毕业论文参考文献格式具体如下：
1、参考文献需要顶格书写。开始换行的时候，第二行必须有空格，汉语必须要两个汉字空格。
2、原则上，要有15条以上的参考文献。英语放在前面，中文放在后面。英语按姓氏的首字母顺序排列，中文用姓氏的音序排列。
3、一级标题要加粗，其他的标题不要加粗。
4、外文文献的第一个字母要大学，其他都是小写。
5、如果引用超过4行以上，就需要另起一行。
6、正文和正文的小标题之间不要留空行，段落之间也不要留空行。
毕业论文参考文献格式如下：
1、参考文献与正文相对应。
2、所有汉语著作名，文章名，论文名等都不用书名号，且不用斜体。
3、汉语两个以上的作者名字中间用“、”隔开，英语的用“﹠”连接。
4、所有的标点符号均为英文输入状态下的标点。
5、英语作者所有的名都只取首字母，姓用全名。
6、英语多个作者，除了第一个是姓前名后，其余的`都是正常顺序，明前姓后。
7、英语期刊内文章名，论文集内论文名等都不用斜体，且仅仅首单词首字母大写，期刊名，论文集名要斜体大写。
参考文献需要注意以下6点
1.参考文献的著录格式应选择著者-年制。该种格式具有简单明了的对应关系，文献作者、出版年份等均一目了然。
2.为遵照著作权法，应当列出全部的文献作者。当前常用的GB/T 7714-2015 格式要求列出的文献作者不得超出3人，若作者人数超过3人，在列出前3位之后添加“等”或“et al.”即可。
3.若引用的西文文献中存在华人作者，应当对其姓与名均进行全拼处理。
4.参考文献的起止页码与卷号之间，一律使用冒号隔开。
5.引用的参考文献要具有选择性，切忌堆砌过多的参考文献。
6.注意区别参考文献的年份，尽量少引用陈旧文献。
毕业论文参考文献格式及范文
大学生活将要谢下帷幕，毕业论文是毕业生都必须通过的，毕业论文是一种比较正规的、比较重要的检验学生学习成果的形式，怎样写毕业论文才更能吸引眼球呢？以下是我为大家整理的毕业论文参考文献格式及范文，欢迎阅读，希望大家能够喜欢。
一、参考文献的类型
参考文献(即引文出处)的类型以单字母方式标识，具体如下：
M——专著 C——论文集 N——报纸文章
J——期刊文章 D——学位论文 R——报告
对于不属于上述的文献类型，采用字母“Z”标识。
对于英文参考文献，还应注意以下两点：
①作者姓名采用“姓在前名在后”原则，具体格式是： 姓，名字的首字母. 如： Malcolm Richard Cowley 应为：Cowley, .，如果有两位作者，第一位作者方式不变，&之后第二位作者名字的首字母放在前面，姓放在后面，如：Frank Norris 与Irving Gordon应为：Norris, F. & .;
②书名、报刊名使用斜体字，如：Mastering English Literature，English Weekly。
二、参考文献的格式及举例
1.期刊类
【格式】[序号]作者.篇名[J].刊名，出版年份，卷号(期号)：起止页码.
【举例】
[1] 王海粟.浅议会计信息披露模式[J].财政研究，2004,21(1)：56-58.
[2] 夏鲁惠.高等学校毕业论文教学情况调研报告[J].高等理科教育，2004(1):46-52.
[3] Heider, . The structure of color space in naming and memory of two languages [J]. Foreign Language Teaching and Research, 1999, (3): 62 – 67.
2.专著类
【格式】[序号]作者.书名[M].出版地：出版社，出版年份：起止页码.
【举例】[4] 葛家澍，林志军.现代西方财务会计理论[M].厦门：厦门大学出版社，2001：42.
[5] Gill, R. Mastering English Literature [M]. London: Macmillan, 1985: 42-45.
3.报纸类
【格式】[序号]作者.篇名[N].报纸名，出版日期(版次).
【举例】
[6] 李大伦.经济全球化的重要性[N]. 光明日报，1998-12-27(3).
[7] French, W. Between Silences: A Voice from China[N]. Atlantic Weekly, 1987-8-15(33).
4.论文集
【格式】[序号]作者.篇名[C].出版地：出版者，出版年份：起始页码.
【举例】
[8] 伍蠡甫.西方文论选[C]. 上海：上海译文出版社，1979：12-17.
[9] Spivak,G. “Can the Subaltern Speak?”[A]. In & L. Grossberg(eds.). Victory in Limbo: Imigism [C]. Urbana: University of Illinois Press, 1988, .
[10] Almarza, . Student foreign language teacher’s knowledge growth [A]. In and (eds.). Teacher Learning in Language Teaching [C]. New York: Cambridge University Press. 1996. .
5.学位论文
【格式】[序号]作者.篇名[D].出版地：保存者，出版年份：起始页码.
【举例】
[11] 张筑生.微分半动力系统的不变集[D].北京：北京大学数学系数学研究所, 1983：1-7.
6.研究报告
【格式】[序号]作者.篇名[R].出版地：出版者，出版年份：起始页码.
【举例】
[12] 冯西桥.核反应堆压力管道与压力容器的LBB分析[R].北京：清华大学核能技术设计研究院, 1997：9-10.
7.条例
【格式】[序号]颁布单位.条例名称.发布日期
【举例】[15] 中华人民共和国科学技术委员会.科学技术期刊管理办法[Z].1991—06—05
8.译著
【格式】[序号]原著作者. 书名[M].译者，译.出版地：出版社，出版年份：起止页码.
三、注释
注释是对论文正文中某一特定内容的进一步解释或补充说明。注释前面用圈码①、②、③等标识。
四、参考文献
参考文献与文中注(王小龙，2005)对应。标号在标点符号内。多个都需要标注出来，而不是1-6等等 ，并列写出来。
附、范文
摘要：
企业财务管理目标是企业确定的财务管理活动的预期结果，而企业财务核心能力则是企业所具有的可持续盈利成长能力与可持续价值增值能力。二者对企业的发展都具有重要意义。本文主要研究财务管理目标的现状，简要阐述企业的财务管理与核心能力内容及企业的财务管理与核心能力的关系，并相应地提出企业的财务管理及财务核心能力问题的解决措施，旨在推动企业的财务管理工作顺利开展。
关键词：
财务管理目标；财务核心能力；企业
随着我国市场经济体制改革不断地深入，经济发展水平得到显著提高，企业应提高对财务报告质量的重视，为财务信息的真实性及准确性提供重要保障，实现企业的经济利益的最大化。然而在现阶段，我国企业的财务管理存在较多的问题，例如：企业财务报告不能够与经济发展同步，无法为企业的决策者提供重要的理论支持，直接影响企业的财务管理的质量及效率。在企业的发展过程中，企业在一段时间范围内需要完成企业的财务管理目标，并且与企业的发展目标保持一致，推动企业的管理目标的实现。
一、传统财务管理目标的现状
（一）不考虑企业的运营风险受到计划经济的影响，我国的企业在经济发展过程中，管理工作始终需要围绕着总体计划开展，企业的目标的实现在一定程度上需要依赖于国家颁布的各项的规制，才能够真正地落实财务的管理目标。现阶段，大多数的企业的负责人及财务管理工作人员未能够充分地认识到企业发展过程中存在的各种风险。例如：一部分的企业拆除自身之下的大多数的分公司，对于原先价格比较高的厂房及机械设备，企业对其进行报废的处理，然而，企业却未能够统计报废的固定资产，造成同实际的价格存在较大差距的问题，虽然现阶段一部分企业已经做出相应的改善，对管理模式进行适度的调整，但是，企业的整体财务工作与固定资产的管理工作存在比较大脱节的现象，直接影响了企业的后续的发展。
（二）财务管理系统亟待完善受到计划经济的影响，我国目前的企业的管理工作在长时间范围之内，对自身的运营状况缺乏足够的研究及预测，直接造成企业的利润出现不够真实的状况。虽然企业都在开展财务管理工作的过程中对管理目标进行一定的设定，而后进行企业的财务分析计划预算及控制等方面的内容，但是在决策方面的内容比较少，导致企业的财务管理在实际工作中存在较多的问题，例如：企业应构建一整套完整的科学的系统，从而进行对企业的固定资产的买进报废的处理，在经过系统后，而后进行生产运营。此外，大多数的企业在管理固定资产的过程中，往往只重视对原料进行采买应用及划分，而严重忽视了对商品报废环节方面的管理，致使给某些人员一些可趁之机，加大了企业的财务管理目标实现的难度。
（三）资金回收缺乏科学性随着市场经济的建设与发展，在日常生活中，商业信用显得尤为重要。大部分企业出于经济利益的考虑，通常会采取赊销的方式，从而拓宽市场的占有率。在一定意义上，赊销能够提高企业的市场占有率。由于企业缺乏对客户的了解，无法正确认识客户的信用，经常造成企业无法收回商品款项的问题，甚至会造成出现严重的坏账及死账的状况。企业的发展过程中存在的较多的坏账及死账，会危及企业的资金流动，从而降低企业的财务管理工作的效率与质量。
（四）员工缺乏积极性员工的工作质量的好坏直接关系着企业的发展，员工自身的积极性则影响着工作的质量。因此，在企业的财务管理的工作中，应充分地调动工作人员的积极性，参与至企业财务工作的管理与监督的过程中，从而合理地解决企业的财务管理工作面临的机遇与挑战。
二、现代企业的财务管理目标现状
随着社会经济建设的进步与发展，现代企业在管理模式与管理手段等方面发生巨大变化，企业已经具备明晰的产权与职能，形成政企分开的科学化的管理模式，因此，现代企业在激烈的市场竞争中应发挥出财务管理功能，其中，现代企业的财务管理目标则成为企业进行财务活动的最终目的，成为企业进行决策的准则，更成为企业理财绩效的考核标准，更是财务行为的重要依据与标准，财务管理一方面决定着企业的成败兴衰，另一方面则关系着企业的运行方式与运行的方向，影响着国民经济的发展水平。财务管理的目标在企业的发展中占据重要地位。随着我国经济制度由计划经济向市场经济的转变，我国的资本市场产权等发生巨大变化，企业的财务管理在企业的发展具有越来越重的位置，企业的财务管理目标可以综合地体现企业内部与外部环境间以及现实与未来间的关系。
三、企业的财务管理与核心能力内容
（一）企业的财务管理内容企业的财务目标从以往的利润最大化转变为利益相关者的最大化，一方面，体现人们对企业目标的主体的认识，另一方面，体现了人们对企业的本质的认识，其中，生产要素与企业的经济利益紧密相连，在传统的思想模式下，企业作为资本要素的所有者，并且资本所有者的目标直接决定着企业的目标，与此同时，决定着企业的财务目标，企业的财务目标是实现所有者的利益最大化。
（二）企业的财务核心能力内容企业的财务能力一方面能够维持企业的能力，另一方面，能够确保企业的持续发展，成为企业能力的重要组成部分，同时是一个完整的能力体系。在企业的财务的能力体系之中，企业的盈利及成长能力居于比较核心的位置。其中，企业提高营运能力有利于提高企业的盈利能力，并且提高企业的偿债能力极社会的贡献能力，促进企业的成长。企业通常会运用经营管理、融资策略。股利分配及投资管理等，推动企业的发展，获得更多的利益。企业的财务能力经过一系列的整合与转化之后则形成企业的财务的核心竞争力，而企业的财务能力则是由财务资源所构成，在实际的'应用过程中，企业的财务的核心竞争力不会有所损耗，并且成为系统地无形资产，随着财务核心竞争力的应用，则会增加企业的价值，推动企业的发展。
四、企业的财务管理与核心能力的关系
（一）统一的本质企业的财务管理目标的重要内容之一是企业的财务核心能力，是企业的各项的财务管理活动所要到达的目的，更是企业的财务管理的归宿与出发点，并且在一定程度上对企业的财务管理的组织原则指标体系具有决定性的作用，因此，企业的财务核心能力指标需要反映出财务管理的各项基本的内容，并且能够与之保持统一。
（二）主体具有独特性企业的核心能力具有异质性及不可仿制性的特点，所以，企业的财务核心能力同样具备不可仿制性急异制性的特点，换言之，每个企业的财务核心能力具有较大的差异性，并且不能够相互进行仿制，其中，异质性及不可仿制性并不是体现在形式与指标的不同，而是体现在内容与含义的异质及不可仿制性。
（三）一致的目标对于企业的核心能力，人们还存在较大的分歧，其中，企业的可创新能力属于企业的核心能力的重要组成部分，此外，企业的可持续的创新主要体现在以下几个方面，分别是：观念、组织、技术、产品、管理及市场等，因此，提高企业的可持续的创新能力，能够推动企业的可持续的发展，提高企业的可持续的盈利的成长能力，其中，企业的财务核心能力需要充分地展现企业的盈利性持续性及发展性等三个目标，并且需要与以上三个目标保持一致性。
（四）相互关联的能力在企业的财务能力中，企业的财务核心能力占据核心与统帅的地位，是企业的财务能力体系的重要组成部分，因此，企业的财务核心能力应与企业的各种的财务能力相互关联，并且能够包容与体现企业的各种财务能力，其中，企业提高营运能力，能够提升企业的盈利能力，并且能够提高企业的偿债能力，与此同时，能够提升社会的贡献能力，推动企业的可持续的发展。
五、财务管理问题的解决对策
（一）开展审计跟踪工作在对审计过程进行跟踪的过程中，企业应严格把关各项任务各个环节，加强对各个时间点的审计管理，帮助企业及时地发现问题，并且为解决问题提供必要的指导，确保各项管理项目的合理性及规范化。此外，在项目的开展过程中，应严格地跟踪与审计整个项目的原料购买及项目实施。在最后的检验环节，同样需要进行跟踪审计。由此可以看出，开展多个方面的审计全过程的跟踪与改善，能够有效地提升审计工作的效率，并且有效地预防贪舞弊的行为的产生。
（二）提升企业的创新能力很多的经济学家对于企业的财务核心能力存在较大的分歧，然而，在企业的发展过程中，企业的创新能力获得较多人的一致认可。站在企业的发展角度上，企业的创新能力能够完善企业的多个方面。
六、结语
综上所述，随着我国社会经济的不断地向前发展，市场经济体制改革不断地推进，我国的企业面临着越来越复杂的发展环境，企业的各项的运营活动面临更多的挑战，限制了企业的发展，更影响了企业的财务管理的目标。因此，企业应培养自身的财务核心能力，尽力实现企业的内部的财务管理的目标，提升企业的经济收益，提高企业的市场竞争力，让企业能够在激烈的市场竞争中脱颖而出，占据有利的市场竞争的优势。
参考文献：
[1]李淑贤.解析财务管理目标与企业财务核心能力[J].商,2014,01:45.
[2]齐明霞.企业财务管理目标与企业财务核心探析[J].企业改革与管理,2014,16:209-210.
期刊的文献格式如下：
(1)期刊。
[序号]主要作者。文献题名[J]。刊名，出版年份，卷号(期号):起止页码。
例如:[1]袁庆龙，候文义.Ni-P合金镀层组织形貌及显微硬度研究[J].太原理工大学学报，2001,32(1):51-53。
(2)专著。
[序号]著者.书名[M].出版地:出版者，出版年:起止页码。
例如:刘国钧，王连成.图书馆史研究[M].北京:高等教育出版社，1979:15-18，31。
(3)论文集。
[序号]著者。文献题名[C]。编者.论文集名.出版地:出版者，出版年:起止页码。
例如:[3]孙品一高校学报编辑工作现代化特征[C]中国高等学校自然科学学报研究会。科技编辑学论文集。北京:北京师范大学出版社，1998:10-22。
(4)学位论文。
[序号]作者.题名[D]。保存地:保存单位，年份。
如:[4]张和生地质力学系统理论[D].太原:太原理工大学，1998。
对于多次引用的文献，在每篇参考文献的序号标记中列出各处的页码或页码范围(有些出版物也将标明被引用文献位置的信息作为页码)，并置于方括号后(只列出数字，没有“P”或“page”前后的文字和字符)；页码范围中间的连接线是一个半字线)并且是上标。
期刊的文献格式如下：
1.参考文献按正文局部标注的序号依次列出，并在序号中加[]。
2.关于常见的各类参考文献标注办法如下：
（1） 著作：作者姓名，题名[M].出版地：出版者，出版年。
（2） 期刊论文：作者姓名. 题名[J].期刊称号，年，卷 （期） :页码。
（3） 会谈论文集：作者姓名. 题名[C]//论文集称号，会议地点，会议日期。
（4） 学位论文：作者姓名. 题名[D].出版地：出版者，出版年。
（5） 专利文献：专利申请者或一切者姓名. 专利题名：专利国别，专利号[P].公告日期或公开日期. 获取途径。
（6） 电子文献：作者姓名. 题名[文献类型标志 （含文献载体标志） 见其它].出版地：出版者，出版年 （更新或修正日期） , 获取途径。
（7） 报告：作者姓名. 题名[R].出版地：出版者，出版年。
（8） 规范：规范号. 题名[S].出版地：出版者，出版年。
3.同一著作中作者姓名不超越3名时，全部照录，超越3名时，只著录前3名作者，其后加“, 等”。
4.其他：数据库 （DB） , 计算机程序 （GP） , 光盘 （CD） , 联机网络 （OL） 。
期刊的参考文献格式：[序号]作者，篇名[J]，刊名,出版年份,卷号(期号)起止页码。
参考文献是在学术研究过程中，对某一著作或论文的整体的参考或借鉴。征引过的文献在注释中已注明，不再出现于文后参考文献中。
参考文献类型及文献类型，根据GB3469-83《文献类型与文献载体代码》规定，以单字母方式标识：
专著M ； 报纸N ；期刊J ；专利文献P；汇编G ；古籍O；技术标准S 。
学位论文D ；科技报告R；参考工具K ；检索工具W；档案B ；录音带A 。
图表Q；唱片L；产品样本X；录相带V；会议录C；中译文T。
乐谱I； 电影片Y；手稿H；微缩胶卷U ；幻灯片Z；微缩平片F；其他E。
期刊文献的参考文献格式为分为期刊、专著、论文集、学位论文、报告、专利文献、国际、国家标准、报纸文章、电子文献。具体如下：
（1）期刊
［序号］主要作者。文献题名［J］。刊名，出版年份，卷号（期号）：起止页码。
（2）专著
［序号］著者。书名［M］。出版地：出版者，出版年：起止页码。
（3）论文集
［序号］著者。文献题名［C］。编者。论文集名。出版地：出版者，出版年：起止页码。
（4）学位论文
［序号］作者。题名［D］。保存地：保存单位，年份。
（5）报告
［序号］作者。文献题名［R］。报告地：报告会主办单位，年份。
（6）专利文献
［序号］专利所有者。专利题名［P］。专利国别：专利号，发布日期。
（7）国际、国家标准
［序号］标准代号，标准名称［S］。出版地：出版者，出版年。
（8）报纸文章
［序号］作者。文献题名［N］。报纸名，出版日期（版次）。
（9）电子文献
［序号］作者。电子文献题名［文献类型/载体类型］。电子文献的出版或可获得地址，发表或更新的期号/引用日期（任选）。
参考文献根据参考资料类型可分为：
1、纸质文献类型：专著［M］，会议论文集［C］，报纸文章［N］，期刊文章［J］，学位论文［D］，报告［R］，标准［S］，专利［P］，论文集中的析出文献［A］，杂志［G］。
2、电子文献类型：数据库［DB］，计算机［CP］，电子公告［EB］。
3、电子文献的载体类型：互联网［OL］，光盘［CD］，磁带［MT］，磁盘［DK］。
论文参考文献的正确格式如下：
1.参考文献需要顶格书写。开始换行的时候，第二行必须有空格，汉语必须要两个汉字空格。
2. 原则上，要有15条以上的参考文献。英语放在前面，中文放在后面。英语按姓氏的首字母顺序排列，中文用姓氏的音序排列。
3. 一级标题要加粗，其他的标题不要加粗。
4. 外文文献的第一个字母要大学，其他都是小写。
5. 如果引用超过4行以上，就需要另起一行。
6. 正文和正文的小标题之间不要留空行。段落之间也不要留空行。
写论文的注意事项：
1、注重论文的严谨性、严肃性，尽量不出现“我”这个词，建议用“本文”等词汇代替；同时要少使用感叹号，以陈述句为主要句式。
2、对论文的直接引用和间接引用的比例要合理控制，引用参考文献等内容时，要对该内容进行格式设置，避免在查重时出现文字复制比过高的情况。
3、论文全文结构要严谨、完整，目录、摘要、致谢等内容应按学校要求进行撰写，并按校方要求修改论文的格式。
4、论文所用标点符号要规范，逗号、句号、分号、冒号、引号等符号需要正确使用。
参考文献格式一般包括：专著［M］、论文集［C］、报纸文章［N］、期刊文章［J］、学位论文［D］、报告［R］、标准［S］、专利［P］、论文集中的析出文献［A］。具体的参考文献格式应该根据文章种类而决定。具体如下：
1 、期刊论文类
一般格式如下：
作者.论文名称[J].期刊名称,发表年份(第几期):页码.
注意：一般而言，参考文献里的标点符号用的是英文状态下输入的标点符号。输完汉字要切换
到英文状态，再输入相应的标点符号。
示例：
沈延生.村政的兴衰与重建[J].战略与管理,1998(6):1-34.
徐勇,吴记峰.重达自治：连接传承的尝试与困境——以广东省云浮和清远的探索为例[J].探索与
争鸣,2014(4):50-53.
2 、学位论文类
一般格式如下：
作者.论文名称[D].毕业院校所在城市:毕业院校,论文提交年份:页码.
示例：
刘杨.同人小说的著作权问题研究[D].重庆:西南政法大学,2012:12-15.
吴毅,贺雪峰,罗兴佐,等.村治研究的路径与主体[J].开放时代,2005(4):82-96.
3 、书籍著作类
一般格式如下：
作者.著作名称[M].出版社所在城市:出版社名称,出版年份:页码.
示例：
金太军.村治治理与权力结构[M].广州:广州人民出版社,2008:50.
如果是合著，即有多名作者，其作者的书写格式与期刊多名作者的书写格式相同。
4 、报纸类
一般格式如下：
作者.文章名称[N].报纸名称,发行日期(版面).
示例：
胡祖六.“一带一路”战略给河南定位精确[N].大河报,2015-3-30(5).
参考文献按论文中引用参考文献出现的先后次序，用中括号的数字连续编号，依次书写作者、文献名、杂志或书名、卷号或期刊号、出版时间。
参考文献按照中国学术期刊（光盘版）（CAJ－CD）检索与评价数据规范（2005）标准执行。参考文献按在正文中出现的先后次序排列于文后。
“参考文献”四个字左顶格，黑体，四号，段前段后1行。参考文献的序号左顶格，用数字加方括号表示，与后面文字间空两格，如需要两行，第二行文字要位于编号的后边，与第一行文字对齐。
参考文献内容采用宋体，五号，行间距20磅，序号与正文中的指示序号格式一致，每一条参考文献条目的最后均以“。”结束。
一般都是长篇小说，独立成册。
Evaluation of the optimum induction gap for the GEM-MIGAS Original Research ArticleNuclear Instruments and Methods in Physics Research Section A: Accelerators, Spectrometers, Detectors and Associated Equipment, Volume 600, Issue 3, 11 March 2009, Pages . Mir, . Rhodes, . Schooneveld, . Concei�0�4�0�0o, . Maia, . Veloso, . dos Santos Show preview | PDF (201 K) | Related articles | Related reference work articles 2Structure–function studies of the G-domain from human gem, a novel small G-protein FEBS Letters, Volume 580, Issue 25, 30 October 2006, Pages 5959-5964Yarden Opatowsky, Yehezkel Sasson, Isabella Shaked, Yvona Ward, Orna Chomsky-Hecht, Yael Litvak, Zvi Selinger, Kathleen Kelly, Joel A. Hirsch Show preview | PDF (787 K) | Supplementary content | Related articles | Related reference work articles 3Tanzanite as conflict gem: Certifying a secure commodity chain in Tanzania Original Research ArticleGeoforum, Volume 41, Issue 1, January 2010, Pages 56-65Richard A. 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Fabbietti, H. Angerer, R. Arora, R. Beck, M. Berger, P. Bühler, M. Cargnelli, S. Doerheim, J. Hehner, N. Herrmann, C. H�0�2ppner, D. Kaiser, B. Ketzer, K. Mladen, V. Kleipa, I. Konorov, J. Kunkel, R. Lalik, M. Lang, Y. Leifels, et al. Show preview | PDF (697 K) | Related articles | Related reference work articles 11Pharmacokinetics and tissue distribution in rats of an oligodeoxynucleotide phosphorothioate (GEM 91) developed as a therapeutic agent for human immunodeficiency virus type-1 Original Research ArticleBiochemical Pharmacology, Volume 49, Issue 7, 30 March 1995, Pages 929-939Ruiwen Zhang, Robert B. Diasio, Zhihong Lu, Tiepu Liu, Zhiwei Jiang, Wayne M. 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Shekhtman Show preview | PDF (301 K) | Related articles | Related reference work articles 14Charge transfer of GEM structures in high magnetic fields Original Research ArticleNuclear Instruments and Methods in Physics Research Section A: Accelerators, Spectrometers, Detectors and Associated Equipment, Volume 535, Issues 1-2, 11 December 2004, Pages 330-333S. Roth Show preview | PDF (296 K) | Related articles | Related reference work articles 15Short induction gap gas electron multiplier (GEM) for X-ray spectroscopy Original Research ArticleNuclear Instruments and Methods in Physics Research Section A: Accelerators, Spectrometers, Detectors and Associated Equipment, Volume 573, Issues 1-2, 1 April 2007, Pages . Mir, R. Stephenson, . Rhodes, . Schooneveld, . Veloso, . Dos Santos
用pLexA的5′和3′端载体臂引物测序，证实插入子HERPUD1读码框正确、无碱基突变。人胎脑文库扩增及质粒DNA的提取Human Fetail Brain MATCHMAKER cDNA文库构建于pB42AD质粒载体?17修回日期：2005； QIAGEN Plasmid Mega Kit 购自 QIAGEN公司。关键词神经病学神经元蜡样脂褐质沉积症蛋白质相互作用酵母双杂交HerpBax inhibitor?α.1诱饵质粒pLexA?HERPUD1的构建PCR扩增HERPUD1编码区，正反向引物分别为5′，有自激活性?磷酸多萜醇低聚糖和其他物质、指纹状，低熔点琼脂糖回收目的带，收集于锥形瓶中;?Trp培养基Bax Inhibitor?1与Herp的相互作用中国生物工程杂志China Biotechnology，探讨编码该蛋白的基因HERPUD1的调节机制，为研究NCLs发病的分子机理提供依据, 材料胎脑MATCHMAKER LexA cDNA文库，将Herp与筛选到的相互作用蛋白再一对一回复进行酵母双杂交实验。细胞中溶酶体水解酶出现生化异常，去除假阳性?Ura/。每皿加LB培养液10ml，刮下菌落,铺于SD /?1收稿日期，则菌落成蓝色，否则为白色。质粒+EGY48（p8op，线粒体ATP酶的亚基C在多型NCLs中显著沉积?Trp/，包括金属和蛋白质等〔2〕。根据溶酶体蛋白酶基因缺陷和结构蛋白的功能失调〔3〕，这组神经变性疾病被认为是一种新的溶酶体脂褐质沉积疾病。1,EGY48（p8op?lacZ），HERPUD1基因序列由美国纽约州立发育不全研究所Nanbert Zhong博士惠赠。结果得到其中1个阳性克隆的插入子序列与TEGT基因序列一致、进行性智力障碍，X?Ura。对阳性克隆插入子的DNA序列测序，在GenBank中作匹配及生物信息学分析，编码蛋白为Bax inhibitor?1。得出结论, 25(11)?3′, 5′?GGTGAATTCGTTTGCGATGGCTGGGGGGCCTTC?3′.6阳性克隆质粒的分离抽提阳性酵母克隆质粒，电转化至大肠杆菌kc8中。目前，已经鉴定了6个致病基因（CLN1~3?Leu培养基，X?α?gal等购自Clontech公司;Amp+/Trp?培养基上筛选分离得到靶质粒。重建Herp和相互作用蛋白的相互关系消除假阳性按相互作用重建阳性和阴性对照的4组合：（1）pLexA?HERPUD1+pB42AD?Y；（2）pB42AD?Y自激活性检测：pLexA + pB42AD?Y ；（3）相互作用阳性对照pLexA?Pos+ pB42AD?T；（4）相互作用阴性对照pLexA?Lam+pB42AD。初步验证其相互作用，其中再次变蓝色者进行测序。相互作用蛋白基因Y的DNA测序和生物信息学分析以pB42AD的5′端和3′端载体臂引物测序，对重建相互作用仍为阳性的pB42AD?Y测序，测序结果在互联网上与NCBI GenBank，EMBL等生物信息数据库做BLAST分析，应用GCG软件分析可能的阅读框。2结果诱饵质粒的验证pLexA?HERPUD1转化大肠杆菌DH5α培养后提取质粒，对质粒进行PCR扩增，产生约925bp的条带（图1），经EcoRI酶切，也产生约925bp的条带（图2）。图1pLexA?HERPUD1 PCR产物电泳图Fig. 1Electrophoretic map of PCR product of pLexA?HERPUD 11: Product of PCR; M: 200bp DNA step ladder DNA marker图2pLexA?HERPUD1经EcoRI酶切产物电泳图Fig. 2Electrophoretic map of product of pLexA?HERPUD 1 by EcoRI digestionM：Lambda DNA/EcoRI+HindIII marker；1: pLexA?HERPUD1；2: pLexA；3: Product of pLexA?HERPUD1 digested by EcoRIpLexA?HERPUD1测序结果证实诱饵质粒的插入子无突变、阅读框正确。测序结果见图3。阳性克隆的DNA测序及生物信息学分析对反复检测Leu和LacZ 2个报告基因呈阳性表达的1个相互作用蛋白克隆DNA测序，测序获得680bp序列（图4），在GenBank做BLAST分析，发现与TEGT基因的序列一致，GCG软件分析编码区读框正确，TEGT基因编码蛋白为Bax inhibitor?1，生物信息学分析Bax inhibitor?1是一种基因增强转录因子，与BCL2和BCL?X相互作用，调节细胞凋亡。图3pLexA?HERPUD1融合质粒部分序列 Fig. 3Partial sequence of pLexA?HERPUD1 fusion plasmid图4从人胎脑cDNA文库筛选得到的一个阳性克隆质粒的插入子DNA部分测序结果Fig. 4Partial sequencing result of one positive clone screened from the human fetal cDNA library3讨论NCLs是一组致死性疾病，目前尚无有效的治疗方法。了解CLN基因及其编码蛋白的功能，对阐明病理、遗传及发病的分子机制具有重要意义。目前已知NCLs至少由8种不同的基因（CLN1～8）发生突变引起。青少年型（JNCL，NCL3）的致病基因为CLN3。CLN3编码蛋白Battenin位于溶酶体膜，为溶酶体必需的膜糖蛋白，参与哺乳动物细胞溶酶体pH的调节并且具有营养神经作用〔11〕。Herp是Battenin的相互作用蛋白质，Sai等〔12〕发现Herp与早老素（presenilin）相互作用，增加淀粉β蛋白（amyloid beta?protein，Abeta）的退化，说明Herp与细胞生长发育相关，因此研究Herp的功能对阐明NCLs的发病机理有重要意义。体内许多生化反应及代谢过程都存在蛋白质与蛋白质之间的相互作用，蛋白质之间的互作在生命过程中起着极其重要的作用，本研究应用酵母双杂交体系筛选得到一个与Herp相互作用的蛋白——Bax inhibitor?1，经查阅相互作用蛋白数据库IntAct和DIP，发现它是一种新的Herp互作蛋白。Chae等〔13〕研究发现Bax inhibitor?1调节与内质网应激相关的凋亡途径，在内质网诱导的凋亡中通过抑制Bax活化和线粒体移位介导保护、稳定线粒体膜电压，抑制Caspase活化。Bax inhibitor?1是一个进化保守的内质网蛋白，是一种凋亡调节因子，与BCL2（B细胞淋巴瘤/白血病?2）和BCL?X （B细胞淋巴瘤/白血病?X）相互作用，BCL2和BCL?X这2种基因是凋亡相关基因，Herp能与Bax inhibitor?1相互作用，提示Herp与凋亡调节相关。NCLs是一种神经元退行性病变，Herp、Bax inhibitor?1、BCL2、BCL?X在NCLs的发病过程中通过相互协调或拮抗促进神经细胞凋亡或死亡，但其中具体机制，如基因表达调控网络、细胞信号传导通路的改变、细胞离子的具体变化等机制仍需进一步探索。参考文献〔1〕 Wisniewski K E, Kida E, Connell F, et al. Neuronal ceroid lipofuscinoses: research update. Neurol Sci， 2000, 21(Suppl): 49~56〔2〕 Prasal V V, Pullarkat R K. Brain lysosomal hydrolases in neuronal ceroid lipofuscinoses. Mol Chem Neuropathol, 1996,29(2?3):169~179〔3〕 Mole S, Zhong N, Sarpong A, et al. New mutations in the neuronal ceroid lipofuscinosis genes. Eur J Pediatr Neurol, 2001,5 (Suppl):7~10〔4〕 Goebel H H. The neuronal ceroid lipofuscinosis. J Child Neurol,1995,10:424~437〔5〕 Mole S E. The genetic spectrum of human neuronal ceroid lipofuscinoses. Brain Pathol, 2004, 14(1):70~76〔6〕 Sohar I, Sleat D E, Jadot M, et al. Biochemical characterization of a lysosomal protease deficient in classical late infantile neuronal ceriod lipofuscinoses(LINCL) and development of an enzyme?based assay for diagnosis and exclusion of LINCL in human specimens and animal models. J Neurochem, 1997,73：700~711〔7〕 Ranta S, Savukoski M, Santavuori P, et al. Studies of homogenous populations∶CLN5 and CLN8. Adv Genet, 2001,45：123~140〔8〕 Zhong N, Ju W, Moroziewicz D N, et al. Molecular pathogenic studies of Batten disease: identification and charaterization of Battenin?interactive proteins (Herp). J Mol Diag, 1999,1(1):G23〔9〕 Zhong N, Ju W, Moroziewicz D, et al. Prenatal diagnostic testing for infantile and late\|infantile neuronal ceroid lipofusinoses(NCL) using allele specific primer extension(ASPE). Journal of Peking University(Health Sciences), 2005,37(1):20~25〔10〕 Zhong N, Ju W, Moroziewicz D, et al. Finding of Battenin?interactive protein (BIP) may lead to understanding the pathogenic mechanism for neuronal ceroid lipofuscinoses. Genet Med, 2001, 3(3):140〔11〕 Puranam K L ,Guo W X, Qian W H,et al. CLN3 defines a novel antiapototic pathway operative in neurodegeneration and mediated by ceramide. Mol Genet Metab, 1999, 66:294~308〔12〕 Sai X, Kokame K, Shiraishi H, et al. The ubiquitin?like domain of Herp is involved in Herp degradation, but not necessary for its enhancement of amyloid beta?protein generation. FEBS Lett, 2003,553(1?2):151~156〔13〕 Chae H J, Kim H R, Xu C, et al. BI?1 regulates an apoptosis pathway linked to endoplasmic reticulum stress. Mol Cell, 2004,15(3):355~366Screening and Bioinformatic Analysis of the Proteins Interacting With HerpLI Bin?yuan1HE Shu?ya1WANG Gui?liang1MA Yun1XIAO Wei?chun1LI Jie1SUN Chun?li1MIN Ling?feng1YU Jia1Nanbert Zhong2(1 Department of Biochemistry and Molecular Biology, Nanhua UniversityHengyang421001, China)(2 Department of Human Genetics, New York State Institute for Basic ResearchNew YorkNY10314, USA )AbstractThe aim is to screen the interactive proteins of Herp by yeast two hybrid system. The eukaryotic expression vector,pLexA HERPUD1, was constructed, MATCHMAKER LexA was used to screen the human fetal cDNA library, and the inserts of positive clones were regarded as the candidate interactive proteins of Herp. The yeast two hybrid was repeated to screen the proteins and remove the false positive clones. One positive inserted fragment is accordant with the sequence of TEGT which codes Bax inhibitor?1. Herp interacts with Bax inhibitor?1 with the characteristic of regulating apoptosis, hinting that Herp is involved in regulating wordsNeurologyNeuronal ceroid lipofuscinosesProtein interactionYeast two hybrid systemHerpBax inhibitor?1。37℃培养12h，根据克隆的生长数计算文库滴度, 25(11)李斌元 等：Bax Inhibitor?1与Herp的相互作用中国生物工程杂志 China Biotechnology 20051。1材料与方法1，用T4 DNA连接酶将HERPUD1插入pLexA?HTU+X?LacZ）融合菌株的建立小量分步转化法将已经构建的Bait质粒pLexA?HERPUD1全部转化EGY48（p8op?LacZ）储备待用。，MATCHMAKER LexA酵母双杂交系统,酵母SD培养基，SD/, SD/，5：2005?05，电子信箱：神经元蜡样脂褐质沉积症 (neuronal ceroid lipofuscinoses，其它化学试剂均为国内购买。测序公司为上海生工生物工程技术服务有限公司。方法1：Herp与Bax inhibitor?1相互作用，Bax inhibitor?1具有调节凋亡特性，提示Herp可能参与凋亡调节；kc8大肠杆菌，Bait质粒（pLexA?HERPUD1）与pB42AD共转EGY48（p8op?LacZ），铺于SD;? Ura/,7〕。Battenin存在于溶酶体和线粒体中，其功能尚不清楚。Zhong等〔8~10〕研究发现Herp能与Battenin相互作用，文库独立克隆数（cfu）是×106。根据滴度和独立克隆数计算所需文库原始菌液体积和铺皿个数。液体培养液（Amp+）稀释文库原始菌液，铺于150mm的LB皿（Amp+），共铺皿80个, SD/，以基因HERPUD1的编码序列（coding sequence）为诱饵（bait）?07?22*国家自然科学基金资助项目（30370795）** 通讯作者、运动失调和行为变化为主要特征〔1〕,SD/, NCLs)是一组人类进行性神经元变性疾病;?Leu/Raf/Gal，培养4～6d，8），所致疾病分别为NCL1~3，5，6，8〔4,5〕;?Ura/His, SD/，在M9/.2，其主要功能也不清楚，醋酸锂等购自Sigma公司;?His/;?Ura/His?Trp/、曲线状，多为常染色体隐性遗传。临床上以快速的视力恶化、癫痫发作;?His?Trp 。用QIANGEN Plasmid Mega Kit 抽提质粒，置-20℃保存待用。诱饵质粒的毒性和自激活性检测采用小规模共转化法、直线状和混合状样沉积，导致以神经细胞和视网膜细胞为主的细胞凋亡。NCLs至少可分为10种疾病亚型。共同病理特征主要为溶酶体内蜡样脂褐质以颗粒状;? Ura/.5文库的转化与筛选制备酵母菌（已经转化pLexA?HERPUD1表达质粒）感受态，醋酸锂法转入文库质粒;?His?Trp，培养 4～6d。刮取菌液铺于SD/，6、2，另外，在沉积的脂褐质中还可以发现磷脂、中性脂质。CLN3编码的Battenin蛋白被认为是跨膜蛋白〔6，从人胎脑cDNA文库筛选与Herp有相互作用的蛋白质，以研究Herp的功能，Herp是定位于内质网的高半胱氨酸应答的类似泛素的区域构件蛋白1，编码该蛋白的基因为HERPUD1?gal皿，30℃倒置培养4~6d。如Bait有毒性则无菌落生长?TTCGAATTCATGGAGTCCGAGACCGAACC。本研究采用MATCHMAKER LexA 双杂交系统（MATCHMAKER LexA Two?Hybrid System）.2；半乳糖(Gal)，棉子糖(Raf)，HERPUD1插入T载体，T? HERPUD1与pLexA分别用EcoRI酶切?gal滤膜分析克隆变为蓝色者初步认为是阳性克隆（设为pB42AD?Y）:16～20李斌元1何淑雅1**王桂良1马云1肖卫纯1李洁1孙春丽1闵凌峰1虞佳1Nanbert Zhong2（1 南华大学生物化学与分子生物学研究室衡阳4210012 纽约州立基础研究所人类遗传研究室纽约NY10314）摘要应用酵母双杂交技术筛选Herp的相互作用蛋白。构建编码Herp的基因HERPUD1真核表达载体HERPUD1?plexA，应用MATCHMAKER LexA酵母双杂交系统筛选人胎脑cDNA文库，获得的阳性克隆的插入子为Herp的候选相互作用蛋白质
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二级标题1 …………………………………..…………………………….30
三级标题1………………………………….……………………………..40
3 一级标题(结论、结束语)……………………………………………………..100
参考文献(不加标题编号)…………………………………………………………102
附录(不加标题编号)…………………………………………………………………104
附录1………………………………………………………………………………110
附录2………………………………………………………………………………115
附录3 …………………………………………………………………………….120
致谢(不加标题编号) ………………………………………………………………130
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(小四，宋体，倍行距，字符不缩放，字符间距为“标准”;参考文献标识符号[1]，方括号加数字，小四，Times New Roman，上标表示;所有数字和英文全部为Times New Roman字;除目录可适当调整行距外，其他部分全部为倍行距。页面上下边距为，左右边距为;中英文题目、摘要和关键词页面用罗马数字注页码，其他部分用阿拉伯数字注页码，页码为页脚标识，六号、宋体、居中。)
表(一律用三线表)
表 表的名称(表序分两级，小四、宋体、加粗、居中)
表内文字：小四号、宋体、上下左右居中
注(五号、宋体、加黑)：内容(五号、宋体)，有多条注释，用“①、②……”分列。
2 一级标题(四号、黑体、加粗、左对齐)
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1) 期刊文献的著录格式[序号] 主要责任者.文献题名[文献类型标识].刊名,年,卷(期):起止页码. (五号、宋体、下同)
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附录
附录1：
附录2：
附录3：
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致谢
感谢院系领导
感谢指导老师
1、期刊作者，题名凹刊名,出版年,卷(期）：起止页码
2、专著作者：书名IM.版本（第一版不著录),出版地：出版者,出版年：起止页码3、论文集作者,题名〔C〕编者.论文集名,出版地：出版者,出版年：起止页码4、学位论文作者;题名〔D〕，保存地点,保存单位,年份5、专利文献题名〔P〕国别专利文献种类 专利号,出版日期6、标准编号,标准名称 〔S〕了、报纸作者,题名〔N〕报纸名,出版日期(版次）8、报告作者,题名〔R〕 保存地点,年份9、电子文献作者,题名〔电子文献及载体类型标识】 文献出处,日期