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(一)选题毕业论文(设计)题目应符合本专业的培养目标和教学要求,具有综合性和创新性。本科生要根据自己的实际情况和专业特长,选择适当的论文题目,但所写论文要与本专业所学课程有关。(二)查阅资料、列出论文提纲题目选定后,要在指导教师指导下开展调研和进行实验,搜集、查阅有关资料,进行加工、提炼,然后列出详细的写作提纲。(三)完成初稿根据所列提纲,按指导教师的意见认真完成初稿。(四)定稿初稿须经指导教师审阅,并按其意见和要求进行修改,然后定稿。一般毕业论文题目的选择最好不要太泛,越具体越好,而且老师希望学生能结合自己学过的知识对问题进行分析和解决。不知道你是否确定了选题,确定选题了接下来你需要根据选题去查阅前辈们的相关论文,看看人家是怎么规划论文整体框架的;其次就是需要自己动手收集资料了,进而整理和分析资料得出自己的论文框架;最后就是按照框架去组织论文了。你如果需要什么参考资料和范文我可以提供给你。还有什么不了解的可以直接问我,希望可以帮到你,祝写作过程顺利毕业论文选题的方法:一、尽快确定毕业论文的选题方向 在毕业论文工作布置后,每个人都应遵循选题的基本原则,在较短的时间内把选题的方向确定下来。从毕业论文题目的性质来看,基本上可以分为两大类:一类是社会主义现代化建设实践中提出的理论和实际问题;另一类是专业学科本身发展中存在的基本范畴和基本理论问题。大学生应根据自己的志趣和爱好,尽快从上述两大类中确定一个方向。二、在初步调查研究的基础上选定毕业论文的具体题目在选题的方向确定以后,还要经过一定的调查和研究,来进一步确定选题的范围,以至最后选定具体题目。下面介绍两种常见的选题方法。 浏览捕捉法 :这种方法就是通过对占有的文献资料快速地、大量地阅读,在比较中来确定论文题目地方法。浏览,一般是在资料占有达到一定数量时集中一段时间进行,这样便于对资料作集中的比较和鉴别。浏览的目的是在咀嚼消化已有资料的过程中,提出问题,寻找自己的研究课题。这就需要对收集到的材料作一全面的阅读研究,主要的、次要的、不同角度的、不同观点的都应了解,不能看了一些资料,有了一点看法,就到此为止,急于动笔。也不能“先入为主”,以自己头脑中原有的观点或看了第一篇资料后得到的看法去决定取舍。而应冷静地、客观地对所有资料作认真的分析思考。在浩如烟海,内容丰富的资料中吸取营养,反复思考琢磨许多时候之后,必然会有所发现,这是搞科学研究的人时常会碰到的情形。 浏览捕捉法一般可按以下步骤进行:第一步,广泛地浏览资料。在浏览中要注意勤作笔录,随时记下资料的纲目,记下资料中对自己影响最深刻的观点、论据、论证方法等,记下脑海中涌现的点滴体会。当然,手抄笔录并不等于有言必录,有文必录,而是要做细心的选择,有目的、有重点地摘录,当详则详,当略则略,一些相同的或类似的观点和材料则不必重复摘录,只需记下资料来源及页码就行,以避免浪费时间和精力。第二步,是将阅读所得到的方方面面的内容,进行分类、排列、组合,从中寻找问题、发现问题,材料可按纲目分类,如分成: 系统介绍有关问题研究发展概况的资料; 对某一个问题研究情况的资料; 对同一问题几种不同观点的资料; 对某一问题研究最新的资料和成果等等。第三步,将自己在研究中的体会与资料分别加以比较,找出哪些体会在资料中没有或部分没有;哪些体会虽然资料已有,但自己对此有不同看法;哪些体会和资料是基本一致的;哪些体会是在资料基础上的深化和发挥等等。经过几番深思熟虑的思考过程,就容易萌生自己的想法。把这种想法及时捕捉住,再作进一步的思考,选题的目标也就会渐渐明确起来。希望可以帮到你,有什么不懂的可以问我
夏可兒雲卿
浅析现阶段高通量测序中的拼接问题论文
摘要:近年来,随着第二代测序技术的普及和第三代测序技术的逐步发展,高通量测序技术在实际研究中的应用越来越广泛。高速率、高性价比是其主要优点。相对于传统的桑格(Sanger)法测序来言,高通量测序得到的片段长度较为短小,故如何拼接得到完整的序列一直是炙手可热的研究方向。本文总结了现阶段高通量测序中拼接问题的研究结果,针对现在流行的各种算法进行了简单介绍。
关键词:高通量测序;reads 拼接;contigs 组装;OLC、De brujin 图
一、测序技术的发展过程和现状[1]
(一)桑格法
桑格法又叫做双脱氧链终止法,由Sanger在1977年提出。通过加入带有放射标记的dd NTP(双脱氧核苷酸)使DNA合成终止。再通过电泳,并使用放射自显影技术读出碱基。此方法得到的片段较长,能达到1000bp左右。
(二)第二代测序技术
随着科学技术的发展,传统的桑格法已经不能满足研究的需要。科学家们需要更快的速度、更高的通量以及更低廉的价格,于是第二代测序技术应运而生。其核心思想是边合成边测序。现在主要有454 GS FLX、SOLi D和Illumina/Solexa GenomeAnalyzer三个平台。第二代测序是现阶段测序技术的主流,也是高通量测序的开始。
(三)第三代测序技术
第三代测序技术是指单分子测序技术。不需要经过PCR的过程即可测序,速度可以达到每秒十个碱基。通量更大,读长更短,是现阶段测序技术的发展方向。
二、高通量测序中的拼接工作
(一)高通量测序所得片段的特点
高通量测序之后所得到的序列片段称为reads(读取),其主要特点两点。一是长度短,一般在200bp以 下,最长的454平台能达到的长度也不过1000bp,因此需要进行 大量的拼接才能得到整条DNA序列。二是有部分重叠,由于测序位置具有随机性,故各reads总会有一定的重叠,这些重叠是拼接工作的关键。
(二)拼接过程
整个拼接过程分为两步。第一步,考察reads的重复序列,并拼接成更长的片段,称为contigs(重叠群),这一步称为reads的拼接;第二步,确定contigs之间的顺序关系,并按此排列,形成称为scaffolds的序列,这一步叫做contigs的组装。
三、Reads的`拼接
(一)拼接过程的难点
reads拼接过程中要克服的难点主 要有两点,一是高通量测序得到的reads长度较短,故内含信息较少,不易确认相对顺序。二是远程连接信息(Long-range linking information)的不可靠性。 2这两点制约着reads拼接过程的准确率。
(二)方法[3]
reads拼接过程中算法的基本要求是de novo(从头测序),即不需要任何序列信息即可对原料进行测序。由此衍生出两种主流的算法:
OLC,即交叠-排列-共有序列算法(Overlap-layout-consensus),是一个比较传统的算法,其基本思想为根据reads间的重复部分,确定可能性的reads连接顺序。
其步骤为:构建交叠图:对每两个reads进行比对,计算它们的重叠度---排列reads:将reads进行排列,确定它们之间的相对位置,建立overlap图---生成共有序列:通过多序列比对等方法,确立最后的contig.
OLC算法的计算量主要体现在交叠图的构建,而高通量测序得到的海量短序列有大量的交叠,往往需要大量的运算时间。故OLC算法并不适合现在高通量测序的发展趋势。现在某些拼接软件,如Shorty、CABOG等仍在使用基于此的算法。虽然这些软件针对OLC算法有一定的改进和优化,但其拼接速度和准确性仍受到限制。
brujin图
基于De brujin图(DBG)的算法是现在最流行的算法,许多常用的拼接软件如Velvet、ABy SS等都在使用这种算法。其特点为把基因序列的拼接问题转化为了数学上的图论问题,大大提高了拼接效率。
(1)基本思想
reads中 连 续 的k个 碱 基 称 为k -mer,作 为DBG的节点,两个k-mer如 果在同一read中 相邻,则形成一条边。故每个read都会对一些边加权,最后形成一个含有节点、有权值的边的DBG,由此生成最佳的contig.
(2)步骤
筛选reads:对reads进行检测,去除掉可能错误的reads---确定k值:k的值直接影响速度和精度。 K值较大时,精度有所提高,但更容易受覆盖率的影响。故应该根据覆盖率、reads长度等确定合适的k值---处 理DBG:根 据 确 定 的k值,做 出DBG,同时完成化简和修正---根据DBG,拼接成contig.
(3)优缺点
DBG算法在处理海量短reads的时候效果优秀,与现在测序技术的发展趋势相匹配。然而,由于k-mer的长度较短,此方法受重复序列、测序错误的影响较大。
(三)不同拼接软件的效果差异
不同的拼接软件在reads拼接过程中表现为三点:一是比起软件来说,reads质量对拼接结果影响更大;二是与标准序列的接近度随reads和拼接软件的不同有很大改变;三是各软件拼接的正确率差别很大,但与接近度的结果不一致。
四、Contigs的组装
与reads的拼接相比,contigs的组装的难度相对较小。这是因为contigs的长度较reads长很多,所含信息较多。故可以较为准确的组装成scaffold
(一)组装过程的难点[4]
Contigs组 装 过 程 中 的 难 点 主 要 有 二。一 是contigs中 含有大量的重复序列,不易确定contigs之间的相对顺序;二是由于contigs由reads拼接而成,其中不 免 会 有 一 些 错 误,这 些 错 误 也 会 对contigs的组装产生干扰。
(二)方法
Contigs组 装的方法较reads拼 接而言较多,一般常用的有图论法和光学图谱法(Optical mapping)两种。
1.图论法[5]
图论法是比较传统的方法,与reads拼接有相似的地方。它以contigs作为节点,由相连的读取对(Linking reads pair)作为边,由此形成算图。
其一般步骤为:库的构建:构建出含有所有reads的 库---计算相连读取对之 间的距离,并由此计算gap的长度---把长度放在边上,作为算图的数据。
其理想的输出结果是一条scaffold序列,对应一条染色体,包含以正确顺序排 列 的contigs和contigs之间gap的长度。
2.光学图谱法[6]
光学图谱法是一种较为新颖的方法。通过内切酶将DNA切断,此时DNA的片段的谱表现出一种特殊的指纹或是识别码的性质。利用光学方法追踪此信息得到相对位置,由此组装成正确的scaffold.
主要步骤为:将contigs放 置 在 光 学 图 谱上---修正光学图谱---做出contigs的连接图,由此决定最佳的contigs连接顺序。
光学图谱法的组装结果有着很高的覆盖率,巧妙运用光学图谱法可以获得很高的成本效益。
有研究表明,当与454平台获得的实验结果相结合的时候,光学图谱法可以迅速、价廉的得到排列好的定向的contigs组,由此可以产生一个将近完整的基因组。
(三)发展方向
Contigs组装过程的关键点 在于如何得到正确的连接顺序。现阶段此方面研究多集中在这一方向。
五、前景与展望
随着生物学研究向微观、向基因领域逐步延伸,高通量测序作为获得基因序列的主要方法,越来越受到重视,拼接技术也在不断发展。高通量测序的基因片段会变得海量且短小,应对此变化,拼接技术也会由确定“唯一的基因序列”向确定“最可能的基因序列”完成转变。因此,新一代的拼接技术会在准确率、覆盖率和速度上,作出超于现在拼接技术的改进。
参考文献:
[1]Anderson MW, Schrijver I. Next Generation DNASequencing and the Future of Genomic Medicine.?;1(1):38-69. doi:.
[2]Salzberg SL, Phillippy AM, Zimin A, et al. GAGE: Acritical evaluation of genome assemblies and Research. 2012;22 (3):557 -567. doi:.
[3]Deng X, Naccache SN, Ng T, et al. An ensemble strategythat significantly improves de novo assembly of microbialgenomes from metagenomic next -generation Acids Research. 2015;43 (7):e46. doi:.
[4]Latreille P, Norton S, Goldman BS, et al. Opticalmapping as a routine tool for bacterial genome Genomics. 2007;8:321. doi: -2164-8-321.
[5]Hunt M, Newbold C, Berriman M, Otto TD. Acomprehensive evaluation of assembly scaffolding Biology. 2014;15 (3):R42. doi: -2014 -15-3-r42.
[6]Nagarajan N, Read TD, Pop M. Scaffolding andvalidation of bacterial genome assemblies using opticalrestriction . 2008;24 (10):1229 .
王小金Fighting
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