细菌蛋白基因论文格式

我自己的马上就写完了，就是探究一种事物，植物、动物、自然界都可以。留个邮箱吧，一会发给你。格式很简单，写上标题，作者，指导教师（非正规就不用那么麻烦） 上来咯~~~要排好版的留邮箱，或者加我963366202草履虫 界： 动物界门： 原生动物门 纲： 纤毛纲 目： 膜口目科： 草履虫科草履虫是一种身体很小，圆筒形的原生动物，它只有一个细胞，是单细胞动物，雌雄同体。最常见的是尾草履虫。体长只有180—280微米。它和变形虫的寿命最短，以小时来计算，寿命时间为一昼夜左右。因为它身体形状从平面角度看上去像一只倒放的草鞋底而叫做草履虫。目录简介…………………………………………………….3细胞器及功能…………………….................................4生态环境中的作用……………………………………..4种类…………………………………………………….5草履虫结构………………………………………..........5草履虫观察的注意事项………………………………..6简介草履虫草履虫全身由一个细胞组成，体内有一对成型的细胞核，即营养核（又称大核）和生殖核（又称遗传核、小核），进行分裂生殖时，小核分裂，大核消失，小核渐渐生长形成新的大核和小核，故称其为真核生物。其身体表面包着一层表膜，除了维持草履虫的体型外，还负责内外气体交换，吸收水里的氧气，排出二氧化碳。膜上密密地长着近万根纤毛，靠纤毛的划动在水中旋转运动。它身体的一侧有一条凹入的小沟，叫“口沟”，相当于草履虫的“嘴巴”。口沟内的密长的纤毛摆动时，能把水里的细菌和有机碎屑作为食物摆进口沟，再进入草履虫体内，供其慢慢消化吸收。残渣由胞肛排出。草履虫的生殖方式是多种多样的，可分无性、接合、内合、自配、质配等等。生物圈里有许多单细胞生物，他们在我们周围，与我们的生活，生产关系非常密切，草履虫是其中之一。草草履虫可以用于净化污水。细胞器及功能草履虫细胞器的功能分工如下：胞口（口沟）：取食 据估计，一只草履虫每小时大约能形成60个食物泡，每个食物泡中大约含有30个细菌，因此，一只草履虫每天大约能吞食43000个细菌，它对污水有一定的净化作用。表膜：氧的摄入，二氧化碳的排出都通过表膜大核：营养代谢小核：内含遗传物质，生殖作用食物泡：食物泡是草履虫进行胞吞作用产生的，进入细胞后将与初级溶酶体融合形成次级溶酶体。食物泡随着细胞质流动，其中的食物逐渐被消化。伸缩泡及收集管：收集代谢废物和多余的水分，并排到体外胞肛：排出不能消化的食物残渣纤毛：辅助运动，草履虫靠纤毛的摆动在水中旋转前进食物排泄通道口沟（食物进入）——食物泡（消化）——胞肛（排遗）生态环境中的作用草履虫属于动物界中最原始，最低等的原生动物。它喜欢生活在有机物含量较多的稻田、水沟或水不大流动的池塘中，以细菌和单细胞藻类为食。据估计，一只草履虫每小时大约能形成60个食物泡，每个食物泡中大约含有30个细菌，所以，一只草履虫每天大约能吞食43200个细菌，它对污水有一定的净化作用。种类草履虫的分类：草履虫属于纤毛纲，膜口目，草履虫科。世界上已经报导过的草履虫有22种 草履虫结构我国常见种至少有下述几种。1．大草履虫又叫尾草履虫，长180—280微米，后端圆锥形，锥顶角度约45至60度。两个伸缩泡均有收集管。有小核一个，致密型，椭圆形。生活在有机质较多的死水或缓流中。2．双小核草履虫长80－170微米，形似尾草履虫，但后部较前部更宽，后端锥形，顶角近90度。有伸缩泡两个，收集管较短。有两个小核，很小，泡型。生活环境和尾草履虫相同。3．多小核草履虫长180—310微米，形似尾草履虫，有时有三个伸缩泡。小核泡型，有3—12个。生活环境和尾草履虫相同。4．绿草履虫体长80—150微米。细胞质内有绿藻共生，在见光处培养后通体呈绿色。小核一个，致密型。生活在清水池塘。5.放毒型草履虫（killerparamecia）草履虫中有一些品系可以产生一种毒素（草履虫素），这种毒素可杀死其他品系的草履虫，而对自身却无害。于是将能产生毒素的品系称为放毒型草履虫；将可被杀死的品系称为敏感型草履虫，该品系不能产生草履虫素。放毒型草履虫所以能产生毒素，是由两方面因素决定的，一是在它的细胞质中含有一种称为卡巴粒（Kappaparti-cle）的特殊颗粒，卡巴粒的直径约微米，长约1～5微米，含有DNA、RNA、蛋白质、糖类等，现已公认是一种内共生体。它可进行自我复制和发生突变，每个细胞中的卡巴粒数目可从几个到几百个，草履虫素就是由卡巴粒控制产生的。另一个因素是在它的细胞核中含有显性基因K，当核基因K和卡巴粒共存于一个细胞内，该草履虫就能产生毒素，可见放毒是由卡巴粒和显性基因K共同决定的。卡巴粒必须在K基因作用下才能复制，只有核基因K而无卡巴粒的草履虫是不能产生毒素的，因为核基因K不能在原先无卡巴粒的情况下重新产生卡巴粒。只有卡巴粒而无核基因K的草履虫开始时虽然也能放毒，但由于细胞不断分裂而卡巴粒不能复制，卡巴粒也就越来越少，最后（大约经历5～8代）就变成无卡巴粒的敏感型。放毒型与敏感型草履虫的基因型如下：放毒型 敏感型K/K+卡巴粒K/KK/k+卡巴粒K/kk/k+卡巴粒 k/k草履虫观察的注意事项在显微镜下观察，最好在载玻片上放适量的棉花纤维，这样可以避免草履虫乱动。编辑本段生活环境喜欢生活在有机物丰富的池塘、水沟、洼地等。大多数草履虫是全动性营养，但绿草履虫是例外，体内含共生绿藻，这种绿藻可利用动物体排泄的含氮废物作为无机盐的来源，通过植物式光合作用制造有机物生存（属于植物性营养。草履虫可以在缺氧或厌氧环境中生活，其耐污性极强。要排好版的留邮箱，或者加我QQ963366202要排好版的留邮箱，或者加我QQ963366202要排好版的留邮箱，或者加我QQ963366202

笨蛋，自己写嘛！！！！！！

0引言脆性X综合征（fragile X syndrome, FXS）是一种最常见的遗传性智力发育不全综合征，有超过99%的FXS是由脆性X智障基因1（fragile X mental retardation, FMR1）中5′端非编码区CGG三核苷酸重复序列不稳定扩增及其CpG岛异常甲基化导致. FMR1基因的表达产物FMRP的缺乏导致FXS的发生［1-2］. 本实验对编码基因存在于3号染色体［3］，能与FMR1 基因5′ d (CGG)n3′重复序列特异性结合的蛋白CGGBP1进行原核表达，并对其DNA结合活性进行研究.1材料和方法材料大肠杆菌DH5α, BL21（ DE3）和表达载体pRSET A均为本实验室保存. 质粒提取试剂盒购自Sigma公司； 限制性内切酶BamH I和KpnI购自宝生物工程公司；T4 DNA连接酶购自Promega公司； Ni2+NTA金属螯合蛋白质纯化系统购自Qiagen公司；链酶亲和素磁珠购自Dynal公司；低分子质量蛋白标准购自上海西巴斯生物技术有限公司. 方法 表达载体的构建根据CGGBP1基因起始密码子和终止子邻近序列设计PCR引物：CGGBP1F CGC GGA TCC GAG CGA TTG TAG TAA CAG CA，CGGBP1R GGG GTA CCT CAA CAA TCT TGT GAG TTG AG. 其上游及下游引物分别加入BamHI和KpnI酶切识别位点序列(引物序列下划线部分). PCR反应以人淋巴细胞cDNA文库为模板，扩增编码CGGBP1的基因序列. 设计PCR扩增体系25 μL，灭菌去离子水10 μL，10×反应缓冲液 μL，25 mmol/L MgCl2 μL，DMSO μL，4× dNTP混合物（每种 mmol/L）2 μL，CGGBP1F和CGGBP1R各10 pmol，模板 μL（50 ng/μL）， Taq DNA（5 μ/μL）聚合酶 μL. 扩增条件：95℃预变性5 min，再94℃ 30 s， 53℃ 1 min，72℃ 1 min循环40次，最后72℃终末延伸产物10 min. PCR产物经琼脂糖电泳分离，用胶回试剂盒回收目的基因. 用BamHI和KpnI酶切PCR产物和pRSET A，酶切产物电泳后回收，在T4连接酶作用下，目的片段定向克隆至pRSET A的BamHI和KpnI克隆位点. 将重组质粒转入大肠杆菌DH5α，接种到含氨苄青霉素的LB培养基平板并挑取单菌落.融合蛋白的诱导表达将测序正确的重组质粒转入BL21（ DE3）. 挑取携带目标质粒的单菌落接种于含100 mg/L氨苄青霉素的LB培养基中， 37℃振荡培养12 h， 按10 mL/L比例转接于新鲜培养基，37℃振荡培养至对数生长期时，加入IPTG至终浓度1 mmol/L，32℃诱导振荡培养4 h，离心收集菌体，SDSPAGE分析重组蛋白的表达.蛋白表达形式的分析取5 mL菌液离心，用500 μL的裂解液（10 mmol/L 咪唑，300 mmol/L NaCl及50 mmol/L磷酸二氢钠 pH ）重悬，加溶菌酶至终浓度为1 mg/mL，冰浴30 min，超声波裂菌，离心后分别将上清和沉淀进行SDSPAGE分析.融合蛋白的纯化将1 mL 500 mL/L Ni2+NTA悬液和4 mL细菌裂解上清液轻轻混匀4℃放置60 min，直接过柱. 过柱结束后，用4 mL漂洗液（20 mmol/L 咪唑，300 mmol/L NaCl及50 mmol/L 磷酸二氢钠 pH ），洗脱未和Ni珠结合的杂蛋白. 经过2次漂洗后再用 mL洗脱液(250 mmol/L 咪唑，300 mmol/L NaCl及50 mmol/L 磷酸二氢钠 pH ) 3次洗脱特异结合的目的蛋白，分步收集. 取收集液，进行SDSPAGE分析.与（CGG）29重复序列双链DNA结合实验取10 μL磁珠用1 mL的无RNA酶的三蒸水清洗磁珠2次，除去防腐剂. 1×生物素亲和素结合缓冲液（10 mmol/L TrisHCl，2 mol/L NaCl，1 mmol/L EDTA，1 g/L Tween 20）15 μL重悬磁珠，各5 μL分3组实验. 其中一组加入25 μL（100 ng/μL）生物素化的（CGG）29重复序列双链DNA，另外两组分别加入25 μL（100 ng/μL）非生物素化的（CGG）29重复序列双链DNA和25 μL三蒸水做对照；三组分别再加入2×生物素亲和素结合缓冲液30 μL，25℃轻摇1 h. 经磁力吸附后，弃上清. 重复上述步骤3次；加入纯化后CGGBP1（500 μg/mL）15 μL 和2×核酸蛋白结合缓冲液（20 mmol/L HEPES，100 mmol/L NaCl， mmol/L DTT，100 g/L甘油）20 μL，室温下静置30 min；经磁力吸附后，弃上清；用1×核酸蛋白结合缓冲液清洗磁珠2次；加三蒸水10 μL，沸水煮10 min，进行SDSPAGE分析.2结果原核表达载体的构建及鉴定扩增产物在15 g/L的琼脂糖凝胶电泳，可观察到一条约504 bp的条带（图1）； 重组质粒pRSET A/CGGBP1及质粒pRSET A分别用BamHI和KpnI酶切，pRSET A/CGGBP1分为两个片段，分别为 ku和504 bp（图2），均与预计结果相同.的表达用BamHI和KpnI双酶切pRSET A/CGGBP1表达质粒，筛选阳性重组质粒. 携带有pRSET A/CGGBP1质粒的 BL21(DE3)菌株，经IPTG诱导后，在Mr 约25 000处出现1条表达条带；而未经IPTG诱导的菌体则无此条带. 诱导后的菌体经溶菌酶及超声波裂解，离心后分为上清和沉淀两部分. 经SDSPAGE分析表明，CGGBP1部分存在于细菌裂解液的上清中，为可溶性蛋白，上清液中的目标蛋白相对较少（图3）. 蛋白纯化在表达质粒pRSET A多克隆酶切位点的上游， 插入有连续6个组氨酸的序列 —(His )6 tag. 重组质粒经诱导表达后，(His )6 tag可以和外源插入片段共同表达. 利用(His )6 tag 和金属Ni2+的螯合所设计的固定化金属配体亲和柱层析方法，是纯化目的蛋白的一种高效而简单的方法. SDSPAGE显示，CGGBP1得到较高程度的纯化（图4）.与5′d（CGG）293′重复序列双链DNA结合实验生物素化的5′d（CGG）29 3′重复序列双链DNA被固定到链酶亲和素磁珠上，非生物素化的5′d（CGG）293′重复序列双链DNA因无法固定到链酶亲和素磁珠上而被洗脱掉. 同理，加入CGGBP1后，未和5′d (CGG）293′重复序列双链DNA结合的蛋白也被洗脱（图5）.3讨论关于微卫星的产生机制，普遍认为是DNA复制过程中DNA聚合酶的滑动［4］，或DNA复制和修复时滑动链与互补链碱基错配，导致一个或几个重复单位的插入或缺失. 已发现微卫星可能是一种非常活跃的碱基序列，通常各种简单的重复序列成簇地聚集在一个染色体区域，这个染色体区形成特异染色体结构的能力将会增强. 这些区域在核糖体RNA基因中非常复杂，同时这些重复序列所折叠形成的结构还能与特异的蛋白质相结合，成为“染色质折叠密码”［5-6］，参与遗传物质的结构改变，基因调控及细胞分化等过程. 脆性X综合征是Igarashi等［7］研究报道的与三核苷酸重复片段扩增突变有关的7种神经变性疾病其中的一种. 该蛋白只和（CGG）n重复序列发生特异性结合，而与其它类型的三核苷酸重复序列不结合［8］. 因此，对该蛋白功能的研究具有重要的理论研究意义. 本实验成功地构建了含CGGBP1的重组质粒，以可溶性蛋白形式获得较高表达. 通过Ni2+NTA柱纯化，获得纯化的目标融合蛋白质，同时证明了该蛋白能和人FMR1基因5′d (CGG)293′重复序列双链DNA特异性结合. 这将为进一步开展真核生物蛋白CGGBP1功能的研究和阐释CGG三核苷酸动态突变的致病机理奠定基础.

1一般规则在你的文章中使用大家都认可的基因/蛋白质的名称和符号(见下文)有时认可的基因/蛋白质的名称或符号已经不再有效。这种情况下，第一次提到的基因/蛋白质，需要先列出经批准的名称，然后再添加括号说明(以前被称为XXX)。例如，“我们使用抗POU5F1蛋白的抗体(以前称为OCT-4)...”。注意使用正确的符号，而不是以往的名称。2不同物种有不同的规则1)小鼠/大鼠/鸡(1)一般命名规则(适用于小鼠，大鼠和鸡)：基因的全名不用斜体，也不用希腊字母例如：insulin-likegrowthfactor1(胰岛素样生长因子1)基因符号不用希腊字母和连字符，使用斜体，第一个字母大写，其余小写例如：Igf1(斜体)(胰岛素样生长因子1)蛋白质的名称和基因符号相同，但不用斜体，并全部大写例如：IGF1mRNA和cDNA的基因符号和规定的格式例如："...levelsofIgf1(italicized)mRNAincreasedwhen..."首次提到的突变等位基因应该详细列出例如：Igf1tm1Arge/Igf1tm1Arge(italicized)isoneofseveralknockoutallelesofIgf1(italicized)所有字母和数字用斜体，等位基因的符号(tm1Arge)要用上标经前面详细描述之后，敲除的纯合子可表示为Igf1-/-(所有字母均用斜体，并且-/-用上标)；杂合子为Igf1+/-等。(2)对于这些命名规定的详细信息，请参阅：2)人类/非人类灵长类动物/家畜/除了小鼠、大鼠、鱼、昆虫、苍蝇外默认的其他物种完整的基因名称不用斜体和希腊字母例如：insulin-likegrowthfactor1(胰岛素样生长因子1)基因符号不使用希腊字母和连字符，基因符号用斜体，所有的字母用大写例如：IGF1(斜体)蛋白质的名称与基因符号相同，但不用斜体，并全部大写例如：IGF1mRNA和cDNA的基因符号和规定的格式例如："...levelsofIGF1(italicized)mRNAincreasedwhen..."3)鱼(适用于所有的鱼)完整的基因名称用斜体表示，全部用小写字母，不要用希腊字母例如：cyclops(斜体)基因符号用斜体，全部小写例如：cyc(斜体)蛋白质命名与基因符号相同，但仅首字母大写，也不用斜体例如：Cyc