根癌农杆菌论文写法

原理：农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌，它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部位(受伤处的细胞会分泌大量酚类化合物,从而使农杆菌移向这些细胞)，并诱导产生冠瘿瘤或发状根。根癌农杆菌和发根农杆菌中细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒，其上有一段T-DNA，农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将T-DNA插入到植物基因组中,并且可以通过减速分裂稳定的遗传给后代，这一特性成为农杆菌介导法植物转基因的理论基础。人们将目的基因插入到经过改造的T-DNA区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，然后通过细胞和组织培养技术，再生出转基因植株。农杆菌介导法起初只被用于双子叶植物中，近年来，农杆菌介导转化在一些单子叶植物（尤其是水稻）中也得到了广泛应用。农杆菌转化植物细胞涉及一系列复杂的反应，主要包括：①受伤的植物细胞为修复创伤部位，释放一些糖类、酚类等信号分子。②在信号分子的诱导下，农杆菌向受伤组织集中，并吸附在细胞表面。③转移DNA上的毒粒基因被激活并表达，同时形成转移DNA的中间体。④转移DNA进入植物细胞，并整合到植物细胞基因组中。方法：（根据不同受体环境基因要求而不同）1． 农杆菌准备2． 外植体的准备（愈伤组织、悬浮细胞系、幼嫩茎段或叶片）;3． 用 MS-AS液体培养基稀释原菌液15倍（ / 20ml）或离心后稀释3倍;4． 外植体与菌液共培养20 分钟;5． 放置在带滤纸的培养皿上（注意充分吸干多余的菌液）;6． 将外植体接种到MS-AS固体诱导培养基，培养2－3天 ;7． 移至含卡那霉素（Kan）300mg/L和羧苄青霉素（Cb 300mg/L）的固体筛选培养基上进行Kan抗性愈伤组织的筛选;8． 隔20天，进行第二次筛选；9． 抗性愈伤组织在固体筛选培养基上分化成苗；10 在生根培养基上生根，获得完整的再分化植株。

根癌农杆菌（emphasis：role=italicAgrobacterium：tumefaciensemphasis）含有一种内源质粒，当农杆菌同植物接触时，这种质粒会引发植物产生肿瘤（冠瘿瘤），所以称此质粒为Ti质粒（tumor：inducing：plasmid）。

Ti质粒是一种双链环状DNA分子，其大小有200kb左右，但是能进入植物细胞的只是一小部分，约25kb，称为T-DNA（transfer：DNA）。T-DNA左右两边界（left：border，LB，right：border，RB）各有一个25bp长的正向重复序列（LTS和RTS），对T-DNA的转移和整合是不可缺少的，并且已证实T-DNA只要保留两端边界序列。

虽然中间的序列不同程度被任何一个外源DNA片段所替换，仍可转移整合到植物基因组中。根据Ti质粒的这个性质近年来构建成含LB和RB的质粒载体（link：xlinkhref=i010602图4-6link），已被广泛地用于植物的基因转移。利用基因枪等新的基因转移技术将其直接导入植物细胸，使含有目的基因的外源DNA片段整合到植物基因组中。