1．首次成功地应用α－萘乙酸延长花椰菜和甘蓝的保鲜期。李曙轩在美国留学时，美国在应用植物生长调节剂延长鳞茎类和薯芋类蔬菜贮藏期方面已获得成功，但在延长甘蓝类蔬菜保鲜期方面刚刚开始探索。李曙轩意识到，甘蓝和花椰菜是全世界普遍食用的蔬菜，若能用激素处理的方法代替冷藏法延长保鲜期，将有广阔的发展前景。在阅读了大量科技文献，并在认真总结前人经验的基础上，他用各种植物生长调节剂，进行多种方法处理，终于获得成功。他把α－萘乙酸甲脂先喷在纸屑上，然后与产品一起混装在包装箱里，明显地抑制了采后脱叶，延长了保鲜期。1947年，他在《美国园艺学报》上发表了《α－萘乙酸甲脂对花椰菜保鲜作用的研究》论文，1948年，完成了博士论文《植物生长调节剂对花椰菜和结球甘蓝采后脱叶的影响》。李曙轩率先研究了用植物生长调节剂延长甘蓝类蔬菜保鲜期。2．开发出应用生长素类物质刺激茄果类单性结实技术。李曙轩认识到用生长素类物质促进单性结实，防止茄果类落花落果，提高产量，是一项极其有效而易于在中国推广的技术，因此在回国时，有意识地带回了2，4－D，β－萘氧乙酸（βNOA）等生长素类物质。50年代初期，他就在国内开始用2，4－D防止番茄、茄子的落花落果，促进单性结实获得成功，明显地增加了产量。在以后30多年里，他一方面推广这项技术，另一方面则不断地加以改进和完善。70年代，他研究使用对－氯苯氧乙酸（PCPA）代替2，4－D，提高了工效，减轻了药害。现在用2，4－D和PCPA防止落花已成为各地普遍使用的生产措施。他发表的代表性论文有《植物生长刺激素对于番茄落花及结实的影响》、《植物生长刺激物对于茄子落花及结实的影响》、《应用苯酚类生长调节剂防止番茄落花增加产量的效果》等。国际园艺界的调查报告记载：“中国是应用植物生长调节剂增加番茄产量最多的国家。”这项举世公认的成就凝聚了李曙轩近40年的心血。3．最先在世界上用激素控制瓠瓜的性别表现。瓜类是雌雄同株异花植物，其性别调控机理和技术一直是遗传学、园艺学和植物生理学研究的重点。到80年代，已经可以用植物激素调节黄瓜的性别表现，但还没有人在瓠瓜上作过试验。李曙轩经过多次试验，1978年终于成功地用植物激素控制了瓠瓜的性别表现。他用乙烯利在苗期处理瓠瓜植株，使原来很少开雌花的主蔓开出了大量雌花，大幅度地提高了产量。1979年，李曙轩在《植物生理学报》上发表了题为《黄瓜及瓠瓜的性别表现与激素控制》论文，这一发现，提出了激素可以改变植物遗传中的雌性或雄性表现，1980年，李曙轩在美国科罗拉多大学召开的美国园艺学会第77届年会上宣读了题为《瓠瓜性别表现的激素控制》的论文，为各国科学家所重视。1986年，他主持的“蔬菜作物化学控制技术”研究课题，由于在瓠瓜性别调控方面取得的研究成果，获国家教委颁发的科技进步二等奖。李曙轩在植物激素应用领域内的研究很广泛，在使用2，4－D防止大白菜脱叶，用顺丁烯二酸联氨（MH）控制洋葱及大蒜在贮藏期间发芽，用乙烯利对番茄进行催熟等方面，都取得了明显的效果。1988年以后，李曙轩相继出版了《植物生长调节剂与农业生产》、《植物生长调节剂与蔬菜生产》2本专著，全面总结了他的研究成果，系统地介绍了国内外的研究进展和应用技术。
植物激素对附子多糖含量的影响
植物在生长的过程中受到内源激素(或外源激素)的调节作用，因此在植物的栽培过程中激素对其生长发育、生理生化、产量、品质、次生代谢产物等都可能会产生作用。
【摘要】 目的研究植物激素对附子多糖含量的影响。方法在附子的苗期和子根膨大期喷施不同的激素，采用蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量。结果不同的激素间差异明显，赤霉素(GA)、α-萘乙酸(NAA)对多糖含量的增加也有作用;6-苄氨基嘌呤(6-BA)和6-糠氨基嘌呤(KT)对多糖含量的增加也有作用;吲哚乙酸(IAA)有抑制影响。结论植物激素对附子多糖的含量有显著的影响。
【关键词】 植物激素; 附子; 多糖
Abstract：ObjectiveTo study the effects of plant hormones on the determination of polysaccharide of Aconitum plant hormones were sprayed on the Aconitum carmichaili at the seedling growing period and tubers expanding anthrone-sulfuric acid colorimetry was used to determine the results showed that there was significant difference between the effect on the increment of the content of polysaccharide with the treatments of GA and NAA were and KT also improved the content of polysaccharide,but IAA had inhibitory effect on effects of plant hormones on the determination of polysaccharide of Aconitum carmichaili are singificant.
Key words：Plant hormones; Aconitum carmichaili; Polysaccharide
附子是我国常用的中药，为毛茛科乌头Aconitum carmichaeli Deb.的子根，附子的主要有效成分为乌头类生物碱:乌头碱(aconitine)、中乌头碱(mesaconitine) 与次乌头碱(hypaconitine)等，具有抗炎、镇痛、强心、抗心律失常、降血糖等药理作用, 有回阳救逆、补火助阳、散寒除湿的功效 [1，2]。中草药多糖在增强机体免疫功能及抗肿瘤、抗肝炎、抗溃疡、调血脂、降血糖、抗衰老方面都有作用[3]。附子多糖提取液还具有抗癌、抗衰老和增强免疫机能等作用[4]。附子多糖高效低毒的生物学特性,近年来逐渐受到了人们的关注，是人们新药研发方向之一。植物激素作为化控技术在农业上发挥了重要的作用,对药用植物次生代谢产物也有影响，但在附子上的研究尚未开展。因此，研究激素对多糖含量的影响，对附子的栽培管理、标准化生产和药用价值的利用都有重要的意义。
1 材料与仪器
材料试验材料来自四川江油附子GAP基地的主要栽培种，由侯大斌教授鉴定。随机区组设计，重复3次，种植在西南科技大学校内实验田。试验田土壤特性：全氮含量为，速效氮含量为 mg/kg，速效磷含量为 mg/kg，速效钾含量为 mg/ kg,有机质 mg/kg。底肥：农家肥30 000 kg/ha，油枯3 000 kg/ha，高效磷肥750 kg/ha，按附子生产要求进行田间管理，每月除1次草。激素选用：GA(60 mg/L)，6-BA(40 mg/L)，NAA (30 mg/L)，IAA(20 mg/L)，KT (25 mg/L)，对照(清水)，分别在苗期和子根膨大期喷施，06-27收获。
收获附子先用自来水清洗干净，在用蒸馏水漂洗两次，装入牛皮纸袋放入烘箱，在105℃下烘30 min，再在60～70℃下烘干至恒重，粉碎过60目筛，4℃冰箱保存，备用。
仪器设备、试剂旋转蒸发仪(Buchi公司)，BP211D电子分析天平(Storis公司)，T6普析通用新世纪紫外分光光度计(北京普析)，高速冷冻离心机(Backman公司)，中药切片机(长沙中南制药机械厂)、中草药粉碎机(天津泰斯特仪器有限公司)。
无水乙醇，丙酮，乙醚，氯仿，正丁醇，浓硫酸，蒽酮，葡萄糖等，以上试剂均为分析纯。
2 方法
附子多糖的提取[5，6]称取干燥的附子粉200 g,加入适量80%乙醇,回流提取3 h,抽滤，药渣挥尽乙醇后,沸水提取2次,1 h/次,合并提取液,浓缩至200 ml,加95% 乙醇使醇含量达到80% ,于4℃冰箱中醇沉过夜，离心(5 000 r/min，10 min)，沉淀依次用无水乙醇、丙酮洗涤,得到粗多糖。用热水将粗多糖溶于水,用Sevage法(氯仿∶正丁醇=5∶1)除蛋白,重复3次(用考马斯亮蓝法测得无蛋白为止)。流水透析后, 蒸发浓缩至200 ml, 加95%乙醇使醇含量达到80% ,于4℃冰箱中醇沉过夜。离心,沉淀依次用无水乙醇、丙酮洗涤,真空干燥，称重计算得率。
多糖含量的测定采用蒽酮-硫酸法[7]。以糖浓度(C，μg /L)为横坐标，吸光度(A)为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程A= 7,r= 2，葡萄糖在20～100 μg/L与吸光度呈良好的线性关系。
换算因子的测定精密称取附子多糖100 mg,溶于1L容量瓶中,稀释至刻度,摇匀。精密吸取1 ml于具塞试管中,按照蒽酮-硫酸法方法测定吸光度,根据回归方程计算多糖浓度中葡萄糖的浓度C,按下式计算出换算因子f。f= C·D/W。式中W为多糖质量(mg) , C为葡萄糖浓度(μg /ml) ,D为稀释倍数。测得换算因子f= ( n= 5,RSD=)。
样品溶液的制备精密称取不同处理的附子样品 g(n=3)，加入150 ml 80 %乙醇回流提取3 h,抽滤，残渣挥尽乙醇后,用100 ml水提取1 h, 2次,离心，定容至250 ml的容量瓶中,为样品液。
精确度实验精密称取附子粉5份，每份1 g，按照“”项下的方法同时制取5份样品溶液。精密移取各样品溶液各1 ml分别置于具塞试管中，按照“”项下的方法测定吸光度，计算附子多糖含量。测得RSD=(n=5),说明该分析方法精密度良好。
稳定性实验按“”项下样品溶液制备方法制备，吸取1 ml试液于具塞试管中，按照“”下的方法测定吸光度，每隔1 h测定1次，连续6 h，考察其稳定性。测得吸光度在6 h内无明显变化，稳定性较好(RSD=)。
数据处理数据用SAS软件进行方差分析和最小显著差数法(LSD)分析。
3 结果
精制多糖的得率干燥的附子粉200 g,得到精制多糖 g,得率为(n=3)。
回收率的测定精密称取5份附子样品液各 g,分别加入30 mg左右的附子多糖,按照“”项下样品溶液的制备和“”项下的测定方法操作,测得吸光度,计算回收率(R)。回收率R=，RSD=(n=5)表1 回收实验结果
植物激素对附子多糖含量的影响精密吸取“”项下样品液1 ml于具塞试管中，按照蒽酮-硫酸法测定吸光度，按回归方程计算样品液中葡萄糖的浓度，按照下面公式计算附子粉中多糖的含量。样品中含量(% ) = (CD /W Rf) ×100%。式中: C为样品液中葡萄糖的浓度, D为稀释倍数, f为换算因子, W为样品质量,R为回收率。各处理样品中多糖含量和方差分析表见表2。表2 方差分析表
激素对附子多糖的含量的影响见表3。区组间的方差分析可知，F=,说明不同的激素间差异具有明显的差异性，多糖对不同激素的敏感性存在差异。GA，NAA对多糖含量的提高最为显著，平均含量分别是 ， mg/g，比对照增加了，，与其它激素和对照的差异达到极显著;两种细胞分裂素对多糖含量的影响也有显著的增加，但作用低于GA,NAA，含量分别为 mg/g和 mg/g，增加量分别是，和对照的差异也达到极显著。IAA对多糖含量有明显的抑制作用，多糖含量仅为 mg/g。几种激素的作用效果GA，NAA>KT，6-BA>CK>IAA。表3 激素对附子多糖含量影响分析
字母表示处理间的差异显著水平，相同的字母表示两处理间没有差异，不同的字母表示两处理间差异显著，大写字母表示差异极显著(1%)，小写字母表示差异显著(5%)
4 讨论
植物在生长的'过程中受到内源激素(或外源激素)的调节作用，因此在植物的栽培过程中激素对其生长发育、生理生化、产量、品质、次生代谢产物等都可能会产生作用。多糖作为附子有效成分之一，是评价附子药用价值的主要标准之一。目前对多糖含量的测定使用的方法还主要是经典的紫外比色法，通过验证，该方法具有较好精密度和稳定性，回收率也较高，是检测多糖含量的优良的方法之一。通过实验可以发现，激素对多糖的含量有调节作用。除IAA外其它几种激素对多糖含量都有明显的增加作用，说明IAA的作用具有不稳定性，这与前人研究的激素IAA的调节作用具有不稳定性比较相似[8]。IAA在植物生长的不同时期易受到吲哚乙酸氧化酶的破坏而失去作用，对植物的生长发育产生有影响，可能是抑制多糖含量的原因之一。由于激素对植物生长调节机理目前还不是很清楚，激素对多糖含量的影响还有待进一步研究。
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收稿日期：2007-10-25基金项目：深圳市科技和信息局基金资助项目作者简介：王丹（1982-），女，辽宁本溪人，硕士研究生，从事植物生物技术研究。注：雷江丽为通讯作者。大花美人蕉茎尖组织培养技术研究王 丹1,2，雷江丽2，吴燕民3，吕 慧2，郁继华1(1.甘肃农业大学 农学院，甘肃 兰州 730070；2.深圳市园林科学研究所，广东 深圳 518003；3.中国农业科学院 生物技术研究所，北京 100081)摘 要：以大花美人蕉（Canna×generalis）根茎茎尖为外植体进行组织培养技术研究，筛选出芽诱导适宜的培养基为MS + 6-BA （单位下同）+ TDZ ；MS + 6-BA + TDZ + NAA 培养基能较好地诱导分化出丛生芽, 继代增殖培养中与MS + 6-BA + TDZ + NAA 培养基交替使用可减少畸形芽，增殖系数达；适宜的生根培养基为MS + 6-BA + NAA ，生根率达，且植株生长健壮，移栽易成活。关键词：大花美人蕉；茎尖；组织培养中图分类号： 文献标识码：A 文章编号：1009-7791(2008)01-0033-04Research on Shoot-tip Culture of Canna×generalisWANG Dan1,2, LEI Jiang-li2, WU Yan-min3, LÜ Hui2, YU Ji-hua1( of Agronomy, Gansu Agricultural University, Lanzhou 730070, Gansu China; Institute of LandscapeGardening, Shenzhen 518003, Guangdong China; Research Institute, Chinese Academy of AgriculturalSciences, Beijing 100081, China)Abstract: The paper mainly studied on tissue culture of Canna×generalis with the stem tips asexplants. The results showed that the bud inoculation medium was MS + 6-BA ; the best of clump shoot induction and differentiation medium was MS + 6-BA +TDZ + NAA ; using MS + 6-BA + TDZ + NAA asproliferation medium, an optimal proliferation rate was obtained. When the two kinds of mediumused alternatively, the effect was better. The optimum rooting medium was MS + 6-BA +NAA , the rate of rooting could reach , and cultured in this medium, the plant grewwell and easy to words: Canna×generalis; shoot-tip; tissue culture大花美人蕉(Canna×generalis)属美人蕉科(Cannaceae)美人蕉属(Canna)的园艺杂交种[1]，是多年生喜光宿根草本花卉，原产美洲热带和非洲等地。其枝叶茂盛、花朵艳丽、姿态优美、花期长，在深圳地区几乎全年开花，是配置大型花坛的优良品种。大花美人蕉不仅观赏价值高，而且能吸收硫、氯、氟、汞等有害物质，具有净化空气、保护环境的作用，因此，世界许多城市的园林绿化中都广泛应用。美人蕉传统的繁殖方式主要采用分切地下根茎的方法，繁殖速度慢、增殖效率低，而且连续营养繁殖造成病毒积累致使病毒病在各地相当普遍，严重影响其观赏价值。利用茎尖组织培养进行脱毒试管苗快繁，是目前大力繁殖与推广美人蕉的主要手段。关于美人蕉组织培养的研究报道较少[2,3]，本研究探索其组织培养高效的再生体系，以期为品种提纯复壮及遗传转化、性状改良奠定基础。2008,37(1): Plant Science第·34· 37 卷1 材料与方法 材料供试材料为目前城市绿化中普遍应用的大花美人蕉‘President’品种。 外植体选择与处理选择生长健壮、无病虫害的优良母株，挖取带芽胞的根茎，去除表面老皮并用肥皂水清洗。用75%乙醇棉擦拭，然后采用不同的消毒剂及处理时间（升汞10min、2%次氯酸钠10min、2%次氯酸钠20min、2%次氯酸钠 + 升汞5min、2%次氯酸钠 + 升汞10min），封闭式振摇灭菌。无菌水冲洗5 次，置于超净工作台上备用。接种前，剥去外部叶片，露出生长点，立即切取茎尖进行接种。 培养方法及培养条件试验于2006 年10 月在深圳市园林科学研究所组培室进行。诱导、增殖和生根培养基均选用MS为基本培养基，在不同培养阶段附加不同种类、不同浓度配比的植物生长调节剂（表2～表4），蔗糖3%，pH 。培养温度(28±2)℃，光照强度2 500 lx，光照周期为14h/d，相对湿度70%～80%。每处理接种30 瓶。定期观察试管苗生长与分化情况。2 结果与分析 不同消毒处理方式对外植体无菌化的影响因供试外植体取自美人蕉地下根茎，表面污染物较多，不易消毒，且不同植物及外植体的成熟度对消毒剂的反应不同，故本试验选用升汞和次氯酸钠进行灭菌效果比较，以筛选合适的消毒剂及消毒处理时间。由表1 可知，2%次氯酸钠20min 处理的无菌化效果较好，但茎尖褐化较严重，说明灭菌时间过长对去老皮后的幼嫩根茎影响较大。升汞10min 处理与2%次氯酸钠 + 升汞 10min处理，无菌化效果差异不大，但2%次氯酸钠 + 升汞 10min 处理有轻微药害。因此，后续实验选用升汞处理10min 进行外植体消毒。 不同生长调节剂配比对芽诱导的影响以MS 为基本培养基，附加不同浓度6-BA、NAA、2,4-D、KT、TDZ 等（表2），以筛选出较适宜美人蕉茎尖诱导分化的配方。因美人蕉根茎具有休眠特性，芽诱导分化较难。TDZ 具有很强的促进细胞分裂活性，～μmol/L 即可有效促进分化[4]，因此，本实验对TDZ 的诱导效果进行初步探索。试验表明，在不添加任何生长调节剂的MS 基本培养基（1 号）上，茎尖接种10d 后开始生长，叶片展开后，生长停止；15d 后转接到新的MS 培养基上无明显生长，随后叶片逐渐变黄、萎蔫，说明基本培养基中添加生长调节剂是美人蕉离体培养的必要条件。在仅添加6-BA 的2、3、4 号培养基中，高浓度的2 号培养基分化率为，明显好于3、4号培养基，说明美人蕉启动芽诱导分化需要高浓度的细胞分裂素（表2）。11～16 号培养基添加物为不同生长调节剂与TDZ 组合（表2）。仅添加TDZ 的培养基分化率为0，而多种生长调节剂配合使用分化效果更好[5]。其中15 号培养基的侧芽分化率最高，达，且每个茎尖可增殖2～3 个侧芽，但个别茎尖经多次转接后有畸形芽；与2 号培养基相比，分化率明显提高，说明添加低浓度TDZ 可促进芽诱导分化（表2）（图版-a）。5、6、7 号培养基为生根培养基，探讨NAA 对美人蕉茎尖生长和生根的影响。试验结果初步说明美人蕉在6-BA/NAA 小于2/ 时生根率可达50%以上（表2）。8、9、10 号培养基，探讨美人蕉脱分化，诱导愈伤组织，但结果均不理想。因此，建立高效的美表1 不同消毒剂及处理时间对外植体无菌化的影响处 理 接种数污染数污染率(%) 药害情况升汞10min 30 5 基本无药害2%次氯酸钠10min 30 12 无药害2%次氯酸钠20min 30 4 20%有轻微药害2%次氯酸钠+升汞5min 30 10 3%有轻微药害2%次氯酸钠+升汞10min 30 5 7%有药害第1 期 王丹,等：大花美人蕉茎尖组织培养技术研究 ·35·人蕉遗传转化再生体系还需进一步探索愈伤组织诱导途径。 芽继代增殖为了探讨优化的芽继代增殖培养基配方，按表3 设计6-BA、NAA、TDZ 的正交实验，以15 号培养基上分化出的丛生芽为接种材料，进行继代增殖培养（图版-b）。由表3 可见，除17、18 号培养基外，低浓度TDZ（）的分化促进作用较高浓度（）的效果好，说明高活性的TDZ 浓度过高反而抑制分化。当 时, NAA 促分化作用显著优于。在TDZ、NAA 浓度相同的情况下，随着6-BA 浓度的升高，分化率提高。但随着继代次数的增多，含高浓度6-BA的27 号培养基分化率略有下降，甚至有个别畸形芽产生，说明高浓度细胞分裂素对短期的分化有促进作用[9]，但继代数次后，芽已经萌动，自身具有分化能力，需适当降低6-BA 浓度进行壮苗，以避免畸形芽产生。因此，在增殖过程中交替使用分化增殖系数较高的19 号培养基和27 号培养基，既可保证较高的芽分化率，又可使继代苗生长健壮，减少畸形芽。 生根诱导增殖芽3～5cm 长时，转接到生根培养基上培养约10d 后，可见到根生成（图版-c）。接种20d 后统计生根结果（表4）。从表4可见，所用培养基上都有根生成，说明美人蕉生根较容易；结合生根率和生长势，我们认为MS + 6-BA + NAA 培养基较适宜美人蕉生根。表2 不同植物生长调节剂组合的比较植物生长调节剂(mg/L) 编号6-BA NAA 2,4-D KT TDZ分化率(%) 生根率(%) 备注1 0 0 0 0 02 9 0 0 0 0 参考[2]3 5 0 0 0 0 参考[3]4 3 0 0 0 0 2 1 0 0 0 2 0 0 0 2 0 0 0 08 0 0 4 0 09 0 0 2 1 0 参考[6]10 0 0 2 0 参考[7]11 0 0 0 0 012 0 0 0 参考[8]13 0 0 0 0 0 1 0 8 0 0 0 5 0 0 表3 不同生长调节剂配比对芽继代繁殖的影响生长调节剂(mg/L) 编号6-BA NAA TDZ接种数分化率(%)增值系数 生长势17 30 ++18 30 ++19 30 ++20 30 ++21 30 ++22 30 ++23 30 ++24 30 +25 30 ++26 30 +27 30 ++28 30 +注：++ 表示生长势强；+表示生长势弱。同列中不同字母表示差异显著(P＜＝，表4 同。表4 不同的生长调节剂配比对组培苗生根的影响生长调节剂(mg/L) 编号6-BA NAA接种数生根苗数生根率(%)植株生长势29 0 30 19 +30 0 30 21 ++31 30 20 +++32 30 16 ++注：+++ 表示生长势强；++表示生长势中等；+表示生长势弱。第·36· 37 卷3 结 论美人蕉根茎生长在土壤中，无菌化操作较困难。灭菌试验表明，升汞震荡灭菌10min 效果较好，采回的外植体应尽快处理接种，放置时间过长伤口处易染菌，导致接种后褐化较严重。MS + 6-BA + ZDT + NAA 培养基能较好地诱导分化丛生芽，MS + 6-BA + TDZ NAA 为较好的增殖培养基，在增殖培养过程中这两种配方交替使用效果更好；短时间使用高浓度生长调节剂对增殖有促进作用，但长时间使用高浓度生长调节剂会使组培苗质量下降。在试验中还发现，转接次数多的茎尖较转接次数少的分化率大，建议在接种后的10～20d 内及时转接。选用MS + 6-BA + NAA 为生根培养基，生根率较高，根系粗壮、根毛密集，植株生长健壮（图版-d），且移栽成活率较高。参考文献:[1] Segeren W, et al. The genus Canna in Northern South America[J]. Acta Bot Neerl., 1971,20(6): 663-680.[2] 刘文萍,等. 美人蕉茎尖组织培养及快繁技术[J]. 北方园艺, 2001(6): 32.[3] 丁爱萍,等. 美人蕉组织培养及快速繁殖技术[J]. 园林科技, 2006(1): 11-12.[4] Singh N D, et al. The effect of TDZ on organogenesis and somatic embryogenesis in pigeonpea (Cajanus cajan L. Millsp)[J].Plant Science, 2003,164(3): 341-347.[5] 王关林,等. 高活性细胞激动素TDZ 在植物组织培养中的应用[J]. 植物学通报, 1997,14(3): 47-53.[6] 宣朴,等. 生姜茎尖组培快繁技术研究[J]. 西南农业学报, 2004,17(4): 484-486.[7] Kromer K, et al. In vitro cultures of meristem tips of Canna indica L.[J]. Acta Horticulturace, 1985,167: 279-286.[8] Vendrame W A, et al. In vitro propagation and plantlet regeneration from Doritaenopsis Purple Gem 'Ching Hua' flowerexplants[J]. HortScience, 2007,42(5): 1 256-1 258.[9] 刘敏. 花卉组织培养与工厂化生产[M]. 北京: 地质出版社, 2002: 101-102.
在高中生物第四章《植物生命活动的调节》中，以顶端优势为例，说明植物激素之一生长素对植物生长的促进作用，与其浓度的高低有一定关系，并以棉花摘心和果树修剪为例，略述它在生产实践上的应用价值，恰当地联系了实际，激发了学习兴趣，容易为学生理解。但是，要真正掌握和运用这一原理，为“科技兴农”服务，还须扩大视野，反复实践，不断总结提高。现将我如何结合教学，培养学生动手能力，探索“科技兴农”的做法略述于下。1指导葡萄修剪栽培葡萄是一条见效快的致富门路，但它的技术性较强，主要是修剪和病虫害防治。葡萄的修剪主要是冬夏两季。我校是农村中学，冬季（12月至翌年1月）要带同学到毗邻的专业户葡萄园中学习冬剪技术。而葡萄的夏季修剪，则更为繁重而严格，项目也较多，摘心剪梢就是其中重要的一项。在结果枝蔓始花时（一般在5月下旬～6月初），带同学到园中实习，在花序以上留4～7叶，将新梢顶端摘去（一般长3～5cm）阻止顶芽产生的生长素向下运输，促使夏芽萌发，抽生夏芽副梢。学生看得见摸得着，很容易理解生长素对生长影响的二重性特性。因为长江流域气候温暖湿润，葡萄枝蔓生长旺盛，副梢萌发次数多，花序原始体形成容易，因此，生产实践上常保留结果枝花序以上的1～2个夏芽副梢，其余全部抹除，以提高座果率，并对此副梢也进行摘心，解除其下部侧芽所受的抑制作用，同时对发育枝和徒长枝进行重摘心，调节养分流向，促使夏芽副梢出现二次花序，培养二次结果，甚至三次结果，创造一年多次结果的良好条件，达到增产的目的。学生为之耳目一新，再次证实了“知识就是力量”，“科技是第一生产力”的英明论断；也符合兴趣发展是从“有趣→乐趣→志趣”的客观规律，激发了学习积极性，许多同学准备在家庭园子里试种。2指导落叶果树的修剪顶端优势的原理在果树整枝修剪上应用极为普遍，如桃、梨、苹果、柿等。我曾以校内的幼年桃树为例，指导学生进行修剪，实践教材内容。在桃树定植后的当年，距地面65～80cm处摘心或剪截，叫定干。使下部侧芽萌发，并把剪口下约20～40cm一段选作整形带，其上选育3个生长健壮、分布均匀、开张角度适当的新梢作为第一层主枝，以后通过各种不同程度的短截逐步培养副主枝和结果枝组，逐步“造成一定形状的树冠”（即生产上普遍采用的自然开心形树形）。其它落叶果树的修剪整形，方法与桃树大同小异，即运用顶端优势的原理，通过修剪来调节果树器官的数量、质量、性质及其在树冠内的分布，调节生殖与生长的关系，维持丰产树形。学生在实践中加深理解了课文内容，学到了栽培修剪技能，效果很好，回去能够试着做，少数饶有兴趣的尖子，成了能说能做的小技术员。3指导菊花等花卉的矮化栽培“菊不盈尺”，是对菊花株高的严格要求，也是评品菊花观赏价值的重要条件之一。而要做到“菊不盈尺”主要靠摘心，一般须2～3次。我每年都要指导同学对学校栽培的菊花进行摘心整枝，并留部分不摘心的作对比观察，通过实践，大家都能深刻理解和运用顶端优势原理促进侧芽萌发，调整花朵数量和质量，并把植株控制在理想的高度，提高观赏价值。在反复实践中又摸索出新的摘心方法，即先摘顶心，以后分批抹去全部腋芽、侧枝，养根护叶，逼地下茎萌发脚芽，最后齐土面剪除老茎这样从上到下逐层摘心除枝，诱导脚芽早出土并茁壮生长，最终开出硕大花朵，培育成矮壮型菊花，效果更好。其它许多花卉的修剪造型，原理和方法也和菊花基本相同。如月季，萌芽力虽强，花开在当年生新梢顶端，不修剪腋芽不易萌发，枝条又瘦又长，呈藤本状，因此，除冬季休眠期重剪外，在生长期，当花将凋谢时，一般在残花第三个复叶以下及时进行轻度短剪，以促使下部腋芽萌发，不断开出硕大艳丽的花朵。又如一串红、�杜鹃等，通过分别对主茎和侧枝摘顶，抑制顶端优势，促使腋芽萌发，控制植株纵、横方向生长，达到株形矮壮，侧枝丛生，繁花满枝的理想效果。至于那些随处可见的绿化隔离带绿篱、绿墙和各种形式的绿球，也是应用此原理，通过修剪艺术，才形成茂密的绿色屏障和多姿多彩的艺术造型。还有油料作物芝麻，试验证明打顶是增产的有效途径，即在终花期及时对主茎和分枝摘心，一般可增产一至二成。
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可以对你们城市的工厂周围的植物进行调查啊
收稿日期：2007-10-25基金项目：深圳市科技和信息局基金资助项目作者简介：王丹（1982-），女，辽宁本溪人，硕士研究生，从事植物生物技术研究。注：雷江丽为通讯作者。大花美人蕉茎尖组织培养技术研究王 丹1,2，雷江丽2，吴燕民3，吕 慧2，郁继华1(1.甘肃农业大学 农学院，甘肃 兰州 730070；2.深圳市园林科学研究所，广东 深圳 518003；3.中国农业科学院 生物技术研究所，北京 100081)摘 要：以大花美人蕉（Canna×generalis）根茎茎尖为外植体进行组织培养技术研究，筛选出芽诱导适宜的培养基为MS + 6-BA （单位下同）+ TDZ ；MS + 6-BA + TDZ + NAA 培养基能较好地诱导分化出丛生芽, 继代增殖培养中与MS + 6-BA + TDZ + NAA 培养基交替使用可减少畸形芽，增殖系数达；适宜的生根培养基为MS + 6-BA + NAA ，生根率达，且植株生长健壮，移栽易成活。关键词：大花美人蕉；茎尖；组织培养中图分类号： 文献标识码：A 文章编号：1009-7791(2008)01-0033-04Research on Shoot-tip Culture of Canna×generalisWANG Dan1,2, LEI Jiang-li2, WU Yan-min3, LÜ Hui2, YU Ji-hua1( of Agronomy, Gansu Agricultural University, Lanzhou 730070, Gansu China; Institute of LandscapeGardening, Shenzhen 518003, Guangdong China; Research Institute, Chinese Academy of AgriculturalSciences, Beijing 100081, China)Abstract: The paper mainly studied on tissue culture of Canna×generalis with the stem tips asexplants. The results showed that the bud inoculation medium was MS + 6-BA ; the best of clump shoot induction and differentiation medium was MS + 6-BA +TDZ + NAA ; using MS + 6-BA + TDZ + NAA asproliferation medium, an optimal proliferation rate was obtained. When the two kinds of mediumused alternatively, the effect was better. The optimum rooting medium was MS + 6-BA +NAA , the rate of rooting could reach , and cultured in this medium, the plant grewwell and easy to words: Canna×generalis; shoot-tip; tissue culture大花美人蕉(Canna×generalis)属美人蕉科(Cannaceae)美人蕉属(Canna)的园艺杂交种[1]，是多年生喜光宿根草本花卉，原产美洲热带和非洲等地。其枝叶茂盛、花朵艳丽、姿态优美、花期长，在深圳地区几乎全年开花，是配置大型花坛的优良品种。大花美人蕉不仅观赏价值高，而且能吸收硫、氯、氟、汞等有害物质，具有净化空气、保护环境的作用，因此，世界许多城市的园林绿化中都广泛应用。美人蕉传统的繁殖方式主要采用分切地下根茎的方法，繁殖速度慢、增殖效率低，而且连续营养繁殖造成病毒积累致使病毒病在各地相当普遍，严重影响其观赏价值。利用茎尖组织培养进行脱毒试管苗快繁，是目前大力繁殖与推广美人蕉的主要手段。关于美人蕉组织培养的研究报道较少[2,3]，本研究探索其组织培养高效的再生体系，以期为品种提纯复壮及遗传转化、性状改良奠定基础。2008,37(1): Plant Science第·34· 37 卷1 材料与方法 材料供试材料为目前城市绿化中普遍应用的大花美人蕉‘President’品种。 外植体选择与处理选择生长健壮、无病虫害的优良母株，挖取带芽胞的根茎，去除表面老皮并用肥皂水清洗。用75%乙醇棉擦拭，然后采用不同的消毒剂及处理时间（升汞10min、2%次氯酸钠10min、2%次氯酸钠20min、2%次氯酸钠 + 升汞5min、2%次氯酸钠 + 升汞10min），封闭式振摇灭菌。无菌水冲洗5 次，置于超净工作台上备用。接种前，剥去外部叶片，露出生长点，立即切取茎尖进行接种。 培养方法及培养条件试验于2006 年10 月在深圳市园林科学研究所组培室进行。诱导、增殖和生根培养基均选用MS为基本培养基，在不同培养阶段附加不同种类、不同浓度配比的植物生长调节剂（表2～表4），蔗糖3%，pH 。培养温度(28±2)℃，光照强度2 500 lx，光照周期为14h/d，相对湿度70%～80%。每处理接种30 瓶。定期观察试管苗生长与分化情况。2 结果与分析 不同消毒处理方式对外植体无菌化的影响因供试外植体取自美人蕉地下根茎，表面污染物较多，不易消毒，且不同植物及外植体的成熟度对消毒剂的反应不同，故本试验选用升汞和次氯酸钠进行灭菌效果比较，以筛选合适的消毒剂及消毒处理时间。由表1 可知，2%次氯酸钠20min 处理的无菌化效果较好，但茎尖褐化较严重，说明灭菌时间过长对去老皮后的幼嫩根茎影响较大。升汞10min 处理与2%次氯酸钠 + 升汞 10min处理，无菌化效果差异不大，但2%次氯酸钠 + 升汞 10min 处理有轻微药害。因此，后续实验选用升汞处理10min 进行外植体消毒。 不同生长调节剂配比对芽诱导的影响以MS 为基本培养基，附加不同浓度6-BA、NAA、2,4-D、KT、TDZ 等（表2），以筛选出较适宜美人蕉茎尖诱导分化的配方。因美人蕉根茎具有休眠特性，芽诱导分化较难。TDZ 具有很强的促进细胞分裂活性，～μmol/L 即可有效促进分化[4]，因此，本实验对TDZ 的诱导效果进行初步探索。试验表明，在不添加任何生长调节剂的MS 基本培养基（1 号）上，茎尖接种10d 后开始生长，叶片展开后，生长停止；15d 后转接到新的MS 培养基上无明显生长，随后叶片逐渐变黄、萎蔫，说明基本培养基中添加生长调节剂是美人蕉离体培养的必要条件。在仅添加6-BA 的2、3、4 号培养基中，高浓度的2 号培养基分化率为，明显好于3、4号培养基，说明美人蕉启动芽诱导分化需要高浓度的细胞分裂素（表2）。11～16 号培养基添加物为不同生长调节剂与TDZ 组合（表2）。仅添加TDZ 的培养基分化率为0，而多种生长调节剂配合使用分化效果更好[5]。其中15 号培养基的侧芽分化率最高，达，且每个茎尖可增殖2～3 个侧芽，但个别茎尖经多次转接后有畸形芽；与2 号培养基相比，分化率明显提高，说明添加低浓度TDZ 可促进芽诱导分化（表2）（图版-a）。5、6、7 号培养基为生根培养基，探讨NAA 对美人蕉茎尖生长和生根的影响。试验结果初步说明美人蕉在6-BA/NAA 小于2/ 时生根率可达50%以上（表2）。8、9、10 号培养基，探讨美人蕉脱分化，诱导愈伤组织，但结果均不理想。因此，建立高效的美表1 不同消毒剂及处理时间对外植体无菌化的影响处 理 接种数污染数污染率(%) 药害情况升汞10min 30 5 基本无药害2%次氯酸钠10min 30 12 无药害2%次氯酸钠20min 30 4 20%有轻微药害2%次氯酸钠+升汞5min 30 10 3%有轻微药害2%次氯酸钠+升汞10min 30 5 7%有药害第1 期 王丹,等：大花美人蕉茎尖组织培养技术研究 ·35·人蕉遗传转化再生体系还需进一步探索愈伤组织诱导途径。 芽继代增殖为了探讨优化的芽继代增殖培养基配方，按表3 设计6-BA、NAA、TDZ 的正交实验，以15 号培养基上分化出的丛生芽为接种材料，进行继代增殖培养（图版-b）。由表3 可见，除17、18 号培养基外，低浓度TDZ（）的分化促进作用较高浓度（）的效果好，说明高活性的TDZ 浓度过高反而抑制分化。当 时, NAA 促分化作用显著优于。在TDZ、NAA 浓度相同的情况下，随着6-BA 浓度的升高，分化率提高。但随着继代次数的增多，含高浓度6-BA的27 号培养基分化率略有下降，甚至有个别畸形芽产生，说明高浓度细胞分裂素对短期的分化有促进作用[9]，但继代数次后，芽已经萌动，自身具有分化能力，需适当降低6-BA 浓度进行壮苗，以避免畸形芽产生。因此，在增殖过程中交替使用分化增殖系数较高的19 号培养基和27 号培养基，既可保证较高的芽分化率，又可使继代苗生长健壮，减少畸形芽。 生根诱导增殖芽3～5cm 长时，转接到生根培养基上培养约10d 后，可见到根生成（图版-c）。接种20d 后统计生根结果（表4）。从表4可见，所用培养基上都有根生成，说明美人蕉生根较容易；结合生根率和生长势，我们认为MS + 6-BA + NAA 培养基较适宜美人蕉生根。表2 不同植物生长调节剂组合的比较植物生长调节剂(mg/L) 编号6-BA NAA 2,4-D KT TDZ分化率(%) 生根率(%) 备注1 0 0 0 0 02 9 0 0 0 0 参考[2]3 5 0 0 0 0 参考[3]4 3 0 0 0 0 2 1 0 0 0 2 0 0 0 2 0 0 0 08 0 0 4 0 09 0 0 2 1 0 参考[6]10 0 0 2 0 参考[7]11 0 0 0 0 012 0 0 0 参考[8]13 0 0 0 0 0 1 0 8 0 0 0 5 0 0 表3 不同生长调节剂配比对芽继代繁殖的影响生长调节剂(mg/L) 编号6-BA NAA TDZ接种数分化率(%)增值系数 生长势17 30 ++18 30 ++19 30 ++20 30 ++21 30 ++22 30 ++23 30 ++24 30 +25 30 ++26 30 +27 30 ++28 30 +注：++ 表示生长势强；+表示生长势弱。同列中不同字母表示差异显著(P＜＝，表4 同。表4 不同的生长调节剂配比对组培苗生根的影响生长调节剂(mg/L) 编号6-BA NAA接种数生根苗数生根率(%)植株生长势29 0 30 19 +30 0 30 21 ++31 30 20 +++32 30 16 ++注：+++ 表示生长势强；++表示生长势中等；+表示生长势弱。第·36· 37 卷3 结 论美人蕉根茎生长在土壤中，无菌化操作较困难。灭菌试验表明，升汞震荡灭菌10min 效果较好，采回的外植体应尽快处理接种，放置时间过长伤口处易染菌，导致接种后褐化较严重。MS + 6-BA + ZDT + NAA 培养基能较好地诱导分化丛生芽，MS + 6-BA + TDZ NAA 为较好的增殖培养基，在增殖培养过程中这两种配方交替使用效果更好；短时间使用高浓度生长调节剂对增殖有促进作用，但长时间使用高浓度生长调节剂会使组培苗质量下降。在试验中还发现，转接次数多的茎尖较转接次数少的分化率大，建议在接种后的10～20d 内及时转接。选用MS + 6-BA + NAA 为生根培养基，生根率较高，根系粗壮、根毛密集，植株生长健壮（图版-d），且移栽成活率较高。参考文献:[1] Segeren W, et al. The genus Canna in Northern South America[J]. Acta Bot Neerl., 1971,20(6): 663-680.[2] 刘文萍,等. 美人蕉茎尖组织培养及快繁技术[J]. 北方园艺, 2001(6): 32.[3] 丁爱萍,等. 美人蕉组织培养及快速繁殖技术[J]. 园林科技, 2006(1): 11-12.[4] Singh N D, et al. The effect of TDZ on organogenesis and somatic embryogenesis in pigeonpea (Cajanus cajan L. Millsp)[J].Plant Science, 2003,164(3): 341-347.[5] 王关林,等. 高活性细胞激动素TDZ 在植物组织培养中的应用[J]. 植物学通报, 1997,14(3): 47-53.[6] 宣朴,等. 生姜茎尖组培快繁技术研究[J]. 西南农业学报, 2004,17(4): 484-486.[7] Kromer K, et al. In vitro cultures of meristem tips of Canna indica L.[J]. Acta Horticulturace, 1985,167: 279-286.[8] Vendrame W A, et al. In vitro propagation and plantlet regeneration from Doritaenopsis Purple Gem 'Ching Hua' flowerexplants[J]. HortScience, 2007,42(5): 1 256-1 258.[9] 刘敏. 花卉组织培养与工厂化生产[M]. 北京: 地质出版社, 2002: 101-102.
植物的生长发育过程受外界环境条件，如水分、阳光、土壤、温度等的影响和内部遗传因素的控制，而调节控制植物生理活动的是某些代谢物质，即植物激素。植物激素的发现，是生物学领域中的巨大进步。它推动了“化学调控”在农业中的应用，使人们有可能通过化学调控而改变植物生长、发育的固有模式。研究植物激素的目的，不仅是为了揭示其在调节植物生长发育过程中的作用机制及调节控制的规律性，更重要的是探索植物生长物质的应用技术，使之能按生产需要，调控植物的生长发育，提高作物的品质与产量。自从第一类植物激素——生长素发现以后，人们在模拟天然激素的研究中，合成了许多具有生理活性的化合物，即植物生长调节剂。目前植物生长物质（植物激素与植物生长调节剂的总称）虽已数以千计，但真正在农业与园艺上已广泛应用的，也只有几十种。人们可以通过化学调控来促进或抑制农作物和园艺作物的生长，增加产量，为机械化管理与收获提供有利条件。植物生长物质的应用，在植物栽培和育种上也为人们提供了一些便利条件。也就是通过植物生长物质来调节控制植物激素在植物体内的合成与代谢、运输方向以及各类激素之间的平衡关系。目前化学调控技术，已在农、林、牧、园艺、花卉、育种、栽培管理、提高植物抗性等领域中广泛应用，并取得了一定的效果，受到了生物、化工科技工作者与栽培、育种工作者的重视。在某些情况下，合理地应用植物生长物质的生产效果甚至比栽培与育种快得多。……
用途很多,比方说促进果实的发育,提前或延迟其成熟.....
The paper introduces the major growth areas of Africa jasmine, form, function and characteristic, habits, The concept of plant hormones, types and functions, Plant hormones to promote plant root is obvious, but the effect of different concentrations of different kinds of plants to the root of different plant hormones and significant effect. The experiments were conducted by different concentrations jasmine cuttings in Africa, in different hormone solution rooting cuttings rooting rate and the matrix. Due to the jasmine plant is rooted in Africa, and lower survival, through the study, the highest rooting rate and concentration range of speed cutting speed, African jasmine rooting rate increases, improve cutting propagation coefficient, improve production has important significance. Results show that: (1) in the experimental design of concentration and environmental conditions, the three kinds of solutions of the African Molly's survival, and no significant difference in certain degree borrows its growth inhibition effect. 2 for African jasmine in soil conditions.
1．首次成功地应用α－萘乙酸延长花椰菜和甘蓝的保鲜期。李曙轩在美国留学时，美国在应用植物生长调节剂延长鳞茎类和薯芋类蔬菜贮藏期方面已获得成功，但在延长甘蓝类蔬菜保鲜期方面刚刚开始探索。李曙轩意识到，甘蓝和花椰菜是全世界普遍食用的蔬菜，若能用激素处理的方法代替冷藏法延长保鲜期，将有广阔的发展前景。在阅读了大量科技文献，并在认真总结前人经验的基础上，他用各种植物生长调节剂，进行多种方法处理，终于获得成功。他把α－萘乙酸甲脂先喷在纸屑上，然后与产品一起混装在包装箱里，明显地抑制了采后脱叶，延长了保鲜期。1947年，他在《美国园艺学报》上发表了《α－萘乙酸甲脂对花椰菜保鲜作用的研究》论文，1948年，完成了博士论文《植物生长调节剂对花椰菜和结球甘蓝采后脱叶的影响》。李曙轩率先研究了用植物生长调节剂延长甘蓝类蔬菜保鲜期。2．开发出应用生长素类物质刺激茄果类单性结实技术。李曙轩认识到用生长素类物质促进单性结实，防止茄果类落花落果，提高产量，是一项极其有效而易于在中国推广的技术，因此在回国时，有意识地带回了2，4－D，β－萘氧乙酸（βNOA）等生长素类物质。50年代初期，他就在国内开始用2，4－D防止番茄、茄子的落花落果，促进单性结实获得成功，明显地增加了产量。在以后30多年里，他一方面推广这项技术，另一方面则不断地加以改进和完善。70年代，他研究使用对－氯苯氧乙酸（PCPA）代替2，4－D，提高了工效，减轻了药害。现在用2，4－D和PCPA防止落花已成为各地普遍使用的生产措施。他发表的代表性论文有《植物生长刺激素对于番茄落花及结实的影响》、《植物生长刺激物对于茄子落花及结实的影响》、《应用苯酚类生长调节剂防止番茄落花增加产量的效果》等。国际园艺界的调查报告记载：“中国是应用植物生长调节剂增加番茄产量最多的国家。”这项举世公认的成就凝聚了李曙轩近40年的心血。3．最先在世界上用激素控制瓠瓜的性别表现。瓜类是雌雄同株异花植物，其性别调控机理和技术一直是遗传学、园艺学和植物生理学研究的重点。到80年代，已经可以用植物激素调节黄瓜的性别表现，但还没有人在瓠瓜上作过试验。李曙轩经过多次试验，1978年终于成功地用植物激素控制了瓠瓜的性别表现。他用乙烯利在苗期处理瓠瓜植株，使原来很少开雌花的主蔓开出了大量雌花，大幅度地提高了产量。1979年，李曙轩在《植物生理学报》上发表了题为《黄瓜及瓠瓜的性别表现与激素控制》论文，这一发现，提出了激素可以改变植物遗传中的雌性或雄性表现，1980年，李曙轩在美国科罗拉多大学召开的美国园艺学会第77届年会上宣读了题为《瓠瓜性别表现的激素控制》的论文，为各国科学家所重视。1986年，他主持的“蔬菜作物化学控制技术”研究课题，由于在瓠瓜性别调控方面取得的研究成果，获国家教委颁发的科技进步二等奖。李曙轩在植物激素应用领域内的研究很广泛，在使用2，4－D防止大白菜脱叶，用顺丁烯二酸联氨（MH）控制洋葱及大蒜在贮藏期间发芽，用乙烯利对番茄进行催熟等方面，都取得了明显的效果。1988年以后，李曙轩相继出版了《植物生长调节剂与农业生产》、《植物生长调节剂与蔬菜生产》2本专著，全面总结了他的研究成果，系统地介绍了国内外的研究进展和应用技术。
在研究思路中，最重要的就是研究方法了，所以这里整理了几个常用的研究方法，以供参考：1、归纳方法与演绎方法归纳就是从个别事实中概括出一般性的结论原理；演绎则是从一般性原理、概念引出个别结论。归纳是从个别到一般的方法；演绎是从一般到个别的方法。门捷列夫使用归纳法，在人们认识大量个别元素的基础上，概括出了化学元素周期律。后来他又从元素周期律预言当时尚未发现的若干个元素的化学性质，使用的就是演绎法。2、分析方法与综合方法分析就是把客观对象的整体分为各个部分、方面、特征和因素而加以认识。它是把整体分为部分，把复杂的事物分解为简单的要素分别加以研究的一种思维方法。分析是达到对事物本质认识的一个必经步骤和必要手段。分析的任务不仅仅是把整体分解为它的组成部分，而且更重要的是透过现象，抓住本质，通过偶然性把握必然性。3、比较分析法比较分析法又称类推或类比法。它是对事物或者问题进行区分，以认识其差别、特点和本质的一种辩证逻辑方法。在资料不多，还不足以进行归纳和演绎推理时，比较分析法更具有价值。康德说：“每当理智缺乏可靠论证的思路时，类比这个方法往往能指引我们前进。”4、观察法观察法是指研究者根据一定的研究目的、研究提纲或观察表，用自己的感官和辅助工具去直接观察被研究对象，从而获得资料的一种方法。科学的观察具有目的性和计划性、系统性和可重复性。5、文献研究法文献研究法是根据一定的研究目的或课题，通过调查文献来获得资料，从而全面地、正确地了解掌握所要研究问题的一种方法。文献研究法被广泛用于各种学科研究中。
论文是在导师的指导下，从选题开始，经过了收集资料、编制论文提纲、完成开题报告等论文撰写过程，现在论文初稿已基本完成，取得了阶段性的成果。我的论文主要研究礼貌原则视角下委婉语的差异，通过运用对比，分析，举例例证等写作手法进行研究，总结委婉语在中英生活中的运用差异，怎样更好运用委婉语，进而达到使跨文化交际更顺畅的目的。在资料收集阶段，由于相关的资料文献较多，针对什么什么，需要在什么什么基础上中大量搜集较为新颖的例证，并进行较深入的思考，我耗费了大量的精力和时间来阅读、观看电影、思考、分析和整理。接下来，按照预期的工作进度，下一步，首先要针对论文的文字、格式和内容进行基本的修改，使之精简和升华；其次我需要多翻阅一些参考文献、更有针对性的在什么什么中寻找例证来支持论点，之后需要在老师的指导之下，再对我论文进行梳理，看能否再找出一些创新点来使论文更加出彩。
(一)论文——题目科学论文都有题目，不能“无题”。论文题目一般20字左右。题目大小应与内容符合，尽量不设副题，不用第1报、第2报之类。论文题目都用直叙口气，不用惊叹号或问号，也不能将科学论文题目写成广告语或新闻报道用语。(二)论文——署名科学论文应该署真名和真实的工作单位。主要体现责任、成果归属并便于后人追踪研究。严格意义上的论文作者是指对选题、论证、查阅文献、方案设计、建立方法、实验操作、整理资料、归纳总结、撰写成文等全过程负责的人，应该是能解答论文的有关问题者。现在往往把参加工作的人全部列上，那就应该以贡献大小依次排列。论文署名应征得本人同意。学术指导人根据实际情况既可以列为论文作者，也可以一般致谢。行政领导人一般不署名。(三)论文——引言 是论文引人入胜之言，很重要，要写好。一段好的论文引言常能使读者明白你这份工作的发展历程和在这一研究方向中的位置。要写出论文立题依据、基础、背景、研究目的。要复习必要的文献、写明问题的发展。文字要简练。(四)论文——材料和方法 按规定如实写出实验对象、器材、动物和试剂及其规格，写出实验方法、指标、判断标准等，写出实验设计、分组、统计方法等。这些按杂志 对论文投稿规定办即可。(五)论文——实验结果 应高度归纳，精心分析，合乎逻辑地铺述。应该去粗取精，去伪存真，但不能因不符合自己的意图而主观取舍，更不能弄虚作假。只有在技术不熟练或仪器不稳定时期所得的数据、在技术故障或操作错误时所得的数据和不符合实验条件时所得的数据才能废弃不用。而且必须在发现问题当时就在原始记录上注明原因，不能在总结处理时因不合常态而任意剔除。废弃这类数据时应将在同样条件下、同一时期的实验数据一并废弃，不能只废弃不合己意者。(六)论文——讨论 是论文中比较重要，也是比较难写的一部分。应统观全局，抓住主要的有争议问题，从感性认识提高到理性认识进行论说。要对实验结果作出分析、推理，而不要重复叙述实验结果。应着重对国内外相关文献中的结果与观点作出讨论，表明自己的观点，尤其不应回避相对立的观点。 论文的讨论中可以提出假设，提出本题的发展设想，但分寸应该恰当，不能写成“科幻”或“畅想”。(七)论文——结语或结论 论文的结语应写出明确可靠的结果，写出确凿的结论。论文的文字应简洁，可逐条写出。不要用“小结”之类含糊其辞的词。(八)论文——参考义献 这是论文中很重要、也是存在问题较多的一部分。列出论文参考文献的目的是让读者了解论文研究命题的来龙去脉，便于查找，同时也是尊重前人劳动，对自己的工作有准确的定位。因此这里既有技术问题，也有科学道德问题。(九)论文——致谢 论文的指导者、技术协助者、提供特殊试剂或器材者、经费资助者和提出过重要建议者都属于致谢对象。论文致谢应该是真诚的、实在的，不要庸俗化。不要泛泛地致谢、不要只谢教授不谢旁人。写论文致谢前应征得被致谢者的同意，不能拉大旗作虎皮。(十)论文——摘要或提要：以200字左右简要地概括论文全文。常放篇首。论文摘要需精心撰写，有吸引力。要让读者看了论文摘要就像看到了论文的缩影，或者看了论文摘要就想继续看论文的有关部分。此外，还应给出几个关键词，关键词应写出真正关键的学术词汇，不要硬凑一般性用词。
参考一下角度，完善论文答辩：答辩者在答辩前可从以下角度去考虑准备答辩：一、自己为什么选择这个课题？二、研究这个课题的意义和目的是什么？三、全文的基本框架、基本结构是如何安排的？四、全文的各部分之间逻辑关系如何？五、在研究本课题的过程中，发现了那些不同见解？对这些不同的意见，自己是怎样逐步认识的？又是如何处理的？六、论文虽未论及，但与其较密切相关的问题还有哪些？七、还有哪些问题自己还没有搞清楚，在论文中论述得不够透彻？八、写作论文时立论的主要依据是什么？对以上问题应仔细想一想，必要时要用笔记整理出来，写成发言提纲，在答辩时用。这样才能做到有备无患，临阵不慌。论文答辩技巧如何检查答辩文本本科论文答辩的老师大多是现场才翻看你的论文，你大段的论述他们根本就不可能一字一句读完。老师一般会看你论文的什么？封面、摘要、目录、以及致谢或者后记。1. 摘要。一定摘要体现出你提出了个问题，还勉强给出了答案。老师清楚了你的思路也好针对性地提问题。2. 目录。快速了解你的框架就是看目录，可很多同学的目录像是系统自动生成的，很多文科论文还会出现“以天下为己任”这种不知所云的小标，老师很难文中去一探究竟，就只能说你思路不清。3. 后记。这是所有人都最爱看的论文部分，相比前面刻板的论述、无趣的堆砌，后记或致谢是文章最展示性情的部分。所以这部分千万要自己用心写，起码你感谢那一堆的老师里别把人家名字写错了……论文答辩技巧 如何写论文答辩自述稿1. 自己为什么选择这个课题？2. 研究这个课题的意义和目的是什么？（学术价值与现实意义）3. 全文的基本框架、基本结构是如何安排的？4. 全文的各部分之间逻辑关系如何？5. 说明有关本课题的研究历史与现状，哪些人做了哪些研究，取得怎样的成果，还有哪些问题没有解决，自己在研究本课题的过程中，有没有发现不同见解？对这些不同的意见，自己是怎样逐步认识的？又是如何处理的？6. 论文虽未论及，但与其较密切相关的问题还有哪些？7. 还有哪些问题自己还没有搞清楚，在论文中论述得不够透彻？8. 文章的基本观点和立论依据？9. 论文有何创新之处？10. 定稿交出之后，自己重读时发现的缺陷？对以上问题、角度进行认真思考、整理，写成答辩自述稿。论文答辩前的准备答辩老师常问哪些问题1. 你的毕业论文采用了哪些与本专业相关的研究方法？2. 论文中的核心概念是什么？3. 你选题的缘由是什么？研究具有何种现实指导意义？4. 论文的理论基础与主体框架存在何种关联？最主要的理论基础是什么？5. 论文有何创新之处？
（一）良好的经济态势为现代物流发展提供了强劲需求基础。（二）区域产业结构决定了对现代物流有着广阔需求市场。（三）专业市场等集中货流发生源对现代物流业的现实需求。（四）具备良好的区位优势和发展现代物流所需的设施体系。
101、供应链激励机制的研究 102、论政府在第三方物流发展中的作用 103、第三方物流企业竞争力研究 104、我国物流园区建设发展现状及趋势 105、面向虚拟企业的供应链管理业务重组 106、逆向物流管理策略研究 107、论提升物流企业竞争力的途径 108、供应链集成下的企业采购管理 109、供应链合作伙伴关系研究 110、论农产品物流系统的构建 111、连锁商业网络营销物流配送策略分析 112、仓储企业核心竞争力研究 113、供应商管理库存的应用研究 114、湖北省物流发展现状及趋势 115、湖北省物流发展的运行模式研究 116、物流企业MIS平台安全应对策略 117、第三方物流企业信息系统的设计 118、制造企业库存管理策略研究 119、连锁超市配送策略研究 120、物流运输合理化研究 121、我国物流配送的发展及趋势 122、运输企业向物流企业转型探讨 123、我国制造型企业业务外包决策研究 124、第三方物流企业运作模式分析 125、中小型第三方物流企业发展研究 126、现代物流配送中心系统设计 127、我国第三方物流企业发展战略研究 128、基于电子商务的物流系统研究 129、电子商务环境下物流配送研究 120、零售业的物流发展策略研究 131、我国零售企业物流配送研究 132、物流园区发展战略研究 133、物流园区规划与运作模式研究 134、加入WTO后我国物流发展及其对策研究 135、国际物流业的发展与对策研究 136、集中采购与分散采购的优缺点分析及其适用条件研究 137、最佳采购的决策方法研究 138、采购成本的控制方法研究 139、供应源选择的评价指标体系及评价方法 140、如何有效实施JIT采购 141、供应商绩效评估研究 142、国际采购对中国企业的挑战和带来的机遇 143、信息技术对采购职能的影响 144、供应源发展趋势研究 145、供应商如何介入产品开发 146、我国第三方物流发展研究 147、企业如何提高物流能力 148、企业物流外包研究与探讨 149、供应链物流的特点及发展趋势 150、影响企业物流能力的要素分析 151、供应链绩效分析 152、基于供需利益最大化的采购合同研究 153、电子商务环境下的物流配送问题与对策 154、我国保税区国际物流发展对策研究 155、铁路行包向现代物流发展的对策 156、国际电子商务与国际物流业的互利发展 157、**省（市）物流的现状与对策 158、长江集装箱运输经营策略 159、**区域物流业现状及发展对策研究 160、港口企业现代物流发展战略选择 161、区域物流商的运价研究 162、加快我国国际物流系统建设的战略思考 163、物流标准化现状分析与研究 164、物流企业的跨国并购动机 165、第三方综合物流管理信息系统的规划设计 166、对发展我国多式联运的建议 167、全球供应链条件下港口竞争物流策略 168、港口的功能转变与物流系统构建 169、做好产业集群规划 促进港口经济发展 170、灰关联理论与区域物流 171、我国第三方物流发展中存在的问题及对策 172、论物流成本管理 173、我国现代物流标准化的协调问题 174、交通运输行业在加入WTO后经营战略的探讨 175、经济全球化背景下的条码技术 176、我国电子商务企业的物流配送思考 177、建设国际航运中心的战略与思路 178、CEPA实施与物流业合作:现状及前景 179、现代物流与国际多式联运的关系 180、国际物流发展趋势下的供应链管理 181、我国汽车物流的发展趋势分析 182、现代物流商面临的风险分析 183、推进长江航运物流与区域经济发展的思考 184、全球视角下的区域经济一体化与国际物流 185、物流产业组织结构SCP理论框架分析及对策思考 186、当前经济运行中的物流问题浅议 187、我国物流业现状及发展方向探析 188、企业物流的营销战略 189、城市物流系统的结构设计 190、发挥武汉地域优势 创建物流中心城市 191、我国第三方物流发展模式分析 192、第三方物流企业的并购整合 193、关税对国际物流及民族产业的影响 194、浅析我国如何应对物流国际化的挑战求采纳
论现代物流现状及其发展前景1. 我国物流服务中存在的问题及对策研究 2. 网络经济时代物流包装管理发展趋势的探讨 3. 运输合理化及现代化的研究 4. 绿色物流理论及其发展路径探讨 5. 论城市环境与物流合理化 6. 物流配送中心合理选址问题的研究 7. 物流中心的发展趋势的研究 8. 现代物流中心的作用及发展趋势的研究 9. 现代物流配送中心的建设与定位 10. 关于物流战略管理的研究 11. 供应链管理的战略管理策略 12. 供应链管理在我国连锁经营配送中的应用 13. 基于供应链的逆向物流管理 14. 关于供应链绩效评价的研究 15. 现代物流系统布局与规划的研究 16. 现代物流中心规划与布局的研究 17. 降低物流成本方法与策略的研究 18. 企业物流一体化研究 19. 供应链库存管理面临的挑战与对策 20. 论物流配送下的零库存控制 21. 电子商务下的库存管理问题研究 22. 零售商店库存管理改革的研究 23. JIT生产管理模式的研究 24. 第三方物流企业的市场环境及竞争战略选择 25. 我国第三方物流的现状及发展思路 26. 第三方物流服务的顾客满意度研究 27. 论电子商务与现代物流的发展 28. 中国物流标准化现状与对策研究 29. 我国物流企业面对跨国竞争的战略思考 30. 中美集装箱运输发展的比较制度分析 31. 逆向物流管理的研究 32. 世界邮政物流运营方式的研究 33. 振兴东北老工业基地给物流企业带来的发展机遇与挑战 34. 中国连锁企业配送的特点及发展趋势 35. 中国汽车物流的现状与发展前途 36. 中国第三方物流市场环境研究 37. 论物流企业的服务创新 38. 在经济全球化条件下的企业采购策略 39. 连锁经营的物流配送及服务创新 40. 第四方物流在我国的发展与应用 41. 我国物流园区的发展与展望 42. 绿色物流现状及发展趋势的研究 43. 论第三方物流的经济性 44. 美、日物流业现代化发展的分析研究 45. 论区域物流平台的构建 46. 物流信息分类编码标准体系探讨 47. 电子商务下的跨区域物流 48. 我国企业实施ERP的必要性研究 49.我国企业实施供应链管理的战略优化 50.供应链管理中的信息流及其控制研究 51.我国物流服务业应对全球竞争的发展战略 52.供应链中库存管理问题与对策的研究 53.企业物流管理发展趋势的研究 54.论我国电子商务物流体系的构建 55.中国物流产业发展前景与政策的研究 56.物流成本的管理的研究 57.论第三方物流在中国的发展趋势 58.论现代企业的物流战略 59.我国物流业发展布局的特点及对策研究 与供应链结合的采购管理研究 61.面对WTO我国物流业的发展战略 62.物流配送下零库存控制的研究 63.我国企业实施供应链管理中遇到的问题和对策的研究 64.浅析供应链管理中的物流创新 65.国际物流竞争趋势与我国物流企业策略研究 66.中小企业在物流业中的竞争战略 67..重视物流学科建设 加快物流人才培养 68.论现代企业物流与企业竞争优势 69.第三方物流的发展瓶颈及对策研究 70.绿色物流与可持续发展的研究 71.电子商务技术在现代物流中的应用 72.供应链环境下的现代物流中心 73.论物流企业的资源整合 74.论物流质量管理 75.物流企业成本控制模式的探讨 76.第四方物流企业核心竞争力的研究 77.我国物流业如何应对入世挑战 78.企业管理中的物流策略研究 79.综合物流信息系统规划及开发过程研究 80.物流园区开发建设布局规划的研究 81.建立和完善我国现代物流体系的对策 82.论信息技术在物流企业发展中的作用 83.论我国农村物流体系结构设计 84.物流配送中心选址模型及其算法研究 85.论物流的整合与标准化建设 86.现代商贸物流配送体系建设相关问题的研究
当前我国经济发展遇到不少困难，主要有物价上涨，人民币升值引发的外向型企业困境，高额外汇储备损失问题，从紧的货币政策对企业的冲击等。本文主要讨论以降低物流费用方式来抑制物价，减免过路费是核心。 1 降低以过路费为核心的物流费用是平抑物价的有效市场化手段 尽量使用市场化手段，遵循市场规律是一条应尽量坚持的政策原则。我们不能够长期人为降低企业原材料和能源价格，也不能限制人力成本增长，那么，我们能否转变思维，把降低企业生产成本的重点放到降低物流成本上？物流成本降低也将使产品最终销售价格降低，这将从生产和产品运输两个方面来共同降低商品价格。当前我国公路运输物流费用的两个主要构成部分，一是燃油，二是公路通行费，燃油价格调整应遵循市场化原则，除此以外可以加以干预并且有效的就是降低公路过路费，尤其是高速公路的通行费了。运输成本占社会物流总费用的比重超过50％，而在整个产品运输成本中，过路费的比例一般占到30％～40％，有很大的下调空间。因此，降低公路过路费是有效降低物流费用的核心，下面针对我国公路收费存在的主要问题分析减免过路费的必要性和可行性。 2 我国公路收费存在的主要问题 从发达国家经验来看，流通产业越发达，区域经济就越具有生命力和竞争力。1984年国务院做出的“贷款修路，收费还贷”的决定，目的是为了加快公路建设。2004年开始实施的《收费公路管理条例》规定，国家确定的中西部省自治区、直辖市的经营性公路收费期限，最长不得超过30年。我国公路的发展模式越来越受到人们质疑，争议的焦点主要集中在如下三方面： 高额收费阻碍了经济发展与地区交流 如世界银行报告认为，中国高速公路通行费和国际相比偏高，更重要的是，中国高速公路通行费的可承受性是全世界最低的几个国家之一。通行费可承受性，是私人汽车行驶1600公里所付通行费在车主收入中所占的比例。美国的通行费可承受性远低于，中国的这个数字超过了2%。例如一辆小轿车，从北京到上海的过路费为570元，往返1140元；而2008年7月16日新开通的北京至天津的第二高速，收费标准为小型车元/公里，从北京到天津市界，收费76元，往返152元，加上天津极富地方特色的“进津费”20元，一共172元，燃油费用在130元左右，合计约300元，过路费占50％。一旦燃油价格再行提高或者燃油税开征该怎么办？昂贵的道路费，怎么能带来良好的效益呢？怎能不做调整？ 高额收费有碍社会公平 高额过路费造成了重大社会经济成本，妨碍了社会公平，有损营商环境，对成本消化能力有限的农业和中小企业来说负担更加沉重。如2008年春季南方遭受冰冻灾害，柑橘产区大量柑橘等待运出，价格非常低廉；再比如2007年海南香蕉，当地收购价格甚至低于一毛钱一斤。这些价廉物美的农产品，拿到任何地方去销售都有很强的竞争力，但加上运输费用之后就难说了。商贩为了生存，必然不断压低收购价格。中央财政2008年7月起对整车运输的蔬菜、生猪等鲜活农产品，过路、过桥费一律予以免除。这样好的惠民政策希望能够长期坚持下去。5�6�112四川大地震之后，所有救灾运输车辆免除过路费，体现出了人性光辉，必须持续执行。 收费期限问题 2005年北京市人代会上，人大代表李淑媛要求北京市审计局对京石高速公路北京段收费情况进行审计。审计局回复，京石高速公路北京段，已累计收费17亿余元，偿还贷款等款项后还剩余近6亿元。这样的情况在全国不知道还有多少。为保证通行能力，有的公路在收费偿还完贷款后可继续收费，比如机场高速，但收费必须降低标准并严格监管，或者由第三方机构来收费或监管，收益归社会所有。而一些久已开通的成熟公路下调收费标准应该是可以做到的，关键的问题是破除背后的利益链。 3 适时减免高速公路通行费的可行性 控制物价上涨是当前全社会的共识，相关政策推出后能够得到各方配合、理解与支持。收费公路大大提高了区域经济间的物流成本，它阻碍了区域间经济的互补,影响了公路的利用率和运输效率，少数部门或资本的利益获取不能以牺牲全社会利益为代价。有学者指出公路特别是高速公路在我国经济社会发展中越来越具有杠杆性作用，降低收费标准可以采取延长收费还贷的期限的方式，要针对不同空间，不同季节，不同时段制定不同的收费标准，完善收费的法规体系。这种方式有可行性。 “痛则不通，通则不痛”，面对通货膨胀之痛，让我们用公路的真正畅通来缓解它吧。