沿海地区地下水环境系统动力学方法研究,地质出版社，200210、王红旗，姚亚萍，小学试用教材《环境教育》1-6年级，中国环境科学出版社，2004-200511、王红旗等，绿色家园丛书，4部，明天出版社，200212、许嘉琳、王红旗等，面向可持续发展中小学环境教育，北京师范大学出版社，1996

我只会做要不传影象给你溶液:(1) 转移缓冲液：称取2.9g甘氨酸，5.8g Tris碱，0.37 SDS，200ml甲醇，加去离子水至1000ml，如果蛋白分子量小可不加SDS。(2) PBS－T： NaCl 8.0g, KCl 0.2g, KH2PO4 0.2g, Na2HPO4•12H2O 2.9g, 溶于800ml去离子水中，用盐酸调PH值为7.4，定溶至1000ml，加0.05％Tween20。(3) 封闭液：5%脱脂奶溶于PBS中(4) 氨基黑染液：0.2%氨基黑溶于7%乙酸中。(5) 氨基黑脱色液：30%甲醇, 10%冰醋酸溶液SDS-PAGE相关溶液(1).电极缓冲液：Tris: 6g甘氨酸： 28.8g(10% )SDS: 10ml加1000 ml H2O PH:8.3(2).分离胶buffer: 100ml:Tris:36.6g1N HCL:(约48ml): PH:8.9 加水至：100ml(3). 浓缩胶buffer: 100ml: Tris: 5.98g1N HCL:(约48ml): PH: 加水至：100ml(4).凝胶贮存液： 100ml:Acr:30gBis:0.8g 加水至：100ml(5). 4Xloading buffer:2-Me: 20% 2mlSDS: 8% 0.8gGlycerin: 40% 4mlBromophenol Blue: 0.4% 0.04gTris-CL (ph6.8) 240mM 2.5ml(浓缩胶buffer) 加1.5ml H2O total: 10ml(6) 染色液(快速染色配方，染色1小时0.1% Coomassie blue, 10% acetic acid, 45% methanol考马斯蓝R-250 1g甲醇 450ml水 450ml冰醋酸 100ml (7). 脱色液：1000ml 冰醋酸： 75ml 甲醇： 50ml 水： 875ml细胞裂解液（1）Buffer A: 25 mM Tris pH 7,550 mM KCl2 mM MgCl21 mM EDTA5 mM dithiothreitol (DTT)（2）细胞核裂解液Buffer NE:25 mM Tris pH 7,50.42 M NaCl1.5 mM MgCl20.5 mM EDTA1 mM dithiothreitol (DTT)25% Sucrose 0.2% SDS (免疫沉淀不加)裂解细胞前加入蛋白酶抑制剂至终浓度为 100 mg•L-1 PMSF, 1 mg•L-1 Aprotinin, 2 mg•L-1 Leupeptin步骤:SDS-PAGE电泳按照胶配置方法配制不同浓度PAGE胶，电泳置染料抵达分离胶底部，断开电源。 取下凝胶，Western Blot1. 电泳结束后，切下带有要转移蛋白泳道的凝胶用，右下角作一标记以确定方向及正反面。2. 剪1块与凝胶大小相同的NC膜（不能大于凝胶），右下角作一标记，浸泡于转移缓冲液中，大约5分钟。3. 剪8块新华1号滤纸，右下角作一标记，其大小略与凝胶相同（不能大于凝胶）。4. 将剪好的滤纸在转移缓冲液中浸泡，按阳极到阴极（从下至上）顺序安装转移装置: 平放底部电极，在底部电极上放置4张浸泡好的滤纸,精确对齐，将NC膜放在滤纸上，排除气泡。把SDS-PAGE 电泳凝胶转移到去转移缓冲液中漂洗，平放于NC膜上，用玻棒挤出所有气泡。在其上再放置4张浸泡好的滤纸，排出气泡。5. 将上层电极放于夹层物上，连接电源，根据凝胶面积按1mA/cm2接通电源，电转移2~4h。100mA,2h。6. 转移结束后，去除滤纸。把凝胶转移到考马斯亮蓝染液的托盘中染色，以检查蛋白转移是否完全。剪下含分子量标准的NC膜放在氨基黑染液中染色30秒，氨基黑脱色液脱色。7. 将转移上蛋白的NC膜以蒸馏水略洗稍干后，浸在封闭液中4℃封闭过夜，然后用PBS-T缓冲液洗膜3次，每次10min。8. 将膜与第一抗体室温孵育2h，第一抗体用PBS-T缓冲液按不同稀释度稀释以摸索最合适的一抗浓度，然后PBS-T缓冲液洗膜3次，每次10min。9. 将膜与HRP标记的羊抗鼠IgG(1:5000)共同孵育1h，PBS-T缓冲液洗膜3次，每次10min。10. 配制发光底物（按1：1混合底物液）。11. PBS-T缓冲液洗涤后在化学发光底物显色2分钟，凝胶成像系统观察照相。（或DAB显色液中避光显色~15分钟，出现条带后立即以水冲洗以中断显色反应）。我只是举个例子给你看,因为只有你自己想出来的实验才是得心应手的.别人手把手教你做实验,那么你的思路就会跟着别人走,有可能被别人误导,那你做这个实验又有什么意思.

（一）仪器恒温水浴箱，电泳仪，凝胶成像系统，真空转移仪，真空泵，UV 交联仪，杂交炉，恒温摇床，脱色摇床，漩涡振荡器，分光光度计，微量移液器，电炉（或微波炉），离心管，烧杯，量筒，三角瓶，等。（二）材料总RNA样品或mRNA样品，探针模板DNA(25 ng)，尼龙膜（三）试剂NorthernMax Kit（Cat. # 1940，Ambion, Inc.），琼脂糖，DEPC, X光底片，底片暗盒，Random Primer， dNTP Mixture，111 TBq/mmol[a-32P]dCTP，Exo-free Klenow Fragment和10 X Buffer, Sephadex G-50,SDS，双氧水, 灭菌水等。[方法与步骤]1. 用具的准备：180度烤器皿：三角锥瓶、量筒、镊子、刀片等4小时。电泳槽：清洗梳子和电泳槽，并用双氧水浸泡过夜，用DEPC水冲洗，干燥备用。处理DEPC水(2 L)备用。2．用RNAZaP去除用具表面的RNase酶污染用RNAZap擦洗梳子，电泳槽，刀片等，然后用DEPC水冲洗二次，去除RNAZap。3．制胶：1． 称取0.36mg 琼脂糖加入三角锥瓶中，加入32.4mlDEPC水后，微波炉加热至琼脂糖完全熔解。60℃空气浴平衡溶液 (需加DEPC水补充蒸发的水分)2． 在通风厨中加入3.6ml的10＊Denaturing Gel buffer，轻轻振荡混匀。注意尽量避免产生气泡。3． 将熔胶倒入制胶板中，插上梳子如果胶溶液上存在气泡，可以用热的玻璃棒或其它方法去除，或将气泡推到胶的边缘。注：胶的厚度不能超过0.5cm。4．胶在室温下完全凝固后，将胶转移到电泳槽中，加入1x MOPS Gel Running buffer盖过胶面约1cm，小心拔出梳子。（配制250ml 1＊MOPS Gel Running buffer，在电泳过程中补充蒸发的buffer。）5．检查点样孔。4. RNA样品的制备在RNA样品中加入3倍体积的formaldehyde load dye和适当的EB（终浓度为10ug/ml）。混匀后，65℃空气浴15min。短暂低速离心后，立即放置于冰上5min。5. 电泳：1. 将RNA样品小心加到点样孔中。2. 在5V/cm下跑胶（5x14cm）。在电泳过程中，每隔30min短暂停止电泳，取出胶，混匀两极的电泳液后继续电泳。当胶中的溴纷蓝（500bp）接近胶的边缘时终止电泳。3. 紫外灯下，检验电泳情况，并用尺子测量18S、28S、溴纷蓝到点样孔的距离。注意不要让胶在紫外灯下曝光太长时间。6. 转膜1．用3%双氧水浸泡真空转移仪后，用DEPC水冲洗。2．用RNAZap擦洗多孔渗水屏和塑胶屏，用DEPC水冲洗二次。3．连接真空泵和真空转移仪，剪取一块适当大小的膜（膜的四边缘应大于塑胶屏孔口的5mm），膜在Transfer buffer浸湿5分钟后，放置在多孔渗水屏的适当位置。4．盖上塑胶屏，盖上外框，扣上锁。5．将胶的多余部分切除，切后的胶四边缘要能盖过塑胶屏孔，并至少盖过边缘约2mm，以防止漏气。6．将胶小心放置在膜的上面，膜与胶之间不能有气泡。7．打开真空泵，使压强维持在50~58mbar；立即将transfer buffer加到胶面和四周。每隔10min在胶面加上1ml transfer buffer，真空转移2小时。8．转膜后，用镊子夹住膜，于1x MOPS Gel Running buffer中轻轻泡洗10秒，去除残余的胶和盐。9．用吸水纸吸取膜上多余的液体后，将膜置于UV交联仪中自动交联。10．将胶和紫外交联后的膜，在紫外灯下检测转移效率。(避免太长的紫外曝光时间)12．将膜在-20℃保存。7. 探针的制备1．在1.5ml离心管中配制以下反应液：模板DNA(25 ng) 1ulRandom Primer 2ul灭菌水 11ul总体积：14ul2．95°C加热3分钟后，迅速放置于冰冷却5min。3．在离心管中按下列顺序加入以下溶液：10×Buffer 2.5uldNTP Mixture 2.5ul111 TBq/mmol[a-32P]dCTP 5 ulExo-free Klenow Fragment 1 ul4．混匀后（25ul），37°C下反应30分钟。短暂离心，收集溶液到管底。5．65°C加热5min使酶失活。 8. 探针的纯化及比活性测定：1．准备凝胶：将1g凝胶加入30ml的DEPC水中，浸泡过夜。用DEPC水洗涤膨胀的凝胶数次，以除去可溶解的葡聚糖。换用新配制的TE（PH7.6）。2．取1ml一次性注射器，去除内芯推扞，将注射器底部用硅化的玻璃纤维塞住，在注射器中装填Sephadex G-50凝胶。3．将注射器放入一支15ml离心管中，注射器把手架在离心管口上。1600g离心4分钟，凝胶压紧后，补加Sephadex G-50凝胶悬液，重复此步直至凝胶柱高度达注射器0.9ml刻度处4．100ul STE缓冲液洗柱，1600g离心4min。重复3次。5．倒掉离心管中的溶液后，将一去盖的1.5ml离心管置于管中，再将装填了Sephadex G-50凝胶的注射器插入离心管中，注射器口对准1.5ml离心管。6．将标记的DNA样品加入25 ul STE，取出0.5ul点样于DE8 paper上，其余上样于层析柱上。7．1600g离心4min，DNA将流出被收集在去盖的离心管中，而未掺入DNA的dNTP则保留在层析柱中。取0.5ul己纯化的探针点样于DE8-paper.8． 测比活性(试剂比活要求:106cpm/ml）。 9．预杂交：1．将预杂交液在杂交炉中68℃预热，并漩涡使未溶解的物质溶解。2．加入适当的ULRAhyb到杂交管中(以100cm2 膜面积加入10mlULRAhyb杂交液)，42℃预杂交4 hr。10．探针变性：1．用10 mM EDTA将探针稀释10倍。2．90℃热处理稀释后探针10min后，立即放置于冰上5min。3．短暂离心，将溶液收集到管底。11．杂交：1．加入0.5ml ULTRAhyb到变性的探针中，混匀后，将探针加到预杂交液中。2．42℃杂交过夜（14~24hr）。杂交完后，将杂交液收集起来于－20℃保存。12．洗膜：1．低严紧性洗膜：加入Low Stringency Wash Solution#1 (100cm2膜面积加入20ml洗膜溶液)，室温下，摇动洗膜5min两次。2．高严紧性洗膜： 加入High Stringency Wash Solution#2 (100cm2膜面积加入20ml洗膜溶液)，42℃ 摇动洗膜20min两次。13．曝光：1． 将膜从洗膜液中取出，用保鲜膜包住，以防止膜干燥。2． 检查膜上放射性强度，估计曝光时间3． 将X光底片覆盖与膜上，曝光4． 冲洗X光底片，扫描记录结果。14．去除膜上的探针：将200ml 0.1%SDS（由DEPC水配制）煮沸后，将膜放入，室温下让SDS冷却到室温，取出膜，去除多余的液体，干燥后，可以保存几个月。15．杂交结果如果你只是做本科的毕业论文，这些差不多够用了，如果是做研究生论文或者是科研课题你给的条件太笼统了，你没有具体的东西怎么做计划书。如果你是专业人士建议去买本分子生物学试验指南吧，80多块钱是可以用一辈子的必备工具书。另外我northern做的比较少，westhern做的比较多一点。所以没什么太多经验给你。朋友，你只说要做个northern，有些东西怎么好给你。Northern只是一个实验步骤，和电泳、PCR一样本身没有任何意义，关键是你自己要通过northern达到一个什么目的，是通过杂交来大规模筛选你需要的RNA片断，还是通过northern来进行定性验证或者只是单纯的为了熟悉这一个实验的操作。另外你的探针和靶RNA是现成的还是需要特殊处理的也没有说，探针类型的不同在标记过程中也有区别，你的问题没有任何信息所以我也只有复制了一份基本的实验流程给你了。另外你说的试剂和价格问题，我只能这样告诉你。用什么试剂是根据你的经费情况决定的，只能根据你实际到手的经费来决定，如果钱多就多用进口的吧，不过探针标记的试剂盒一定要用好的推荐德国宝灵曼公司的地高辛试剂盒及尼龙膜。如果你是申报课题的话，往高处报吧，批下来肯定是打了很大折扣的。