发表广东药学院学报

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关于高良姜药材中4种有效成分的含量测定

【摘要】 目的 建立评价高良姜药材质量的含量测定方法。方法 采用DiamonsilTMC18柱(4.6 mm×200 mm，5 μm)，流动相为乙腈?0.2%磷酸溶液，梯度洗脱，流速1 mL/min，柱温30 ℃，检测波长为220 nm。结果：高良姜素、山 柰 素?4′?甲醚、5?羟基?7?(4?羟基?3?甲氧苯基)?1?苯?3?庚酮、5?羟基?1,7?双苯?3?庚酮的线性范围分别为0.267～1.328 μg、0.103 4～0.517 μg、0.310 8～1.554 0 μg、0.247 3～1.236 μg，平均回收率分别为100.9%、97.0%、96.8%、99.0%，RSD值分别为1.7%、1.4%、1.8%、0.6%。结论 该方法准确、简便，具有良好的重复性和稳定性，可用于高良姜药材的质量控制。

【关键词】 高良姜;高效液相色谱法;黄酮;庚烷;质量控制

Abstract: Objective To develop an HPLC method for characterizing the active constituents, namely, galangin, kaempferol?4?methyl ether, diphenylheptane A and diphenylheptane C, in Alpinia officinarum Hance. Method Samples were analyzed on an HPLC Diamonsil C18 column(200 mm×4.6 mm，5 μm) by using gradient elution of acetonitrile (A) and 0.2% aqueous phosphoric acid (B) at a flow rate of 1.0 mL·min-1.The diode?array detection was set at 220 nm. Results Galangin, kaempferol?4?methyl ether, diphenylheptane A and diphenylheptane C had good linearity over the ranges of 0.267-1.328，0.1034-0.517， 0.3108-1.554 and 0.2473-1.236 μg， respectively, and the average recoveries were 100.9%(RSD=1.7%)、97.0%(RSD=1.4%)，96.8% (RSD=1.8%) and 99.0%(RSD=0.6%)，respectively.ConclusionThe method is rapid，accurate and reproducible, which is helpful in the quality control of Alpinia officinarum Hance.

Key words: Alpinia officinarum Hance;HPLC;flavonoids;diarylheptanoids;quality evaluation

高良姜为姜科山姜属植物高良姜Alpinia officinarum Hance的干燥根茎，其性热味辛，归脾、胃经,具温胃散寒、消食止痛的功效，用于脘腹冷痛、胃寒呕吐、 嗳 气吞酸等[1]。高良姜黄酮和庚烷均具有调节钙离子释放、抗氧化应激、抗炎、调节免疫、抗病原微生物、抑制平滑肌刺激收缩、镇痛止呕等药理作用[2～5]。高良姜含有十多种黄酮类成分[6]和十多种二苯基庚烷类物质[7]，其中高良姜素、山 柰 素?4′?甲醚、5?羟基?7?(4?羟基?3?甲氧苯基)?1?苯?3?庚酮 (DPHA)、5?羟基?1,7?双苯?3?庚酮 (DPHC)含量比较高，因此本文选择这4个成分作为监控指标，采用HPLC法同时测定不同批号和来源的高良姜药材中的以上的2种黄酮类成分和2种庚烷类成分的含量，为全面准确控制药材质量提供了可行的依据。

1、仪器、试剂与材料

Waters2695/2996高效液相色谱仪，Empower工作站; BP210D型电子分析天平(德国Sartorius公司);高良姜素对照品、山 柰 素?4′?甲醚对照品、DPHA、DPHC对照品均为自制，经UV、NMR、MS确定化合物结构，以HPLC法按面积归一化法计，质量分数>98.0%;乙腈(色谱纯);超纯水;高良姜药材为各地收集的市售产品，经广东药学院中药鉴定教研室王凤云老师鉴定均为姜科植物高良姜的根茎。

2、方法与结果

2.1 溶液的'制备

2.1.1 对照品溶液的制备

分别精密称取高良姜素、山 柰 素?4′?甲醚、DPHA、DPHB、DPHC对照品，加甲醇制成每1 mL含1.068、0.414、1.243、0.248、0.989 mg的对照品储备液。分别精密量取上述对照品储备液各1 mL，置20 mL容量瓶中，加甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，制成对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液的制备

取不同批号的高良姜药材细粉约0.2 g，精密称定，加甲醇约40 mL回流提取2 h，放冷，过滤，滤液加甲醇定容至50 mL。摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.2 色谱条件

广东药学院学报，2008，24(5)第5期 陈平,等.高良姜药材中4种有效成分的含量测定色谱柱：Diamonsil TMC18色谱柱(200 mm×4.6 mm，5 μm);流动相：乙腈(A)?0.2%磷酸水(B)，梯度洗脱[0～30 min，A?B(39∶42);30～35 min，A?B(45∶55)]，检测波长：220 nm;流速：1.0 mL/min;柱温：30 ℃，进样量：20 μL。

2. 3 系统适应性试验

分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各20 μL注入液相色谱仪，计算理论板数及分离度，结果见表1、图1、图2。

2.4 线性关系的考察

分别精密吸取对照品溶液5、10、15、20、25 μL注入液相色谱仪，按“2.2”色谱条件测定，以峰面积积分值为纵坐标，对照品进样量为横坐标绘制标准曲线，结果见表1。表1 系统适应性试验结果

成分线性方程r线性范围/μg高良姜素Y=4.0×106 X+5.1×1040.999 80.267 0～1.328 0山 柰 素?4′?甲醚Y=4.0×106X+2.5×1040.999 90.103 4～0.517 0DPHAY=2.0×106X+2.0×1040.999 90.310 8～1.554 0DPHCY=8.2×105X+4.7×1030.999 40.247 3～1.236 0

2.5 重复性试验

取高良姜药材细粉(批号20080315)约0.2 g，精密称定，共6份，按“2.1.2”项下的方法制备供试品溶液后，按“2.2”色谱条件下测定各组分的含量，结果高良姜素、山 柰 素?4′?甲醚、DPHA、DPHC的RSD值(n=6)分别为0.92%、1.60%、0.45%、1.8%，表明方法重现性良好。

2.6 稳定性试验

取供试品溶液(批号20080315)1份，分别间隔4、12、24、36、48 h进样，连续测定2 d，计算含量，结果高良姜素、山 柰 素?4′?甲醚、DPHA、DPHC的RSD值(n=6)分别为0.71%、1.51%、1.7%、1.9%，表明供试品溶液在48 h内测定结果稳定。

2.7 加样回收率试验

取高良姜药材粉末(批号20080315)约0.1 g，共6份，精密称定，置100 mL锥形瓶中，精密加入“2.1.1”项下的高良姜素、山 柰 素?4′?甲醚、DPHA、DPHC对照品储备液溶液各1 mL，按“2.1.2”项下方法制备溶液，按“2.2”项色谱条件操作并计算，结果见表3。 表3 回收率试验结果

2.8 样品测定

对11批样品按上述方法进行含量测定，以外标法计算高良姜中各成分的含量。结果见表4。表4 样品中的4种成分的含量

3、讨 论

3.1 提取方法的选择

比较了超声提取法、索氏提取法和回流提取法对药材中各成分的提取效果，并对不同的提取条件进行优化，结果发现回流提取法对两类成分的提取效果最好，操作简单，因此选用回流提取法提取高良姜药材制备供试品溶液。

3.2 测定波长的选择

PAD检测器全波长扫描发现，DPHA在220 nm和285 nm均有较大吸收峰，但是DPHC仅在220 nm处有最大吸收峰，高良姜素和山 柰 素?4′?甲醚在267 nm和360 nm处有较大吸收峰，在220 nm处也有末端吸收。所以选择220 nm作为测定波长，在无PAD检测器的条件下也可以应用该法，便于推广。

3.3 色谱柱和流动相的选择

比较了DiomonsilTM C18柱、WatersTM C18柱和XterrexTM C18柱3种色谱柱的保留行为，发现WatersTM C18柱保留时间过长，XterrexTM C18柱对黄酮类物质存在严重的拖尾现象，而DiomonsilTM C18柱适用范围广，分离效果好，保留时间相对较短，所以选择DiomonsilTM C18柱。同时考察了甲醇?水、乙腈?水、乙腈?磷酸溶液、甲醇?磷酸溶液体系等，最终选用0.2%磷酸溶液?乙腈体系进行梯度洗脱，取得较好峰形和较高的理论塔板数，效果满意。

3.4 指标成分的确定

7?(4′?羟基?3′?甲基苯基)?1?苯庚基?4? 烯 ?3?酮(DPHB)是高良姜中二苯基庚烷类物质中的一种成分，药理作用与DPHA和DPHC的药理作用相似， 但因其含量较低，不作为考察指标，所以未进行该成分的方法学考察和药材中的含量测定。

【参考文献】

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[5] 陈佃,何瑞，李彩君.高良姜镇痛止呕有效成分的研究[J].广州中医药大学学报, 2001,18(3):240-242.

[6] 周漩,梁汉明，冯毅凡.高良姜薄层色谱特定(指纹)图谱的研究[J].药物分析杂志，2005，25(8)：916-919.

1 文稿要求1.1 总体要求 文稿应具科学性、逻辑性、先进性和实用性，论点明确，内容翔实，数据可靠，图表规范，标点正确，文字准确通顺。论著类文稿字数一般限5000字内, 综述6000字内，个案报告等短篇报道限1000字以内 （均包括参考文献）。文章题目一般不超过25字。1.2 作者 作者姓名排列在文题下，名的右上角标注单位序号（仅一个单位者不标注），在作者后依序标注作者单位，第一作者还须注明单位所在城市、邮政编码、联系电话及E-mail地址。论文首页页脚附注第一作者及通讯作者简介（包括出生年月、性别、学历、学位、技术职称、研究方向等）。如属各级科研基金资助项目,请注明项目名称及编号。1.3 摘要 论著类文稿应有250字左右的结构式摘要，中、英文摘要应相对应。内容明确列出4个要素，即目的 （Objective）：研究目的和涉及范围；方法（Methods）：所用的原理、条件、材料、工艺、手段等；结果 （Results）：实验研究的结果、数据等；结论（Conclusion）：结果分析、研究、比较、评价，今后的课题、假设、启发、建议、预测等。1.4 关键词 一般3～8个，多个关键词之间用分号分隔，中英文关键词应相对应。1.5 引言 概述课题的理论依据、研究思路、实验基础及国内外研究现状，明确指出本文的研究目的及创新之处，并列出主要参考文献，一般不超过300字。1.6 实验材料 动植物、微生物应注明拉丁学名、植物标本应注明鉴定人和存放地。实验动物应注明清洁等级和合格证号。其他主要材料、仪器应说明品种、来源、规格和产地。1.7 方法 尽量简单明了，但应便于他人重复实验。一般方法可引文献，有改进的应突出改进之处，创新的方法则宜详述。1.8 结果和讨论 重点叙述新的发现及本文研究的结果与观点。应交代本研究工作的不足之处及实验条件对结果可能产生的影响，讨论不重复引言和结果中已叙述的内容。1.9 文内标题 一级标题序号用1，2，3……；二级标题序号用1.1，1.2，1.3……； 三级标题序号用1.1.1， 1.1.2……；余类推。1.10 外文大小写、正斜体 外文大小写、正斜体应准确。人基因缩写符号用大写斜体，人基因相关产物如蛋白质的缩写符号用大写正体；动物基因缩写符号用斜体（首字母大写，其余小写），动物基因相关产物的缩写符号用正体（首字母大写，其余小写）；内切酶如EcoRⅠ，HindⅠ用斜体；生物的属名、种名等用斜体；统计学符号用斜体，如t检验，F检验，P值，x±s（均数±标准差）等；拉丁词如in vitro， in vivo， in situ， et al等也用斜体。1.11 量和单位 严格执行GB 3100～3102有关量和单位的规定。量的符号一律采用斜体，如m（质量）、t（时间、温度）、c（量浓度）、p（压力）、v（速度），F力），E（能量），吸收度（A），等。单位符号用正体，如：1 mg,1 min,1 M HCl应为1 mol/L HCl，转速rpm应为r/min。图表中用符号表示数值的量和单位时，采用量与单位相比的形式，如t/min,c/（mol·L-1）。在一个组合剂量单位代号内，不得有一条以上的斜线，如mg/kg/d应写成mg/（kg·d）或mg·kg-1·d-1。1.12 数字 凡是可以用阿拉伯数字且得体的地方，均应使用阿拉伯数字。应注意有效数字的使用。平均数应写出标准差（x±s）。百分数范围20%～30%不能写成20～30%。1.13 代号和缩写 文中可使用国际代号和缩写，例如:1秒，1 s；2分钟，2 min；3小时，3 h；4天，4 d。相对标准偏差RSD，静脉注射iv，肌肉注射im，腹腔注射ip，皮下注射sc，灌胃ig，口服po。1.14 医学名词及药名 医学名词以《医学名词》系列（全国自然科学名词审定委员会公布）为准。药名以《中华人民共和国药典》2005年版和《中国药品通用名称》（化学工业出版社，1997）为准，不用商品名。新译名词应附外文。文内缩略语首次出现时应使用全称。1.15 图表 应有自明性，力求简明，避免与正文重复，并置于文内相应处。正文与图表中数据须认真核对，做到准确无误，相互一致。图表要有序号（序号用阿拉伯数字表示）、题目及说明；题目要附英文对照。图表中的量、单位、符号、缩略词等必须与正文中所写的一致。图的制作 图序、图题居中排在图下方，图例置于图形与图题之间。图中文字与符号应用电脑植字，不用手写。字号以小5号（9磅）为宜。也可提供原图或复印件，大小不限，不必用描图纸绘制。如用扫描等数据采集图，线条图用600 dpi,TIF格式，灰度图及彩色照片用300 dpi,TIF或JPG格式。线条图线条均匀、主辅线分明。高度与宽度之比一般为5∶7左右。如为坐标图，纵、横标目的量和单位符号应齐全，居中置于纵、横坐标轴的外侧。照片图要求主要显示部分的轮廓清晰，层次分明，反差适中。病理显微照片应标明染色方法。涉及尺寸的照片应附有表示目的物尺寸大小的标度。化学结构式使用ChemDraw或CHemWin绘制。表的制作 应按统计学的制表原则设计，力求结构简洁，主、谓语位置合理。采用三线表。每表均应有序号和简明的表题，居中排印在表的上方。表中不设“备注”栏，需说明的事项在表下以简练文字注释。标目词表的各栏应标明标目词，参数栏的标目词一般为量或测试项目及其单位符号。如表中所有参数的单位相同，可标注在表的右上方，或表题之后（加括号）。各栏参数单位不同，则应将单位符号加括号标注在各栏标目词后。表中数字同一栏的数字必须按位次上下对齐。表内不能用“同上” 、“同左” 、“〃”和类似词，一律填入具体数字或文字。如未测或无此项可空白，未发现用“-”，但表下均应简单注释；结果为零用“0”。1.16 参考文献 参考文献应限于作者直接阅读过的、发表在正式出版物上的文献。采用顺序编码制，在文内引用处依出现的先后以阿拉伯数字排序，并用方括号标注，再在文末依次列出参考文献。一般论著20条以内，综述20条以上。参考文献的作者（主要责任者）为1～3名者全部列出，3名以上者只列出前3名，其后加“等”（日文加“他”，英文加“et al”）。须用文献类型标识标注参考文献的类型.著录格式如下: