几丁质是一种除了纤维素之外最 丰富的天然生物聚合物,含有丰富的C、N元素,能被微生物降解利用,作为一种无污染的微生物肥料供给植物生长的养分。 1 甲壳质简介甲壳质是地球上最丰富的天然高分子化合物之一，其年生物合成量估计可达百亿吨之多，足可与纤维素的年产量相匹敌。甲壳质属于直链氨基多糖，学名为（1，4）-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-葡萄糖]，分子式为（C8H13NO5）n，单体之间以β（1-4）甙键连接，分子量一般在106左右，理论含氮量（图1）。甲壳质是自然界中唯一带正电荷的一种天然高分子聚合物，其化学结构与植物中广泛存在的纤维素非常相似，若把组成纤维素的单个分子——葡萄糖分子第二个碳原子上的羟基（OH）换成乙酰氨基（NHCOH3），纤维素就变成了甲壳质，从这个意义上讲，甲壳质可以说是动物纤维。在甲壳质分子中，因其内外氢键的相互作用，形成了有序的大分子结构，溶解性能很差，这限制了它在许多方面的应用，而甲壳质经脱乙酰化处理的产物——壳聚糖，却由于其分子结构中大量游离氨的存在，溶解性能大大改观，具有一些独特的物化性质及生理功能，在农业、医药、食品、化妆品环保诸方面具有广阔的应用前景。目前，国内外常采用化学法，经过酸碱处理，脱支钙盐和蛋白质，然后用强碱在加热条件下脱去乙酰基就可得到应用十分广泛的可溶性甲壳质（壳聚糖）。壳聚糖的分子量为十几万至几十万。因制法、工艺条件和要求不同，脱乙酰基度可由60%到95%以上。这种壳聚糖较甲壳质的溶解性能大大改善，可溶解于酸各酸性溶液中，但不能直接溶于水。当壳聚糖经过降解成为低分子量的寡聚糖，产品可直接溶于水，从而扩大适用范围。大量的研究结果表明，甲壳质及其衍生物以其独特的作物机理用于维护农业生态环境，保护人民身体健康，是用于生产绿色食品的一种环保型农药， 是无公害农产品生产和可持续农业的重要资源。2 甲壳质在农业上的应用 病虫害防治剂 植物病原菌生长阻制剂在植物病原菌与寄生植物之间,壳聚糖对植物病原菌的孢子萌发和生长有阻碍作用,并对病原菌感染的防护机能有诱导作用。在25。C分别以～1%壳聚糖溶液浸泡棉花组织细胞，结果表明，随着壳聚糖浓度、脱乙酰基度的增加，其抑制作用增强，1%壳聚糖能阴抑90%病原菌的生长。用的壳聚糖溶液喷洒烟草，10天内可减少烟草斑纹病毒的传播；喷洒的壳聚糖可阻止豆科植物免遭受病原菌的侵染，菜豆将减少由苜蓿花叶病毒造成的损伤；浸种处理，可使小麦纹枯病发病率降低30%～50%，大豆根腐病发病率降低42%；种子处理可防治水稻胡麻斑病、花生叶斑病和埃及豆萎蔫病；芹菜苗用25～50μg/ml壳聚糖浸根可防治尖孢镰刀菌引起的萎蔫症；番茄浸根或喷施可防治根腐病；黄瓜水培液中加入壳聚糖可控制由腐霉菌引起的猝倒病等。 植物或园艺作物的抗病诱活剂甲壳质的诱导抗病性，近年来报道较多，如壳聚糖的降解产物对黄瓜的幼苗离体叶片及整株都能诱导出几丁质酶活性，而且这种诱导作用是可以传导的。植物体内不含甲壳质、壳聚糖的成分，但却具有几丁质酶。这些酶能与植物病原菌或害虫外皮的甲壳质反应，并阻止其侵入植物组织内，从而增强了植物自身对敌害的防御能力。树组织附上层甲壳质膜后，这些植物组织中的几丁质酶活性比没有覆盖甲壳质薄膜的去皮树组织提高4倍，并且这层甲壳质膜在4～24周内被树组织降解、吸收，且加快了树组织的伤口愈合。用氨基糖喷施黄瓜幼苗，500倍液；800倍液及1000倍液处理后，几丁质酶的活性分别提高了，和；500倍液处理黄瓜枯萎病的诱导活性提高，表明壳低聚糖对植物防御酶系有较强的诱导作用。 杀线虫剂线虫近些年来给水果、蔬菜和粮食作物造成很大危害。将壳聚糖与适当的载体物质相混，可制成一种对防治线虫非常有效的天然物农药。它不溶于水，不会对地下水造成污染。它的杀虫作物与化学制剂在美国已开始使用，其商品名是CLANDO SAN，主要用于苗圃及园艺作物，如草莓等。当用1%量施入土壤时，能在60天内控制线虫的发生。 种子处理剂壳聚糖用于多种粮食、蔬菜作物的种子处理（浸种、拌种、包衣）可促进种子提前发芽、作物生长、激发抗病能力、提高产量和品质。这一领域近年来研究成果较多。关于甲壳质应用于种子处理后提高产量和改进品质，增加抗病的机理，正在深入的研究中。壳聚糖能在种子表面形成一层保护膜 ，利于保持种子水份，又能吸收环境中的水份供作物需要，如果土壤水分过多，又能阻断水分，防止种子烂掉，有利于种子发芽和出苗。用不同数量的壳聚糖处理小麦、水稻、玉米、棉花、大麦、燕麦、大豆、甘薯、疏菜等几个物种子处理上，均有取得增产的报道，国外报道，国外报道可使茶叶道更香醇，提高水稻的抗寒能力，番茄颜色靓丽，提高含糖量等。 肥料和土壤改良剂甲壳质/壳聚糖有改善土壤性质的作物，加上壳聚糖的抑菌作用，可将壳聚糖与可溶性蛋白（如胶原蛋白）合成液体土壤改良剂。这种改良剂有适当的稳定性和可降解性，降解后是优质的有机肥料，供作物吸收利用。还能抑制土壤中的病原菌生长繁殖，有效地改善土壤的团粒结构和微生物区系。这种液体土壤改良剂，喷洒到土壤表面后，能形成一层薄膜，起到保墒作物。施加粘土土壤中，可大大提高作物的产量。以壳聚糖为基本成份，配以化肥、微量元素等营养成分及防腐剂，可制成用于无土栽培的叶面肥料。 果蔬保鲜剂和食品防腐剂壳聚糖保鲜剂天然、安全、无毒，是来自于自然又回归自然的环保保健型保鲜剂；具有优良的成膜性和附着性。形成一层选择透气性保护膜，限制了氧气的进入，但不影响二氧化碳的通透，使果实处于自发调节的微气调状态从而延缓了果实的成熟衰老进程；具有广谱的抗菌活性。不但影响二氧化碳的通透，使果实处于自发调节的微气调状态从而延缓了果实表面的细菌，还能抵御外面病菌的侵入，达到防腐保鲜的作用；具有良好的保湿性。一方面抑制了果蔬的蒸腾作物，另一方面又有良好的保湿性能，创造了一个良好的稳定的湿度环境，利于保持鲜度；具有优良的抗氧化活性。防止果蔬变色提高商品价值。总之，壳聚糖保鲜剂的功能在于为果蔬产品创造成了一个良好的气体环境，减缓了果蔬菜成熟衰老的生化反应，降低了水份的蒸腾，抵抗和抑制了病原菌的侵染，提高了保鲜率，延长了货架寿命，从而达到保鲜的效果。3 甲壳质产品作为农药的一些特点甲壳质产品作为农药在种植业的实际应用中表现出许多优秀的特性，概括起来可以归纳以下10个方面。 完全无毒无害甲壳质、壳聚糖均属天然高分子化合物，无毒无味，可被生物降解。甲壳质对动物经口的亚急性实验表明，LD50为16g/kg鼠体重。以壳聚糖对ICP系鼷鼠按每日18g/kg鼠体重进行连续19日经口投入的亚急性毒性实验，未发现异常现象。可以认为壳聚糖与蔗糖、食盐一样，对人和动物是无害的。在国内外已有用甲壳质、壳聚糖制成的保健食品、化妆品、医药等作为商品出售。这是甲壳质产品能成为绿色农业主导产品的必备和基本的特点。甲壳质产品的毒性等级应为实际无毒，然而我国现行农药管理体系中对农药毒性等级的划分还没设这个等级（过去从来还没有完全无毒的农药），因此，甲壳质产品（如OS-施特灵）还不得不在包装上标明低毒的字样。 有效诱导作物增强抗性这是甲壳质产品最具有竞争力，最被看好的特点。传统的植保技术过份依赖化学农药，而几乎所有的农药都是遵循直接杀灭原则。在这种观念和技术的主导下，使病虫的抗药性不断增加，而植物自身的抗病抗逆机制却逐渐被削弱、钝化、休眠甚至丧失。这就是现今病虫害防治越来越困难的根本原因。由此可见，要使植保走出误区，摆脱胎换骨困境，应该首先着眼于千方百计调动作物自身的免疫机制，甲壳质产品恰好为此创造了条件，提供了物质基础。甲壳质作物于植物能诱导其在短时间内产生大量多种抗性物质，使作物用于植物能诱导其在短时间内产生大量多种抗性物质，使作物自身免疫能力大大提高，一旦病菌侵犯，这些抗性物质就能从多个靶位对之加以消灭。这种作用持久，而且病菌难以产生抗药性。实践表明，抓住了调动作物自身免疫这条主线，强调预防为主，辅助科学管理和适当的外部农药的抑控，许多病害的防治都变得不再困难。甚至给那些长期困扰被认为几乎无望解决的病害的防治带来了光明的前景。 可防可治应用甲壳质强调预防为主，甲壳质产品最好在作物发病前使用才能获得最佳效果。然而，由于甲壳质的作物机制是诱导作物产生抗性物质，这些抗性物质可以迅速歼灭入侵的病菌，因此，在作物已经发病后及时使用甲壳质产品，往往也可取得较好的效果。实践表明，应用甲壳质产品对炭疽、疫病、病毒、枯黄萎、根腐等病害均可直接控制。对其他多数病害，或病情严重时，可与外抑农药（减量）配伍，内抗外抑，协同作物，多数情况也都能取得满竟的效果。这一点对于甲壳质产品的前期市场开拓竟义尤为重要。 防治病害范围广泛甲壳质诱导作物产生多种抗生物质，因此对病毒、真菌、细菌三方面病害的防治都有效，尤其是对病毒病的防治过过往往是植保的难题，而用甲壳质产品防治效果却十分理想。这些均已得到实践的验证。辅助防治虫害实践表明，经常使用甲壳质的作物较少发生虫害。对这种效果的作物机制还缺少深入的研究，有报导说由于昆虫外皮均含有几丁质，而甲壳质诱导作物产生的几丁质酶可降解昆虫外皮的几丁质从而破坏昆虫表皮使之死亡；也有人认为，几丁质聚糖被作物吸收后，在植物吸吮后进入体内把内壁的几丁质壳素酶分解掉，使其失去了生物被膜而丧失生存条件。这些情况均在昆虫则孵化成幼虫时效果最好。甲壳质产品对各种蚜虫均有明显的触杀作物，这已经得到实践的验证。 增强作物的抗逆能力甲壳质诱导作物的抗性不仅表现在抗病，也表现在抗逆方面。施用甲壳质，对作物的抗寒冷、抗高温、抗旱涝、抗盐碱、抗肥害、气害、抗营养失衡等方面有良好作物。这是由于甲壳质对作物本身以及土壤环境均产生多方面的良好影响，譬如甲壳质诱导作物产生的多种抗性物质中，有些具有预防、减轻或修复逆境对植物细胞的伤害作用；再如甲壳质能促使作物生长健壮，健壮植株自然也有较强的抗逆能力；甲壳质对土壤环境的影响将在下面加以介绍。实践中，当作物幼苗遇低温冷害而萎蔫时，及时使用甲壳质很快植株就恢复了长势；当作物不论是什么原因导致根系老化时，使用甲壳质很快就会促使焕发出有活力的新根系；当作物受农药药害枝叶枯萎时，使用甲壳质可以辅助解毒并使之很快就抽出新的枝叶。这些都是甲壳质增强作物抗逆性能的典型实例。 提高产量，改善品质甲壳质对作物的增产作用也十分突出，这是因为甲壳质可以激活、增强植株的生理生化机制，促使根系发达，茎叶粗壮，使植株吸收和利用水肥的能力以及光合作用等都得到增强。实践表明，甲壳质用于粮食作物，仅处理种子即可增产5％－15％；用于果蔬喷灌等可增产20％－40％或更多。对作物品质的改善如增加粮食蛋白质和面筋的含量、果蔬糖的含量，产品风味的改善等作用也十分明显。随着人们生活质量的提高，产品的品质将会越来越受到重视，甲壳质在这一方面的作用将日益显得重要。 有利于改善土壤中微生物的分布这是甲壳质很有意思的特点。研究表明，甲壳质进入土壤后可以大大促使有益细菌如固氮菌、纤维分解菌、乳酸菌、放线菌的增生，抑制有害细菌如霉菌、丝状菌的生长。譬如使放线菌的数量可增加近30倍。这一特点决定了甲壳质可以有效改良土壤，改善作物的生存环境，也是它可以防控土传病害和促进作物生长的一个重要原因。 广谱抗菌，良好的成膜性、保湿性和选择透气性甲壳质有广谱的抗菌性。研究表明，甲壳质对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的多数菌都有很好的一杀作用。甲壳质在植株和产物表面形成薄膜，对病菌的侵害起阻隔作用，而且这层膜有良好的保湿作用和选择性透气作用。这些特性决定了甲壳质可以成为果蔬保鲜剂的最好原料。现在甲壳质保鲜剂已经问世，其保鲜作用十分良好。甲壳质的抗菌作用也表现在甲壳质产品的一些辅助用途上，譬如可治疗外伤，消炎，止血，止痛，促进伤口愈合，治疗脚气等等。 使用方便，价格不贵甲壳质产品多为水剂，对水就可以利用。价格不贵农民比较容易接受。综上所述，甲壳质产品集诸上许多独特优点之大成，特别是它的诱抗特性在植保方面有重大意义，这些在现有农药中是少见的。甲壳质产品的广泛应用将会导致植物保护从观念到技术的一次根本性变革，将会为减少作物病虫害，发展两高一优（高产、高效、优质）的绿色农业带来美好的前景，其前途不可限量。这已经在实践中日益明显地表现出来了。4 典型作物典型病害的防止 瓜、菜、草莓等作物连作减产的防治瓜、菜（主要是茄果类）、草莓等作物的连作减产，历来被视为难题，一直未能找到理想的解决办法。连作减产的原因是多方面的，如土壤养分的失调，土壤盐分含量过高，上茬同类作物所产生的废酸中毒，以及镰孢菌为主的土传病菌的危害等。要彻底解决连作问题必须采取综合的防治措施。传统的防治方法，如轮作倒茬，选用抗病品种，嫁接，淹水改土灭菌，化学药剂防治等，均存在各种局限和困难，难以取得理想的效果。利用生物农药健根宝（沈阳农业大学开发的微生物农药）和甲壳质生物农药（施特灵），辅以合理施肥和科学管理，有望为解决连作减产开辟出一条崭新而有效的途径。健根宝和甲壳质产品主要解决重茬最关键、最棘手的防控土传病害问题。仅仅应用健根宝和甲壳质产品就可以解决连作减产的主要问题，实现防病、增产，这已经得到了实践的验证。 水稻立枯病的防治水稻旱育苗已成为我国水稻栽培的主要技术。面积不断扩大，然而水稻苗期的立枯病也相应肆虐，成为制约旱育苗发展的主要障碍。立枯病因源于幼苗出土后的寒潮、冷害，小苗的正常代谢受到阻碍，原生质受到破坏，生理机能减弱，以致内抗性减弱甚至丧失，病菌就相机侵染。由此可见，防治苗期立枯病，增强秧苗自身的抗性是关键所在，甲壳质产品恰可担当此任。用甲壳质产品浸种，出苗后，小苗一叶一针到三叶一针时喷2遍甲壳质产品。最好在喷第一遍（一叶一针）时加入常规50%量的叶面肥，效果更好。 地下块茎（含鳞茎、根茎）类作物的防病和增产甲壳质生物农药对块茎类作物的抗病增产效果特别显著，应积极倡导采用。甲壳质的作用主要表现在作物的早期发育中，以土豆为例，施用甲壳质产品后，其主要有效成分壳聚糖被土豆块茎的淀粉粒子吸收后，作为细胞高效活化因子可取代其他植物激素，促进生根早发，提高出苗率，促进淀粉的大量合成。这是实现高产的基本因素。当苗出齐后，尤其在插墒时和土豆形成期是薯类晚疫病盛发期，可用甲壳质产品喷防，如见病则提高甲壳质产品浓度控制。按上述措施，出苗率已平展叶期计算，展叶出苗率比对照高，平均提前三天出苗；须根增加5％，主根直径比对照平均增粗，主根长度比对照增长，在生长中期计算，没进行任何喷雾情况下产生量比对照增加，可以认为：所有地下块茎、鳞茎、根茎类作物应用甲壳质产品处理是挖掘增产潜力的最简便有效的方法。5 结论面临新世纪到来之际，人类对于保护地球、保护生存环境，发展绿色农业，生产无公害、无污染、无残毒的农产品已成为时尚的追求。可以预见，甲壳质生物农药的广泛应用，必将成为绿色农业的发展开拓出一片崭新的天地，为广大农民的增产增收带来美好的前景。
之前发过一个ATMT的综述，这篇文章会有一些具体的操作方法 【现学现卖】review农杆菌介导的真菌转化 Agrobacterium-MediatedTransformation of Fusarium oxysporum: An Efficient Tool for InsertionalMutagenesis and Gene Transfer (Mullins etal., 2001) 农杆菌介导的尖孢镰刀菌的转化 简介 农杆菌介导的转化（Agrobacterium tumefaciens-mediatedtransformation (ATMT)）一直被用在植物细胞的转化实验中，这篇文章以尖孢镰刀菌为例，构建了4个双载体系统，并且优化了ATMT操纵真菌基因，构造插入突变体的实验条件。实验发现转化效率受真菌孢子和农杆菌共培养时期农杆菌数量的影响最为显著。 材料与方法 真菌材料 F. oxysporum strain O-685，在22℃下连续12d荧光灯照射，并使用CLA培养基（康乃馨叶片水琼脂培养基，康乃馨叶片干燥，灭菌，撒在水琼脂上。也可以用CMC或者绿豆培养基），诱导真菌分生孢子产生。用无菌水冲洗培养的菌落表面并用移液器收集，并用一种滤布Miracloth(CalbiochemBehring, La Jolla, CA)过滤掉大一些的菌丝体，获得孢子悬浮液(1 ×106 conidia per ml)。 构建载体 所有的载体都是在pCAMBIA1300 (CAMBIA, Canberra,Australia)载体的基础构建的。（结果表明基础载体和改造的都可以在尖孢镰刀菌中起作用。这篇文章中用的载体比以前研究用的pUR5750，14kb小了很多） （1）pBHt1（）载体：用BamHI和HindIII酶切pCSN44质粒，获得大小，携带潮霉素B抗性基因（hygromycinB resistance ( hph ) gene）和构巢曲霉 trpC 启动子的插入片段。而基础pCAMBIA1300载体则如图箭头所示，用XhoI和BstXI酶将这部分切除，接合（ligate）上述插入片段，最终得到pBHt1（）载体。 （2）pDHt（）载体：将基础载体按照（1）的两个酶作用后，得到的片段在没有插入片段的情况下自我连结（self-ligate）。 （3）pBHt2（）载体：与（1）类似，但是插入序列是从pCB1004质粒里获得的。 （4）pKHt（）载体：大小的片段包含ColE1复制起点（replicationof origin）和氯霉素抗性（ferringchloramphenicol resistance）基因。这段序列是通过特异性引物ECO-1和PST-1扩增pBCSK (Stratagene, La Jolla, CA)得到的。在pBHt2的基础上，插入的位置是MCS（Themultiple cloning site，MCS包含EcoRI,SacI, KpnI, SmaI, BamHI, XbaI, SalI, PstI, SphI, 和HindIII等位点）。 转化 （1）包含合适的双载体的农杆菌 Agrobacteriumtumefaciens strain AGL-1在28℃，包含卡那霉素（kanamycin，50μg/ml）的 MM 培养基（Minimalmedium(g/L)：K2HP04, ; KH2P04,; NaCI, ; , ; , ; , ;(NH4)2S04, ）中生长2d。 （2）将农杆菌细胞在 IM 培养基（inductionmedium: MM salts, 40 mM 2-(N-morpholino) ethanesulfonic acid (MES), pH , 10mM glucose, (w/v) glycerol, 200 µM AS）中稀释到OD600= ，继续培养6h。（结果显示前培养时AS不是必需的） （3）然后将农杆菌菌液与上述制备的孢子悬浮液1：1混合。200μl混合液平铺在消化纤维素滤纸（nitrocellulosefilter）上，滤纸放在在共培养平板上，所用培养基和 IM 唯一的差别是glucose含量为10 mM。25℃培养2d。 （4）滤纸转移到含有hygromycinB (75 µg/ml)，cefotaxime (200 µM)和moxalactum (100 µg/ml)的MM培养基。 （5）获得的真菌转化子分别独立的转移到24孔板里，孔里含有 CLA 和hygromycin B (75 µg/ml)，培养至产孢。 （6）独力转化子产生的孢子在水中稀释，涂布在含有hygromycin B (75 µg/ml)的PDA上。获得单孢菌落。并且通过多代无抗生素培养，随后再次接种在含有抗生素培养基上的方法，检测转化的稳定性（文章结果是6代仍遗传稳定）。 Transformation ofConiothyrium minitans, a parasite of Sclerotinia sclerotiorum, withAgrobacterium tumefaciens (Li et al.,2005) 通过农杆菌介导将盾壳霉转入到核盘菌 这个文章同样用到了农杆菌转化，但是因为实验真菌不同，这个文章在前一篇的基础上，更改了真菌培养温度，时间；真菌孢子浓度（107 spores/ml）；孢子和农杆菌共培养时AS浓度400μM。以及一系列抗生素的浓度都根据材料有所变化。 参考文献 Li, M., Gong, X., Zheng, J.,Jiang, D., Fu, Y., and Hou, M. (2005) Transformation of Coniothyrium minitans,a parasite of Sclerotinia sclerotiorum, with Agrobacterium tumefaciens. FEMS microbiology letters 243 : 323-329. Mullins, ., Chen, X., Romaine,P., Raina, R., Geiser, ., and Kang, S. (2001) Agrobacterium-mediatedtransformation of Fusarium oxysporum: an efficient tool for insertionalmutagenesis and gene transfer. Phytopathology 91 : 173-180.
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植物保护专业本科毕业论文（设计）开题报告
紧张又充实的大学生活即将结束，大学生们马上就要开始最难熬的毕业设计阶段，而我们做毕业设计之前要先写好开题报告，快来参考开题报告是怎么写的吧！以下是我整理的植物保护专业本科毕业论文（设计）开题报告，欢迎大家借鉴与参考，希望对大家有所帮助。
毕业论文题目：
菌寄生真菌纤细齿梗孢蛋白酶基因的克隆与表达
姓名： xx 学号： xxxx
年级： xxx 专业： 植物保护
指导教师：姓名 xxx 职称 教授
学科 植物病理
山东农业大学教务处
20XX年x月x日
一、选题依据（拟开展研究项目的研究目的、意义）
菌寄生(Mycoparasitism)是发生在菌寄生真菌与寄主真菌之间的一种寄生方式，是自然界普遍存在的一种真菌与真菌之间的相互作用。一直以来，生物间相互作用及信号传导的分子机制，是当今生命科学研究的热门。利用菌寄生真菌与寄主真菌作为研究的模式系统来揭示生物相互之间的相互作用机制有重要理论和实践意义。李多川(Li,1996)先生发现纤细齿梗孢(Olpitrichum tenellum)和串珠镰刀菌(Fusarium moniliforme)的菌寄生关系以来，我们实验室试图通过研究纤细齿梗孢和串珠镰刀菌，来建立菌寄生真菌与寄主真菌相互作用机制研究的模式系统，从而揭示菌寄生真菌与寄主真菌之间相互作用的分子机制。纤细齿梗孢(Olpitrichum tenellum)是串珠镰刀菌的一种重寄生真菌，该菌是一种接触性活体重寄生菌，离体试验发现其分生孢子只有在串珠镰刀菌细胞壁提取物刺激下才能萌发。这说明两者之间的重寄生关系是建立在二者识别与互作的分子机制上的(Li,2004)。在纤细齿梗孢和串珠镰刀菌相互作用过程中，几丁质酶、蛋白酶等细胞壁裂解酶可能起到重要作用。其中，蛋白酶在木霉属菌寄生真菌中的功能已经得到初步证明，而纤细齿梗孢的蛋白酶的研究还未见报道。因此，克隆纤细齿梗孢蛋白酶编码基因对于从分子水平上研究重寄生真菌和寄主识别和互作机制有着重要的意义。
二、文献综述内容(在充分收集研究主题相关资料的基础上，分析国内外研究现状，提出问题，找到研究主题的切入点，附主要参考文献)
纤细齿梗孢(Olpitrichum tenellum)是李多川教授分离得到的一种活体营养接触型菌寄生真菌[1~3]，其寄主包括Fusarium moniliformeAlternaria alternata等。近年来，我们实验室一直在努力以其为基础研究菌寄生真菌与寄主真菌之间的相互作用的分子机制。经过多年的研究，人们渐渐认识到真菌细胞壁蛋白在细胞与外界的相互作用过程中扮演着重要的角色。细胞壁蛋白研究已经成为生物间相互识别机制研究的热点。鉴于以上原因，我们实验室成功分离纯化了纤细齿梗孢的寄主之一Alternaria alternata菌丝细胞壁上的一种特异性糖蛋白——凝集素，并初步证明其在和孢子吸附过程中起到识别因子的作用[4]。近年来，菌寄生真菌细胞壁裂解蛋白酶在菌寄生过程中的作用被人们逐渐重视起来。克隆和表达菌寄生真菌的蛋白酶编码基因变得很有意义。本研究试图以菌寄生真菌纤细齿梗孢(Olpitrichumtenellum)作为研究材料克隆了其蛋白酶基因。根据氨基酸的保守序列设计兼并引物，然后采用RT-PCR和RACE是一个较为快速、简单和高效的方法。本实验根据同源保守序列设计兼并引物，通过RT-PCR及RACE-PCR的方法，克隆了蛋白酶的编码基因的全长cDNA序列，并对该基因进行了序列分析，为后续试验打下了基础。
由于Olpitrichum tenellum在离开寄主的人工培养基中很难生长，纯化其蛋白酶变得非常困难。因此，我们需要使用外源蛋白表达系统得到蛋白，进一步研究其性质，从而搞清楚其在重寄生过程中的作用。在过去的几十年间，随着DNA重组技术的不断发展，通过构建遗传工程菌株，人们可以较容易地使各种各样的天然酶的基因在微生物系统中高效表达，从而在很大程度上摆脱对天然酶源的依赖。
基因工程的表达系统有原核表达系统和真核表达系统两大类。在原核表达系统中，大肠杆菌表达系统是目前了解最深入，实际应用最为广泛的表达系统。与其他表达系统相比，大肠杆菌表达系统具有遗传背景清楚、目标基因表达水平高、培养周期短、抗污染能力强等特点。在基因表达技术中占有重要的地位，是分子生物学研究和生物技术产业化发展进程中的重要工具[5]。
Pichia pastoris基因表达系统经过十几年发展，已基本成为较完善的外源基因表达系统，具有易于高密度发酵，表达基因在宿主基因组中稳定整合，能使产物有效分泌并适当糖基化，培养方便经济等特点。利用强效可调控启动子AOX1，已高效表达了HBsAg、TNF、EGF、破伤风毒素C片段、基因工程抗体等多种外源基因[6]，证实该系统是高效、实用、简便，能提高表达量并保持产物生物学活性的外源基因表达系统。表达系统在生物工程领域将发挥越来越重要的作用，促进更多外源基因在该系统的高效表达，提供更为广泛的基因工程产品[7]。
我们已经分离到蛋白酶的编码基因，本研究中将该基因的去掉信号肽序列的正确阅读框融合于原核表达载体pET-22b(+)和毕赤酵母表达载体pPIC9K上，分别转化 BL21及Pichia pastoris GSxx5，以期在这些菌株中有效表达该基因的编码产物，从而为以后功能研究打下基础。
1 李多川.1998.菌寄生真菌分子生物学研究进展.吉林农业大学学报,20：37~65.
2 21.李多川.1998.菌寄生真菌分子生物学研究进展.微生物学通报，25：345~347.
3 .李多川，沈崇尧.1997.菌寄生菌物与寄主菌物相互作用的研究进展.西北农业学报，6：94~98.
4 张成省，李多川，孔凡玉. alternata菌丝细胞壁凝集素的纯化与特性研究.植物病理学报，35(2)：141~147.
5 .xx.何诚，朱运松.1998.甲醇营养型酵母表达系统的研究进展.生物工程进展,18：7~xx.
6 彭毅，杨希才，康良仪.2000.影响甲醇酵母外源蛋白表达的因素.生物技术通报，4：33~36.
7 韩雪清，刘湘涛，尹双.2003.毕赤酵母表达系统.微生物学杂志，3：35~40.
三、研究方案(主要研究内容、目标，研究方法、进度)：
1、研究内容：
本课题选择纤细齿梗孢(Olpitrichum tenellum)做为研究对象，通过RT-PCR及RACE技术分离克隆了其丝氨酸蛋白酶基因，并进行原核及真核表达，并对其的性质进行了研究，为进一步的研究工作打下基础。
2、研究的目标：
克隆了纤细齿梗孢(Olpitrichum tenellum)的丝氨酸蛋白酶基因，进行原核及真核表达，并对其的性质进行了研究。
3、研究方法：
将纤细齿梗孢(Olpitrichum tenellum)接种到LB培养基上，培养14个小时后，收集菌丝，然后采用总Trizol法提取RNA。再从GenBank数据库中搜索到大量的蛋白酶氨基酸序列，并根据同源性进行分类，分别设计兼并引物。再通过RT-PCR、3’-RACE、5’-RACE获得全长cDNA、DNA克隆，并将其连接到载体上，然后采用电击法将将重组质粒转入到全长cDNA、DNA克隆中，通过透析纯化蛋白酶，最后研究其特性。
四、研究进度：
20xx年5月23日~20xx年5月29日 整理收集资料，并跟着研究生学习基本实验技术。
20xx年5月30日~20xx年6月18日 提取RNA，设计引物、全长cDNA、DNA克隆 。
20xx年6月19日~20xx年7月15日 转化大肠杆菌、毕赤酵母表达，获得纯纯产物，并研究其特性。
20xx年3月~20xx年6月 对实验结果不理想的实验重做，整理实验数据，完成毕业论文，并准备毕业答辩。
五、技术路线：
收集菌丝
总RNA提取
同源序列 设计引物
特性研究
RT-PCR、
3’-RACE、5’-RACE
纯化表达产物
全长cDNA、DNA克隆 转化大肠杆菌、毕赤酵母
四、进程计划(各研究环节的时间安排、实施进度、完成程度)
20xx年5月23日~20xx年5月29日 整理收集资料，并跟着研究生学习基本实验技术。完成实验的1%。
20xx年5月30日~20xx年6月18日 提取RNA，设计引物、全长cDNA、DNA克隆。完成实验的50%。
20xx年6月19日~20xx年7月15日 转化大肠杆菌、毕赤酵母表达，获得纯纯产物，并研究其特性。完成实验的95%。
20xx年3月~20xx年6月 对实验结果不理想的实验重做，整理实验数据，完成毕业论文，并准备毕业答辩。完成100%。
五、导师对文献综述的评语
签字：
20xx年xx月xx日
六、专业意见
专业主任签字：
20xx 年 月 日
七、学院意见
学院(章)： 负责人签字：
20xx年xx月xx日
摘要：
针对目前浙江农林大学植物保护研究法实验教学方法、内容及手段等方面存在的一系列问题，提出了相关改革对策：优化实验课程内容，整合实验模块，学生自行设计实验方案等教学方法和手段的改革，以及课程考核方式和时间安排的调整，旨在培养学生的科研兴趣及创新能力。
关键词：
目前，国内外很多农业院校的植物保护专业均开设了昆虫研究法和植病研究法课程。为优化本科培养方案，浙江农林大学通过调整教学大纲，将植病研究法、昆虫研究法和农药研究法合并成一门植物保护研究法课程。植物保护研究法是植物保护专业重要的专业限选课程之一，是植物保护研究的重要组成部分，也是培养和提高学生专业实验技能和学习兴趣的重要课程，是一门专业性、实践性很强的实验学科。通过这门课程的教学，能使学生掌握植物保护研究的基本方法及基本原理，培养植物保护研究常规操作能力，以及查阅资料、设计实验方案和实际操作能力，提高学生的逻辑思维、整理资料、总结归纳和论文撰写的能力。笔者分析了浙江农林大学植物保护研究法实验教学中存在的问题，提出教学改革内容，并总结了改革成效。
1.实验教学存在的问题
传统实验教学的弊端传统实验教学的主要特征是“灌输式”“填鸭式”，学生在2个小时的实验过程中就是简单地按照实验指导书和实验大纲中的实验方法和步骤依葫芦画瓢，实验完成后，又按照统一的模式填写实验报告。在整个实验过程中，学生无需独立思考和分析，更谈不上发挥创新能力了。因此，很难让学生对实验产生兴趣，培养学生的创造性思维就更无从谈起了。虽然这种传统实验模式简明、清晰，有利于学生对相关结论的认可、理解和记忆，也有利于教师对整个教学过程的控制，教师和学生很轻松愉快地就能完成实验教学任务。学生走上工作岗位后，传统实验教学的弊端立即显现。学生缺乏设计实验的能力，在实验过程中缺乏发现问题、分析问题和解决问题的能力，实验后缺乏正确分析实验结果的能力。因此，传统的实验教学模式急需改革。
实验教学内容系统性不强植物保护研究法是植物保护专业本科学生的一门专业课程，其涉及的内容有昆虫研究法、植病研究法和农药研究法。在以往的实验课程中，只是简单地把这3门课的实验合在一起上，并没有把内容紧密联系在一起，如昆虫实验时，指导教师一般是教授昆虫学科的教师;而在进行植病实验时，则由讲授植病学科的教师指导。这样的实验模式难以使植物病虫害系统联系起来，学生学习专业知识不够系统和深入，容易造成理解上的片面性和孤立性，不利于掌握该专业的系统知识和技能。
实验考核不科学以往实验课程成绩评定的主要依据是实验报告，而每次实验课结束后，学生递交的实验报告只是把实验大纲(包括实验口的、原理、仪器与试剂、内容及方法)原文不动地抄一遍，实验结果更是千篇一律，这样实验就变成了预演过程，学生在实验中缺乏思考，不利于培养发现问题、提出问题、分析问题和解决问题的能力，背离了实验课教学的初衷。同时，还会导致每位学生的实验成绩差异微乎其微，不具有良好的区分度。
2.教学改革内容
重视教学环节在以往的实验课程中，实验教学所需要的实验用具和材料大多数都是实验教辅人员提前准备，导致他们的工作量非常大。让学生参与实验材料的准备和管理，一方面提高了教辅人员的工作效率;另一方面可以让学生对实验过程有全面了解，获得整个科研实践过程的训练，从而养成好的实验习惯，在未来的科研工作中做到计划周密、有条不紊地安排和实施实验计划。同时，在实验教学过程中，必须教育学生认真操作、仔细观察、实事求是地记录实验结果，并对实验进行科学分析。一日_发现弄虚作假的学生，一定要严厉批评，同时帮助他们分析失败的原因，找出解决的方法，有条件的情况下，让其重新做实验，让学生充分意识到科学研究允许失败，但是不能有半l从虚假。提高学生的实践能力实践教学是培养和训练学生实践操作能力，独立分析问题、解决问题能力的重要手段，尤其对于学生创新能力的培养，具有其独特的地位和作用。该项口分别以某种农作物病虫害为主轴展开一系列的实践性实验教学，要求学生自主设计实验和执行各项实验内容，指导教师负责答疑和提供技术帮助。学生通过自己分组、调查、取样、鉴定、查阅资料、讨论制订实验方案和动手实验等一系列步骤，不仅可以很好地将课堂上所学的理论知识与实践相结合，而且还有助于提高自学能力、实践能力和团队协作能力，进一步培养科学思维和创新能力。优化实验教学内容结构将整个实验课程设置成一个综合性的大实验：分别以某个农作物上的病虫害发生规律及防治措施贯穿整个课程。将口前昆虫研究法的昆虫标本的采集与制作、昆虫人工饲养技术、昆虫生态学研究方法、昆虫生理生化研究方法、昆虫分子生物学研究方法和害虫综合治理研究方法5个实验和植病研究法的植物病害调查、植物病原菌分离与鉴定技术、植物病原菌分子生物学鉴定技术、植物病原真菌遗传转化技术和植物病害综合治理技术5个实验合并成1个综合性大实验，将植物病虫害研究以故事的形式紧密地整合在一起，让学生将课堂知识与田间实际应用有机地联系在一起，加深对理论知识的理解，提高学习兴趣。整个实验就是以具体的作物病虫害发生为时间轴，具有很强的连贯性和系统性，学生只有认真完成每一个实验，才能很好地保证后续实验的顺利进行，有助于增强学生的责任感和团队合作精神，同时也改变了学生实验报告千篇一律的`现象。改革成绩评定方式实验课成绩一方面是对学生实验完成好坏的肯定，另一方面也对学生起到了一定的督促作用。为了做到对学生的全面评价，实验成绩除实验报告和考勤成绩外，应将实验过程中学生的学习主动性、动手操作能力、实验结果记录规范性量化纳入成绩考核。在实验过程中，教师应主动观察并记录每个学生的实际动手、操作能力，量化后按一定比例记入总成绩，对那些既有独立操作能力，又有创新意识的学生，适当给予创新学分。实验过程中，学生是否遵守实验室规则、是否具有团队合作精神，实验结束后，学生是否打扫卫生、是否清洗实验器材等，这些看似小问题，但也体现着一个人的品质和素养，做得好的学生也可以适当加分。
3.改革成效
提高学生的专业技能及其对专业知识重要性的认识学生能在同一时间完成植病研究法、昆虫研究法和农药研究法3门实验课程，体现了实验课程很强的连贯性和系统性。学生在实践过程中将这3门课程的相关内容紧密、有机地联系起来，对植物病虫害防治有了更深入的认识，同时也提高了学生的专业技能及其对专业知识重要性的认识。在实验的过程中，强调把学生的动手能力放在首位，让学生更多地参与到实验中，切身体会到所学专业的意义。
培养学生发现、提出、分析和解决问题的能力植物保护研究法实验教学模式具有系统化和整体化特点，同时涉及昆虫研究法、植病研究法、农药研究法等相关学科课程。在实验过程中，学生在对病虫害的认知及其防治等问题的处理上始终处于主体地位，在独立思考、查找资料、咨询专业教师、综合分析之后，拟定出具体的处理方案，能够融会贯通地掌握植物保护学科的理论知识和基本实践技能。
提高指导教师的业务水平新的实验教学模式综合运用了3门相关课程的理论知识，加强了课程的综合实践环节，因此指导教师自身的知识面、操作技术、实践应用和协调能力都需要提升。所以，这种实验教学模式促使教师在教学过程中同学生一起不断学习，丰富专业理论知识，完善专业实践体系，提高发现、提出、分析和解决问题的能力，了解和掌握学科及相关学科的发展动态、研究的新进展、出现的新技术，从而提高了指导教师的业务水平。
4.结语
植物保护研究法在植物保护专业2013级和2014级本科生实验课程教学中进行了实践，通过问卷调查，95%的学生认为在实验过程中有较多的动手机会，激发了自己对实验的兴趣，提高了自己分析和解决问题的能力。因此，认为该教学方法可以发挥学生的主观能动性、拓展学生的科研思路、激发学生的创新创造力和提高学生的独立应用实践能力，具有良好的教学效果。
根本就是无解的项目，实验室里搞搞就算了，放在大田里搞，变化因因素太多了，除非农药百分百降解矿化了，这可能吗？否则代谢不完全的中间体是否有志毒还说不定，还要做急性和遗传的毒理试验，总之，不好搞，说能搞，都是怱悠
我空间里有啊！
物理化学与医学检验的关系与应用 物理化学是从物质的物理现象和化学现象的联系入手来探求化学变化基本规律的一门学科，它并不是一些人所理解的是物理与化学的简单组合。对于生命科学工作者来说，物理化学有极大的指导作用，利用物理化学的基本概念，可以解释和阐明许多生命现象，并用以指导生命科学研究工作。 近年来，医学以逐渐有经验科学想理论科学发展，它与物理化学联系更加紧密。医学检验对物理化学日益显示更高的要求，检验工作中越来越多地使用了仪器分析方法，而仪器分析实质上是物理化学的研究手段；在阐明各种检验的医学意义时，也要用到很多物理化学的知识，例如：如果镰刀状细胞的血红蛋白的电荷与正常细胞不同，因而其电泳速率就和正常的细胞不一样。所以，医学检验可以用电泳法来鉴定镰刀状贫血。检验血红蛋白分子的稳定性以及他们的聚合情况时，用物理化学的方法（如沉降，黏度）非常有效。光吸收实验可以用来测定血红素颜色的改变情况，用化学热力学和动力学的方法来测定血红素与氧的结合的情况等。总之，物理化学对医药院校的学生是非常有用的一门学科，学好了物理化学，学生可以扩大自己的知识面，可以可以用物理化学的知识解释和解决学生在日后的学习和工作中遇到的许多问题，打好专业基础，进一步培养自己的独立能力，提高自学能力，逐步培养自己独立思考、独立解决问题、独立操作和实验的能力。 下面简要叙述物理化学在医学检验的应用的几个例子： 在第六章中，通过讨论电解、极化、超电势及析出电势等，可以从理论上了解检验工作中常用的测试方法——极谱分析法。其中生物敏感电极中的微生物电极是将活的微生物固定在膜上而制成的电极，用于医学检验中测定肌酐酸等微生物电极。 医学检验中的酶学测定法是直接根据动力学原理而设计的。 现代医学检验中广泛应用的气相色谱法和高效液相色谱技术是通过对界面现象的研究而建立和发展起来的分析技术，界面化学已经发展成为一门独立的科学——界面化学。过冷、过热及过饱和状态常叫亚稳态，在医学检验中常常涉及亚稳定的生成和破坏。 医学检验所研究的血液、细胞液、组织液等蛋白质也是胶体分散系的范畴，在医学中，也大量涉及胶体化学。如做尿蛋白电泳来诊断多发性骨髓瘤以及通过对血液黏度的测定可诊断某些疾病等。 总之，医学检验离不开物理化学。
木犁：用于农田或旱地的耕作。
耙：是农业生产中传统的翻地农具，曾经是农家必备的农具之一。
耧：古代播种用的农具，由牲畜牵引，后面有人把扶，可以同时完成开沟和下种两项工作。这种农作工具是现代播种机的前身。
锄头：专用于耕种、除草、疏松植株周围的土壤。
镰刀：是农村收割庄稼和割草的农具，由刀片和木把构成，有的刀片上带有小锯齿，一般用来收割稻谷，在江南的一些农村现在还有广泛的使用。
木犁、耙、耧、锄头、镰刀这些都属于农具中的耕地整地工具。
农具，指农业生产使用的工具，多指非机械化的，也称农用工具、农业生产工具。农具是农民在从事农业生产过程中用来改变劳动对象的器具。
中国农业历史悠久，地域广阔，民族众多，农具丰富多彩。就各个地域而言、不同的环境而言、相应不同的农业生产而言，使用的农具又有各自的适用范围与局限性。历朝历代农具都不断得到创新、改造，为人类文明进步做出了贡献。
传统农具是历史上发明创制，承袭沿用的农业生产工具的泛称。传统农具具有就地取材，轻巧灵便，一具多用，适用性广等特点。古代传说最先出现的农具是耒耜。有明确文献记载的播种用农具是西汉的耧犁，耧犁由牲畜牵引，后面有人扶着，可以同时完成开沟和下种两项工作。
耕地整地工具用于耕翻土地，破碎土垡，平整田地等作业。经历了从耒耜到畜力犁的发展过程。汉代畜力犁成为最重要的耕作农具。魏晋时期北方已经使用犁、耙、耱进行旱地配套耕作；宋代南方形成犁、耙、耖的水田耕作体系。
水田耕整地工具主要有耕、耙、耖等，这套耕作体系在宋代已经形成。晋代发明了耙，用于耕后破碎土块，耖用于打混泥浆。宋代出现了耖、砺礋等水田整地工具用于打混泥浆。秧马，出现于北宋时期，是拔稻秧时乘坐的专用工具。
参考资料：百度百科-农具
在社会的各个领域，大家对论文都再熟悉不过了吧，通过论文写作可以培养我们的科学研究能力。那么一般论文是怎么写的呢？下面是我为大家收集的初中议论文作文9篇，希望能够帮助到大家。
要想成就大事业，必先从小事做起。正可谓是“一屋不扫，何以扫天下”。
古代著名工匠鲁班从单纯地练习将木头砍成四方形开始，经数年刻苦练习，最终成为名流千古的土木建筑发明家。
鲁班曾拜一名知识渊博的老工匠师傅向他学艺。他每天早出晚归，按师傅的旨意，从练习砍木头开始，经苦练到熟练以后，又开始进行砍木块、木条的基础训练。后来再制作各种小模型。日积月累，有一天他终于自己发明创造并制出了第一架活动小亭——现在的伞的“雏形”。后来又成为了著名的工匠、土木建筑发明家。
我认为鲁班之所以会有昔日的辉煌，是因为他当日有恒心能从小事做起，技术、经验与日俱增，才能有此成就。我领悟到做任何事都要从小事做起。
我们敬爱的周总理，他从小就立下了“为中华之崛起而读书”的宏伟目标。在他的青少年时代，学习成绩是顶尖的，社会活动是广泛的。他办过报纸，写过文章，做过盈千累万的演讲，有过人的口才与机敏，这些对于他日后出任总理时的雄才大略不能不说有相当大的影响。假如他没有当年脚踏实地的工作，那么，当他面对一个上亿人口的泱泱大国，面对纷繁复杂的国内外局势，面对那些突如其来的天不幸，他能够当好日理万机的国家总理吗?
我认为周总理之所以能够当好日理万机的国家总理，是因为他成就大事业的光辉革命业绩与他早年从小事做起的工作是分不开的。
其实不仅是成就大事业如此，而且环保也是这个道理。
在快餐店里，人们吃快餐盒饭，都用一次性木筷子。每天到快餐店的人，且每人都用一双木筷，木筷用完就扔，十分方便，但并不环保。照这样计算，每天就会耗费一、两千双木筷，一周耗费一万多双。如此，日积月累，会有多少棵曾经亭亭玉立的树倒下“牺牲”呢?若每人都改用非一次性餐具，一周下来至少能节省若干棵能够绿化环境的树。
因此，我认为我虽不能站在讲台上大喊口号：我们要如何环保。但我确能做到少用或不用一次性筷子。如此小事，我想大家也都能力所能及，何必夸张地说：“我要环保”呢?只要做好了眼前能力所能及的小事，就做到了名副其实的环保。
可见做任何事都要从小事做起。做不好生活中的小事，何以干成大事、成大业!
小事，体现智慧;小事，决定成败;小事，改变命运。因为注重小事，鲁班不为人知的昼夜练习成为传世的典范。一切的伟人与不朽才得以区别于平庸而成为永恒。我们的人生，也因细小事而跌倒，因细小事而流泪，因细小事而成长。
生活的小事，有的不断涌来，有的不断地破散，许多，宛如孩提的面孔，向回不去的大海奔腾而去，沉睡了;许多，像树荫下那位自由的提琴手，奏出美妙的音响，环绕于你的心头，是啊，过去属于死神，未来属于自己。寻找往事的芳香，我思索追忆……
记得，那是一个人的影象，高大鲜明。哦，是的——那是个童话里的人物，美好，令人向往。他，曾经在风雨中前进，为了战争，但——他并不知道在追寻什么。那雨，有杂着和风的，有从上到下的，有“从下到上”的，最后，他拾起了诺言，他失去了最珍贵的，不是生命!他，曾经在大海中乘风破浪，为了那个诺言。他曾经在运动场上大显身手，抛弃了人的贪婪与自私。他，曾经在草地上闪过身影，在夜晚忍受孤独，在纯洁神圣的黎明中，在灿烂的朝霞的映衬下奔跑，他这时明白了——奔跑，为的是在过去的路上学会放弃，在未来的人生中学会拼搏，学会超越。他就是阿甘，他的传奇的一生，给我心灵上的震撼，是对美的追求吧!我感动了，我在沉思中领悟……
面对挫折，面对生活中的风暴与枷锁，显然，我迷失了、囚困着。是消沉、软弱导致的。在这些枷锁面前，我没有直观地去面对，沉迷于过去的美丽，让它剥夺了我的一切，主宰和取代我的一切。失败时，用过去作为安慰的理由，不去经历，不去挑战，怎么能成功呢?风雨过后的彩虹最灿烂!我明白了，只有不断地超越自我，才能创造比过去更明亮的珍珠，用微笑面对人生吧!
那一次，我感动了。感动的是人生，是人的品格，是人的灵魂，我知道了以后的路该怎么走，用乐观向上去看待;我知道了该做什么样的人，做品德高尚、知进取、拿得起放得下的人。
小学幸过，渐入中学。
——我读到《周易·乾》的`“君子学以聚之，问以辨之，宽以居之，仁以行之。”的时候，想着自己正在“聚”，聚了小学的基本知识，聚了六个阶段的积累面。已经到中学了……
想走进一所中学不难，迈开脚跨一步就进去了；可要读一所中学，得费个周折。好中学是这样，坏的亦这样。想读好的，你要占一定程度上的优势：学习好，有闲钱——这两点里，具备一点即可——你学习好，人家总不见得就因为你没钱，就放弃一个优生罢？你大有闲钱，人家总不见得就因为你一个不好的成绩就放弃多揽钱的机会罢？读坏的，看似简单，其实不然。首先你知道要读这个的时候，先得给自己做思想工作，然后再给自己的家长做思想工作——往后在街上遇见一个熟人，总得问你，你都得窘着脸回避了。最后还要整日被家人们冷嘲热讽的，说别人如何如何，你又如何如何。再加上暑期的天气，毒辣的阳光不给你留情面，人也是！
如此看来，好坏中学都不好读，甚至坏中学受的周折还，那我们为什么要去计较学校呢？无非就是这个好坏。
人们说，这个好坏包括了学校环境、师资力量、是高等还是普通等等因素。囊括起来就是两个字——“权威”——大多人们的心都是由这个而定的。没权威的人不配伟人之名；没权威的招牌不能受名牌的称号；没权威的书籍里装的全不是可信知识；没权威的学校便也不是能读的学校了。再照这样迷信下去，权威的人能把阿猫阿狗推到凤凰之上，权威的招牌能够随心所欲的卖假货，权威的书籍能传授人们虚无的知识，权威的学校估计也能随便找些“花瓶”老师应付教育……这都是一个叫做权威的东西掌控了人们的心智，以致让一切不负责任的敷衍“见缝插针”，得以滋生。如果我们只是一味的去信仰权威，那那些具有实力却才出庐、还未发扬出来的“准好学校”呢？难道只能听取权威的摆布吗？那样，权威将它压着，它也只能销声匿迹了？一大损失。
是不是能完全摆脱权威的诱惑，主要看家长的态度。家长们有的消极，说自己的儿女没希望，没前途，就“破罐子破摔”罢；有的自信，认为儿女定能取得成功，毫无顾忌。这是两个极端，往往结果相反，但也有刚好着意的——只能说明儿女的学习也是两个极端中的一个，总不会做家长的如孔明般神机妙算呵。家长本该采取中端态度，面对中考，哪容得下这般诸多的情结呢？这一来，以后小到单元测试，大到中考高考，岂不乱下阵来？有些家长心里的动作可谓“变化万千”，考前担心复习，考时焦心发挥，考后忧心成绩。家长的心情可以理解，但是考试答卷的人是自己的孩子，再担心也只是干担心。担心过后，家长们才来把时间全花在等分数上，谁让这分数就握着孩子的何去何从能呢！当分数下来，了的索性不说，固然是要进那个“好学校”的；考差了的呢？还是要进！不管给钱托关系都得进！——这就是大部分家长的心态了。他们从不把其他学校考虑过，只是在想怎样读上人们都说好的学校。一大误区。
其实读中学是和大学差不多的，没必要鼓着劲去勉强学生们上传说中的好中学，资质好的、资质不好的都是这样。“老师领进门，修行在个人。”只要学生有一个良师，有一个益友，其余都是靠自己奋斗，学校又去想些什么呢，毕竟中学的门，不是这么好进的，以后的路，也不是那么好走的。
提着竹篮，看着身边走过的人大都和我一样，手提竹篮，竹篮里有酒、斋饭、三牲、纸、香、鞭炮。可不知为什么，每每这个时候，我从来都不喜欢念出：“清明时节雨纷纷，路上行人欲断魂。”的诗句，而是苏轼的“江上冰消岸草青，三三五五去踏青”，或者是白居易的“逢春不游乐，但恐是痴人。”
小的时候，爷爷奶奶都健在，清明节要去扫墓也就是我父亲过继了的一位大婆。那时候我刚刚十一二岁，母亲通常就让我一个人去。在遂川扫墓不叫扫墓而是叫挂纸，意思就是要在坟墓周围放上一圈的黄裱纸，这样路过的人就知道这是有子孙的坟，不像那些孤坟野鬼，什么时候也没有人过问。而且遂川还有“清明挂纸挂一天，冬至挂纸挂一冬”的说法，所以到了每年的清明，我的家就是我一个人拿着一把镰刀，提着一个竹篮去给我这位大婆挂纸。
每当走到她的坟前，我会说上一句：“大婆，我来看你了。”然后把坟墓旁边的荆棘砍掉，点着香、点着烛、燃了鞭炮，跪了四跪。我就会倚着大婆的坟回忆一些有关大婆的事情，可这些事情十分的模糊，唯一记住的就是她骂我姐姐，因为我姐不听她的话不给她去泉江饭店打酒。
这样给大婆上坟挂纸很多年后，忽然有一天，我的爷爷，我的奶奶，我的父亲、我的叔叔……属于我父辈的那一代人好多都被送进到坟里，而我也成了家、生了小孩。我也终于明白，其实清明节也叫踏青节。这个时候此正是春光明媚草木吐绿的时节，所以我更多的以为这是古人为了让人们能够和大自然充分接触，所以特意想出来的这么一个节日，让人们在和祖辈对话的时候，尽享人间春色。
去年清明节，我儿子说要和我一起去扫墓挂纸，他和我一样在坟前四跪四拜，然后说一些有关我父亲的话题，说他小时候我父亲怎么样，怎么样。忽然儿子像是想起一件很重要的事一样，他仰起他的脸问我：“爸爸，你下次死了是不是也要送到这样的坟里。”我忽然间不知道怎么回答，我后来看看天空，看看行走在春天里的人们，我对儿子说：“我不需要坟墓，等到有一天，我真的死了，你把我烧了，然后把我的骨灰当成花肥，或者是你把它洒到山谷、河川。”儿子马上问：“如果我想你怎么办？”我说：“如果你想我的时候，就在清明这天，寻一块草地，然后对着天空跟我说说话，我想我会听到的。”
这应该是我在坟墓前对我儿子交待我的遗言吧，但想想也挺好的。
今年，清明节又要来了，我忽然间感觉我也要和我的父亲说说话了，过去一年了，有许多话憋在心里，倚着父亲的坟说一说，也许就像儿子以后躺在草地上，心底尽是一片春色。
杜牧说：“清明时节雨纷纷，路上行人欲断魂。”今天是清明节，有的人从十里八外驱车赶回应县，有的人要从应县赶往其他地方惦念亲人。
清明节相传为春秋时期晋文公为了感恩19年前介子推为自己割肉熬汤之情，希望通过火烧绵山引出介子推，却不想介子推背着老母亲宁肯在一棵柳树下烧死而不愿出，于是后人把这一天定为清明节。
从此，每年的清明节人们都要惦念哀思自己的亲人。今年清明节，我和爸爸妈妈去给姥爷扫墓。
来到墓前，往事历历在目。在我年纪尚小的时候，姥爷每次从外面回来时，总会带回我最喜欢的鸡腿，接着笑眯眯地叫我一声“多多”，我便感受到姥爷对我的一份关爱。如今，每次吃起鸡腿的时候，一阵阵香气扑鼻而来，我总感觉着姥爷就在我的身边微笑着看着我。
待我再长大些时，姥爷就教我不少做人的道理，如：要养成饭前坚持洗手，早睡早起锻炼身体的好习惯；要尊重长辈懂礼貌，勤俭节约不浪费；要珍惜时间，不虚度光阴；好好学习，将来成为对国家有用的人才。
现在，姥爷离开我们身边已经一年多了，想起来不时地一阵酸痛。再喊一声姥爷，只有一声空空的回音，没有应答。不知道天堂里有没有如此明媚的春光，天堂里的您看得见我们吗？
我想，唯有好好读书，奋发图强，努力完成姥爷的遗愿，才是真正的孝吧。
索一会儿，选中了友谊。老者笑了笑，施用魔法，变出了一位亭亭玉立的少女，并告诉我，以后她就是我的朋友，会带给我这世界最纯洁、最珍贵的感情友谊。
自从拥有了友谊，我不再孤单、寂寞。我们总是肩并肩，手牵手，漫步于黄昏的街头，奔跑于浪漫的雨中。我们总是在同一张桌子上，专注地学习。时而沉默不语，各忙各的；时而互相探讨，“争吵”激烈。我们总会在公园的长椅上，或向对方倾诉心中的烦恼与忧愁，得到体贴的宽慰；或将快乐的事告诉对方，然后一起开怀大笑。
自从拥有了友谊，我不再软弱。当在人生之路跌倒时，心中被“放弃”这个意念完全占据。可是，这时，朋友将我扶起，提醒我要坚强，漫漫人生路，岂能无荆棘，若被拌倒，就一蹶不振，选择放弃，又怎能体味到成功的快乐呢？这些话，令我又充满希望。从此，每当跌倒，我都会自己站起来，将这当作命运的考验，相信成功不远。
自从拥有了友谊，我找到了“心有灵犀一点通”的感觉。对于同一个问题，我们时常会有相同的见解。我们崇拜同一个明星，喜欢同一种颜色，热爱同一种写作风格……还有，我们都同样珍惜着这份友谊。
友谊是一把伞下的两个身影，是一张桌子上的两对明眸。
友谊似一弯温暖的海港，静静地抚慰着疲惫的帆船。
友谊是穿越人海，互视对方双眼的默契，是不期而遇的缘分。
摘要 ：本文基于初中写作教学缺乏实用性与创新性现状，从实用与创新的视角探索初中写作教学：立足写作技能发展，授予学生写作技巧，书写心声，读写结合，凸显作文教学实用性；释放学生写作个性，培育学生观察力，释放想象力，激活创作力，凸显作文教学创新性等。
关键词 ：实用；创新；初中；作文
作文教学是初中语文教学的重要组成部分，在高考中也占据较高比例，它折射出学生语文综合素养，是学生输出语言的重要形式。然而初中作文教学现状不尽如人意，不少作文过于追求形式，忽视作文内容的雕琢，缺乏实用性与创新意识，本文基于这一现状，尝试从实用和创新的视角探索初中作文教学，以提升初中作文教学的有效性。
一、初中作文教学现状诊断
（一）缺乏实用性
初中阶段由于学习时间紧张，作文教学中不少语文教师存在急功近利思想，往往要求学生背诵一些高考满分范文，以此代替作文指导教学，作文教学缺乏实用性，从而导致学生作文陷入程式化模式；部分语文教师作文指导纯理论化，大多从形式入手，作文内容空洞，难以有效激发学生写作兴趣，缺乏实用性。
（二）缺乏创新性
创新是保持作文活力的重要手段，不少语文教师在作文教学中缺乏创新意识，过于依赖作文指导用书，过于倚重高考满分范文，缺乏作文教学思考，导致学生作文陷入“套作”的泥淖，不能根据作文写作内容、情感思想表达的需要以及自身写作优势等展开写作活动，作文教学缺乏创新意识，导致作文缺乏感染力，内容空乏[1]。
二、基于实用与创新视角的初中作文教学探微
（一）立足写作技能发展，凸显作文教学实用性
1.授之以渔初中作文教学的要旨在于促进初中生写作技能提升，写作作为一门创造性思维活动，具有一定的写作技巧，学生要写出实用性的作文，掌握必要的写作技巧是基本前提。因此初中作文教学中，教师要重视作文教学，精心备课，明确每一次作文训练目标，将作文技巧训练有机渗透在每一次写作教学中，授之以渔，使学生掌握基本的写作技能，例如常见开头方式、文章结构、结尾形式、表达方式的综合运用等，从而写出实用性作文。2.书写心声初中作文写作的一个基本要求是写出真情实感，唐代白居易曾响亮地提出“文章合为时而著，歌诗合为事而作”的创作理论，这就启发我们写作不能无病呻吟，不能缺乏灵魂。初中语文教师在作文教学中要引导学生书写心声，无论是选材，还是立意，都要关注内心情感、思想等，写出真情实感，在此基础上辅以必要的写作技巧，这样才能写出实用性作文，唤起读者情感、思想的共鸣[2]。3.读写结合教材是初中语文教学的有效载体，教材中的语篇都是经过精挑细选，具有普遍的指导性与实用性。初中语文作文教学中，教师要改变“唯范文”的资源开发意识，将作文教学与阅读教学结合起来，在阅读教学中渗透写作教学，将阅读文本作为实用的范文；在写作教学中，教师要善于援引教材范例，调动学生阅读学习积累，做到读写结合，使作文教学与阅读教学互相促进，互相提升，提升作文教学的实用性[3]。
（二）释放学生写作个性，凸显作文教学创新性
1.培育观察力学生写作过程中创新能力的发展是以细致的观察为前提，初中生由于生活阅历不丰富，难以写出具有创新性的作文。这就需要教师引导学生善于从生活中取材，仔细地观察生活，能够从不同的角度审视生活，正所谓“横看成岭侧成峰，远近高低各不同”。学生观察力提升了，写作素材就厚实了，写作的角度就独特了，自然就能够写作富有创新性的作文，写出高人一筹的佳作。2.释放想象力想象本身就是一种创造性思维活动，初中作文教学中教师要善于写“慢作文”，给予学生足够的时间去思考，去发挥想象力，通过系列化作文训练，采取合理的想象力训练，例如看图训练，根据提供的图画展开想象力，连词成文训练，为学生提供几个词汇，要求学生运用这几个词写一篇作文。阅读教学中，教师也要善于培育学生想象力，例如对文本的空白进行“补白”，诗词教学中对诗词画面、场景、形象进行还原或者再现，释放学生想象力，以提升作文创新性。3.激活创作力实践出真知，同样丰富的写作实践才能有效培养学生写作创造力。这就这需要教师在写作教学中为学生搭建写作与成果展示平台，激活学生创作力，丰富学生的写作体验，这样才能激活学生写作灵感，写出创新性作文。一方面，教师可以利用传统平台，例如班级角将学生佳作展示出来，专门开辟“创新性佳作”栏目，激发学生写作创新能力；其次，发挥新媒体平台优势。教师可以借助班级微博、微信圈等开辟“作文秀”、“微写作”等栏目，为学生创新性作为提供展示平台，激活学生创作力，从而写出创新性佳作。
三、结语
基于实用与创新视角的作文教学不是一个新命题，但是初中作文教学的应然追求。初中语文教师要充分认识到作文教学的意义，在写作教学实践中不断探索，不断反思，不断探索实用性与创新性作文的基本内涵，不断丰富实用性与创新性作文理论，使学生写出既实用又富有创造性的佳作，促使初中作文教学迈上新台阶。
参考文献
[1]秦慧谱.“作文六视角创新训练”教学纪实[J].黑龙江教育:中学教学案例与研究,20xx,(12):46.
[2]张燕燕.浅析初中语文作文教学的实用性和创新性[J].读写算:教育教学研究,20xx,(28):34.
[3]孟庆华.新课程改革视角下的初中语文作文教学研究[J].散文百家:新语文活页,20xx,(5):56-57.
3月的一天，我意外地收到了老师转交给我的一笔小小的“财富”---120元“希望工程”助学金。虽然只有120元钱，但我却感觉到这笔财富不仅仅是120元钱，而是一笔包涵“希望”的财富，内涵着我发奋学习、立志成材的希望，更内涵着老师、学校、国家希望我“好好学习、天天向上”，早日成为报效国家栋梁之材的一片厚望。
是啊！我是多么希望自己能博学多识，早日长大成人，走上社会，去干一番轰轰烈烈的事业！去开垦出一块属于自己的绿地，撑开一片属于自己的蓝天呀！更希望早日投身到社会、投身到国家的建设中去，去搏击，去冲浪，去实现一生的追求，去实现一生的梦想，去贡献一生的力量······
回到家的那天晚上，我渐渐地进入了梦乡。梦里，我终于考上了国家重点学校，成了一名大学生，成了一名研究生，成了一名博士生，成了一名······真正变得学识渊博起来，成为一名名副其实的学者、科学家。我感到有用不完的知识，使不完的力量，一点一滴地，一天一天地向社会、向国家贡献着自己的才学，奉献着自己的金色年华。在梦里，我又仿佛看到了我们的国家，一天一天的变的强大起来，就像一位雄姿伟岸的巨人，傲然屹立在世界民族之林，高高伫立在地球的东方。
但是，现在我还小，还只是一名中学生。离自己的梦想，距国家的希望还如银河般地遥远。当我从老师手中接过120元钱那一刹那间，我深深地感到同学们投来羡慕的目光，老师投来希望的目光，回到家爸爸妈妈投来鼓励的目光。120元钱虽轻，但令我始终感到心里沉甸甸的。与其说这是一种压力，到不如说是一种激励、一种动力、一种感召力，一种勉励我“好好学习、天天向上”的“助推器”，一种······
我没有舍得花这笔“财富”，爸爸妈妈建议我把它存到银行里去。我想，现在我还小，不能为国家做多少事情，做多大的贡献，我把它先存到银行里，先让国家用，也算是我对国家的一点微薄的贡献吧！我把心里的话告诉了爸爸妈妈。爸爸妈妈听了高兴地直夸我，说我已经长大了，懂事了！说等我考上大校，上大学时再用。而我却一直在想，我要把这笔“希望”的财富一直存下去，存下去，让我时时刻刻地牢记着同学们、老师们、国家、爸爸妈妈对我的厚望，成为一笔激励我不断追求，不断前进的力量财富，直到有一天它真正变成了一笔“大财富”。是啊！我是多么希望这“120元钱”将来有一天也能真正变成了一笔“大财富”啊！因为那时，我可以自豪地把它捐献给我们的国家，捐献给那些需要教育又因家庭贫困而面临失学的孩子们！
“120元钱”不算多，但它表达了国家对我们这些小小学子无限的厚望啊！“120元钱”给了我更多的感受。我在想，如果现在还不好好学习，能对得起不辞辛苦、孜孜不倦、谆谆教诲我的老师吗？能对得起含辛茹苦供我上学的爸爸妈妈吗？能对得起学校辛勤浇灌和国家的希望与培育吗？我做了一个坚定的回答：不能！我在日记中默默写下了这样一段话：从我做起，从现在做起，好好学习、天天向上，一点一滴地学，扎扎实实地学，如饥似渴地学，发奋图强地学，把学到的有用知识，把学到的本领，早日应用到实践中去，应用到将来建设社会中去，应用到伟大的祖国建设中去，做一个真正的国家有用之材！来作为报答同学们对我的关心，报答老师、学校、国家、父母对我的教育之恩，关怀之恩，教养之恩······
拳拳小学子，悠悠报国情！我已经下定决心：一定要把一点一滴学到的有用知识，不断地溶进我的脑海里，不断地输入我的血液中，让它们遍布我的每一个细胞，流遍我的每一根血管。因为只有这样，将来我才就会有一股使不完的力量！
每每我想起这“120元钱”，“为中华崛起而读书”那句伟人的教导就有感而发！每每想到这些的时候，我就心潮澎湃，我就热血沸腾，我就有一股坚无不摧的精神力量！因为它已经化作成一艘带我去探索知识宝藏的巨船！化作成一面实现我远航理想的风帆！
“书上得来终觉浅，绝知此事要躬行。”这句古训被世人广为传颂。它告诉我们，做一个行者，把理想化作行动;做一个行者，把虚幻变成真实;做一个行者，用行动实现理想。如果想成功，必先做一个行者。
世上的人几乎都曾拥有一个理想，可只有少数人实现了它。其余的人则在一次又一次的失败，和自己所谓的理性认识下渐渐放弃了它，最后只得叹息终生。为何——他们忘记了做一个行者。
纵观天下伟人，你会惊奇地发现，他们都是行者。居里夫人是享誉世界的科学家，她为自己的理想甘于奉献。在她收到诺贝尔奖后，竟毫不犹豫的送给一个孩子当玩具，最后为自己心爱的事业而捐躯。她，用自己的行动为世界做出了巨大的贡献。
玄奘大师是家喻户晓的佛学大师，他从西安一路历尽了坎坷，正如《西游记》中的九九八十一难那样，玄奘到达了他理想的天国天竺。他翻译了诸多佛经并写下珍贵的历史文献，带回中国，他的努力为后世的佛教发展与历史考证均起到了积极的影响。
如果我们没有行者的精神，我们将一无所获。古时那个在树桩旁奢望坐享其成，等着兔子撞树的的农夫被天下人耻笑，他正是从反面揭示了——要成功，必先做一个行者。
作为一个学生，我们也在做一个行者。
你听，“刷刷……刷刷……”，教室里只有同学们笔尖与试卷的摩擦声;你看，清晨的操场上同学们飞奔的身影;你看，上课时同学们聚精会神、目不转睛的神情。不错，这就是初三学生为理想而奋斗的情景。进入初三，课堂纪律好了，嬉戏打闹少了，虔诚的询问多了。因为每个人都意识到，在这个人生的转折点上，我们必须做一个行者。只有做一个行者，我才能将理想的种子用自己的汗水灌溉成艳丽的花朵，我们才不会在以后追悔莫及。
做一个行者，用汗水铸造成功;做一个行者，让青春绽放光彩;做一个行者，让生命释放光芒。
巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium)，为革兰氏阳性菌，属于芽孢杆菌属（Bacillus)。它能够形成芽孢，其芽孢的抗辐射能力是的36倍。工业上用于生产葡萄糖异构酶，同时也是有机磷的分解菌，因此，在农业上可用于制造磷细菌肥料。应用作物 ：生姜、兰花；防治对象 ：生姜细菌性青枯病、兰花炭疽病病。
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巨大芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的区别性质不同、生理特征不同、应用不同。1、巨大芽孢杆菌属于类芽孢杆菌属，是一种产芽孢的革兰氏阳性细菌。是一类生理特性多样的杆状细菌，也是土壤与植物微生态的优势种群之一。2、枯草杆菌是芽孢杆菌属的一种，广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖而得名。
平板应该至少做3个平行样涂布，三个中有2个长1个菌落，按100cfu/g计算结果，如果两个不长，可以按<100cfu/g计算。
食品中蜡样芽胞杆菌的检测实验目的。1、掌握蜡样芽孢杆菌检验的主要步骤与方法。2、了解蜡样芽孢杆菌菌落特点和掌握生化反应结果的判断方法。
一般按照最高的计算