FLAER多参数检测PNH克隆的影响论文
阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)是一种获得性克隆性造血干细胞疾病，其发病机制主要是由于体细胞X染色体上的PIG-A基因突变，导致血细胞膜表面糖化磷脂酰肌醇(GPI)锚合成障碍，锚连接蛋白缺失。传统的诊断方法主要有蔗糖溶血试验、酸溶血试验、尿含铁血黄素试验，但这些方法敏感性、特异性差。近些年来，通过流式细胞仪检测CD55、CD59已经成为诊断PNH的常规方法，特别是CD59，其敏感性高于CD55，在PNH 诊断过程中被认为是一个优于CD55 的指标。荧光标记的无活性嗜水气单胞菌溶素前体的变异体(FLAER)可以特异性的与GPI锚连蛋白结合，经流式细胞仪检测，其特异性和敏感性较传统方法更好。PNH、再生障碍性贫血(AA)和骨髓增生异常综合征(MDS)均为骨髓衰竭性疾病，具有相似的发病机制和临床表现，早期鉴别诊断常很困难。本文联合FLAER、CD45、CD15、CD24 多参数检测粒细胞PNH克隆以及CD59检测红细胞PNH 克隆，旨在有效提高PNH克隆检测的敏感性、特异性，有助于骨髓衰竭性疾病的早期鉴别诊断，现报道如下。
1 资料与方法
一般资料 所有病例均来自于本院血液科连续48例住院患者。其中PNH患者9例，AA患者13例，诊断均符合血液病诊断及疗效标准;MDS患者11例，符合2008年WHO诊断分型标准。对照组15例均为巨幼细胞性贫血患者。
仪器与试剂 FACSAria型流式细胞仪，溶血素、磷酸盐缓冲液(PBS)和CD59、CD45、CD15、CD24试剂和均购自BD公司，FLAER试剂购自加拿大Protox Biotech公司。
方法
外周血红细胞CD59检测 取EDTA 抗凝全血100μL，经PBS洗涤后稀释于的PBS中，取100μL加入CD59-PE单抗20μL，4℃避光孵育30min后，1 000r/min离心5min，弃上清，用2mL PBS液洗涤2遍，重悬于1mL PBS液中上机检测，用流式细胞仪测定CD59细胞的表达率。
外周血粒细胞FLAER检测 取EDTA抗凝全血100μL，加入CD45、CD15、CD24、FlAER抗体各20μL，避光孵育30min后，加入2mL溶血素，室温下避光10min，溶血完全后1 000r/min离心5min，弃上清，用2mL PBS液洗涤2遍，重新悬于500μL的PBS液中液上机检测，用流式细胞仪测定FLAER的表达率。
统计学处理 采用软件进行数据分析，计量资料以x±s表示，组间比较采用t检验和Mann-Whitney U 检验，P<为差异有统计学意义。
2 结果
临床特征 PNH患者9例，男6例、女3例，年龄16～60岁，中位年龄30岁;AA患者13例，男5例、女8例，年龄7～63岁，中位年龄38;MDS患者11例，男5例、女6例，年龄41～72岁，中位年龄53岁，其中RCMD 1例，RCUD 6例，RAEB-Ⅰ2例RAEB-Ⅱ1例，5q-综合征1例;对照组15例，男6例、女9例，年龄19～61岁，中位年龄34岁。
不同方法对PNH 患者检测的比较 PNH 组患者FLAER缺失率和CD59缺失率分别为(±)%和(±)%，显著高于对照组、AA组、MDS组，差异有统计学意义(P<)。FLAER检测结果明显高于CD59检测，差异有统计学意义(P<)。其中，有2例患者，一例CD59缺失率为，FLAER缺失率为;另一例CD59缺失率为，FLAER缺失率为。
不同方法对非PNH 患者检测的比较 各组中FLAER缺失率平均值均大于CD59缺失率，但差异无统计学意义(P>)，表明在非PNH组中FLAER和CD59检测无显著差异。对照组中FLAER缺失率为，特异性100%，有3例存在CD59缺失，缺失率均小于1%。13例AA 患者中5例检测出FLAER缺失，其中4例检测出CD59缺失，1例未检测出;11例MDS患者中3例检测出FLAER缺失，其中2例存在CD59缺失，1例CD59缺失率为0。结果说明FLAER检测比CD59检测更为敏感，特异性更好。
3 讨论
到目前为止，已经发现了20多种蛋白在PNH 患者血细胞表面表达缺乏，其中红细胞膜上衰变加速因子(CD55)和反应性溶血膜抑制物(CD59)的缺失被认为是引起PNH 病理生理的主要原因。红细胞数目多、抗体表达强是灵敏度检测最好的目标细胞。尤其是在一些粒细胞减少的疾病中如AA、MDS，红细胞检测尤为重要。同时，通过比较红细胞和白细胞的数值，可以给临床提供更多信息。CD55分子在红细胞上表达较低，而CD59分子的荧光染色强且均一，近些年来已成为PNH诊断的“金标准”。然而，越来越多的研究发现检测红细胞CD59表达对PNH 的诊断有一定的局限性。
本研究发现，在PNH组的两例患者中，一例CD59缺失率为，另一例CD59缺失率为，而FLAER缺失率分别为和。可能是由于患者正处于疾病的活动期，接受输血治疗，影响了红细胞CD59的表达，导致CD59表达出现假阳性。有研究表明，在小细胞低色素性贫血时，病人的红细胞膜表面的CD59表达均有降低，但粒细胞是正常的，若只检测红细胞的CD59会造成其表达假阴性。此外，正常细胞衰老时表面分子CD59还有可能自发丢失，均可导致检测值偏离事实。随着技术不断进步，人们研究出了FLAER 技术，FLAER是Alexa-488标记的无活性的嗜水气单胞菌溶素前体的变异体，可以特异性地与GPI锚链蛋白结合，在所有具有GPI锚连蛋白的粒细胞上均有特异性表达，不会因不同细胞表达GPI锚链蛋白的多少和种类不同造成误差。由于FLAER能直接检测GPI蛋白，有助于识别真正的PNH 和免疫性血细胞减少症，明确真正的GPI阴性细胞。本研究中对照组FLAER检测缺失率均为0，与CD59相比检验结果更具有特异性;在PNH组中，FLAER的缺失率显著高于CD59，敏感性更高。FLAER也是防止门内出现污染细胞最好的抗体。如果门内污染了少量的.CD24阴性表达的细胞群，可能会被误认为是小的PNH 克隆，而FLAER 与CD24一起使用可以提高PNH检测的准确性，CD24/FLAER双阴性细胞群才是真正PNH克隆细胞群。FLAER多参数检测要求外周血标本采集后必需及时送检，否则会导致粒细胞存活率下降，细胞非特异性染色增强，影响检测效果。这在一定程度上影响了FLAER在临床上的应用。PNH 克隆的检出对于MDS和AA的临床表现、治疗及转归有重要意义。部分具有PNH 克隆的AA患者对免疫治疗效果更好，即使小于的克隆也会影响治疗效果。
对于检测出少量PNH克隆的AA患者，需监测PNH克隆数的变化，因为患者有可能发展为溶血性贫血。在本研究中，PNH 与MDS的关系只局限在低危MDS中，表现为血细胞减少，骨髓增生低下;遗传学异常发生率低，临床过程惰性进展，更多地表现为骨髓衰竭的特点。AA 组、MDS 组中FLAER的缺失率均大于CD59的缺失率。由于AA和低增生性MDS的鉴别十分困难，但到目前为止还没有报道MDS的患者进展为PNH，监测PNH 克隆对于这两种疾病的鉴别具有一定的意义。AA、MDS患者中检测出的PNH 克隆常常很小，CD59检测不易测出。在这两组中各有1例患者CD59缺失率为0，而FLAER表达均有缺失，缺失率分别为、。FLAER检测更敏感，与CD59相比灵敏度更高。由于AA、低增生性MDS和PNH 均属于骨髓衰竭性疾病，具有相似的发病机制、临床表现和生物学特性，三种疾病之间的鉴别很困难。FLAER检测与CD59相比灵敏性和特异性更高。能够早期提供更为灵敏、特异的PNH 克隆依据，在临床症状不典型、诊断不明确的疑似PNH患者，辅以FLAER检测有助于早期确诊或除外诊断。因此，FLAER高灵敏度检测PNH 克隆对这三种疾病及疾病之间的诊断鉴别及了解临床过程、预后及转归具有一定的意义。
作者 | 田瑞颖 廖洋
为减少不可降解塑料的增量，越来越多的国家开始采取“禁塑令”等措施。但全球每年仍有约亿吨塑料垃圾进入陆地和海洋环境。如何帮助地球“消化”海量的不可降解塑料？寻找能“吃”塑料的微生物，成为近年来科学家关注的焦点。
近日，中国科学院海洋研究所研究员孙超岷团队经过多年攻关，首次发现能有效降解聚对苯二甲酸乙二醇酯（PET）和聚乙烯(PE)两种塑料的海洋微生物菌群和酶——仅需两周，它们就能将最难降解的PE塑料“吃”成碎片。相关研究成果发表于《危险材料》。
小菌群大作用
塑料是一类高分子聚合物的统称，包括聚乙烯、聚丙烯、聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚苯乙烯和聚氯乙烯等。
2016年，日本京都工艺纤维大学科学家发现了能有效降解PET塑料的微生物，这一消息让众多科学家为之振奋。
虽然目前许多科学家正在寻找能有效降解塑料的微生物及酶，但对最难降解、体量最大的PE塑料，却一直没有办法。
“PE塑料具有优异的化学稳定性，比PET等其他类型的塑料更难降解，而生活中常见的一次性塑料袋、农用地膜等几乎都是PE塑料。研制出有效降解PE塑料的生物制品，对于消除白色污染至关重要。”孙超岷在接受《中国科学报》采访时说。
微生物无处不在，是否有能“吃”掉PE塑料的微生物？如果有，又该去哪儿找呢？
“全世界的塑料垃圾只有约9%得到回收再利用，其余大部分被焚烧、填埋或直接遗弃在自然环境中，而海洋正是塑料垃圾最终流向之一。”孙超岷告诉记者。
“百川归海”，他决定向海洋要答案。“海洋是塑料的主要承载地，相应地，很多海洋微生物在与塑料的长期共存中也进化出一系列塑料降解系统，其产生的塑料降解酶也成为发展塑料降解酶制剂的绝佳候选材料。”
孙超岷进一步解释道，“塑料聚合物主要被生物胞外酶解聚成短链或小分子物质，随后转运到细胞内彻底氧化。细菌可产生多种胞外酶降解塑料大分子，如脂酶、解聚酶、酯酶、蛋白酶、角质酶、脲酶和脱水酶等。”
“塑料可以转化成微生物自身生长所需的能源物质，微生物最终可以将塑料分解成对环境完全无害的二氧化碳、水等产物。”中国科学院海洋研究所博士高蓉蓉说。
中国科学院理化技术研究所研究员、工程塑料国家工程研究中心主任季君晖认为，“对于解决塑料增量问题，推行可降解塑料是主要途径，但对于解决不可降解塑料的存量问题，运用微生物进行降解是非常好的研究方向。”
大海捞“菌”
寻找能“吃”掉PE塑料的微生物，可谓大海捞针。
“适者生存，海洋中的微生物适应了高盐、高压、黑暗等极端环境，产生了一些陆地环境无法形成的天然产物，例如具有特殊功能的抗生素和酶等，这些是生物制品非常好的资源库。”孙超岷告诉记者。
2016年，在与海洋微生物打了多年交道后，孙超岷带领团队开始了这场也许没有结果的寻“菌”征程。
起初，他们在青岛近海受塑料污染较严重的海水浴场采集了上千份塑料垃圾，并对其中的菌群进行培育筛选，然而两年多的工作几乎没有进展。就在大家一筹莫展之时，偶然发现有一个菌群能有效定殖在矿泉水瓶壁，这让整个团队兴奋起来。
但菌群中含有很多微生物，并非所有微生物都能分解塑料，在进一步剔除“打酱油”的微生物、精准锁定能“吃”掉PE塑料的微生物后，孙超岷团队又耗时近3年获得了相应的微生物纯培养，并人工复配了能有效降解PE塑料的菌群，最终结合不同手段找到了降解PE塑料的相应酶。
“在筛选能降解PE塑料的微生物的过程中，我们常常几个月都在重复失败的结果，最难时也曾想过放弃，但庆幸的是，我们坚持下来了，也正是大量失败的经验促使我们最终得到能‘吃’塑料的菌群，这是一种量变引起质变的过程。”高蓉蓉感慨道。
在孙超岷看来，很多研究团队没有持续下去的原因，一方面是塑料作为近百年才出现的新型污染物，自然界的微生物还没有进化出高效降解塑料的成熟系统，筛选起来犹如大海捞针。另一方面，微生物降解塑料的效果短时间内肉眼难以观察，需要借助特殊的仪器检测。
“科学研究需要持续坐‘冷板凳’，项目没有拿到结果，是很难得到资助的，而对于有潜力但又有冒险性的课题，尤其是从‘0’到‘1’的课题，国家应该给予更多资助。”孙超岷表示。
“我们的研究为PE塑料的降解打开了一扇门，但‘登堂入室’后还需开展更多工作。”孙超岷告诉记者，“目前，团队还在精细研究酶的结构及作用机制，试图通过突变的方式找到更高效降解PE塑料的酶，并把不同的酶合在一起形成酶系，最终发展为塑料降解酶制剂。”
此外，孙超岷团队还在尝试用不同比例复配微生物菌群，希望通过调整不同微生物个体的比例，提高PE塑料降解效率。
加强学科交叉
“目前，团队发现的微生物菌群和酶还只能在实验室小规模条件下实现对塑料垃圾的部分降解，距离产业化应用还有一段较长的路要走。”孙超岷坦言。
他希望能研制出塑料降解生物制剂，并在密闭的反应器中处理塑料垃圾，对相应的降解产物进行回收再利用。“目前所使用的菌群都是常见的微生物，不会造成生物安全及二次污染问题。”
在孙超岷看来，可降解塑料全面取代传统塑料之前，后者仍具有一定的生存空间，研制塑料降解生物制品对解决已经形成和未来新增的塑料污染问题具有重要意义。
“消除地球上的白色污染，不能单靠几个团队或几个专业，必须全 社会 通力合作，才能突破传统塑料的降解技术瓶颈。未来，我们希望能与其他不同学科的研究团队共同努力，研制出高效降解塑料垃圾的生物制品。”孙超岷说。
在季君晖看来，利用微生物降解塑料和研制可降解塑料，虽然是两个相差较大的领域，但存在互补性。“两个学科需要更多地交叉，未来也一定会有更多的相互补充。”
“禁塑令”应循序渐进
目前，全国绝大多数省份已经发布塑料污染治理相关实施方案或行动计划。2020年12月1日，《海南经济特区禁止一次性不可降解塑料制品规定》正式实施，意味着海南正式全面禁止一次性不可降解塑料袋、塑料餐饮具等塑料制品。
但季君晖指出，真正可靠的塑料制品是全生物降解塑料，由于目前各地出台的政策缺乏统一标准，致使“部分可降解”塑料混迹市场，更尴尬的是，“全生物降解塑料目前的产量仍无法满足实际市场需求”。
他还发现，“禁塑令”存在一些执法“盲点”，对于在市场“明面”上流通的塑料，监管相对容易，而对于通过物流手段交易的塑料产品，监管起来却非常困难。
“国家应该尽快统一标准，这样一方面减少重复标准制定，另一方面便于统一管理。此外，政策制定还应循序渐进，不应‘一刀切’。对于超市等渠道销售的塑料袋等产品价格，应该进行一定的干预，以防过高价格和利润引起民众对禁塑令的抵触，并滋生廉价违规塑料产品的地下交易。”季君晖表示。
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报告关键点： 集装箱海运收入高，利润小，波动大，运价有回升迹象； 集装箱港口及租赁业务收入、利润稳定增长； 干散货资产注入是投资亮点。 报告摘要： 集装箱运输公司最主要的收入来源，但其利润波动大，估值贡献小。预计未来三年公司的集装箱海运市场地位略有提高，运价也有望开始回升，07~09年主营利润平均增幅在20%以上； 集装箱港口及租赁中远太平洋(HK1199)是公司该项业务的依托平台，分列行业前列。借助我国沿海集装箱吞吐量未来三年15%的复合增长率，公司的港口业务也将保持同步增长； 干散货注入提升公司价值公司07年3月29日在香港市场发布公告，管理层已得到授权开始进行收购中远集团干散货资产可行性研究及相关准备工作。集团干散货运力世界排名第一，估计2007年净利润在58亿左右，是公司07年预测净利润的约倍，而且未来三年增长平稳。 估值估计干散货业务注入后，公司07年EPS可达到元左右，每股净资产在元左右。参考国内国际同类公司的估值情况，没有资产注入预期的中远航运( )和中海发展( )的07年PE在22倍左右，PB在6倍左右；而有资产注入预期的南京水运( )和长航凤凰( )等，07年PE在40倍左右，PB在倍左右。考虑到公司的行业地位，20~25倍的模拟07年动态市盈率是市场可以接受的，则公司股票价格为元；而5倍动态市净率对应的股价则在元。综合比较，公司股票的合理价格区间是元，对应07年模拟动态PE为20~28倍，PB为倍。 1.集装箱业务—波动大，利润率低，估值贡献小 .行业地位-中国第一，世界第五 公司的集装箱海运业务主要通过旗下的全资子公司中远集运来完成。中远集运06年底拥有和控制的集装箱运输船舶139艘，运力万TEU，运力规模中国第一，世界第五，同时是CKYH(全球第2大集运联盟，中远/川崎/阳明/韩进)联盟的主要成员。根据公司的造船计划，中远集运的市场地位有望在未来得到保持并稍微提升。 .收入占比大，利润贡献小 收入的角度，集装箱运输无疑是公司的第一主营业务，而且从公司的发展战略和募集资金投向看，未来集装箱运输依然是公司最主要的业务之一。但从利润的情况看，受全球集装箱运输市场波动的影响，公司的集装箱业务利润波动也较大，而且近三年来呈下降趋势，营业利润从2005年的亿元下降到亿元，下降幅度达。 从中也可以看出集装箱运输市场的特征之一：运量优先。为了保证足够的运量，不惜降低价格。 .固定成本高，价格波动大，业绩对运价敏感 集装箱运输的主要特点是：货主数量多、装载点分散；时效要求高(班次多，速度快，降低堆存时间)、综合物流服务要求高等，导致集装箱运输业务的固定成本较高，边际成本相对低。 同时，和大宗货物单一的品种不同，集装箱货物种类繁多，运量需求的变化难以准确预测，而集装箱船舶建造周期又较长，使供需时时处于不均衡的状态，结果自然是运价的大幅波动。1996-2007年间，2760TEU船每日租金是7000~40000美金，波动幅度接近600%。 行业特性使公司的集装箱业务对运价比较敏感。根据公司测算，若2006年集装箱航运业务单位TEU的平均运费收入下降1%，则公司营业收入将下降亿元，在不考虑其他因素变动的情况下，年度净利润将减少亿元，对应全面摊薄后每股盈利下降约元。 .盈利前景及估值 .募集资金投向助推运力增长 公司本次募集资金主要投向之一就是用60亿资金通过中远集运公司支付12艘在建船舶所需的资本开支，包括8艘5100TEU型和4艘10000TEU型，运力占公司现有集装箱运力的20%。这部分船舶将在2008~2010年陆续交付使用，其中10000TEU型用于需求逐渐增加的西北欧航线，5100TEU型投入到远东/波湾线、中澳线、远东/南非南美及远东/美东等热点航线。这些船舶的投入使用无疑将增强公司的集运能力。 根据公司的订单计划，2007~2010年公司总运力的增长分别是9%、17%、9%和6%，船舶数量增速低于运力增速，显示公司集装箱运输船舶的大型化。 .运价有回升迹象 集装箱运输市场需求旺盛，而行业运力投放速度趋于放缓，供需形势趋于好转。预计全球集装箱运输市场走出低谷在望。 CLARKSONS预测2007年和2008年全球对集装箱运输需求仍然保持两位数的增长，分别增长和；运力投放增速有所放缓，预计2007、2008年运力投放增速分别位和。供需之间的比率已经从2006年的提高到。集装箱运输市场的有可能在07、08年开始景气回升。 各班轮组织开始提升运价。远东班轮工会成员(FEFC)决定把原定7月1日执行的运价普涨计划提前至6月15日执行，目前暂定涨幅位100美元/TEU。从全球集装箱运输市场的期租水平可以初步判断，市场运价水平有上升迹象。 . 收入和成本预测 2.集装箱码头及租赁业务—被动受益于行业增长 .业务依托平台—中远太平洋() 公司持有中远太平洋()51%的股权。截止到2006年底，中远太平洋在全球投资经营24个码头项目，总泊位达115个，年吞吐量达万TEU，世界排名第五；中远太平洋下属(100%控股)的经营集装箱租赁业务的佛罗伦公司拥有和管理的集装箱队达万TEU，集装箱租赁业务占全球市场份额约，位居世界第三。 .尽管被动受益，增长仍值得期待 虽然中远太平洋所投资码头2006年的集装箱吞吐量达到了3280万TEU，但其投资超过50%的码头带来的吞吐量却只有420万TEU，比例不到13%。另外中远太平洋已经决定要从码头参股投资向控股投资转变。这些都意味着公司目前的集装箱码头业务的利润基本上是分享投资对象的利益，难以从主动经营中把握收益。 尽管被动受益，我们依然看好公司集装箱码头业务的发展空间： 我国经济和贸易的平稳发展带来沿海集装箱吞吐量未来三年15~18%的增长率，而中远太平洋2006年的集装箱吞吐量来自我国沿海港口； 中远太平洋后续投资码头带来的收益增长； 中远太平洋业务转型和投资码头网络效应的体现。 预计中远太平洋投资的码头2007~2009年集装箱吞吐量复合增长率为17%。 .集装箱租赁业务发展平稳中远太平洋下属的佛罗伦公司依靠母公司强大的集装箱航运实力，发展迅速，目前占据着世界第3的市场地位，而且我们认为该项业务未来会保持稳定增长的势头： 业务结构带来较高利用率06年出租箱中，37%出租给了中远集运，租期10年，利用率100%，国际租赁中的大部分也是长期客户；管理箱的利用率也接近100%； 业务结构多元化进一步提高经营效率并降低风险该公司管理集装箱的比例从2005年的3%提高到了2006年的50%，不仅减少了资金占用，提高了经营效率，而且减少了集装箱价格波动对公司业绩的影响。 预计佛罗伦公司07年因业务转型，出售集装箱而导致主营利润同比有所下降，08、09年逐步回升。。 .中远太平洋盈利预测 3.物流业务—延伸主营业务，提升整体价值 .航运业进入综合物流时代 全球经济一体化的发展使跨国公司的生产、销售和供应链网络不断延伸，对多式联运与综合物流服务的需求不断增加。跨国公司要求为其服务的航运企业能够从原先的提供“港到港”的单一海上运输服务向拥有一个体系完整的物流网络、能够提供“门到门”的综合运输服务转变。“门到门”服务是客户全球供应链的核心部分，除了海路运输外，能同时提供综合性的陆路运输，将货物由内陆供应点运送到内陆需求点，覆盖了运输计划、运输执行与控制、仓库管理、包装及交付等环节。与此同时，技术的革新和生产的区域化导致了原材料运输量的相对降低和高附加值产品运输需求的大幅增加，这将对运输服务的及时性与可靠性提出更高的要求。 同时，“门到门”服务的发展创造了集装箱航运业的价值链，其中的主要环节包括集装箱航运、集装箱码头、集装箱租赁、货运代理、船务代理及物流服务。 公司目前的业务范围涵盖了集装箱航运业价值链的各个环节，通过一体化的经营模式为客户提供“门到门”的服务，有效控制各环节的成本，提升公司业务的协同效应和抗风险能力。 .业绩预测 公司本次募集资金用于物流业务的就达亿元，其一是亿元用来收购中远总公司持有的中远物流51%的股权；其二是亿元通过中远物流投资物流项目。 收购中远物流51%的权益这个项目可以在2007年产生效益，但产生的效益对于公司影响有限。中远物流公司2006年产生的净利润为亿元。 4.估值亮点—干散货业务的注入 .预期确定 中国远洋07年3月29日在香港市场发布公告：公司董事会确认正与中远集团商讨对于其散货船队可能的收购，董事会于今天授权公司管理层进行可行性研究及相关准备工作。 鉴于： 公司在中远系的战略地位-“上市旗舰，资本平台”； 中远集团的总裁魏家福07年初在香港的的公开表示：“中远集团将把干散货和油轮运输资产注入到香港上市的中国远洋公司中，今后要把中国远洋打造成中远集团的旗舰，把集团所有的航运资产注入到中国远洋”； 全球干散货市场处在景气周期的高位，此时干散货资产可以卖个好价钱，同时也会受投资者欢迎。 因此，我们认为，干散货资产的注入是可以明确预期的，收购将不迟于08年底前完成。 .干散货盈利突出 截止到2006年底，中远集团运营407艘干散货船舶，总计运力3072万载重吨，是全球规模最大的干散货船队，且规模为第二名的倍，占全球干散货运力的8%左右。 近年来，由于世界经济和贸易的平稳发展，干散货船舶运力和码头设施投放不足，导致干散货海运价格一路走高，BDI指数在今年的5月更是创出了历史新高，使得干散货船队利润普遍大幅增加。作为全球最大的干散货船队，中远集团下属的主要干散货企业无疑也是主要的受益者。 我们预计，干散货市场的供需矛盾难以在短时间内得到平衡，因此干散货市场有望在未来3年保持高位震荡的格局，BDI2007年平均水平将同比提高30%左右。 对于中远集团干散货业务的盈利情况，我们参照同类公司的情况并结合对市场的判断，粗略估计其07年、08的净利润分别为58亿元和61亿元，06年净资产230亿元。 .提升公司估值水平 如前所述，集装箱业务呈现较强的周期性和较大的波动性，对运价非常敏感，毛利率也较低。虽然公司还有比较稳定的、利润率也较高的集装箱码头和租赁业务，但由于利润占比不够，依然难以平抑公司业绩的大幅波动。 如果干散货业务能如期注入公司，则公司的收入和利润结构将发生大的变化，不仅能提高公司的盈利能力，而且能在相当大的程度上平抑公司业绩的波动。这些无疑会提高市场对公司股票的估值水平。 5.估值及风险分析 .公司盈利预测 我们预计，公司原有业务收入2007~2009年的增长率分别、和，摊薄后EPS为元、元和元，详见公司盈利预测表。 .估值分析 由于干散货资产注入的确定性，我们认为，以模拟干散货资产注入后的07、08年的业绩为估值依据，可以较真实的反映公司的股票价值。 根据上述估算，保守估计，干散货注入后公司，公司07年EPS可达到元左右，每股净资产在元左右。 参考国内国际同类公司的估值情况，国内可比公司可分为两类：暂没有资产注入预期和有资产注入预期。前者中的中远航运和中海发展的07年PE在22倍左右，PB在6倍左右；而有资产注入预期的南京水运和长航凤凰等，07年PE在40倍左右，PB在倍左右。 考虑到公司的行业地位，20~25倍的07年动态市盈率是市场可以接受的，则公司股票价格为元；而5倍动态市净率对应的股价则在元。 综合比较，公司股票的合理价格区间是元，对应07年模拟动态PE为20~28倍，PB为倍。(安信证券)
一、期租集装箱的期租分为长期租赁和短期租赁两种方式。长期租赁一般是指有一段较长的租用期限，而短期租赁则根据所需要的使用期限来租用集装箱，时间比较短。长期租赁又可分为金融租赁与按实际使用期租赁两种方式。前者指租箱人在使用期届满后买下所租用的箱子，后者系指租箱人在使用期届满后将箱子退还给集装箱出租公司。长期租赁对租箱人和出租公司都有好处。对出租公司来说，在出租期间有较稳定的租金收入；对租箱人来说，只要按时支付租金，箱子如同自己的一样；而且，长期租赁的租金比较低。同长期租赁比较，短期租赁较灵活。租箱人可根据自己需要的时间、地点来确定租用期限，但其租金比较高。二、程租集装箱的程租包括单程租赁和来回程租赁两种方式。1.单程租赁。单程租赁多用于同一条航线上来回程货源不平衡的情况，即从起运港至目的港单程使用集装箱。例如某船公司经营A港至B港的集装箱货物运输业务，A港至B港的货运量较大，而B港至A港的货物运输所使用的集装箱较少，即来回程货运量不平衡，而该公司从B港至其它地区又没有集装箱运输业务，营运结果必然在B港导致空箱积压。在这种情况下，该公司可租用A港至B港的单程集装箱，这样既可节省空箱在B港的保管费，又可节约空箱从B港运回A港的运费等。在采用单程集装箱租赁时应注意到，租箱人除支付租金外，有时还要支付提箱和还箱费。如果集装箱使用人从租赁市场行情好的地方租用至行情差的地方，租箱人就须支付提箱费、还箱费；反之，则不支付或仅少量支付这部分费用。2. 来回程租赁。来回程租赁通常用于来回程有较平衡货运量的航线。该种租赁方式租期不受限制，在租赁期间，租箱人有较大的自由使用权，不局限于一个单纯的来回程。这种租赁方式对还箱地点有严格的限制。三、灵活租赁集装箱的灵活租赁方式在费用上类似于长期租赁，在使用上与短期租赁相似，可灵活使用。这种租赁方式租期通常为一年。在大量租用箱子时，租金有回扣，其租金近乎于长期租赁一样便宜。在集装箱货运量大，经营航线较多且来回程货运量不平衡的情况下，采用这种租赁方式能比较容易适应变化，是一种很有价值的租赁方式。灵活租赁合同中，一般都规定有租箱人每月提箱、还箱数量及地点，租金按集装箱使用天数计，以及有关租箱人使用出租公司设备的规定等。在集装箱租赁业务中，租箱人除根据自己的需要选择集装箱出租公司外，还应注意到：（1） 出租公司的业务范围、管理水平和信誉；（2） 对目的地还箱数量的限制规定；（3） 对租箱费率的调研、比较；（4） 对提箱费、还箱费的规定；（5） 对所租用箱子的检查；（6） 有关合同责任条款和租金支付规定等。因此，作为租箱人，在进行租箱业务时， 工作应细致、周到，充分了解并掌握各租赁公司的特点，尽可能利用各公司的长处，与多家租赁公司签订灵活租赁合同。
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可以用那个知网，又几次免费得查重机会可以使用得，。
1.从论文的段落和格式进行检测。 论文检测基本上是整篇论文的上传。论文上传后，首先将论文软件分成若干部分，最终稿件格式对抄袭率有较大影响。paperfree小编告诉大家，不同段落的划分可能影响导致几十个字的小段落无法检测到。通过划分更短的段落也可以有效降低查重率。 2.从数据库中进行比较。 论文通过检测系统主要研究针对已发表的毕业设计论文、期刊论文和会议论文进行匹配，一些数据库也包含了一些网络文章。很多书籍是没有被查重系统收录的。从书本中中提取了摘抄的文献可能不会被查重。 3.章节变换。 许多学生改变了章节的顺序，或者从不同的文章中选择不同的章节拼凑在一起，这对抄袭考试结果几乎没有影响。所以现在许多论文检测都有关键词。句子的区分功能，只要与数据库中的论文相似，就会被标记出来。 4.标注参考文献。 引用别人的论文需要进行参考文献标注。其实很简单，我们在论文里加了参考资料，但是在论文查重软件里。统一来看，软件的阀值一般设置为1％。比如学习一篇研究文章有5000字，文章的1％是50字。如果你剽窃了超过50个单词，即使你增加了参考文献，你也会被判为剽窃。因此，标注参考文献非常具有重要，这也是可以降低查重率的一种教学方法。 5.字数匹配。 论文的抄袭检测系统是比较严格的，只要20个单位以上的词匹配是一致的，就认定为抄袭，但前提是要满足第四点，参考注释。
从开题到最后发表一篇论文需要很多时间和精力。如果你想顺利通过大学或杂志的查重，你必须提前进行论文检测，但自检的查重费用需要自费。为了节约检测费用，我们会找一些免费查重软件进行自检，那么免费论文查重检测软件都有哪些？ 一、免费论文查重软件。 1.学校内部查重系统: 学校一般会提供内部的论文查重系统，并且提供1-2次免费查重机会，学校内部查重系统查重率是最准确，也是最权威的。内部查重系统是不对外开放的，我们校外很难找到查重入口。 论文查重软件:学校提供的几次免费查重机会往往是不够的。这时我们可以选择Paperfree查重软件，新用户可以获取免费试用机会，而用户亦可透过参与活动，免费使用转发字数。 3.其免费查重系统软件：大学生在撰写毕业论文时，学校和导师会推荐免费查重软件。不同学校推荐的软件不同，我们以学校通知为准。 二、免费论文查重软件怎么选择。 虽然目前市面上有自己很多企业提供免论文查重检测系统软件，我们在选择的时候要注意其安全性。因此，在选择免费论文查重软件时，最好不要使用不安全的软件，不仅查重结果没有参考性，而且你的论文可能会因为小损失而泄露。通过询问学长学姐或自己的导师，我们可以选择一个真正可靠的免费论文查重检测系统软件。
目前免费论文查重软件比较多，部分高校定稿查重系统是知网查重及维普查重前期初稿检测一般使用一下部分查重软件（适合前期初稿检测）：
PaperFree论文查重软件通过海量数据库对提交论文进行对比分析，准确地查到论文中的潜在抄袭和不当引用，实现了对学术不端行为的检测服务；
PaperTime开启真正免费论文查重时代首家独创同步在线改重，实时查重；边修改边检测，修改哪里检测哪里；享受智能查重带来的美妙体验。
Paperbye论文查重系统，无论从查重内容准确度，修改论文效率，还是使用体验，都在不断精进，2018年下半年正式推出全新的论文查重系统，不光可以查重还可以自动降重。因此paperbye并不是纯粹的论文查重系统，准确的描述是，自带改重的论文查重系统，解决了目前市场论文查重之后，不知道怎么修改和修改论文效率低的问题，利用软件的“机器人改重”功能，实现软件的自动修改论文重复内容，从而达到迅速自动降低论文重复率，特别是对于第一次写论文的同学，软件自动修改论文内容，会给同学们一些启示或直接使用机器修改的内容进行替换原文内容，提高的文章查重和修改效率。
具体看看有哪些实用功能：
1、机器人智能改重
Paperbye改重是机器人自动修改查重报告里相似的文字内容，自动修改就是论文查重完成后，系统自动把相似内容通过深度学习的数据内容进行替换修改，达到自动降低文章相似率的目的。一篇几万字的文章，10秒内容可以修改完成，这个修改效率是任何人工都无法比拟的，修改文章效率高是机器人修改的独特优势。机器人修改的语句并不是简单的替换关键词和调换语序，主要原理是通过深度学习大量数据后把语义相似的句子进行替换。
2、免费在线改重
在线改重功能是机器人改重功能的延伸和完善，机器改重功能并不是非常完美，就像我们现在的语音识别系统，语音输入并不是100%的完美识别，用手机语音输入文字大家应该有体会。对于机器人修改的语句并不是每句都修改的很完美的，遇到一些专业性比较强的术语修改的会有些牵强，但是不用担心，可以在免费改重工具编辑器里自主修改，通过人工修改相结合达到完美降重效果。
3、同步查重功能
这个功能根据“赫洛克效应”的及时反馈的心理原理，在修改论文的过程中，修改一句话，通过paperbye的“同步查重”功能，马上就可以看到修改效果，达到及时反馈，并且及时检验了修改的方法技巧，使继续修改的信心大增，可以大大提高修改论文的质量和效率。传统的论文查重方式的是你必须把全文或片段改完，重新提交论文到查重系统里重新检测才能知道结果，这种方式无论从流程，还是查重后修改，都比较繁琐，更重的是如果通过修改查重后的相似比例降下来不理想，给人的感觉比较身心疲惫，没有愉悦感，对修改论文极度厌恶。Paperbye论文查重系统解决了这个问题，算是颠覆传统，开创先河，让论文降重不再痛苦。
4、同步查重和在线改重的结合
这两个功能在paperbye查重系统里像一双筷子一样，紧密结合使用的，自己对文章内容修改后，就需要对修改的内容进行查重，点击系统里的“同步查重”，马上就会看到修改后的效果，甚至修改1个字，都可以进行马上查重并反馈修改结果，真正实现一边修改论文，一边进行论文查重。修改、查重同步进行，完美结合。市场上声称“在线改重”，好多同学容易误解，那种改重是必须改完整片文章，再整篇提交，就是传统的论文查重方式，并不能实现修改一句马上看到修改结果。目前paperbye才是真正的实现了边修改边查重的同步效果。
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第一步：初稿一般重复率会比较高(除非你是自己一字一句写的大神)，可以采用万方、papertest去检测，然后逐句修改。这个系统是逐句检测的，也就是说你抄的任何一句话都会被检测出来。这种检测算法比较严格，从程序的角度分析这种算法比较简单。因而网上卖的都很便宜，我测的是3万字，感觉还是物美价廉的。(注意：1 这个库不包含你上一届研究生师兄的大论文，修改一定注意. 2 个人建议如果学校是用万方检测，就不要去检测维普之类的 先把论文电子版复制一份，保存一份。看检测结果，其中一份复制的备份论文，把检测出重复的部分能删了先删了，把不能删的，15字以内改一改，最好是加减字符，不要改顺序，改顺序没太大用，参考文献删掉一部分，不能删的话，先改下，英文文献可以15个字符换一个词。把修改过的上交，重新过系统检查。保存的原论文稍做改动上交纸质版。那个系统很麻烦的，很多没看过没应用过的文献都能给你加上，可见中国人抄袭的功夫，都是互相抄，但是为了保证论文的完整性和表述的准确性，不要随意改动，上交的纸质版，一定要斟酌，一般检查完就不会再过检测系统了，所以纸质版的不用担心。第二步：经过修改后，重复率大幅下降了。这时你可以用知网查了，知网查重系统是逐段检测的，比较智能。检测后再做局部修改就基本上大功告成了，我最后在网上用知网查是4%，简单修改后，在学校查是。注意：记住，最忌讳的是为了查重，把论文语句改得语句不通、毫无逻辑，这样是逃不过老师的，哈哈，大家加油！关于知网相关抽查规定：有规定的，可以进行第一次修改，修改之后通过就可以答辩，如果第二次不通过就算结业，在之后4个月内还要交论文或者设计的。这个是在抄袭30%的基础上的。 如果抄袭50%以上的话，直接结业 在之后4个月内还要交论文或者设计的。1．被认定为抄袭的本科毕业设计（论文），包括与他人已有论文、著作重复总字数比例在30%至50%（含50%）之间的，需经本人修改。修改后经过再次检测合格后，方可参加学院答辩。再次检测后仍不合格的，按结业处理。须在3 个月后提交改写完成的毕业设计（论文），检测合格后再参加答辩。2．被认定为抄袭的本科毕业设计（论文），且与他人已有论文、著作重复总字数比例超过50%的，直接按结业处理。须在4 个月后提交改写的毕业设计（论文），检测合格后再参加答辩。知网系统计算标准详细说明：1．看了一下这个系统的介绍，有个疑问，这套系统对于文字复制鉴别还是不错的，但对于其他方面的内容呢，比如数据，图表，能检出来吗？检不出来的话不还是没什么用吗？学术不端的各种行为中，文字复制是最为普遍和严重的，目前本检测系统对文字复制的检测已经达到相当高的水平，对于图表、公式、数据的抄袭和篡改等行为的检测，目前正在研发当中，且取得了比较大的进展，欢迎各位继续关注本检测系统的进展并多提批评性及建设性意见和建议。 2．按照这个系统39%以下的都是显示黄色,那么是否意味着在可容忍的限度内呢?最近看到对上海大学某教师的国家社科基金课题被撤消的消息,原因是其发表的两篇论文有抄袭行为,分别占到25%和30%. 请明示超过多少算是警戒线？百分比只是描述检测文献中重合文字所占的比例大小程度，并不是指该文献的抄袭严重程度。只能这么说，百分比越大，重合字数越多，存在抄袭的可能性越大。是否属于抄袭及抄袭的严重程度需由专家审查后决定。 3．如何防止学位论文学术不端行为检测系统成为个人报复的平台？这也是我们在认真考虑的事情，目前这套检测系统还只是在机构一级用户使用。我们制定了一套严格的管理流程。同时，在技术上，我们也采取了多种手段来最大可能的防止恶意行为，包括一系列严格的身份认证，日志记录等。 4．最小检测单位是句子，那么在每句话里改动一两个字就检测不出来了么？我们对句子也有相应的处理，有一个句子相似性的算法。并不是句子完全一样才判断为相同。句子有句子级的相似算法，段落有段落级的相似算法，计算一篇文献，一段话是否与其他文献文字相似，是在此基础上综合得出的。 5．如果是从相关书籍上摘下来的原话，但是此话已经被数据库中的相关文献也抄了进去，也就是说前面的文章也从相关书籍上摘了相同的话，但是我的论文中标注的这段话来自相关的书籍，这个算不算学术抄袭？检测系统不下结论，是不是抄袭最后还有人工审查这一关，所以，如果是您描述的这种情况，专家会有相应判断。我们的系统只是提供各种线索和依据，让人能够快速掌握检测文献的信息。6．知网检测系统的权威性？学术不端文献检测系统并不下结论，即检测系统并不对检测文献定性，只是将检测文献中与其他已发表文献中的雷同部分陈列出来，列出客观事实，而这篇检测文献是否属于学术不端，需专家做最后的审查确认。
光阴似箭，转眼间又到了毕业季，为现在论文查重很严，所以说很多学生都会认真准备写毕业论文，对他们来说是一个忙碌的毕业季。所以下面就和paperfree小编一起来了解一下如何使用网络论文检测系统！ 要想顺利毕业，论文查重这个步骤是必不可少的，面对市场上层出不穷的论文检测系统，我们该如何使用？虽然论文检测系统有很多种，但是它们提供的功能都是检测论文。所以说基本上每一个论文检测系统的使用步骤都是相通的，你只要知道一个软件，其他软件肯定可以无师自通。 现在很多论文检测系统都有微信官方账号，现在可以通过两种方式进行论文检测。第一种是直接搜索官网进入官网；第二种是通过微信官方账号找到论文测试界面，输入论文标题和作者名称，上传要测试的文档，然后点击提交。此时，论文测试系统会自动计算整篇论文测试的成本。成本出来后，可以选择微信支付或支付宝支付，成功支付后进行测试。发出查重报告需要半个小时左右。查重报告非常详细，可以根据查重报告进行修改。所以无论等多久，都要下载保存查重报告，这对论文的修改真的很重要。大家也要充分利用查重报告。