黄曲霉毒素的检测方法论文

用黄曲霉毒素检测仪HED-HQM

黄曲霉毒素检测卡和检测试纸都是可以用作家用的检测黄曲霉毒素比较简单、方便的工具，而且相对精准

● 1995年，世界卫生组织制定的食品黄曲霉毒素最高允许浓度为15ug/kg.● 中国政府对各种食物中黄曲霉毒素的最高允许量见表2.表2 中国对食品中黄曲霉毒素的最高允许含量食 物 名 称最高允许含量/（ug/kg）玉米花生，花生油,坚果和干果（核桃杏仁）20（黄曲霉毒素B1）玉米，花生仁制品（按原料折算）20（黄曲霉毒素B1）大米其他食用油（香油，菜籽油大豆油，葵花油胡麻油，茶油麻油，玉米胚芽油米糠油，棉籽油）10（黄曲霉毒素B1）其他粮食（麦类面粉，薯干），发酵食品（酱油食用醋，豆豉腐乳制品），淀粉类制品（糕点饼干，面包裱花蛋糕）5(黄曲霉毒素B1）牛乳及其制品（消毒牛奶，新鲜生牛乳全脂牛奶粉，淡炼乳，甜炼乳奶油，黄油）新鲜猪组织（肝，肾血，瘦肉）（黄曲霉毒素M1）● 美国联邦政府有关法律规定人类消费食品和奶牛饲料中的黄曲霉毒含量（指B1+B2+G1+G2的总量）不能超过15μg/kg.人类消费的牛奶中的含量不能超过μg/kg，其他动物饲料中的含量不能300μg/kg。● 而欧盟国家规定更加严格落花生和坚果及其加工产品和所有谷类食品及加工产品中黄曲霉毒素B1限量为μg/kg；原奶、热处理奶及加工奶产品中M1限量为μg/kg；婴儿食品（包括婴幼儿奶）中M1限量为μg/kg。” 1、薄层层析法薄层层析（Thin-Layer Chromatography,TLC）是在黄曲霉毒素研究方面应用最广的分离技术.自1990年它被列为AOAC （Association of Official Agricultural Chemists）标准方法，该方法同时具有定性和定量分析黄曲霉毒素的功能.2、液相色谱法液相色谱（Liquid Chromatography,LC）与薄层层析在许多方面具有相似性二者互相补充.通常用TLC进行前期的条件设定，选择适宜的分离条件后再用LC进行黄曲霉毒素的定量测定。3、免疫化学分析方法利用具有高度专一性的单克隆抗体或多克隆抗体设计的黄曲霉毒素的免疫分析方法也是最常用的黄曲霉毒素检测方法.这类方法通常包括放射免疫分析方法（Radioimmunoassay,RIA），酶联免疫法（Enzyme-linked of Immunosorbent Assay,ELISA）和免疫层析法（Immunoaflinity Column Assay,ICA）.它们均可以对黄曲霉毒素进行定量测定。（1） 免疫亲和柱-荧光分光光度法和免疫亲和术-HPLC法免疫亲和柱法和酶联免疫吸附法虽然都可达到速简便效果但酶联免疫吸附法仅能检测单一毒素（如黄曲霉毒素B1）含量，而且易出现假阳性结果难以控制.免疫亲和柱法（包括荧光光度法和HPLC法）却能达到既定量准确又快速简便的要求。免疫亲和柱的使用可以避免传统TLC和HPLC的缺点，同时免疫亲和柱与TLC和HPLC法结合可以大大提高工作效率提高灵敏度和准确度。黄曲霉毒素免疫亲和柱-荧光光度计法是以单克隆免疫亲和柱为分离手段，用荧光计紫外灯作为检测工具的快速分析方法。它克服了TLC和HPLC法在操作过程中使用剧毒的真菌毒素作为标定标准物和在样品预处理过程中使用多种有毒，异味的有机溶剂毒害操作人员和污染环境的缺点.同时黄曲霉毒素免疫亲和柱-荧光光度计法分析速度快，一个样品只需10-15min，比传统方法快几个小时甚至几天时间；仪器设备轻便容易携带自动化程度高，操作简单直接读出测试结果，可以在小型实验或现场使用.可以进行黄曲霉毒素总量 （B1B2G1G2） 的测定检测限可达到1ug/kg，达到黄曲霉毒素标准限量值以下测定范围为1-300ug/kg。黄曲霉毒素免疫亲和柱-高效液相色谱法比传统的HPLC法更加安全可靠，灵敏度和准确度高。它采用单克隆抗体免疫技术可以特效性地将黄曲霉毒素或其他真菌毒素分离出来，分离效率和回收率高。分析原理试样中的黄曲霉毒素用一定比例的甲醇/水提取液经过过滤稀释后，用免疫亲和柱净化以甲醇将亲和柱上的黄曲霉毒素淋洗下来，在淋洗液中加入溴溶液衍生以提高测定灵敏度，然后用荧光分光光度计进行定量。也可以将甲醇-黄曲霉毒素淋洗液的一部分注入HPLC中对黄曲霉毒素B1,B2,G1,B2分别进行定量分析.免疫亲和柱是用大剂量的黄曲霉毒素单克隆抗体固化在水不溶性的载体上然后装柱而成.该方法的测定范围0-300ug/kg。（2） 酶联免疫吸附法：1996年，Nakane 建立了辣根过氧化物酶标记抗体的测定技术.由于该方法简便敏感，特异可作为多种抗原或抗体的测定，20世纪70年代后期该方法引入真菌毒素的检测中，下面介绍的是竞争性酶联免疫吸附间接法检测黄曲霉毒素B1。原理：将已知抗原吸附在固态载体表面洗除末吸附抗原，加入一定量抗体与待测样品（含有抗原）提取液的混合液竞争培养后，在固相载体表面形成抗原抗体复合物.洗除多余抗体成分然后加入酶标记的抗球蛋白的第二抗体结合物，与吸附在固体表面的抗原抗体结合物相结合再加入酶底物。在酶的催化作用下，底物发生降解反应产生有色物质，通过酶标检测仪测出酶底物的降解量从而推知被测样品中的抗原量。（3） 微柱筛选法可以用来半定量测定各种食品中黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2的总量。原理 样品提取液中的黄曲霉毒素被微柱管风硅镁型吸附层吸附后在波长365nm紫外光灯下显示蓝紫色荧光环，其荧光强度与黄曲霉毒素在一定的光密度范围内成正比例关系.若硅镁型吸附剂层未出现蓝紫色荧光则样品为阴性（方法灵敏度为5-10ug/kg）.由于在微柱上不能分离黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2，所以测得结果为总的黄曲霉毒素含量。（4） 一步式黄曲霉毒素检测金标试纸法一步式黄曲霉毒素检测金标试纸法是利用单克隆抗体而设计的固相免疫分析法。由此产生的一步式黄曲霉毒素快速检测试纸可在5—10分钟完成对样品中黄曲霉毒素的定性测定.借助黄曲霉毒素标准样品这种方法能估算黄曲霉毒素的含量，非常适用于现场测试和进行大量样品的初选。