1、确定选题
选题的基本原则就是尽量精确，研究范围不要太大，找那种你似乎懂一点又不懂一点的题目，最后拟定一个看起来十分高大上的长短适中的标题(标题元素可包含理论框架、研究问题、研究对象)。
2、写一个引人入胜的引言
引言一般包括读者需要知道的相关研究背景信息、你研究的问题、使用的研究方法、文章的结构介绍，顺带点一下自己研究的创新点。
3、文献综述
文献综述是论文里比较令人头疼的part，因为好的文献综述是建立在读了很多文献的基础之上的。你可以尝试先在知网、万方、维普、谷歌学术、学校的图书馆资源上找找文献，去实地的图书馆找也是可以的。
4、实验步骤
你可能会做一个实验，那就把实验过程具体写一下，比方说用了什么实验设备、谁是实验对象、得到了什么是实验结果，原则是别人能根据你写的实验步骤得到你的实验结果，学术地说就是你的实验应该是可以复现的。
如果不打算设计实验的话，可以弄个案例分析鸭。分析前的一part可以加一个理论框架解释，这样会让人觉得你的分析还是有点学术依据的。这个方法的关键是自圆其说。
5、讨论
解释你的实验结果，加工并分析你呈现的原始数据，这个部分要写得通俗易懂，但是用点学术化的语言。
6、结论
传说有经验的答辩老师拿到论文是先扫结论，所以结论务必好好写!!!你在研究开始之前，可能写在引言里或另开了一章，提出了一些2-4个研究问题，结论就是你回答这些研究问题的地方了!
7、改格式环节
对应学校给的格式要求一个一个改文内标注和参考文献格式，字号、字体、行距、缩进、加粗不加粗、空行不空行、斜体不斜体、标点全角还是半角等等都要好好检查。还有，引用了的文献一定要在最后的参考文献列表中出现啊，否则会被说抄袭，可别因为粗心就背上了这种锅。
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如果能有实验这一方面的材料，那么你的论文更具有说服力，当然是好的，如果没有根据自己的推算和预测也能得到一定的结论，这个结果也是不错的。
化学类毕业论文有两种类型，一种是通过做实验写研究型论文，另一种是通过写综述来完成论文。可以根据你的实际情况与老师商量来确定用哪种方式做哪个方面的课题。
1、用好样式
编写论文，一定要使用样式，除了Word原先所提供的标题、正文等样式外，还可以自定义样式。
一般情况下，不论撰写学术论文或者学位论文，相应的杂志社或学位授予机构都会根据其具体要求，给论文撰写者一个清楚的格式要求。比如，要求宋体、小四，行间距17磅等等。这样，论文的撰写者就可以在撰写论文前对样式进行一番设定，这样就会很方便的编写论文了。
2、使用交叉引用设置编号
一定不要自己敲编号，推荐使用交叉引用，否则手动输入的编号极可能给你文章的修改带来无穷的后患。标题的编号可以通过设置标题样式来实现，表格和图形的编号通过设置题注的编号来完成。在写"参见第x章、如图x所示"等字样时，不要自己敲编号，应使用交叉引用。这样做以后，当插入或删除新的内容时，所有的编号和引用都将自动更新，无需人力维护。并且可以自动生成图、表目录。
3、对齐
一定不要用手动敲空格来达到对齐的目的。只有英文单词间才会有空格，中文文档没有空格。所有的对齐都应该利用标尺、制表位、对齐方式和段落的缩进等来进行。如果发现自己手动打了空格，一定要谨慎，想想是否可以通过其他方法来避免。同理，一定不要通过敲回车来调整段落的间距。
4、绘图技巧
论文中会用到很多图表，强烈建议论文撰写者分清论文中的图形和表格，表格可以使用Word提供的工具进行编写，很简单，这里就不再赘述了。框图和流程图的编辑，强烈建议使用Office 2003中绑定的Microsoft Office Visio Professional 2003画。如果不能忍受Visio对象复制到Word的速度，还可以试试SmardDraw，功能不比Visio弱，使用不比Visio难，速度却快多了。
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Word长文档制作的4大步骤：1、制作长文档的纲目结构；（将视图方式切换到大纲视图，输入1级标题，默认为1级标题，完毕后输入2级标题，将1级标题变为2级标题的方法是按“TAB键”，注：降级按“TAB键 ”，升级按“SHIFT+TAB”键，把所有的二级标题输入完成后，含有下属标题的一级标题段落前面的段落控制符有原来的小矩形变成十字形，单击十字形，可选中该段落以及它的下属段落）2、为长文档设置多级标题编号；（长文档的多级标题输入完成之后，执行全选，选择菜单“格式→项目符号和编号”命令，打开“项目符号和编号”对话框，选择“多级编号”选项卡，选中第二行第二种编号方案然后单击“自定义”按钮，打开“自定义多级符号列表”对话框。选中“级别”列表框内的“1”，然后选择编号样式为“一、二、三”，在编号格式框内“一”字符之前输入“第”，之后输入“章 ”， 选中级别列表框内的“2”， 在“编号格式”框中可能显示的是“一.1 ”这样的编号格式，如果要把该2级标题段落的标号格式设置成正规的“ ”编号格式，则需要按下“高级”按钮，然后在“正规形式编号”复选框前打上钩即可。编号完成后，就可以切换到“页面视图”，进行文档正文内容的填充工作。）3、在文档中让插图自动编号及交叉引用题注；（为了让文档更具表达力，我们可能需要插入很多图片。插入图片之后，随之而来的工作就是为插图编号，用Word的术语讲，针对图片、表格、公式一类的对象，为它们建立的带有编号的说明文字，即称为“题注”。通俗的说法就是插图的编号。为插图编号后，还要在正文中设置引用说明。引用说明文字和图片是相互对应的，我们称这一引用关系为“交叉引用”。具体设置为，插入图片，选中图片，单击右键，在弹出的菜单中选择“题注”命令，打开“题注”对话框。假设我们需要的编号格式为“如图1、如图2”等，那么单击“新建标签”按钮，在弹出的“新建标签”对话框中输入“如图”，注意不要输入任何数字，实际编号的数字Word会自动处理的。输入完成后单击“确定”返回“题注”对话框，由于我们希望每次插入图片后Word能够自动为插图编号，所以单击“自动插入题注”按钮，在打开的对话框中进行设置。在插入时添加题注列表框中勾选“Microsoft Word图片”复选框，然后选择使用标签为“如图”，默认的编号输入为“1、2、3”，如果你要更改编号数字，可以单击“编号”按钮，在弹出的对话框中进行设置。设置完成，单击“确定”后返回Word编辑窗口。以后插入图片时，Word就会自动为它们添加编号。接下来把光标定位到第2张图片的插入位置，插入第2张图片，也可以看到Word自动在它下方添加了题注“如图2”。插入所有图片之后，接下来为图片设置引用说明。将光标定位于正文中需要添加插图1引用说明的位置，选择菜单命令“插入→引用→交叉引用”命令，打开“交叉引用”对话框，在“引用类型下拉”列表内选择“如图”，在“引用内容”下拉列表内选择“只有标签和编号”，然后在“引用哪一个题注”列表框内选中“如图1”，单击“确定”，这时“交叉引用”对话框并没关闭，我们可以把插入点定位于需要添加图2的引用说明的位置，然后选中“引用哪一个题注”列表框内的“如图2”，单击“插入”按钮即可为如图2添加引用说明。用同样的方法为其它插图在正文中添加引用说明。使用交叉引用的好处是：如果删除其中某一个图片，包括它的题注以及引用说明。如果我们是用常规方法手动为插图输入题注和引用说明，那么现在被删除的这幅图片后面的所有插图的题注和引用说明的编号就都不对了，需要重新手动修改。不过由于前面我们是使用的是Word自动添加题注以及“交叉引用”功能为插图添加的引用说明，所以现在就只需把文档内容全部选中，按下键盘“F9”，Word就可以自动更新域，让后面的题注和引用说明中的序号自动更新为正确状态。）4、为长文档编制目录和索引。（所谓“目录”，就是文档中各级标题的列表，它通常位于文章扉页之后。目录的作用在于，方便阅读者可以快速地检阅或定位到感兴趣的内容，同时比较容易了解文章的纲目结构。 所谓“索引”，就是以关键词为检索对象的列表，它通常位于文章封底页之前。索引的作用在于，阅读者可以根据相应的关键词，比如人名、地名、概念、术语等，快速定位到正文的相关位置，获得这些关键词的更详细的信息。在我们使用过的中学数理化课本中，最后通常都有索引，列出了重要的概念、定义、定理等，方便我们快速查找这些关键词详细信息。 如果“手动”为长文档制作目录或索引，工作量都是相当大的。而且弊端很多，比如当我们对文档的标题内容更改后，又得再次更改目录或索引。文档目录通常位于文档正文内容之前，于是将插入点定位于文档首行，按下键盘“Ctrl+Enter”插入了一个分页符，然后在文档首行适当位置输入“目录”，设置为“居中对齐”。 将插入点放在“目录”下方恰当位置，选择菜单“插入→引用→索引和目录”命令，打开“索引和目录”对话框，选择“目录”选项卡，在“目录”选项卡里我们可以设置与创建目录相关的内容。比如可以单击“格式”框的下拉箭头，在弹出的下拉列表中选择Word中预先设置的各种目录格式，通过预览区可以查看相关格式的生成效果。单击“显示级别”框的选择按钮，可以设置生成目录的标题级数，单击“制表前导符”框的下拉箭头，可以在弹出的列表种选择一种选项，设置目录内容与页号之间的连接符号格式，完成与目录格式相关的选项设置之后，单击“确定”按钮，Word即可自动生成目录，6 目录生成后，也许外观并不符合我们的要求，在这种情况下，我们可以方便地根据自己的要求进行更改。用和前面相同的方法进入“索引和目录”对话框，并选择“目录”选项卡，单击“修改”按钮。在打开的“样式”对话框中，由于我们要对目录中一级标题文字进行修改，故选中样式列表框中的“目录1”，然后单击“修改”按钮，最后，值得注意的是，如果当目录制作完成后又对文档进行了修改，不管是修改了标题或正文内容，为了保证目录的绝对正确，请对目录进行更新。操作方法为：将鼠标移至目录区域单击右键，在弹出的菜单中选择“更新域”命令，打开“更新目录”对话框，选择“更新整个目录”单选框，然后单击“确定”即可更新目录）
搜索：长文档的编辑
完成一篇毕业论文大体要经过以下几个主要步骤： 一、选题有三个原则： 价值性：选题要有科研价值、有社会需求； 创新性：选题应是新领域探索、空白填补、通说的纠正（推陈出新）、前说的补充（丰实完善）； 可行性：个人条件、实践性调查、资料占有条件、指导教师条件。 总之，要根据自己所具备的能力选择大小、深浅、适度的课题。而且要注意：课题易小不宜大；课题深浅要适度；选题应以所学专业科内容为主；选题课题的时间要适当（大三专科写作时间4--8周内完成）；论文的长短看需要（4000字以上）。 二、搜集资料途径：一是通过社会调查；二是通过大量阅读、查阅文献资料。 （一）社会调查调查的对象内容：专业、论文需要确定对象内容；调查的方式与方法：蹲点、泡面、提问等。 （二）读、查资料文献：精选；选摘要点、观点；研究消化作为我所用“提炼过程。” 三、确立论点、选定材料 （一）明确论点是关键（论点明确） （二）明立论点要力求正确、有新意（观点新颖----最近两年的热点问题） （三）确立论点要写出论点句。总论点----分论点 例：著名经济学家于兴远题目《在决心进行经济体制改革之后》（总论点） 分论点分三层：明确改革方向；对新经济体制进行全面设计；制定实施改革的步骤。 （四）根据论点筛选材料(丰实-——翔实——提炼) 四、编写写作提纲 （一）拟定标题写出论点 （二）确定层次分出段落 （三）取舍材料列示论据 （四）理顺文脉合理布局 （五）运用简明概括性语言（专业语言下面有提到） 五、撰写初稿（草稿是成功的关键——要注意结构层次和语言文字） （一）结构要严谨、层次要分明 （二）毕业论文的语言特点： 1、准确、客观、严谨 2、规范、统一性、标准性 3、简明、严简意骇 4、平实、自然质朴（与文学作品不同） 5、生动、语言鲜明、实有生气 六、修改定稿 （一）观点符合马列主义、毛泽东思想、邓小平理论和社会市场经济基本原理。 （二）中心论点是否正确、鲜明、深刻是否有所创新；标题是否恰切“画龙点睛。” （三）论证是否充分、理论、实事——摆事实、讲道理（至少有两个以上案例）。 （四）结构是否完整、严谨；层次是否清楚、条理；思路是否连贯、流畅。 （五）布局是否合理——详略得当。 （六）语言是否符合论文的要求；文字、标点运用是否恰当、准确；文面书写是否规范。 （七）引用资料是否准确。 七、毕业论文质量等线与成绩评定 （一）等级：优、良、及格、不及格（不及格不予毕业） （二）质量从五个方面衡量 1、科学性——学术水平 2、创新性——观点新颖或具有前瞻性。 3、实用性——理论联系实际 4、技术性——提炼、分析问题的能力、解决问题的能力 5、逻辑性——结构、层次前后呼应，论点、论据、结论 八、毕业论文（作业）写作的基本要求 （一）格式要求：可以采用论文形式或者调查报告的形式。 （二）内容要求：（1）论文要求在所学专业范围内选题 （2）论述中既有专业理论观点分析又要有实验分析（理论联系实际两个以上案例） （三）结构要求：无论采用论文形式还是调查报告的形式均应做到结构条理清晰，总论点、分论点鲜明具体。 （四）篇幅要求：4000字以上，但也不要过于冗长。 （五）书写要求：字迹工整、段落格式规范、标清页码。
首先是选择课题。选题是论文撰写的第一步，它实际上就是确定“写什么”的问题，即确定研究的方向。如果“写什么”不明确，“怎么写”就无从谈起，故而，选题是论文撰写成败的关键，而论文题目就显得十分重要，必须用心斟酌选定。其次就是研究课题。研究课题一般程序是：1.搜集资料(查阅图书馆、资料室、通过网络等多渠道获取资料，做实地调查研究、分析观察来搜集具体、细致的资料);2.研究资料(对所搜集到的资料进行全面浏览，并对不同资料采用不同的阅读方法来获取可用信息，要以书或论文中的论点、论据、论证方法与研究方法来触发自己的思考);3.明确论点和选定材料(在研究资料的基础上，提出自己的观点和见解，根据选题，确立基本论点和分论点。提出自己的观点要突出新创见，创新是灵魂，不能只是重复前人或人云亦云)。最后是执笔撰写、修改定稿。执笔之后，修改是一个非常重要的过程，在这期间要无数次的找导师商谈、指导。修改从形式上看是写作的最后一道工序、是文章的完善阶段，但是从总体来看，修改是贯穿整个写作过程的。写作一般可分为四个阶段，在每一个阶段都应该加强修改功夫：1.酝酿构思中的修改;2.动笔后的修改;3.初稿后的修改;4.在指导老师指导下修改。经过这些步骤后，一篇论文的框架就基本构成了，但是还没有最终的完成，还得根据各个专业的论文写作规范，去进一步完善，润色，各个部分的写作格式将在下文做出说明。学位论文包括前置部分、正文部分、附录部分、附件等。针对日语专业特点，某些环节另有其具体要求，如：前置部分包括封面、扉页、中文摘要、日文摘要、关键词、目录，必要时还需要插图索引和附表索引;正文部分包括引言或绪论(はじめに)、正文、结论、致谢和参考文献。在语言与文体上也有具体要求：毕业论文一般使用书面语(书き言叶)，用词要准确、简练，避免使用华而不实的'语言。所用术语和名称应当前后一致，必要时对其作出界定或说明。一般使用文章体的简体(である体)。
首先，论文的开端――选题 1 价值性原则 对于拿学位的人来说，写论文不单单是完成任务，更主要的是论文的内容要具有价值性，所以在选题时，不单单要看难易程序，要从两方面考虑其价值，即理论价值或者应用价值，这里以应用价值为首选，否则写出来的东西将没有实际应用和交流的意义，那么纵使华丽丰富，也是华而不实，所谓应用价值就是针对现实中的问题，当下社会中出现的问题，做到理论联系实际去分析。 2 可行性原则 选题时要充分考虑主、客观条件，即要选择那些客观上需要，主观上又有能力完成的题目。 所谓客观条件主要是写作的时间、地点、环境；主观条件包括个人的才能、学识和所掌握的材料等。只有量力而行，才能有所发挥。 在这里试举一例，如学企业管理专业的学生，可以选题的范围非常广，你可以从企业的产、购、销等流程某一环节入手，从财务、人员、工序、战略等等方面入手，当然时下人们比较关注的是人才的引进和培养，以及外资的合作上，那么就可以在此基础上提出有价值性的问题来讨论，但如果你只是感兴趣，却对此知之甚少的话，最好放弃，从其它入手，否则很难有始有终，最后只能中途放弃。 其次，当选题确定后，接下来就是搜集材料。材料从哪里来？途径有三： 1 来源于生活。 生活是取之不竭的素材来源，尤其对于已经有一定的工作经验的人来说，许多的实践经验，将是写作中的最鲜明的好材料。 2 来源于书本和网络 书中自有黄金屋，当你的选题已经确定，便可以寻这条线索，去查找相关的书籍、报刊，把它们汇聚在一起，自然会在阅读中寻出文章的脉络来，当然，提醒你，在阅读中做笔记是个事半功倍的好办法，这样当你在回头想起什么时，不会海里寻针，同时对于论文最后的参考出处也会水到渠成。另外，由于目前网络的发达，在网上找资料也变得很方便，但一般来讲网上资料不易过多，这样可能会使你的文章权威分量下降。最后，最好在阅读前了解毕业论文对于文献的数目分量和来源要求，这样在查找时可以准备出允足的数量和比例安排，才不至于最后麻烦。 3 来源于一手资料。 在有些论文的写作中，学校要求学生亲自做一些调查和采访，这样的材料就是一手材料，那么上面所提到的第二种途径可以称之为二手材料。一般来说，如果学校没有特殊要求，最好是以二手资料为主，因为相比于自已所做的调查，其一不但耗费精力、物力、财力，更主要的是不一定可以说明问题的实质。 第三步下来，就是立意。 当你寻着选题方向备好资料并阅读后，从中你会发现你要写的问题可以是什么，有的时候会有好几个，那么在选择时就要注意几个原则： 1 符合现实需要，体现时代精神。 2 反映客观事物本质。 3 要有独到的见解。 这里就不多说了，主要说说下面文章框架的建立吧。 第四，谋篇布局 所谓谋篇布局，就是考虑和安排文章的整体结构。结构是文章的骨架。确定了主题，选定了材料，接着就要把文章的框架搭起来。 一般来说，毕业论文是遵寻：提出问题→分析问题→解决问题，三部分来安排的，开头和结尾会有摘要和结论，当然根据各人的不同情况，也不能一概而论。无论怎么样，一定切记脉络清楚，符合一定的逻辑性，而不能忽东忽西，杂乱无章，而且还要做到在安排结构时，做为重点段落要多着笔墨，有详有略，重点突出，这样才能做到文章层层深入，发展流畅，并且赏心阅目。 以下介绍一下构局要点： 安排结构的基本要求是：(一)要围绕主题安排结构；(二)要有明确、清楚的层次；(三)要完整、自然、严密。 第五，起草论文。此前的一切工作准备就绪后，就可以开始动笔了。把思绪沉淀下来，不要顾虑什么，只要一气把它写下来就好。 第六，修改。好文章都是改出来的，没有哪一个作者可以写完就订稿，修改是无论什么写作都必需经过的程序。然而修改也不是盲目的，当一篇文章完成后，你可以试着从以下方面入手： 1 斟酌主题。 主题是文章的价值所在。主题要正确、鲜明、深刻、集中、新颖。主题如果有问题，就非改不可。 2．掂掇材料。可以从以下几点： ＊ 引用材料的地方是否恰当，是否可以说明问题 ＊ 看是否有还需要增、删材料的地方 ＊ 全文引用材料比例是否合适，一般来说不易过多，当然太少也不会有说明力 ＊ 材料引用出处是否完整，正确 补充一下，一般引用的材料都要有一定的介绍或分析在里面，这样才能使材料更加有说服力，在修改时需要注意。 3．调整结构。 畅读全文，思考结构安排是否合理，如有不妥之处，还需要进一步调整。 4．锤炼语言。 语言是思想的载体。在修改中，要注意那些罗嗦，烦琐、空话、长话、粗糙的语言地方，以及错字、多字、标点不合适的地方，努力把它们修改得简洁、准确、清楚、正确，这样才能使一篇文章更鲜明，阅目起来。
论文撰写步骤：
一、论文的标题部分
标题就是题目或题名，标题需要以最恰当、最简明的词语反映论文中重要的特定内容逻辑组合，论文题目非常重要，必须用心斟酌选定。
二、论文的摘要
论文一般应有摘要，它是论文内容不加注释和评论的简短陈述。摘要应该包含以下内容：
1、从事这一研究的目的和重要性
2、研究的主要内容
3、完成了哪些工作
4、获得的基本结论和研究成果，突出论文的新见解
5、结构或结果的意义
三、论文关键词
关键词属于主题词中的一类，主题词除关键词外，还包含有单元词、标题词和叙词。关键词是标识文献的主题内容，单未经规范处理的主题词。
四、引言
又称为前言，属于正片论文的引论部分。写作内容包括：
1、研究的理由
2、研究目的
3、背景
4、前人的工作和知识空白
5、作用和意义
五、正文部分
论文的主题，占据论文大部分篇幅。论文所体现的创造性成果或新的研究结果，都将在这一部分得到充分的反映，要求这部分内容一定要充实，论据充分可靠，论证有利，主题明确。
六、参考文献
参考文献是文章在研究过程和论文撰写是所参考过的有关文献的目录，参考文献的完整标注是对原作者的尊重。不只在格式上有具体要求，在数量、种类、年份等方面又有相关要求。
毕业论文的步骤
WB实验是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）将混合蛋白质样品分离后，利用特殊虹吸或电场装置印迹至固相介质（例如PVDF膜）上，再以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原。
与相对应的第一抗体特异性结合，之后再与酶或同位素标记的第二抗体相结合，最终通过底物显色或放射自显影来检测特异性目的基因表达的蛋白成分。
蛋白质样品制备
原始样品可为细胞、组织、培养上清、免疫沉淀或亲和纯化的蛋白，以下为定性检测目的蛋白时细胞样品的处理方法，其余的样品制备方法参阅相关文献。
1.培养细胞或药物处理。
2.弃培养基，用1X PBS漂洗细胞2次，去尽残留培养基。
3.加入1X SDS样品缓冲液，刮落细胞，转移到Ep管。注意：冰上操作。
4.超声10~15秒剪切DNA以减低样品粘性。
5.煮沸样品5min。
6.离心12000g，5min，取上清。
SDS-PAGE电泳
一、清洗玻璃板
二、灌胶与上样
1. 玻璃板对齐后放入夹中卡紧。然后垂直卡在架子上准备灌胶。
2. 配 10％ 分离胶，加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。灌胶时，可用10ml枪吸取5ml 胶沿玻璃放出，待胶面升到绿带中间线高度时即可。然后胶上加一层水，液封后的胶凝的更快。
3. 当水和胶之间有一条折射线时，说明胶已凝了。再等3min使胶充分凝固就可倒去胶上层水并用吸水纸将水吸干。
4. 配 4％ 的浓缩胶, 加入 TEMED 后立即摇匀即可灌胶。将剩余空间灌满浓缩胶然后将梳子插入浓缩胶中。待到浓缩胶凝固后，两手分别捏住梳子的两边竖直向上轻轻将其拔出。
5. 用水冲洗一下浓缩胶，将其放入电泳槽中。
6. 在电泳槽的上、下槽中加入1×Tris-甘氨酸或SDS电泳缓冲液，上样。
7. 连接电泳槽到电泳仪。上槽接负极,下槽接正极，通电起始电压70～ 80V，10min后100V，电泳2h或当溴酚蓝迁移至离底部1cm时，停止电泳。
转膜
1. 将胶浸于转移缓冲液中平衡 10min。注意：若检测小分子蛋白，可省略此步，因小分子蛋白容易扩散出胶。
2. 依据胶的大小剪取膜和滤纸6 片， 放入转移缓冲液中平衡10min。如用PVDF 膜需用纯甲醇浸泡饱和 3-5 秒钟。
3. 装配转移三明治:海绵3层滤纸胶膜，3层滤纸海绵，每层放好后，用试管赶去气泡。切记:胶放于负极面(黑色面)。
4. 将转移槽置于冰浴中，放入三明治(黑色面对黑色面)，加转移缓冲液， 插上电极，100V，1h(电流约为 )。
5. 转膜结束后，切断电源，取出杂交膜。
封闭与杂交
1.用25ml TBS 洗膜5min，室温，摇动。
2.置膜于25ml 封闭缓冲液中1h, 室温，摇动。
洗3次(5min/T)。
4.加入合适稀释度的一抗，室温孵育1-2h或4°C过夜，缓慢摇动。
TBS/T洗3次(5min/T)。
6.加入合适稀释度的碱性磷酸酶(AP)或辣根过氧化酶(HRP)标记的二抗，室温孵育1h，缓慢摇动。
TBS/T洗3次(5min/T)。
TBS洗1次。5
显色
将 A、B 发光液按比例稀释混合。膜用去离子水稍加漂洗，滤纸贴角吸干，反贴法覆于 A、B 混合液滴上，熄灯至可见淡绿色荧光条带（5min 左右）后滤纸贴角吸干，置于保鲜膜内固定于片盒中，迅速盖上胶片，关闭胶盒，根据所见荧光强度曝光。
取出胶片立即完全浸入显影液中 1～2min，清水漂洗一下后放在定影液中至底片完全定影，清水冲净晾干，标定Marker，进行分析与扫描。
WB 中常见的问题以及处理办法。
一、信号强度低
信号强度低是指在正常曝光条件下得到的目的条带微小或是没有目的条带，而增加曝光时间又会招致背景高、杂带多等问题。扫除试剂质量、操作失误等方面的影响，这一类问题产生的主要缘由如下：
① 样本蛋白表达量缺乏。倡议添加蛋白表达量较高的细胞系作为阳性对照，或是恰当增加上样量以取得较高程度的信号；
② 蛋白质降解。在蛋白样品制备期间留意蛋白酶抑止剂 PMSF 的运用，所制备的样品尽快检测或妥善保管；
③ 蛋白的转膜。运用恰当孔径的膜，同时优化转膜时间，关于高分子量蛋白可能需求更长的转膜时间。
④ 抗体的运用。抗体的反响种属与实验类型需求可以满足实验的需求，此外，抗体的稀释比、孵育时间等问题也需求在实验中不时优化；
⑤ 蛋白与抗体分离率低。减少洗膜次数或缩短洗膜时间，降低洗膜液中 NaCl 浓度等；
⑥ 抗原被封锁液遮盖。换用不同的封锁液，优化封锁液中蛋白质浓度并缩短封锁时间；
⑦ 甲醇浓渡过高。会招致蛋白质与 SDS 别离，并沉淀在凝胶中，同时使凝胶收缩或变硬，从而抑止高分子量蛋白的转移。实验中可恰当降低甲醇浓度或者运用乙醇、异丙醇替代。
二、非特异性条带或条带位置不对
WB 结果中目的条带之外的条带被称为非特异性条带，有时非特异性条带很明显，却没有目的条带，这些状况对结果剖析会产生很大的干扰。普通来说惹起这类问题的主要要素有：
① 抗体的非特异性分离。通常以为，多抗的特异性不如单抗，更容易产生非特异性条带，而恰当降低抗体的浓度有助于减少杂带。同时为了扫除二抗非特异性分离的可能，倡议设二抗阴性对照；
② 样品蛋白量过高。恰当降低上样量，同时延长洗濯时间与封锁时间可防止蛋白量过高对实验结果的不良影响；
③ 蛋白质降解。会招致条带位置变化并产生更多杂带，倡议采用新颖制备的或是冻融次数较少的样品；
④ 细胞传代次数过多。会招致蛋白表达形式的分化，倡议运用原始或传代少的细胞株；
⑤ 蛋白存在复合物。有的目的蛋白会和其他蛋白分离构成复合物，招致条带位置改动，需求查阅相关文献来肯定蛋白能否会构成稳定复合物；
⑥ 蛋白存在剪接体或多种修饰方式。局部蛋白存在剪切位点，有的剪切体具有免疫活性，在 WB 中也会被检测出。此外有的目的蛋白会存在糖基化位点或其他修饰位点，条带大小可能会远超理论分子量。因而需求查阅文献或是 uniprot 来得知蛋白的剪切体大小以及修饰位点等。
三、背景过高
在局部 WB 结果中，条带之外本应是空白的背景也会有较深的颜色，对剖析结果会产生干扰，而且结果图不美观，难以用于文章发表。这种问题的可能缘由有以下几点：
① 封锁不充沛。背景过高的主要缘由之一是封锁有问题，倡议运用适宜的封锁剂（脱脂奶粉、BSA 等），优化反响浓度与封锁时间，同时留意防止呈现抗体与封锁剂的穿插反响，以及封锁剂与含有目的抗原，内源性生物素或者与抗生物素蛋白/链霉亲和素不相溶等问题；
② 洗膜不充沛。恰当增加洗膜次数弛缓冲液体积，进步吐温20的百分比可改善由洗膜不充沛招致的背景高的问题；
③ 抗体的运用。一抗浓渡过高是高背景的缘由之一，且二抗也存在与封锁剂非特异性分离的可能，因而倡议恰当优化一抗浓度，并设二抗阴性对照；
④ 曝光时间长。倡议在实验中采用适宜的曝光时间。
四、条带弥散或外形怪异
有时 WB 结果图中条带位置契合预期，但却由于条带弥散、外形怪异等要素招致无法运用，呈现这种状况多半是制胶或电泳过程出了问题，详细如下：
① 电泳时电压、电流过高。会招致条带迁移速率过快以及 SDS-PAGE 温度升高，并可能使得条带弥散、外形变形。倡议运用适宜的电泳条件并坚持低温；
② 电极不均衡。会招致条带偏斜，上样时在无样品的胶孔中参加等量样品缓冲液可防止这种状况；
③ 上样量过高，样品中盐离子浓度较大。上样量过高可能会招致条带弥散，样品中的盐离子浓度不分歧则会招致条带不齐等问题。因而在上样时需保证样品量分歧且恰当，并坚持相同的、较低的盐离子浓度。
④ 制胶问题。在配胶时一定要保证充沛混匀，平均凝胶，上样前用针头将胶孔拨正并吹出胶孔中的气泡。
⑤ 电泳缓冲液寄存过久。电泳实验中的缓冲液假如放置过久也会对结果有不良影响，因而倡议及时改换新的缓冲液。
五、膜上分布不平均的污点
有时在 WB 做出结果后，除了目的条带以外，膜上还散布着不规律的污点，对结果也会有较大的干扰。这类问题产生的主要缘由有以下几点：
① 试剂、仪器等污染。倡议在每次实验前后留意清算实验仪器，同时及时改换呈现问题的试剂；
② 转膜时有气泡。确保在转膜过程中将气泡扫除洁净；
③ 抗体孵育时与膜接触不充沛。确保在抗体孵育过程中，液体总量足够，同时将抗体平均配置，并在摇摆的条件下停止孵育；
④ 曝光时间。过度曝光会招致斑点更明显，倡议采用适宜的曝光时间；
⑤ 膜枯燥。实验中要保证有充沛的反响液，防止呈现干膜现象。
你好，论文并不一定需要做实验来验证。但是，一定要有一定的依据和想法，只有这样才能够让人觉得这篇论文有一定的可行性，从而让别人认可和欣赏这篇论文。不然的话，既没有实验证实，也没有一定的依据，那写出来的论文，别人也是不会欣赏的。希望能够帮到你。
不一定。研究生分学术型和专业型，专业型硕士研究生毕业论文就不一定要有实验内容，高质量的临床研究也能毕业并获得学位。
需要。机械设计及理论研究生有项目可以做实验的。机械设计及理论研究生的研究方向主要有仿生设计，实时机器视觉，摩擦学原理与应用，高速、高精度智能控制。