苯乙醇苷类的医学论文

1.本发明涉及活性成分提取技术领域，具体涉及一种管花肉苁蓉中活性成分的提取方法。背景技术：2.管花肉苁蓉是一种列当科寄生植物，通常称为红柳大芸，寄生于柽柳属植物的根上，主要分布于我国新疆北部的和田和新疆南部的塔克拉玛干沙漠周围地区。同时，管花肉苁蓉又是一种珍贵的滋补中草药，被誉为“沙漠人参”，它具有滋补肾脏，抗衰老，增强血液精华，滋润大肠，使大便通畅的功能。研究表明苯乙醇苷，环烯醚萜和多糖是管花肉苁蓉的主要化学成分。苯乙醇苷是管花肉苁蓉的主要活性成分，具有神经保护，免疫调节，抗炎，保肝和抗氧化的作用。苯乙醇苷是一组水溶性天然产物，是由肉桂酸和羟基苯乙基组成的共同结构，它们分别通过酯和糖苷键与β‑吡喃葡萄糖连接，其主要成分是松果菊苷和毛蕊花糖苷。3.现有的肉苁蓉提取方法主要包括：溶剂萃取法、微波辅助提取法、超声提取法、高剪切辅助提取法等方法。其中，溶剂萃取法具有溶剂用量大，耗时长等缺点。微波萃取法具有设备简单，操作时间短，溶剂用量少，但其提取率较低，不易自动化，缺乏与其他仪器在线联机的可能性。超声提取法操作简便，设备简单，提取率高，但其工作时间长，消耗溶剂量大，不易自动化。技术实现要素：4.针对现有技术中的上述不足，本发明提供了一种管花肉苁蓉的提取方法，该提取方法可有效解决现有的提取方法存在的溶剂用量大、提取率低、苯乙醇苷纯度低的问题。5.为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：6.一种管花肉苁蓉的提取方法，包括以下步骤：7.(1)取鲜肉苁蓉，依次进行灭酶、切块、干燥和粗碎处理得粉末；8.(2)将肉苁蓉粉末依次在石油醚/乙醚/30‑60％乙醇混合溶液、60‑95％乙醇溶液和水中进行超声提取，每次提取后过滤，静置冷却，分离去除石油醚、乙醚和沉淀物，收集30‑60％乙醇提取液、60‑95％乙醇提取液和水提液并合并，然后浓缩去除乙醇，得肉苁蓉提取液；9.(3)将肉苁蓉提取液浓缩干燥，粉碎，制得。10.上述方案中，先对新鲜的肉苁蓉进行灭酶处理，减少后续处理过程中的酶促反应，提高肉苁蓉中有效成分的含量；然后对其进行切块并干燥，将干燥粗碎后过40目筛，将获得的肉苁蓉粉末先在石油醚/乙醚/30‑60％乙醇混合溶液中提取，提取同时进行搅拌处理，由于石油醚和乙醚的极性较小，且两者极性不同，具有一定的跨度，石油醚和乙醚均为有机溶剂，在搅拌提取过程中，肉苁蓉中易溶于不同极性有机溶剂的杂质成分分别被石油醚和乙醚吸收，可减少溶解于乙醇溶液中杂质成分的含量，提高乙醇溶液中对有效成分的溶解度，进而在促进提取效率的基础上可降低溶剂的使用量；11.先使用低浓度的乙醇溶液再使用高浓度的乙醇溶液进行提取，由于不同浓度的乙醇溶液的极性不同，且在细胞内的穿透力不同，采用不同体积浓度的乙醇进行提取，可充分将肉苁蓉中的有效成分提出，最后，用水进行提取，由于水的极性最大，苯乙醇苷易溶于极性大的溶剂中，因此，可进一步将有效成分提出。12.本发明中，通过在提取过程中利用有效成分和杂质成分在不同溶剂中的溶解度不同，使用不同溶剂进行提取，在提取过程中将杂质成分分离，提高苯乙醇苷有效成分的分离。13.进一步地，步骤(1)中灭酶操作为：将鲜肉苁蓉于70‑80℃条件下蒸煮20‑40min。14.进一步地，步骤(1)中的干燥温度为50‑80℃。15.进一步地，步骤(1)中的干燥温度为80℃。16.上述方案中，干燥温度过高，会导致有效成分降解破坏，降低提取率，干燥温度过低，导致干燥时间延长，不利于节能。17.进一步地，步骤(2)中肉苁蓉粉末在每种溶剂中的超声处理次数均为2‑3次，每次超声时间为5‑10min，每次超声间隔15‑30min。18.进一步地，步骤(2)中肉苁蓉粉末在每种溶剂中的超声处理次数均为2次，每次超声时间为10min，每次超声间隔20min。19.进一步地，步骤(2)中超声功率为150‑250w。20.进一步地，步骤(2)中超声功率为200w。21.上述方案中，利用超声波的空化作用将细胞破坏，加速有效成分溶出，且超声处理过程中，可增加溶出的成分在不同溶剂中的溶解度，提高杂质与有效成分的分离效果。22.进一步地，步骤(2)中提取温度为60‑80℃。23.进一步地，步骤(2)中提取温度为80℃。24.上述方案中，提取温度不宜过高，否则易造成有效成分破坏，降低提取率，一定的温度下提取，可增加不同成分在不同溶剂中的溶解度，进一步提高有效成分和杂质的分离效果，提高有效成分的提取率。25.进一步地，步骤(2)中肉苁蓉粉末与石油醚/乙醚/30‑60％乙醇混合溶液、60‑95％乙醇溶液和水的质量比分别为1:15‑25、1:10‑20和1:10‑20。26.进一步地，步骤(2)中肉苁蓉粉末与石油醚/乙醚/30‑60％乙醇混合溶液、60‑95％乙醇溶液和水的质量比分别为1:15、1:10和1:10。27.上述方案中，肉苁蓉粉末分别与不同的溶剂按照一定比例混合，促进有效成分溶出，提高提取率。28.进一步地，步骤(2)石油醚/乙醚/30‑60％乙醇混合溶液中石油醚、乙醚和30‑60％乙醇的体积比为1‑2:1‑2:3‑5。29.进一步地，步骤(2)石油醚/乙醚/30‑60％乙醇混合溶液中石油醚、乙醚和30‑60％乙醇的体积比为1:1:4。30.上述方案中，肉苁蓉还含有大量的环烯醚萜类物质和其他杂质，用石油醚和乙醚作为溶剂，可将该类杂质溶解吸附，减少杂质在乙醇溶液中的溶解量，进而提高提取纯度。31.进一步地，步骤(2)中石油醚/乙醚/30‑60％乙醇混合溶液、60‑95％乙醇溶液和水的ph值均为4‑6。32.进一步地，步骤(2)中石油醚/乙醚/30‑60％乙醇混合溶液、60‑95％乙醇溶液和水的ph值均为5。33.上述方案中，在弱酸性条件下进行提取，弱酸性条件下可破坏肉苁蓉中环烯醚萜等杂质成分结构，进一步提高有效成分的含量。34.进一步地，步骤(2)中将肉苁蓉粉末依次在石油醚/乙醚/50％乙醇混合溶液、75％乙醇溶液和水中进行超声提取，每次提取后过滤，静置冷却，分离去除石油醚、乙醚和沉淀物，收集50％乙醇提取液、75％乙醇提取液和水提液并合并，然后浓缩去除乙醇，得肉苁蓉提取液。35.上述方案中，分别采用50％和75％体积浓度的乙醇进行提取，利用不同浓度乙醇极性不同的特性，充分将肉苁蓉的有效成分提取，提高有效成分的提取率。36.本发明所产生的有益效果为：、本发明中首先在弱酸性条件下对肉苁蓉进行提取，弱酸性条件下，部分杂质成分结构变化后产生沉淀析出，可初步降低提取溶剂中杂质含量，再分别采用石油醚/乙醚/30‑60％乙醇混合溶液、60‑95％乙醇溶液和水中进行提取，可进一步利用石油醚和乙醚对肉苁蓉中杂质成分进行溶解吸收，降低乙醇提取液和水提液中杂质含量，提高乙醇提取液和水提液中有效成分的溶解度，进而降低乙醇提取液和水提液的使用量。、本发明中在提取过程中利用不同的方式对杂质成分进行分解或吸附，可充分减少提取物中杂质的含量，提高苯乙醇苷活性成分的纯度和提取率。具体实施方式39.实施例140.一种管花肉苁蓉的提取方法，包括以下步骤：41.(1)取鲜肉苁蓉，于70℃条件下蒸煮20min进行灭酶、切成1×1cm的小块、于60℃条件下干燥和粗碎过40目筛得粉末；42.(2)将肉苁蓉粉末依次在温度均为60℃，ph值均为4的石油醚/乙醚/30％乙醇混合溶液、60％乙醇溶液和水中进行超声提取，超声功率为150w，在每种溶剂中的超声处理次数为2次，每次超声时间为5min，每次超声间隔15min，在每种溶剂中提取后过滤，静置冷却，分离去除石油醚、乙醚和沉淀物，收集30％乙醇提取液、60％乙醇提取液和水提液并合并，然后浓缩去除乙醇，得肉苁蓉提取液；其中，提取过程中，肉苁蓉粉末与石油醚/乙醚/30％乙醇混合溶液、60％乙醇溶液和水的质量比分别为1:15、1:10和1:10；石油醚/乙醚/30％乙醇混合溶液中石油醚、乙醚和30％乙醇的体积比为1:1:3；43.(3)将肉苁蓉提取液于60℃条件下浓缩干燥至含水率小于15％，粉碎，制得。44.实施例245.一种管花肉苁蓉的提取方法，包括以下步骤：46.(1)取鲜肉苁蓉，于75℃条件下蒸煮40min进行灭酶、切成2×2cm的小块、于70℃条件下干燥和粗碎过40目筛得粉末；47.(2)将肉苁蓉粉末依次在温度均为80℃，ph值均为6的石油醚/乙醚/60％乙醇混合溶液、95％乙醇溶液和水中进行超声提取，超声功率为250w，在每种溶剂中的超声处理次数为3次，每次超声时间为10min，每次超声间隔30min，在每种溶剂中提取后过滤，静置冷却，分离去除石油醚、乙醚和沉淀物，收集60％乙醇提取液、95％乙醇提取液和水提液并合并，然后浓缩去除乙醇，得肉苁蓉提取液；其中，提取过程中，肉苁蓉粉末与石油醚/乙醚/60％乙醇混合溶液、95％乙醇溶液和水的质量比分别为1:25、1:20和1:20；石油醚/乙醚/60％乙醇混合溶液中石油醚、乙醚和60％乙醇的体积比为2:1:4；48.(3)将肉苁蓉提取液于80℃条件下浓缩干燥至含水率小于15％，粉碎，制得。49.实施例350.一种管花肉苁蓉的提取方法，包括以下步骤：51.(1)取鲜肉苁蓉，于75℃条件下蒸煮30min进行灭酶、切成2×2cm的小块、于80℃条件下干燥并粗碎过40目筛得粉末；52.(2)将肉苁蓉粉末依次在温度均为80℃，ph值均为5的石油醚/乙醚/50％乙醇混合溶液、75％乙醇溶液和水中进行超声提取，超声功率为200w，在每种溶剂中的超声处理次数为2次，每次超声时间为10min，每次超声间隔20min，在每种溶剂中提取后过滤，静置冷却，分离去除石油醚、乙醚和沉淀物，收集50％乙醇提取液、75％乙醇提取液和水提液并合并，然后浓缩去除乙醇，得肉苁蓉提取液；其中，提取过程中，肉苁蓉粉末与石油醚/乙醚/50％乙醇混合溶液、75％乙醇溶液和水的质量比分别为1:15、1:10和1:10；石油醚/乙醚/50％乙醇混合溶液中石油醚、乙醚和50％乙醇的体积比为1:1:4；53.(3)将肉苁蓉提取液于80℃条件下浓缩干燥至含水率小于15％，粉碎，制得。54.对比例155.一种管花肉苁蓉的提取方法，包括以下步骤：56.(1)取鲜肉苁蓉，于75℃条件下蒸煮30min进行灭酶、切成2×2cm的小块、于80℃条件下干燥并粗碎过40目筛得粉末；57.(2)将肉苁蓉粉末在温度为80℃的75％的乙醇溶液中进行超声提取，超声功率为200w，超声处理次数为2次，每次超声时间为10min，每次超声间隔20min，提取后过滤，静置冷却，分离去除沉淀物，收集75％乙醇提取液，浓缩去除乙醇，得肉苁蓉提取液；58.(3)将肉苁蓉提取液于80℃条件下浓缩干燥至含水率小于15％，粉碎，制得。59.对比例260.一种管花肉苁蓉的提取方法，包括以下步骤：61.(1)取鲜肉苁蓉，于75℃条件下蒸煮30min进行灭酶、切成2×2cm的小块、于80℃条件下干燥并粗碎过40目筛得粉末；62.(2)将肉苁蓉粉末依次在温度均为80℃的50％乙醇溶液、75％乙醇溶液和水中进行超声提取，超声功率为200w，在每种溶剂中的超声处理次数为2次，每次超声时间为10min，每次超声间隔20min，在每种溶剂中提取后过滤，静置冷却，分离去除沉淀物，收集50％乙醇提取液、75％乙醇提取液和水提液并合并，然后浓缩去除乙醇，得肉苁蓉提取液；63.(3)将肉苁蓉提取液于80℃条件下浓缩干燥至含水率小于15％，粉碎，制得。64.对比例365.一种管花肉苁蓉的提取方法，包括以下步骤：66.(1)取鲜肉苁蓉，于75℃条件下蒸煮30min进行灭酶、切成2×2cm的小块、于80℃条件下干燥并粗碎过40目筛得粉末；67.(2)将肉苁蓉粉末在温度均为80℃，ph值为5的水中进行超声提取，超声功率为200w，超声处理次数为2次，每次超声时间为10min，每次超声间隔20min，提取后过滤，静置冷却，得肉苁蓉提取液；68.(3)将肉苁蓉提取液于80℃条件下浓缩干燥至含水率小于15％，粉碎，制得。69.对比例470.一种管花肉苁蓉的提取方法，包括以下步骤：71.(1)取鲜肉苁蓉，于75℃条件下蒸煮30min进行灭酶、切成2×2cm的小块、于80℃条件下干燥并粗碎过40目筛得粉末；72.(2)将肉苁蓉粉末依次在温度均为80℃，ph值均为5的石油醚/乙醚/40％乙醇混合溶液、90％乙醇溶液和水中进行回流提取，在每种溶剂中提取后过滤，静置冷却，分离去除石油醚、乙醚和沉淀物，收集40％乙醇提取液、90％乙醇提取液和水提液并合并，然后浓缩去除乙醇，得肉苁蓉提取液；其中，提取过程中，肉苁蓉粉末与石油醚/乙醚/50％乙醇混合溶液、75％乙醇溶液和水的质量比分别为1:15、1:10和1:10；石油醚/乙醚/50％乙醇混合溶液中石油醚、乙醚和50％乙醇的体积比为1:1:4；73.(3)将肉苁蓉提取液于80℃条件下浓缩干燥至含水率小于15％，粉碎，制得。74.对比例575.一种管花肉苁蓉的提取方法，包括以下步骤：76.(1)取鲜肉苁蓉，于75℃条件下蒸煮30min进行灭酶、切成2×2cm的小块、于80℃条件下干燥并粗碎过40目筛得粉末；77.(2)将肉苁蓉粉末依次在温度均为80℃，ph值均为5的石油醚/乙醚/50％乙醇混合溶液、75％乙醇溶液和水中进行超声提取，超声功率为200w，在每种溶剂中的超声处理次数为2次，每次超声时间为10min，每次超声间隔20min，在每种溶剂中提取后过滤，静置冷却，分离去除石油醚、乙醚和沉淀物，收集50％乙醇提取液、75％乙醇提取液和水提液并合并，然后浓缩去除乙醇，得肉苁蓉提取液；其中，提取过程中，肉苁蓉粉末与石油醚/乙醚/50％乙醇混合溶液、75％乙醇溶液和水的质量比分别为1:10、1:5和1:5；石油醚/乙醚/50％乙醇混合溶液中石油醚、乙醚和50％乙醇的体积比为3:3:5；78.(3)将肉苁蓉提取液于80℃条件下浓缩干燥至含水率小于15％，粉碎，制得。79.试验例80.分别对实施例1‑3和对比例1‑5中的收集的粉末进行称重，计算出提取物的收率，并分别测定提取物中中松果菊苷、毛蕊花糖苷和苯乙醇总苷的含量，具体结果见表1‑2。81.收率计算公式：收率＝肉苁蓉提取物质量/肉苁蓉质量×100％82.表1：收率统计[0083][0084]分别对获得的提取物中进行检测，具体检测方法如下：[0085]1、hplc测定松果菊苷和毛蕊花糖苷[0086]仪器与用具：高效液相色谱仪、容量瓶100ml、分析天平、移液管和超声仪。[0087]试剂与试液：50％甲醇、纯甲醇、纯甲醇为流动相a，％甲酸溶液为流动相b，松果菊苷标准品，毛蕊花糖苷标准品。[0088]色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以纯甲醇为流动相a，以％甲酸溶液为流动相b()，检测波长为330nm。理论板数按松果菊苷峰计算应不低于3000。[0089]标准品溶液的制备[0090]取松果菊苷标准品、毛蕊花糖苷标准品适量，精密称定分别置棕色瓶中，加50％甲醇制成每1m1各含和的溶液，即得。[0091]供试品溶液的制备[0092]取肉苁蓉提取物(过四号筛)约，精密称定，置100ml棕色容量瓶中，精密加入50％甲醇适量，超声处理10分钟(功率250w，频率35khz)，使溶解再加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，既得。[0093]测定法[0094]分别精密吸取标准品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得。[0095]记录标准品浓度、标准溶液主峰面积s对、供试液的主峰的面积s供、样品称样量、含量的计算和结果。[0096]2、uv测定苯乙醇总苷[0097]标准品溶液的制备[0098]精密称取松果菊苷标准品10mg，置50ml棕色容量瓶中，加50％甲醇溶解并稀释至刻度，即得。[0099]标准曲线制备[0100]精密量取标准品溶液、、、、，分别置10ml容量瓶中，用50％甲醇稀释至刻度，摇匀即得。以相应试剂为空白，照紫外‑可见分光光度法(《中国药典》2015年版附录va)，在30mm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。[0101]供试品溶液的制备及测定[0102]精密称取供试品粉末30mg于50ml容量瓶中，加50％得甲醇适量超声溶解，放置至室温，加50％甲醇至刻度，摇匀。精密量取该溶液置25ml容量瓶中，用50％甲醇稀释至刻度，照标准曲线制备项下的方法，自“以相应试剂为空白”起，依法测定吸光度，从标准曲线中读取供试品溶液中苯乙醇总苷的量，计算，即得。[0103]表2：肉苁蓉提取物成分分析[0104] 松果菊苷毛蕊花糖苷苯乙醇总苷灰分实施例1≥35％≥14％≥80％≤5％实施例2≥35％≥14％≥80％≤5％实施例3≥35％≥14％≥80％≤5％对比例1≤35％≤14％≤80％≤5％对比例2≤35％≤14％≤80％≤5％对比例3≤35％≤14％≤80％≤5％对比例4≤35％≤14％≤80％≤5％对比例5≤35％≤14％≤80％≤5％[0105]结合表1和表2可以看出，实施例1‑3中的提取物的收率在‑％之间，提取物中松果菊苷含量均≥35％，毛蕊花糖苷含量均大于≥14％，苯乙醇总苷含量均≥80％，且灰分均≤5％。而对比例1‑3中提取物收率虽然高于实施例1‑3，但是其中的有效成分松果菊苷、毛蕊花糖苷和苯乙醇总苷的含量均小于实施例，综合比较后可知，实施例中的提取工艺由于对比例中的提取工艺。[0106]将对比例1与实施例3进行对比，未限定的弱酸性条件下提取，取消石油醚和乙醚的加入，并仅在75％乙醇中提取，由于石油醚和乙醚取消，导致肉苁蓉中杂质成分溶解于乙醇溶剂中，使得收率得以提高；未限定弱酸性条件，也使得杂质成分增多，进一步导致收率增加；但是由于提取物中杂质成分未分离去除，导致提取物中有效成分含量降低，使得产品质量不符合标准要求。[0107]将对比例2与实施例3进行对比，未限定在弱酸性条件下提取，取消石油醚和乙醚，导致肉苁蓉中杂质成分溶解于乙醇溶剂中，使得提取率得以提高，未限定弱酸性条件，也使得杂质成分增多，进一步导致收率增加；但是由于提取物中杂质成分未分离去除，导致提取物中有效成分含量降低，使得产品质量不符合标准要求；将对比例1和对比例2进行对比可知，对比例2中采用的不同浓度的乙醇和水进行分别提取，可充分将肉苁蓉中的成分提出，导致提取物的收率有所提高。[0108]将对比例3与实施例3进行对比，仅在水中进行提取，肉苁蓉中的水溶性成分溶解于水中，其收率一般，但是由于水中的杂质较多，导致提取物中有效成分的含量下降。[0109]将对比例4与实施例3进行对比，在不同浓度的乙醇溶液中进行回流提取，由于取消了超声提取，空化作用消失，导致成分溶出减少，收率降低；乙醇浓度过高，影响在肉苁蓉中的渗透作用，也进一步减少了有效成分随溶剂的溶出量，导致提取物中有效成分占比下降。[0110]将对比例5与实施例3进行对比，改变了肉苁蓉粉末与不同提取溶剂的比例关系，导致肉苁蓉中有效成分溶出受限，降低了收率。

对肉苁蓉属、远志属、铁线莲属、大风子科药用植物及中药黄芪、红花等40多种中药和天然药物及中药复方“补阳还五汤”等进行了系统的活性成分研究，分离鉴定了1600多个化合物，其中新化合物400多个；发现肉苁蓉中所含的部分苯乙醇苷类成分具有明显的抑制神经细胞凋亡、促进神经细胞生长作用，阐明其作用机理，并将其研制成为治疗老年痴呆症的二类新药；远志皂苷具有明显的抑制基因转染的神经细胞Aβ的分泌，并阐明其作用机理；广西血竭中所含的黄酮类成分具有明显的抑制血小板聚集、抗血栓等作用，部分黄烷类成分具有明显的抗真菌作用。对大黄、黄芪、红花等20多种中药及黄芪注射液等5种中药注射剂进行了系统的质量标准包括指纹图谱检测标准的研究，建立了有效的质量控制方法。已研制一类新药1项，五类新药10多项，在研新药多项。研究成果获得国家科技进步奖一等奖、三等奖各1项、教育部自然科学奖一等奖和科技进步奖一等奖各1项、国家中医药管理局科技进步奖一等奖2项、中华中医药学会李时珍医药创新奖1项、湖北省科技进步奖三等奖1项、新疆和田地区科技特等奖1项，并获得2001年度中国药学发展奖－地奥药学科学技术奖（中药奖）三等奖、2002年度茅以升科技教育奖－北京青年科技奖等荣誉奖。发表科研论文300余篇，其中SCI收载100多篇，著作9部，申请和授权专利30多项。