茚三酮显色法。
游离氨基酸总量测定常用方法为茚三酮显色法，氨基酸为水溶性物质，在pH为8.0的缓冲溶液中与茚三酮同时加热，可形成紫色络合物，在吸收波长570纳米处可检出光密度值，从而计算出游离氨基酸总量。
天然产的氨基酸的结构上都具有共同特点在羧基邻位α—碳原子上有一个氨基，因此称α—氨基酸。天然蛋白质由不同的α—氨基酸，通过肽键结合而成的复杂高分子化合物，结构和组成十分复杂。
扩展资料：
游离氨基酸测量要求规定：
1、近红外光波长介于可见区与中红外区之的电磁波，波数范围为12500～4000cm。近红外光谱(NIR)分析技术为一种间接的分析技术，通过建立校正模型对样品进行定性或者定量分析。
2、利用酶标记的抗原或酶标记的抗体作为主要试剂，通过复合物中的酶催化底物呈色反应来对待测物质进行定性或定量。
3、将生物识别元素与目标物质结合的物理传感器，具有高特异性和灵敏度、反应速度快、成本低等优点。
参考资料来源：百度百科-游离氨基酸
参考资料来源：百度百科-游离氨基酸总量测定
饲料中的蛋白质包括真蛋白和非蛋白氮（NPN）,一般来说氨基酸的总和在一定程度上反映真蛋白的含量（当然要除去添加的合成氨基酸）,你所说的总蛋白指的是就是粗蛋白.非蛋白氮包含一些含氮的生物碱、嘌呤和嘧啶等,当然也包括饲料中的游离氨基酸.
溶液中游离氨的测定方法是按照国家标准来测定的，这个国家标准我替你找来了，有链接地址，你去看看内容就知道了！标准编号:GB/T 8314-2002标准名称:茶 游离氨基酸总量测定标准状态:现行英文标题:Tea--Determination of free amino acids content替代情况:GB/T 8314-1987实施日期:2002-12-1颁布部门:中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局内容简介:本标准规定了对茶叶中游离氨基酸总量测定的原理、仪器和用具、试剂和溶液、操作方法及结果计算方法。本标准适用于茶叶中游离氨基酸总量的测定。
植物组织中游离氨基酸总量的测定如下：
测定植物体内游离氨基酸含量对研究植物在不同条件下及不同生长发育时期氮代谢变化、植物对氮素的吸收、运输、同化及营养状况等有重要意义。
【原理】
游离氨基酸的氨基可与水合茚三酮反应，产生蓝紫色化合物，其颜色的深浅与游离氨基酸的含量成正比。
【仪器设备】
分光光度计；电子天平；容量瓶25ml或50ml 3个；漏斗（直径6厘米）3个、滤纸适量；20ml刻度试管 7支；移液管0.5ml 3支、5ml 1支；试管架；玻棒；吸耳球；剪刀；移液管架；橡皮筋、塑料薄膜（封试管口）；吸水纸；擦镜纸适量；电炉；水浴锅（含铁丝筐）。
【试剂】
1. 3%茚三酮试剂
称3g茚三酮用95%乙醇溶解定容到100ml容量瓶里，贮于棕色瓶中。此试剂应放在冷凉处，不宜久放，使用期约10天。
2. 氰酸盐缓冲液（按以下方法配制）：
（1）NaCN贮备液0.01mol/L（490mg/L）。
（2）醋酸缓冲液：称360g醋酸钠（含三分子结晶水）溶于约300ml无氨蒸馏水中，加66.67ml冰醋酸再用无氨蒸馏水稀释至1L。
取溶液（1）20ml，用溶液（2）定容到1L。
3. 标准氨基酸 精确称取在80℃下烘干的亮氨酸13.1mg（或α-丙氨酸8.9mg）溶于10%的异丙醇中，并在100ml容量瓶中用10%异丙醇稀释至刻度，混匀，即为1mmol/L的标准氨基酸贮备液，置冰箱中保存。为了制备工作液，可取贮备液与等量无氨蒸馏水混合，此液浓度为0.5mmol/L，即1ml含氨基酸0.5μmol，或氨基氮7μg。
4. 95%乙醇；5.异丙醇（分析纯）。
标样对比.初断.
茚三酮法是比较粗糙的方法，如果你只是想知道含量，不测序，你有HPLC，为什么不用HPLC，先过标准品，再测你样品的水解产物，多方便。
1. 分光光度法氨基酸检测：主要是利用氨基酸与衍生剂发生化学反应，产生蓝紫色化合物，该化合物在某一波长处有最大吸收峰，根据吸收值大小得到氨基酸含量。常用的衍生剂为茚三酮。2. 毛细管电泳法氨基酸检测：根据分离原理的不同，可分为毛细管区带电泳、毛细管凝胶电泳、毛细管等电电泳、毛细管等速电泳以及胶束电动力学毛细管电泳。其中，毛细管区带电泳和胶束电动力学毛细管电泳可用于氨基酸检测。3. 近红外光谱法氨基酸检测：利用有机化合物的含氢基团在特定波长区域跃迁，产生光谱的变化，结合统计学方法间接地实现氨基酸的定量检测。4. 气相色谱法氨基酸检测：将氨基酸衍生化处理变为容易气化的物质，根据气态样品中各组分在流动相和固定相中的分配系数的不同，实现对氨基酸的定量分析。5. 高效液相色谱法氨基酸检测：是最常用的一种氨基酸检测方法。由于大多数氨基酸本身没有紫外吸收和荧光反应，因此需要对样品进行衍生化处理将其转化为有紫外吸收和发射荧光的物质，衍生可分为柱前衍生和柱后衍生。
具体我也没做过。不过可以提供你两个思路。第一是镜检，看形态。第二就是PCR，P它的16S亚基，可以很精确的分类。
我也在做这个，下面是我整理的，时间关系只能这样了，可以看看。都要求无菌操作 菌种的分离 取lmL卤汁以10倍递增稀释方法（一份酸奶，九份无菌水，再取一份第一只管中溶液，加九份无菌水，依次类推），将其稀释至1/10～10的-10次幂（我打不上去），然后从不同浓度稀 释液中分别取lmL倾注在平皿中，再倒入培养基相混合，待培养基凝固后倒置于30~C恒温下 培养48h。挑取长势良好的单个茵落划线分纯，直至纯化(茵落单个大小一致，革兰氏染色镜 检，茵体一致)。结果分离得到3株不同菌株，分别编号为菌株1、菌株2、菌株3。再分别转移 到试管斜面上进行保存。 分离用培养基：牛肉膏5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，蒸馏水1 000 mL，琼脂20g，pH7．0—7．2 ；保存用斜面培养基：酵母膏1％ ，碳酸钙2％ ，葡萄糖1％ ，琼脂2％ ，pH 7．0。 培养条件 将分离出的菌株1、菌株2、菌株3分别接种在上述4种不同的培养基上， 在30。【=恒温条件下培养48h后观察并测定其培养结果。 测定方法 菌落总数采用逐级稀释法来计数；pH值用pHS一2C酸度计测定；乳酸定性 及含量测定依据食品检验技术 1I．2．1乳酸菌的分离与筛选的试验程序 自然发酵酸奶---稀释---培养---挑起单菌落染色、镜检一挑 选革兰氏阳性球菌单菌落一Ⅲ号培养基一挑选溶钙圈大的球菌反复在Ⅲ号培养基上几次纯化筛选一单菌落优 良菌株一试管穿刺低温保存。 1．2 1．2 乳酸菌的鉴定 用光学显微镜、放大镜进行乳酸菌的形态特征鉴定。生理生化特征鉴定：产乳 酸定性试验——乳酸纸层析法0- 、过氧化氢酶(接触酶)反应�6�8、明胶水解反应 、硫化氢反应 、乳酸菌 发酵营养型试验0 、耐盐、酸、温度试验。 1．2．I．3 乳酸菌的保存�6�8 采用定期移植低温保藏法。培养基配方：葡萄糖1％ 、蛋白胨0 2％ 、 l(}l2PQ|0．2％、琼脂20％、pH值7 0，分装试管，121。c灭菌30min。将使用对数生长期后期的细胞进行穿刺 培养，然后密封存于冰箱玲藏室内(5qc左右)，2个月移植1次。 1．2．2 分离乳酸菌的生理特点试验 1 2 2．1 最适生长温度的测定OD值以同温下不接种培养基作对照，定期取出接种培养基在721分光光度 计上，用最大吸收光波长 =6001RIifl测定。 1．2．2．2 生长周期的测定oD值(方法同上)；pH值：PHB一4pH计；可滴定酸(以乳酸计)：吸取ImL菌液 加入9Ⅱ1L蒸馏水，加入1～2滴酚酞，用0．1NNaOH滴定。 1．2 2．3 最适pH值的测试、最适盐浓度的测试。 供试样品及培养基 分离用样品：酸奶、酸奶及西红柿均为市售 分离用培养基：①BCP培养基：酵母膏2 5g，蛋白胨5g，葡萄糖5g，溴甲酚紫0 04g，琼脂15g， 蒸槽水lO00ml，pH7 0；②MRS培养基见文献 。 菌种保藏用培养基：脱脂乳培养基：新鲜牛乳离心去掉上层乳脂，下层奶液分装试管，105℃ 灭菌20mln。 菌利 鉴定用培养基见文献 6。 1 2 方法 1 2 1 乳酸菌的分离纯化 取泡菜汁、酸奶、西红柿表面洗液进行梯度稀释，分别用倾注法、涂布 法和划线法在BCP和MRS培养基平板上进行菌种分离。挑取在BCP平板上有透明目的菌落，在 MRS平扳上有溶钙圈的菌落，反复纯化至纯种，挑菌至脱脂牛奶试管中保存 1．2 2 乳酸菌复筛对初筛菌株进行革兰氏染色，保留革兰氏阳性菌株．并对其所产乳酸能力进 行定性、定量分析，筛选出产酸高的菌株保存，再把产酸高的菌株经萝l、汁发酵 】，进一步选择产 酸高、_l】味纯正的菌株保存鉴定 1 2 3 乳酸定性测定果用纸层析法。溶剂系统为乙醇：浓氨水：水=80：5：15，显色剂为0 04％ 的溴甲酚紫酒精溶液。层析时将乳酸、柠檬酸配成1％ 的标准溶液，两种标准溶液 及乳酸发酵液 均点样3 ．上行层析，显色与标准样比较 1．2 4 乳酸的定量测定采用气相色谱法，利用苄酯化法制备乳酸衍生物，将待测乳酸菌株在产 酸培养基内37"C培养3d，离心。取上清液剃备衍生物，气相色谱分析含量。气相色谱工作条件为： EGS色谱柱，柱温160'C，气化温度180'17．，检测器温度l70"C，载气为N，。 1．2 5 菌种鉴定根据《简明第八版伯杰细菌鉴定手册》 和《一般细菌常用鉴定手册》[6 对复筛 出的菌株的形态、生理生化、碳源利用等方面进行系统鉴定，并提取乳酸菌株DNA，采用熔链温度
国际会议特邀报告：1. 2009年8月，第7届中日韩反刍动物瘤胃生理与调控学术研讨会Keynote speech，韩国，首尔。2. 2008年9月，第13届亚澳动物科学代表大会 (13th AAAP Animal Science Congress)作动物营养专题报告（invited paper），越南，河内。3. 2007年9月，第七届国际草食动物营养研讨会，大会特邀报告(plenary paper)，北京；发表的主要论文 (* 为通讯作者)1) Dai ZL, Zhang J, Wu G, Zhu W-Y*, 2010. Utilization of amino acids by bacteria from the pig small intestine. Amino Acids, 39 (5): 1201-1215.2) Huang RH, Qiu XS, Shi FX, Hughes CL, Lu ZF, Zhu W Y*. 2010. Effects of dietary allicin on health and growth performance of weanling piglets and reduction in attractiveness of faeces to flies. Animal, (first view)3) Pei CX, Mao SY, Cheng YF, Zhu W-Y*, 2010. Diversity, abundance and novel 16S rRNA gene sequences of methanogens in rumen liquid, solid and epithelium fractions of Jinnan cattle. Animal, 4(1):20–294) Sun YZ, Mao SY, Zhu W-Y*. 2010. Rumen chemical and bacterial changes during stepwise adaptation to a high concentrate diet in goats. Animal, 4(2):210–2175) Cheng Y F, Edwards J E., Allison G G., Zhu W-Y* and Theodorou M K., 2009. Diversity and activity of enriched ruminal cultures of anaerobic fungi and methanogens grown together in consecutive batch culture. Bioresource Technology, 100 (2009) 4821–4828.6) Lu Y, Sarson AJ, Gong J, Zhou H, Zhu W-Y, Kang Z, Yu H, Sharif S, Han Y. Expression profiles of genes in Toll-like receptor-mediated signaling of broilers infected with Clostridium perfringens. Clinical and Vaccine Immunology, 2009, 16(11):1639-1647.7) Iqbal MF, Zhu W-Y*, 2009. Characterization of newly isolated Lactobacillus delbrueckii –like strain MF-07 isolated from chicken and its role in isoflavone biotransformation. FEMS Microbiology Letters, 291 (2): 180-187, FEB 20098) Iqbal MF, Zhu W-Y*, 2009. Bioactivation of flavonoid diglycosides by chicken cecal bacteria. FEMS Microbiology Letters, 2009, 295, 30-41.9) Cheng YF, Mao SY, Liu JX, Zhu WY*, 2009. 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Isoflavonic phytoestrogens - new prebiotics for farm animals: a review on research in China. Current Issues in Intestinal Microbiology, 7:53-60.31) 毛胜勇，王新峰，朱伟云，2010. 体外法研究延胡索酸二钠对瘤胃微生物发酵活力及甲烷产量的影响。草业学报，19（2）：69-75。32) 毛胜勇，龙黎明，朱伟云，2010. 体外研究反刍兽新月形单胞菌及与酵母联用对瘤胃微生物发酵的影响。草业学报，19（8）：176-186。33) 陆扬，姚文，苏勇，朱伟云*, 2010. 大豆苷元对断奶仔猪胃肠道发育的影响. 南京农业大学学报，33(2):91-95.34) 成艳芬，朱伟云*，2009. 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皮下脂肪积累过多会导致肥胖，一血液中胆固醇的增高又会导致动脉硬化、冠心病等疾病。因此，常常一提到脂类，人们就会连连摇头。的确，体内脂肪过多是有害的，但脂类毕竟是人体必不可少的物质，对人体具有重要的生理意义。①体贮存能量和供给能量的主要场所。体脂主要分布于皮下、小肠膜、大肠膜及一些内脏器官的脂肪组织中，它为人体各种运动提供后备能量，所以通常被称作“脂库”。为什么说是提供后备能量呢？这是因为，人体消耗的能量首先来自糖元，只有当血液中的糖元容量减少到一定水平后，才开始利用体脂；但如肌肉和肝脏中的糖元已经能满足需要，则体脂是不轻易被动用的。②脂肪能保护内脏免受外界冲击。皮下和内脏器官周围都存在大量脂肪，这些脂肪成为内脏和外界的天然屏障，能缓解外界冲击。同时脂肪还可以起到固定内脏器官，防止其下垂的作用。③脂肪对保护人体体温有重要意义。人体体温必须常年维持在37℃左右，过高或过低的体温都会造成新陈化谢的紊乱，影响人体正常的生理功能。而脂肪传导热的能力非常弱，具有保持体温的作用。④一些人体必须的维生素和微量元素是非水溶性的，它们只有溶解在脂肪中才会被人体吸收利用。如果没有脂肪，这一些营养物质就得不到利用，只能白白浪费掉。⑤脂肪是人体各类腺体分泌物的重要源泉，特别是它能促进胆汁和腺岛素的分泌。为人体的正常生理功能作出重要贡献。⑥脂肪中所包含的类脂（胆固醇、磷脂）是人体细胞膜和大脑组织的重要组成成分，对人体细胞的正常功能和刺激的传递，都有重要意义。
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生物体内氨基酸的代谢主要是通过脱氨基作用和脱羧基作用两种方式进行的，脱氨基作用是指氨基酸脱去氨基，生成相应的α-酮酸的过程。生物体脱氨的方式非常多，常见的脱氨方式有转氨作用、氧化脱氨、联合脱氨、非氧化脱氨等，其中最重要的是联合脱氨。氨基酸脱氨之后可以生成丙酮酸、草酰乙酸、琥珀酰CoA等7种碳骨架，这些产物可以进入三羧酸循环彻底氧化分解，或者用于合成糖、脂肪酸、酮体等物质。
这样你确定通过的了？
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