淋巴瘤病理论文文献最新五年

鼻NK／T细胞淋巴瘤(nasal NK／T celllymphoma)是一种以鼻腔等面中线部组织器官进行性毁损为特点的病变，高发于亚洲，尤其是东南亚及中国南方地区，临床病理表现独特[1]。易累及血管，致使有的患者因急性大出血而死亡。显微镜下病变表现为大片坏死，炎性肉芽肿样背景及多形的中小细胞性瘤细胞，以往常因误为炎症而延误病情。目前，鼻NK／T细胞淋巴瘤的免疫表型、细胞来源、病理机制等问题尚存在争议。本研究对44例鼻NK／T细胞淋巴瘤进行了免疫组化分析，研究其免疫表型、细胞毒颗粒蛋白的表达，探讨免疫组化在鼻NK／T细胞淋巴瘤诊断及鉴别诊断中的作用及肿瘤细胞的来源。 材料和方法 一 研究对象 收集我院病理科1995-2000年外检和会诊、发生在头面部中线部位临床怀疑或诊断为坏死性肉芽肿、组织病理学诊断符合鼻NK／T细胞淋巴瘤的病例44例(其中19例为会诊病例)，每例均经2位或2位以上淋巴瘤诊断经验丰富的病理专家复片确诊。选取诊断明确的鼻咽或鼻腔弥漫大B细胞淋巴瘤10例和外周T细胞淋巴瘤8例作为对照。所有研究对象均为中性4％甲醛固定、石蜡包埋组织。 二 免疫组织化学染色 取蜡块切3 μm厚连续切片各11张，分别做CD3、CD20、CD43、CD45、CD45RO、CD56、CD57、CD79a8种常用淋巴瘤免疫标记物和3种细胞毒性颗粒蛋白TIA-1、Granzyme-B(GryB)和pefforin的免疫组化标记。免疫组织化学染色采用DAKO EnVisionTM两步法。显色系统为辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗鼠EnVisionTM+反应液，是即用型产品，购自DAKO公司。3，3-二氨基联苯胺(DAB)是Fluka公司产品。方法简述如下：切片常规脱蜡、水化，置于10mmoL／L枸橼酸盐缓冲液(pH=)中，95℃蒸汽浴20分钟作抗原修复后，加入第一抗体室温下温育2小时，置4℃冰箱过夜后滴加EnVisionnTM+反应液，室温下温育小时，常规DAB显色，复染。每种标记均用TBS取代第一抗体作空白对照。 三 判定标准 用定性判断，出现定位清晰的颗粒状棕褐或棕黄着色即算阳性。CD20、CD43、C1)45、CD45RO、CD56、CD57和CD79ct定位于细胞膜；CD3定位于细胞质或细胞膜；TIA-1和pefforin定位于细胞质，GryB阳性表现为核旁颗粒状或点状染色。 结果 一 11种抗体在44例鼻NK／T细胞淋巴瘤和23例对照组病例中的表达 所有检测的44例鼻NK／T细胞淋巴瘤均表达CD45(100％)；19例(43％)表达CD3，阳性定位于细胞质，8例对照组T细胞淋巴瘤的阳性定位于细胞膜；CD43和CD45RO阳性例数分别为20(45％)和23(52％)；23例表达CD56(52％)；所有44例病变均不表达CD57、CD20和CD79a；TIA-1、GryB和perforin的阳性率分别为100％、93％和94％，21例CD56阴性病例均表达这3种细胞毒颗粒蛋白，对照组18例病变均不表达。 二 GryB在CD3+CD56+、CD3-CD56+、CD3+CD56-和CD3-CD56-4组病例中的表达 同时观察CD3和CD56的表达，CD3+CD56+的病例10例；CD3-CD56+13例；CD3+CD56-9例；CD3-CD56-12例。GryB在CD3+CD56+的病例中阳性率为90％(9／10)；CD56+的病例中阳性率为84％(11／13)；在CD3+CD56-和CD3-CD56-病例中的阳性率均达100％。 三 Perforin在CD3+CD56+、CD3-CD56+、CD3+CD56-和CD3-CD56-4组病例中的表达 此外还分别观察GryB和perforin在以上4组病例中的表达情况。除了在CD3-CD56+的病例中perforin的阳性率为92％(12／13)外；其余3组病例的阳性率均为100％。在CD3+CD56-组中2例GryB阴性的病例显示pefforin阳性，而1例perforin阴性的病例表达GryB。可见，无论CD3和CD56的表达如何，在本研究的所有鼻NK／T细胞淋巴瘤的病例中皆有细胞毒颗粒蛋白的表达。 讨论 鼻NK／T细胞淋巴瘤的免疫表型和细胞来源存在争议。肿瘤细胞既能表达T细胞的表面标记物CD45RO、CD43、CD3、CD2等，也能表达NK细胞的表面标记物CD56[4，5]。由于大多数肿瘤细胞不出现T细胞受体这一T淋巴细胞特异性标志的基因重排，却能表达NK细胞的表面标志物，不能断定肿瘤细胞究竟来自T细胞或NK细胞[5，6]。 本研究选用了8种淋巴瘤常用标记物对44例鼻NK／T细胞淋巴瘤进行了检测，结果显示肿瘤细胞不表达B细胞标记物CD20和CD79α；T细胞标记物CD43、CD45RO的阳性率为40％-50％，与文献报道一致[7,8]CD3的阳性率为43％，阳性定位与对照组中鼻咽／鼻腔外周T细胞淋巴瘤有所不同。CD3作为T淋巴细胞的表面标志，一直作为诊断T细胞淋巴瘤的重要依据。近来研究发现，用于石蜡切片的CD3抗体是识别CD3γ、δ和ξ3种结构域的复合物(polyCD3)。文献报告[9]，鼻NK／T细胞淋巴瘤细胞在石蜡切片中CD3的定位不同于一般的T淋巴细胞，阳性反应位于胞质而非胞膜，本研究也有同样发现。应用石蜡包埋组织，我们在44例病变中发现19例(43％)表达CD3，阳性定位在胞质，对照组中8例外周T细胞淋巴瘤的阳性反应则在细胞膜。这种阳性定位的不同提示了肿瘤细胞与T细胞的差别，由于活化的成人型NK细胞质内有CD3e链，在石蜡组织切片染色时也能被polyCD3识别，但只定位于胞质；而T淋巴细胞具备完整的CD3结构，阳性定位应在细胞膜[9]。所以尽管肿瘤细胞显示CD3阳性，但阳性定位的特点提示瘤细胞似乎更符合活化的成人型NK细胞。另外，阳性定位的差别也有助于对鼻NK／T细胞淋巴瘤和外周T细胞淋巴瘤的鉴别。 有报道CD56在鼻NK／T细胞淋巴瘤中的阳性率高达100％[2,4,7]，Jaffe等[5]的检测结果>70％。本组44例病变的阳性率为52％，低于文献报道。21例CD56-的病例中，9例CD3+，阳性定位在胞质，符合鼻NK／T细胞淋巴瘤的表现。对其余12例CD3-CD56-的病例再次复片，均能找到诊断鼻NK／T细胞淋巴瘤的形态依据，临床病史特点也符合诊断，结果显示并非所有鼻NK／T细胞淋巴瘤都表达CD56。NK细胞是一种特殊的淋巴细胞，CD56是目前认定的NK细胞表面标记物，但我们的研究结果表明CD56-不能除外鼻NK／T细胞淋巴瘤的可能，必须结合临床特点和形态特征综合判断。本组44例病例均不表达CD57，结果与文献报道一致[7，8]。 TIA-1最初发现于CD8+的T淋巴细胞，是一种溶细胞性的颗粒蛋白[10]。近来发现，该蛋白也存在于细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxicTcell，CTL)和NK细胞，并重新命名为GMP-17[11]。目前普遍将TIA-1作为CTL和NK细胞的标志。本研究组中的44例病变均表达TIA-1，包括21例CD56-的病例，对照组中23例鼻咽／鼻腔T、B淋巴瘤均阴性。结果表明，TIA-1的检测对鼻NK／T细胞淋巴瘤的诊断具有很高价值，尤其对那些CD56阴性的病例。现今仅靠细胞膜抗原表达的不同来区分各种功能性的淋巴细胞仍很困难，自从分离出了抗CTL胞质中的穿孔素(perforin)和主要颗粒物质丝氨酸酯酶(serineesterase)抗体，使区分细胞毒性淋巴细胞成为可能。在蛋白水平，人类活化的CTL和NK细胞中有3种丝氨酸酯酶，颗粒酶A、B和3(granzymeA、B和3)，成熟的T细胞中，只有活化细胞有表达[12]。穿孔素是一种细胞毒作用介导物质，在以细胞排粒作用为模式的淋巴细胞介导的溶细胞作用中起了主要作用[13]。目前将颗粒酶B和穿孔素也作为CTL和NK细胞的标志[14]。本研究结果显示，颗粒酶B和穿孔素分别有93％和95％的高表达，在21例CD56-的病变中也都显示阳性，而对照组均无表达，提示两者蛋白的检测对鼻NK／T细胞淋巴瘤的诊断同样具有很高价值。 总之，本免疫组化研究结果显示鼻NK／T细胞淋巴瘤的免疫表型比较多样，40％-50％的病例显示T细胞表面标记物阳性，但石蜡切片中CD3的阳性定位与外周T细胞性淋巴瘤不同；并非所有病例都显示CD56阳性，对阴性的病例诊断需结合临床表现和组织形态特点。作为CTL和NK细胞的标志，TIA-1、颗粒酶B和穿孔素在鼻NK／T细胞淋巴瘤中的高表达提示其NK细胞来源的可能和细胞毒的潜能，它们明显高于其他标记物的阳性率，表明细胞毒性颗粒蛋白是诊断鼻NK／T细胞淋巴瘤的可靠且敏感的依据。