细胞器分离论文参考文献

叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器，能发生特有的能量转换。利用低速离心机可以分离叶绿体，其分离在等渗溶液(0．35 mol／L氯化钠或0．4 mol／L蔗糖溶液)中进行，目的是为了防止渗透压的改变引起叶绿体的损伤。将匀浆液在1000 r／min离心，去除其中的组织残渣和一些未被破碎的完整细胞，然后，3000 r／min离心，可获得沉淀的叶绿体(混有部分细胞核)。在室温下进行分离要迅速。某些物质在一定短波长的光(如紫外光)的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光(如可见光)，这种光就称为荧光。若停止供能荧光现象立即停止。有些生物体内的物质受激发光照射后，可直接发出荧光(称为自发荧光)，如叶绿素的火红色荧光。有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光(称为间接荧光)，如叶绿体吸附吖啶橙后可发橘红色荧光。本实验利用荧光显微镜对发荧光的叶绿体进行观察。【Materials & methods】1. 试剂（1）蒸馏水（2） mol／L氯化钠溶液2. 器材普通离心机，组织捣碎机，天平，荧光显微镜，显微镜，载玻片，盖玻片，镊子，接种针，目镜测微尺，物镜测微尺，恒温箱，培养皿，滤纸，试管，试管架，移液管，滴管，烧杯，无荧光载片，盖玻片，离心管。3. 材料菠莱叶片。步骤简要步骤如下，明细请看附页（实时记录页）组织破碎匀浆离心分离染色镜检【Results】在在40倍镜下观察时我的载玻片上只有少数的绿色叶绿体可以看到，我还借同组同学的进行了观察发现有较多的绿色叶绿体在视野中游动，至少比我的多10到20倍。【Discussion】1. 讨论实验中进行细胞器分离纯化的注意事项。答：我认为最重要的是做密度梯度这一步和吸取绿色薄带的步骤，两个都直接的影响到实验结果，前者需要把上清液缓缓加入到密度梯度离心管中，，后者要精确和巧妙地吸取中间的绿色薄带到载玻片上：再要之一的是离心机的使用方法，比如：平衡、清洁等。2. 若镜检实验结果不理想，请分析原因？答：虽然我可以看到少量的叶绿体在视野但跟其他同学的比，还是感觉很不理想。我认为出现这种情况的主要原因是密度梯度，我当时做密度梯度是就看不到明显的分层现象，但我还是继续进行了试验，所以得到了这样不理想的结果。注意事项：操作过程中一直保持样品处于冰浴或4℃环境。以确保叶绿体的活性；吸取上清液时应将离心管略微倾斜，将枪头轻靠在管壁内且从溶液上方开始，缓慢吸出液体，注意不要使液体浑浊，否则得重新离心。密度梯度离心加入上层低密度液体时，也应将枪头轻靠上侧液面管壁上，缓慢加入液体，加完后上下层液体应有明显界限。离心管放入离心转头时必须对称，对称放置的两个（或三个）离心管本身及其中所装液体的重量要相等。离心机运转时如发生情况异常，如声音异常、机器剧烈震动，要立即关闭电源，以免机器损坏和伤及人体。