AFLP技术是一项新的分子标记技术，是基于PCR技术扩增基因组DNA限制性片段，基因组DNA先用限制性内切酶切割，然后将双链接头连接到DNA片段的末端，接头序列和相邻的限制性位点序列，作为引物结合位点。
韭菜挥发油中化学成分的研究 【英文篇名】 Identification on chemical components of volatile oil of chive by GC/MS 【作者中文名】 王鸿梅; 冯静; 【作者英文名】 WANG Hong-mei1; FENG Jing21.Laboratory Mass spectrometer; Tianjin 300070; China; 2.Department of Equipment）; 【作者单位】 天津医科大学质谱室; 天津医科大学设备处 天津; 【文献出处】 天津医科大学学报, Journal of Tianjin Medical University, 编辑部邮箱 2002年 02期 期刊荣誉：ASPT来源刊 CJFD收录刊 【关键词】 韭菜; 挥发油; 气相色谱质谱联用; 【英文关键词】 Chive; Volatile oil; GC/MS; 【摘要】 目的 :用化学方法从韭菜的根茎、韭菜叶、韭菜花中提取挥发油 ,并鉴定出其挥发油的化学成分。方法 :用水蒸气蒸馏法提取韭菜中韭菜的根茎、韭菜叶、韭菜花挥发油 ,并用毛细管气相色谱/质谱法 ,鉴定出其挥发油的化学成分。结果 :鉴定出18种化学成分。主要成分有 :二甲基二硫醚、二甲基三硫醚、甲基丙基二硫醚、甲基丙基三硫醚、甲基丙烯基二硫醚、甲基丙烯基三硫醚、丙基丙烯基二硫醚、丙基丙稀基三硫醚、二丙基三硫醚等含硫化合物。结论 :为韭菜作为调味品和保健品的开发利用提供实验数据上的支持。 【英文摘要】 Objective: To extract the volatile oil from rhizome,leaf,flower of chive by chemical method and its chemical components were identified.Medthods:Volatile oil of chive was extracted by means of water-vapour distillation and its chemical components were assayed by capillary gas thromat ography-mass spectrometry.Results:Eighteen components in volatile oil were assayed.The main components in volatile oil were:dimethy dithioether,dimethy trithioether,methyl propyl dithioether,methyl propyl trithjoether,methyl pr... 【DOI】 cnki:ISSN:1006-8147.0.2002-02-023 【参考文献】 反映本文研究工作的背景和依据。 共（1）篇 中国期刊全文数据库 共找到 1 条 [1] 邹忠梅,于德泉,丛浦珠. 葱属植物化学及药理研究进展[J]药学学报, 1999,(05) . 【引证文献】 引用本文的文献。本文研究工作的继续、应用、发展或评价。 共（9）篇 中国优秀硕士学位论文全文数据库 共找到 1 条 [1] 尹怀富. 韭蛆无药化防控技术及应用效果研究[D]山东农业大学, 2006 . 中国期刊全文数据库 共找到 7 条 [1] 高莉敏,陈运起,刘松忠,陈清,何洪巨. SPME-GC-MS法分析掖辐1号大葱挥发性成分[J]山东农业科学, 2008,(02) . [2] 陈小兰,史冬燕,陈善娜. 滇韭挥发性成分分析[J]精细化工, 2005,(05) . [3] 何洪巨,王希丽,张建丽. GC-MS法测定大葱、细香葱、小葱中的挥发性物质[J]分析测试学报, 2004,(S1) . [4] 付英杰,田景振,郭之平. 土鳖虫化学成分制取方法及药理作用研究概况[J]食品与药品, 2005,(04) . [5] 刘建涛,赵利,苏伟,王杉,张维民. 韭菜中生物活性成分及其分子生物学的研究进展[J]食品科技, 2006,(08) . [6] 娄卫东,段大航,孙丕东. 韭菜提取物及药用研究现状[J]中国民康医学, 2007,(15) . [7] 高莉敏,陈运起,刘松忠,陈清,唐晓伟,冯固,何洪巨. 固相微萃取-气相色谱-质谱法分析大葱挥发性成分[J]西北农业学报, 2008,(02) . 中国重要会议论文全文数据库 共找到 1 条 [1] 何洪巨,唐晓伟,宋曙辉,王文琪,李佳萍. 韭葱挥发性物质的气相色谱-质谱分析[A]中国质谱学会第七届会员代表大会暨学术报告会论文集[C], 2004 . 【共引文献】 （也称同引文献）与本文有相同参考文献的文献，与本文有共同研究背景或依据。 共（22）篇 中国优秀硕士学位论文全文数据库 共找到 7 条 [1] 王建军. 洋葱油工厂化生产的提取工艺研究及产品质量分析[D]南京农业大学, 2001 . [2] 卢媛. 沙葱、地椒风味活性成分及其对绵羊瘤胃发酵和羊肉风味的影响[D]内蒙古农业大学, 2002 . [3] 来威. 葱子的生物活性及生药鉴定[D]第二军医大学, 2006 . [4] 刘战. 沙葱提取物对鼠的一般毒性的研究[D]内蒙古农业大学, 2007 . [5] 哈斯额尔敦. 沙葱提取物对绵羊脂肪代谢的影响[D]内蒙古农业大学, 2007 . [6] 严子柱. 沙葱生态生理特性及驯化栽培技术研究[D]甘肃农业大学, 2007 . [7] 陈远平. 卵叶韭生态生物学特性及其更新芽休眠解除机理的研究[D]四川农业大学, 2006 . 中国博士学位论文全文数据库 共找到 2 条 [1] 张巧娥. 沙葱提取物的分离鉴定及其对绵羊消化道共轭亚油酸含量和胴体脂肪沉积影响的研究[D]内蒙古农业大学, 2007 . [2] 徐征. 土壤生态调控马铃薯晚疫病发生的研究[D]西南大学, 2006 . 中国期刊全文数据库 共找到 12 条 [1] 严子柱,刘世增,李爱德,朱淑娟. 野生蔬菜资源——沙葱的开发价值初探[J]甘肃林业科技, 2006,(01) . [2] 胡宁宝,杨忠仁,王萍,张凤兰,陈桂华,李晓静,赵清岩,郝丽珍. 沙葱种子几种营养成分含量的研究[J]安徽农业科学, 2008,(13) . [3] 何明三,李元圆,刘贞,赵元元. 葱中脂溶性成分的GC-MS分析[J]湖北中医学院学报, 2006,(04) . [4] 郝丽珍,杨忠仁,王六英,赵清岩,张凤兰. 三种葱属植物花形态及花药解剖结构观察[J]植物研究, 2005,(03) . [5] 哈斯其木格,敖长金,赵春艳. 葱属植物对动物免疫机能影响的研究进展[J]内蒙古科技与经济, 2008,(05) . [6] 郭艳华,张玉敏. 洋葱提取物清除亚硝酸盐的研究[J]化学研究与应用, 2008,(08) . [7] 高丽,田树革,王晓文. 中药葱白质量标准研究[J]时珍国医国药, 2005,(11) . [8] 刘建涛,王杉,张维民,苏伟,赵利. 葱属植物生物活性物质的研究进展[J]食品科学, 2007,(04) . [9] 赵云斌,胡樱,王增珍,曾繁波,周蕴珍. 大葱清除亚硝酸盐的实验研究[J]食品科学, 2001,(05) . [10] 杨忠仁,郝丽珍,张凤兰,王萍,刘杰才,李晓静,张进文,胡宁宝,赵清岩,王六英. 沙葱种子的萌发特性和几种贮藏物质含量的变化[J]植物生理学通讯, 2007,(01) . ＞＞更多 中国重要会议论文全文数据库 共找到 1 条 [1] 杨忠仁,郝丽珍,王萍,张凤兰,刘杰才,王六英,张进文,陈贵华,赵清岩,袁德正. 内蒙古葱属野菜的多样性及利用现状[A]全国蔬菜和薯类种质资源研究与利用研讨会论文集[C], 2006 .
根据最新数据，2022年，山东农业大学最新排名全国第105名，排在山东农业大学前3位的分别是：广西大学（综合排名：102）、长安大学（综合排名：102）、福建农林大学（综合排名：102）；排在后3位的分别是湘潭大学（综合排名：107）、中国药科大学（综合排名：107）、青岛大学（综合排名：108）。拓展资料山东农业大学坐落在雄伟壮丽的泰山脚下，前身是1906年创办于济南的山东高等农业学堂。后几经变迁，1952年经全国院系调整，成立山东农学院。1958年由济南迁至泰安，1983年更名为山东农业大学。1999年7月，原山东农业大学、山东水利专科学校合并，同时山东省林业学校并入，组建新的山东农业大学。目前，学校已经发展成为一所以农业科学为优势，生命科学为特色，融农、理、工、管、经、文、法、艺术学等于一体的多科性大学。
学校是农业农村部与山东省人民政府共建高校，国家林业和草原局与山东省人民政府共建高校，是教育部、农业农村部、国家林业和草原局首批卓越农林人才教育培养计划改革试点高校，是山东省首批五所应用基础型特色名校之一，是山东省高水平大学“冲一流”建设高校，是首届全国文明校园。近年来，学校毕业生就业质量位居省属高校前列，深造率平均在38%以上，荣获全国毕业生就业典型经验高校50强、全国创新创业典型经验高校50强。
山东农业大学排名：
山东农业大学坐落在雄伟壮丽的泰山脚下，前身是1906年创办于济南的山东高等农业学堂。后几经变迁，1952 年经全国院系调整，成立山东农学院。1958年由济南迁至泰安，1983年更名为山东农业大学。1999年7月，经山东省人民政府批准，将山东农业大学、山东水利专科学校合并，同时将山东省林业学校并入，组建新的山东农业大学。目前，学校已经发展成为一所以农业科学为优势，生命科学为特色，融农、理、工、管、经、文、法、医、教育学等于一体的多科性大学。
根据中国统计出版社出版，武书连编著的《挑大学 选专业 2014高考志愿填报指南》，山东农业大学2014年的最新排名是：全国第101名，山东省内第5名。《挑大学 选专业 2014高考志愿填报指南》中，山东省各高校的排名如下：
资料来源：武书连《挑大学 选专业 2014高考志愿填报指南》，中国统计出版社2014年版
1、来稿均要求有中英文的题目、作者姓名、作者单位、单位所在地的邮政编码、摘要（篇幅为100－300字）、关键词（3－8个）。2、作者简介包括：性别、学历、学位、职称、职务及主要著作（论文）等。另外，请注明通信地址、联系电话、电子信箱。3、各类参考文献，均要求统一按标准的编写格式排列于文末，具体情况如下：(1)中文专著、文集、学位论文、报告的编写格式：“[序号]主要责任者.文献题名[文献标识类型].出版地:出版者,出版年.(文献标识:专著M.论文集C.学位论文D. 报告R.标准S.专刊P.其他文献Z)(2)中文期刊文章的编写格式：[序号]主要责任者. 文献题名(J).刊名,年(期号).(3)中文报纸文章的编写格式：[序导]主要责任者.文献题名(N).报纸名称,出版年月日（版次）.(4)外文译著、译文的编写格式：与中文文献的格式相比，译著、译文的编写格式中多了[原作者国别]和中文译者，具体如下：[序号][原作者国别]主要责任者.文献题名[文献标识类型].中文译者. 中文本的出版社所在地名：中文出版社或中文报刊名，出版年、或年卷期号或出版年月日（版次）。(5)文集中的析出文献的编写格式： [序号]析出文献主要责任者.析出文献名[A]论文集.主要责任者.主要题名.[100].出版地：出版者，出版年.(6)电子文献的编写格式：[序号]主要责任者.文献题名[文献/载体类型标识].出处或可获得地址：发表或更新的年月日/引用的日期（任选其一）（电子文献类型：数据库DB计算机程序CP电子公告服EB；电子载体类型及代码为：磁带MF、磁盘DK、光盘CD、联机网络OL）
农业类核心期刊南京农业大学学报、浙江大学学报、农业与生命科学版、扬州大学学报、农业与生命科学版、湖南农业大学学报、华南农业大学学报、河北农业大学学报、作物学报、中国水稻科学、麦类作物学报、中国油料作物学报、农业工程学报、灌溉排水学报、农业机械学报，等等。
一、南京农业大学学报
《南京农业大学学报》创刊于1956年9月，是经中共江苏省委文化教育部批准，由中华人民共和国教育部主管，南京农业大学主办的综合性农业学术期刊。
据2018年11月《南京农业大学学报》官网显示，《南京农业大学学报》第九届编辑委员会（2018年—2023年）共有顾问2人、编委52人。
二、浙江大学学报
浙江大学学报由浙江大学学报（英文版）A辑：应用物理与工程、浙江大学学报（英文版）B辑：生物医学和生物技术、信息与电子工程前沿（英文）、浙江大学学报（人文社会科学版）、浙江大学学报（工学版）、浙江大学学报（理学版）、浙江大学学报（农业与生命科学版）、浙江大学学报（医学版）组成。
三、麦类作物学报
《麦类作物学报》是由中华人民共和国教育部主管，西北农林科技大学、国家小麦工程技术研究中心和中国作物学会联合主办的麦类作物学术专刊。
据2018年12月《麦类作物学报》编辑部官网显示，《麦类作物学报》第五届编辑委员会拥有学术顾问12人，委员57人。
四、中国油料作物学报
《中国油料作物学报》是由中国农业科学院油料作物研究所主办，科学出版社出版，全国唯一的一种有关油料作物专业学术期刊，创刊于1979。
五、农业工程学报
《农业工程学报》是中国科学技术协会主管，中国农业工程学会主办的全国性学术期刊。
1985年，《农业工程学报》创刊；2000年，由季刊改为双月刊；2005年，改为月刊；2012年，改为半月刊。
据2018年4月《农业工程学报》编辑部官网显示，《农业工程学报》第七届编辑委员会有委员120人、海外委员18人、顾问委员15人、编辑5人。
河北农业大学学报有两个版本其中：《河北农业大学学报》是中文核心、统计源核心的双核心期刊《河北农业大学学报》（农林教育版）不是核心所以你要先问清楚，你发表的刊物是哪个版本，才能确定是不是核心
《河北农业大学学报》是由河北农业大学主办的中文学报。本刊为全国综合性农业核心期刊，已被CA、AJ、ZR、CABI等国际性文献检索机构和国内许多权威性文献检索机构收录，多年来连续获得省内外多项奖励，是河北省优秀期刊、华北地区优秀科技期刊和全国优秀高校学报。
1、学校未安排迎新接站车辆，只在泰山站、泰安站、泰安长途汽车站设立2015级新生入学报到咨询点，现场挂有“山东农业大学”明显标识的横幅，且工作人员佩戴有统一标识的工作证。咨询时间为9月12日、13日8:00—20:00；
2、请不要轻信非山东农业大学迎新咨询点工作人员的引导、提示，谨防上当；
3、请一定注意保管您的随身物品，不要让陌生人代管；
4、请乘坐公共交通工具或正规出租车到校，乘坐出租车时要求按表计费，记住出租车牌号并保存好发票。
二、交通路线
（一）北校区报到路线
1、泰山站（普通火车站）：距山东农业大学北校区约2公里，可乘出租车（约6—7元）到校，也可在车站乘K2路、K12路、K39路、32路公共汽车到山东农业大学北校区下车。
2、泰安站（动车、高铁站）：距山东农业大学北校区约10公里，可乘出租车（约18元）到校，也可在泰安站乘K18路、K37路公共汽车到泰山火车站下车，再转乘K2路、K12路、K39路、32路公共汽车到山东农业大学北校区下车。
3、泰安长途汽车站：距山东农业大学北校区约3公里，乘出租车约需6—7元，也可在车站乘K2路、K11路、K40路、14路公共汽车到山东农业大学北校区下车。
（二）东校区报到路线
1、泰山站（普通火车站）：距山东农业大学东校区约3公里，可乘出租车（约8元）到校，也可在车站乘K2路、K3路、K11路、K15路、K36路公共汽车到山东农业大学东校区（林校操场站）下车。
2、泰安站（动车、高铁站）：距山东农业大学东校区约11公里，可乘出租车（约23元）到校，也可在泰安站乘K17路到山东农业大学东校区（林校操场站）下车。
3、泰安长途汽车站：距山东农业大学东校区约3—4公里，可乘出租车（约8—9元）到校，也可在车站乘K2路、K3路、32路公共汽车到山东农业大学东校区（林校操场站）下车。
（三）南校区报到路线
1、泰山站（普通火车站）：距山东农业大学南校区约6—7公里，可乘出租车（约15元）到校；也可在火车站东北方向200米青少年宫站（银座商城前）乘K31路到山东农业大学南校区（花卉市场站）下车。
2、泰安站（动车、高铁站）：距山东农业大学南校区约20公里，可乘出租车（约30元）到校；也可在泰安站乘K37路公共汽车到建设大厦站下车，再转乘K31路公共汽车到山东农业大学南校区（花卉市场站）下车。
3、泰安长途汽车站：距山东农业大学南校区约6—7公里，可乘出租车（约15元）到校，也可在车站乘5路、29路公交车到岱岳区供电局站下车，转乘K31路公共汽车到山东农业大学南校区（花卉市场站）下车。
（四）自驾车到校路线示意图
特别提示：图中红色实线为正常通行线路；绿色虚线（泮河大街）为正在施工无法通行线路，请注意绕行。建议路线如下：
从泰安东高速出口进入泰安市区可直接从东岳大街到岱宗大街西行至山东农业大学东校区或北校区；从东岳大街到温泉路南行至山东农业大学南校区；
从泰安西高速出口进入泰安市区可经直接从泰山大街经东岳大街到岱宗大街至山东农业大学北校区或东西区；从泰山大街到东岳大街或灵山大街转至温泉路南行至山东农业大学南校区；
从泰安南高速出口进入泰安市区可经长城路至东岳大街到岱宗大街东行至山东农业大学东校区或北校区；从长城路经灵山大街转至温泉路南行至山东农业大学南校区；
三、报到程序
新生请按照以下步骤提前准备好相关材料，便可以迅速完成报到手续：
第一步：提交录取通知书、高考准考证；
第二步：查询缴费情况，领取缴费清单（未缴费成功的须现场刷卡缴费；已办理生源地助学贷款的须出示贷款办理回执）；
第三步：不迁移户口的出示户籍证明信或户口本复印件；迁移户口的出示户口迁移证；交身份证复印件和照片材料；
第四步：领取校园卡、宿舍钥匙、体检表，入住公寓。（学院告知相关注意事项）
入学须知中要求携带的其他材料（党团组织关系材料、中学生档案、参保证明），各学院将在入学后另行安排时间集中收取，请妥善保存。
四、山东农业大学各校区示意图
以下为学校北、东、南三校区手绘示意图，供新生提前熟悉、了解所在校区环境。
研究生考试各个阶段匹配系统查询历年复试分数线查询考研国家线对比查询历年各科试题及答案下载研究生招生简章查询研究生专业目录查询研究生参考书目查询统考大纲/自命题大纲查询推免招生公告查询更多>>院校招生信息查询[新生入学指南]山东农业大学2022级研究生新生报到注意事项已公布，新生注册报到时间暂定2022年9月13日，新生凭准考证、录取通知书、毕业证和身份证来校报到。山东农业大学2022级研究生新生报到注意事项1.新生注册报到时间暂定2022年9月13日，新生凭准考证、录取通知书、毕业证和身份证来校报到。因故不能按时报到者应提前向学院请假，同时递交有关证明，经导师、学院同意并加盖公章后报研究生处备案。请假时间不得超过两周，否则视为自动放弃入学资格。2.新生入学时需要交纳学费和住宿费。全日制硕士研究学费标准为：会计专业学位学费为 15000 元/年，其他专业学费为 8000 元/年。非全日制硕士研究生学费为 15000 元/年。全日制博士研究生学费 10000 元。学校统一安排全日制非定向新生住宿，床上用品自备，届时需缴纳住宿费 800-1300 元/年。非全日制研究生原则上不安排住宿。相关费用收取采用“校园统一支付平台”，交纳时间另行通知。3.为方便新生入学报到后助学金的发放，新生报到时要及时并准确的在研究生管理系统中登记建行卡号(需是储蓄卡非信用卡)。4.根据山东省公安厅鲁公发【2008】115 号文件和迎胜派出所的要求，2022 级新生户口一律不迁移，但须携带居民身份证，并交身份证复印件、户口本首页和个人页复印件各一份。5.党组织关系转接：(1)省内转接：山东省内党员组织关系转接通过灯塔系统转接至研究生入学后所在的党支部。(2)跨省转接：省外新生组织关系介绍信的抬头填写：“中共泰安市委组织部”，开往单位填写“山东农业大学***学院党委”，介绍信由党员本人携带，开学后一周内学生持组织关系纸质介绍信到泰安市委组织部党员服务窗口( 泰安市望岳东路 55 号泰安市民之家三楼 F 区 10 号)做网上转接，通过灯塔系统转接至研究生入学后所在的党支部。6.团关系转接：录取学院团组织在新生入学一个月内，通过“智慧团建”系统创建新生所属团组织，并将新入学的学生团组织关系转入。请保管好智慧团建的用户名和密码，按录取学院相关要求进行操作。7.根据《驻泰高校大学生参加城镇居民基本医疗保险办法》，全日制非定向新生和非全日制非定向新生需一次性交纳在校期间医疗保险费，收费标准后续公布。8.报到地点：山东农业大学北校区 1 号办公楼前花坛区域(非经济管理学院新生);山东农业大学南校区西北片区(经济管理学院所有 2022 级研究生新生)。研究生报到具体安排将在报到前公布于研究生处主页(http://yjsc.sdau.edu.cn/)和山东农业大学研究生公众号，请及时关注，并按要求做好准备工作。9.温馨提示：请各位同学携带一寸免冠照片 4 张，以便填写有关表格时使用。路途中请看管好自己的行李物品、现金与证件，注意安全。斯人若彩虹，遇上方知有。愿您在农大遇见更好的自己!联系电话：见官网联系人：刘老师 石老师山东农业大学研究生招生办公室2022 年 7 月考研有疑问、不知道如何总结考研考点内容、不清楚考研报名当地政策，点击底部咨询官网，免费领取复习资料：
山东农业大学分配报到证遗失，可以到山东农业大学的教务处去咨询，去补领
如果没有网签，你的人事档案应该在学校里。档案可以放在学校里一年。找你们学校问问吧。报到证很有用的，你应该去改派。这样你户口就可以落到青岛了
植物保护专业本科毕业论文（设计）开题报告
紧张又充实的大学生活即将结束，大学生们马上就要开始最难熬的毕业设计阶段，而我们做毕业设计之前要先写好开题报告，快来参考开题报告是怎么写的吧！以下是我整理的植物保护专业本科毕业论文（设计）开题报告，欢迎大家借鉴与参考，希望对大家有所帮助。
毕业论文题目：
菌寄生真菌纤细齿梗孢蛋白酶基因的克隆与表达
姓名： xx 学号： xxxx
年级： xxx 专业： 植物保护
指导教师：姓名 xxx 职称 教授
学科 植物病理
山东农业大学教务处
20XX年x月x日
一、选题依据（拟开展研究项目的研究目的、意义）
菌寄生(Mycoparasitism)是发生在菌寄生真菌与寄主真菌之间的一种寄生方式，是自然界普遍存在的一种真菌与真菌之间的相互作用。一直以来，生物间相互作用及信号传导的分子机制，是当今生命科学研究的热门。利用菌寄生真菌与寄主真菌作为研究的模式系统来揭示生物相互之间的相互作用机制有重要理论和实践意义。李多川(Li,1996)先生发现纤细齿梗孢(Olpitrichum tenellum)和串珠镰刀菌(Fusarium moniliforme)的菌寄生关系以来，我们实验室试图通过研究纤细齿梗孢和串珠镰刀菌，来建立菌寄生真菌与寄主真菌相互作用机制研究的模式系统，从而揭示菌寄生真菌与寄主真菌之间相互作用的分子机制。纤细齿梗孢(Olpitrichum tenellum)是串珠镰刀菌的一种重寄生真菌，该菌是一种接触性活体重寄生菌，离体试验发现其分生孢子只有在串珠镰刀菌细胞壁提取物刺激下才能萌发。这说明两者之间的重寄生关系是建立在二者识别与互作的分子机制上的(Li,2004)。在纤细齿梗孢和串珠镰刀菌相互作用过程中，几丁质酶、蛋白酶等细胞壁裂解酶可能起到重要作用。其中，蛋白酶在木霉属菌寄生真菌中的功能已经得到初步证明，而纤细齿梗孢的蛋白酶的研究还未见报道。因此，克隆纤细齿梗孢蛋白酶编码基因对于从分子水平上研究重寄生真菌和寄主识别和互作机制有着重要的意义。
二、文献综述内容(在充分收集研究主题相关资料的基础上，分析国内外研究现状，提出问题，找到研究主题的切入点，附主要参考文献)
纤细齿梗孢(Olpitrichum tenellum)是李多川教授分离得到的一种活体营养接触型菌寄生真菌[1~3]，其寄主包括Fusarium moniliformeAlternaria alternata等。近年来，我们实验室一直在努力以其为基础研究菌寄生真菌与寄主真菌之间的相互作用的分子机制。经过多年的研究，人们渐渐认识到真菌细胞壁蛋白在细胞与外界的相互作用过程中扮演着重要的角色。细胞壁蛋白研究已经成为生物间相互识别机制研究的热点。鉴于以上原因，我们实验室成功分离纯化了纤细齿梗孢的寄主之一Alternaria alternata菌丝细胞壁上的一种特异性糖蛋白——凝集素，并初步证明其在A.alternaria和O.tenellum孢子吸附过程中起到识别因子的作用[4]。近年来，菌寄生真菌细胞壁裂解蛋白酶在菌寄生过程中的作用被人们逐渐重视起来。克隆和表达菌寄生真菌的蛋白酶编码基因变得很有意义。本研究试图以菌寄生真菌纤细齿梗孢(Olpitrichumtenellum)作为研究材料克隆了其蛋白酶基因。根据氨基酸的保守序列设计兼并引物，然后采用RT-PCR和RACE是一个较为快速、简单和高效的方法。本实验根据同源保守序列设计兼并引物，通过RT-PCR及RACE-PCR的方法，克隆了O.tenellum蛋白酶的编码基因的全长cDNA序列，并对该基因进行了序列分析，为后续试验打下了基础。
由于Olpitrichum tenellum在离开寄主的人工培养基中很难生长，纯化其蛋白酶变得非常困难。因此，我们需要使用外源蛋白表达系统得到蛋白，进一步研究其性质，从而搞清楚其在重寄生过程中的作用。在过去的几十年间，随着DNA重组技术的不断发展，通过构建遗传工程菌株，人们可以较容易地使各种各样的天然酶的基因在微生物系统中高效表达，从而在很大程度上摆脱对天然酶源的依赖。
基因工程的表达系统有原核表达系统和真核表达系统两大类。在原核表达系统中，大肠杆菌表达系统是目前了解最深入，实际应用最为广泛的表达系统。与其他表达系统相比，大肠杆菌表达系统具有遗传背景清楚、目标基因表达水平高、培养周期短、抗污染能力强等特点。在基因表达技术中占有重要的地位，是分子生物学研究和生物技术产业化发展进程中的重要工具[5]。
Pichia pastoris基因表达系统经过十几年发展，已基本成为较完善的外源基因表达系统，具有易于高密度发酵，表达基因在宿主基因组中稳定整合，能使产物有效分泌并适当糖基化，培养方便经济等特点。利用强效可调控启动子AOX1，已高效表达了HBsAg、TNF、EGF、破伤风毒素C片段、基因工程抗体等多种外源基因[6]，证实该系统是高效、实用、简便，能提高表达量并保持产物生物学活性的外源基因表达系统。P.pastoris表达系统在生物工程领域将发挥越来越重要的作用，促进更多外源基因在该系统的高效表达，提供更为广泛的基因工程产品[7]。
我们已经分离到O.tenellum蛋白酶的编码基因，本研究中将该基因的去掉信号肽序列的正确阅读框融合于原核表达载体pET-22b(+)和毕赤酵母表达载体pPIC9K上，分别转化E.coli BL21及Pichia pastoris GSxx5，以期在这些菌株中有效表达该基因的编码产物，从而为以后功能研究打下基础。
1 李多川.1998.菌寄生真菌分子生物学研究进展.吉林农业大学学报,20：37~65.
2 21.李多川.1998.菌寄生真菌分子生物学研究进展.微生物学通报，25：345~347.
3 .李多川，沈崇尧.1997.菌寄生菌物与寄主菌物相互作用的研究进展.西北农业学报，6：94~98.
4 张成省，李多川，孔凡玉.2005.Alternaria alternata菌丝细胞壁凝集素的纯化与特性研究.植物病理学报，35(2)：141~147.
5 .xx.何诚，朱运松.1998.甲醇营养型酵母表达系统的研究进展.生物工程进展,18：7~xx.
6 彭毅，杨希才，康良仪.2000.影响甲醇酵母外源蛋白表达的因素.生物技术通报，4：33~36.
7 韩雪清，刘湘涛，尹双.2003.毕赤酵母表达系统.微生物学杂志，3：35~40.
三、研究方案(主要研究内容、目标，研究方法、进度)：
1、研究内容：
本课题选择纤细齿梗孢(Olpitrichum tenellum)做为研究对象，通过RT-PCR及RACE技术分离克隆了其丝氨酸蛋白酶基因，并进行原核及真核表达，并对其的性质进行了研究，为进一步的研究工作打下基础。
2、研究的目标：
克隆了纤细齿梗孢(Olpitrichum tenellum)的丝氨酸蛋白酶基因，进行原核及真核表达，并对其的性质进行了研究。
3、研究方法：
将纤细齿梗孢(Olpitrichum tenellum)接种到LB培养基上，培养14个小时后，收集菌丝，然后采用总Trizol法提取RNA。再从GenBank数据库中搜索到大量的蛋白酶氨基酸序列，并根据同源性进行分类，分别设计兼并引物。再通过RT-PCR、3’-RACE、5’-RACE获得全长cDNA、DNA克隆，并将其连接到载体上，然后采用电击法将将重组质粒转入到全长cDNA、DNA克隆中，通过透析纯化蛋白酶，最后研究其特性。
四、研究进度：
20xx年5月23日~20xx年5月29日 整理收集资料，并跟着研究生学习基本实验技术。
20xx年5月30日~20xx年6月18日 提取RNA，设计引物、全长cDNA、DNA克隆 。
20xx年6月19日~20xx年7月15日 转化大肠杆菌、毕赤酵母表达，获得纯纯产物，并研究其特性。
20xx年3月~20xx年6月 对实验结果不理想的实验重做，整理实验数据，完成毕业论文，并准备毕业答辩。
五、技术路线：
收集菌丝
总RNA提取
同源序列 设计引物
特性研究
RT-PCR、
3’-RACE、5’-RACE
纯化表达产物
全长cDNA、DNA克隆 转化大肠杆菌、毕赤酵母
四、进程计划(各研究环节的时间安排、实施进度、完成程度)
20xx年5月23日~20xx年5月29日 整理收集资料，并跟着研究生学习基本实验技术。完成实验的1%。
20xx年5月30日~20xx年6月18日 提取RNA，设计引物、全长cDNA、DNA克隆。完成实验的50%。
20xx年6月19日~20xx年7月15日 转化大肠杆菌、毕赤酵母表达，获得纯纯产物，并研究其特性。完成实验的95%。
20xx年3月~20xx年6月 对实验结果不理想的实验重做，整理实验数据，完成毕业论文，并准备毕业答辩。完成100%。
五、导师对文献综述的评语
签字：
20xx年xx月xx日
六、专业意见
专业主任签字：
20xx 年 月 日
七、学院意见
学院(章)： 负责人签字：
20xx年xx月xx日
摘要：
针对目前浙江农林大学植物保护研究法实验教学方法、内容及手段等方面存在的一系列问题，提出了相关改革对策：优化实验课程内容，整合实验模块，学生自行设计实验方案等教学方法和手段的改革，以及课程考核方式和时间安排的调整，旨在培养学生的科研兴趣及创新能力。
关键词：
植物保护论文
目前，国内外很多农业院校的植物保护专业均开设了昆虫研究法和植病研究法课程。为优化本科培养方案，浙江农林大学通过调整教学大纲，将植病研究法、昆虫研究法和农药研究法合并成一门植物保护研究法课程。植物保护研究法是植物保护专业重要的专业限选课程之一，是植物保护研究的重要组成部分，也是培养和提高学生专业实验技能和学习兴趣的重要课程，是一门专业性、实践性很强的实验学科。通过这门课程的教学，能使学生掌握植物保护研究的基本方法及基本原理，培养植物保护研究常规操作能力，以及查阅资料、设计实验方案和实际操作能力，提高学生的逻辑思维、整理资料、总结归纳和论文撰写的能力。笔者分析了浙江农林大学植物保护研究法实验教学中存在的问题，提出教学改革内容，并总结了改革成效。
1.实验教学存在的问题
1.1传统实验教学的弊端传统实验教学的主要特征是“灌输式”“填鸭式”，学生在2个小时的实验过程中就是简单地按照实验指导书和实验大纲中的实验方法和步骤依葫芦画瓢，实验完成后，又按照统一的模式填写实验报告。在整个实验过程中，学生无需独立思考和分析，更谈不上发挥创新能力了。因此，很难让学生对实验产生兴趣，培养学生的创造性思维就更无从谈起了。虽然这种传统实验模式简明、清晰，有利于学生对相关结论的认可、理解和记忆，也有利于教师对整个教学过程的控制，教师和学生很轻松愉快地就能完成实验教学任务。学生走上工作岗位后，传统实验教学的弊端立即显现。学生缺乏设计实验的能力，在实验过程中缺乏发现问题、分析问题和解决问题的能力，实验后缺乏正确分析实验结果的能力。因此，传统的实验教学模式急需改革。
1.2实验教学内容系统性不强植物保护研究法是植物保护专业本科学生的一门专业课程，其涉及的内容有昆虫研究法、植病研究法和农药研究法。在以往的实验课程中，只是简单地把这3门课的实验合在一起上，并没有把内容紧密联系在一起，如昆虫实验时，指导教师一般是教授昆虫学科的教师;而在进行植病实验时，则由讲授植病学科的教师指导。这样的实验模式难以使植物病虫害系统联系起来，学生学习专业知识不够系统和深入，容易造成理解上的片面性和孤立性，不利于掌握该专业的系统知识和技能。
1.3实验考核不科学以往实验课程成绩评定的主要依据是实验报告，而每次实验课结束后，学生递交的实验报告只是把实验大纲(包括实验口的、原理、仪器与试剂、内容及方法)原文不动地抄一遍，实验结果更是千篇一律，这样实验就变成了预演过程，学生在实验中缺乏思考，不利于培养发现问题、提出问题、分析问题和解决问题的能力，背离了实验课教学的初衷。同时，还会导致每位学生的实验成绩差异微乎其微，不具有良好的区分度。
2.教学改革内容
2.1重视教学环节在以往的实验课程中，实验教学所需要的实验用具和材料大多数都是实验教辅人员提前准备，导致他们的工作量非常大。让学生参与实验材料的准备和管理，一方面提高了教辅人员的工作效率;另一方面可以让学生对实验过程有全面了解，获得整个科研实践过程的训练，从而养成好的实验习惯，在未来的科研工作中做到计划周密、有条不紊地安排和实施实验计划。同时，在实验教学过程中，必须教育学生认真操作、仔细观察、实事求是地记录实验结果，并对实验进行科学分析。一日_发现弄虚作假的学生，一定要严厉批评，同时帮助他们分析失败的原因，找出解决的方法，有条件的情况下，让其重新做实验，让学生充分意识到科学研究允许失败，但是不能有半l从虚假。2.2提高学生的实践能力实践教学是培养和训练学生实践操作能力，独立分析问题、解决问题能力的重要手段，尤其对于学生创新能力的培养，具有其独特的地位和作用。该项口分别以某种农作物病虫害为主轴展开一系列的实践性实验教学，要求学生自主设计实验和执行各项实验内容，指导教师负责答疑和提供技术帮助。学生通过自己分组、调查、取样、鉴定、查阅资料、讨论制订实验方案和动手实验等一系列步骤，不仅可以很好地将课堂上所学的理论知识与实践相结合，而且还有助于提高自学能力、实践能力和团队协作能力，进一步培养科学思维和创新能力。2.3优化实验教学内容结构将整个实验课程设置成一个综合性的大实验：分别以某个农作物上的病虫害发生规律及防治措施贯穿整个课程。将口前昆虫研究法的昆虫标本的采集与制作、昆虫人工饲养技术、昆虫生态学研究方法、昆虫生理生化研究方法、昆虫分子生物学研究方法和害虫综合治理研究方法5个实验和植病研究法的植物病害调查、植物病原菌分离与鉴定技术、植物病原菌分子生物学鉴定技术、植物病原真菌遗传转化技术和植物病害综合治理技术5个实验合并成1个综合性大实验，将植物病虫害研究以故事的形式紧密地整合在一起，让学生将课堂知识与田间实际应用有机地联系在一起，加深对理论知识的理解，提高学习兴趣。整个实验就是以具体的作物病虫害发生为时间轴，具有很强的连贯性和系统性，学生只有认真完成每一个实验，才能很好地保证后续实验的顺利进行，有助于增强学生的责任感和团队合作精神，同时也改变了学生实验报告千篇一律的`现象。2.4改革成绩评定方式实验课成绩一方面是对学生实验完成好坏的肯定，另一方面也对学生起到了一定的督促作用。为了做到对学生的全面评价，实验成绩除实验报告和考勤成绩外，应将实验过程中学生的学习主动性、动手操作能力、实验结果记录规范性量化纳入成绩考核。在实验过程中，教师应主动观察并记录每个学生的实际动手、操作能力，量化后按一定比例记入总成绩，对那些既有独立操作能力，又有创新意识的学生，适当给予创新学分。实验过程中，学生是否遵守实验室规则、是否具有团队合作精神，实验结束后，学生是否打扫卫生、是否清洗实验器材等，这些看似小问题，但也体现着一个人的品质和素养，做得好的学生也可以适当加分。
3.改革成效
3.1提高学生的专业技能及其对专业知识重要性的认识学生能在同一时间完成植病研究法、昆虫研究法和农药研究法3门实验课程，体现了实验课程很强的连贯性和系统性。学生在实践过程中将这3门课程的相关内容紧密、有机地联系起来，对植物病虫害防治有了更深入的认识，同时也提高了学生的专业技能及其对专业知识重要性的认识。在实验的过程中，强调把学生的动手能力放在首位，让学生更多地参与到实验中，切身体会到所学专业的意义。
3.2培养学生发现、提出、分析和解决问题的能力植物保护研究法实验教学模式具有系统化和整体化特点，同时涉及昆虫研究法、植病研究法、农药研究法等相关学科课程。在实验过程中，学生在对病虫害的认知及其防治等问题的处理上始终处于主体地位，在独立思考、查找资料、咨询专业教师、综合分析之后，拟定出具体的处理方案，能够融会贯通地掌握植物保护学科的理论知识和基本实践技能。
3.3提高指导教师的业务水平新的实验教学模式综合运用了3门相关课程的理论知识，加强了课程的综合实践环节，因此指导教师自身的知识面、操作技术、实践应用和协调能力都需要提升。所以，这种实验教学模式促使教师在教学过程中同学生一起不断学习，丰富专业理论知识，完善专业实践体系，提高发现、提出、分析和解决问题的能力，了解和掌握学科及相关学科的发展动态、研究的新进展、出现的新技术，从而提高了指导教师的业务水平。
4.结语
植物保护研究法在植物保护专业2013级和2014级本科生实验课程教学中进行了实践，通过问卷调查，95%的学生认为在实验过程中有较多的动手机会，激发了自己对实验的兴趣，提高了自己分析和解决问题的能力。因此，认为该教学方法可以发挥学生的主观能动性、拓展学生的科研思路、激发学生的创新创造力和提高学生的独立应用实践能力，具有良好的教学效果。
毕业论文格式1、论文题目：要求准确、简练、醒目、新颖。2、目录：目录是论文中主要段落的简表。（短篇论文不必列目录）3、提要：是文章主要内容的摘录，要求短、精、完整。字数少可几十字，多不超过三百字为宜。4、关键词或主题词：关键词是从论文的题名、提要和正文中选取出来的，是对表述论文的中心内容有实质意义的词汇。关键词是用作机系统标引论文内容特征的词语，便于信息系统汇集，以供读者检索。每篇论文一般选取3-8个词汇作为关键词，另起一行，排在“提要”的左下方。主题词是经过规范化的词，在确定主题词时，要对论文进行主题，依照标引和组配规则转换成主题词表中的规范词语。5、论文正文：（1）引言：引言又称前言、序言和导言，用在论文的开头。引言一般要概括地写出作者意图，说明选题的目的和意义, 并指出论文写作的范围。引言要短小精悍、紧扣主题。〈2）论文正文：正文是论文的主体，正文应包括论点、论据、论证过程和结论。主体部分包括以下内容：a.提出-论点；b.分析问题-论据和论证；c.解决问题-论证与步骤；d.结论。6、一篇论文的参考文献是将论文在和写作中可参考或引证的主要文献资料，列于论文的末尾。参考文献应另起一页，标注方式按《GB7714-87文后参考文献著录规则》进行。中文：标题--作者--出版物信息（版地、版者、版期）：作者--标题--出版物信息所列参考文献的要求是：（1）所列参考文献应是正式出版物，以便读者考证。（2）所列举的参考文献要标明序号、著作或文章的标题、作者、出版物信息。
自己的导师。山东农业大学为本科学校，毕业生的论文在答辩完后需要交给自己的导师的，导师会对论文进行评价，有不对的地方会返回到学生手里，学生们修改好之后再上交。