首页 > 学术发表知识库 > 核酸检测的论文方向

核酸检测的论文方向

发布时间:

核酸检测的论文方向

1、基于纳米颗粒的分子展示应用于超灵敏检测2、SLE患者中几种新型自身抗体的检测及其临床诊断价值的探讨3、多肽酶检测和细胞表面荧光标记的新方法研究4、区域检验服务协同平台的设计与实现5、胶体金喷膜仪的设计与开发6、重庆市乡镇卫生院医疗资源的调查研究7、基于氧化石墨烯和硫化铅纳米颗粒的荧光生物传感器研究8、产气荚膜梭菌α毒素快速诊断金标试纸条的研制及初步应用9、纳米粒子免疫层析法在检测异位妊娠和膀胱癌中的应用10、现代医院检验科模块化设计研究11、酶免工作站监控系统的设计与实现12、乙型肝炎表面抗原胶体金免疫层析法血清快速测定的性能评估13、基于微型压电与光谱生化分析系统的POCT新技术研究14、长江三角洲地区犬猫皮肤真菌病调查及体外药敏试验15、我国医学检验本科专业人才培养的问题与对策研究16、基于电化学分子信标基因传感技术的HIV-1核酸检测新方法研究17、Free β-hCG和PAPPA光激化学发光免疫分析试剂的研制18、乙肝快速分析仪的研究与开发19、阿托伐他汀对动脉粥样硬化患者外周血中PPAR γ的作用研究及相关炎症因子与动脉粥样硬化关系的建模分析20、综合性医院医学检验资源优化管理研究21、全自动多功能免疫检验过程关键问题的优化研究22、HMGB1通过NF-κB激活TGF-β1诱导特发性肺纤维化发病机制的研究23、若干病毒感染模型的动力学分析24、现代综合医院检验中心空间设计研究25、大型公立医院创建医学独立实验室可行性研究26、高血压病证型与血清褪黑色素水平的相关性研究27、医用臭氧与α-干扰素对照治疗慢性乙型病毒性肝炎28、网织血小板在系统性红斑狼疮患者的临床应用29、G公司第三方独立医学实验室服务营销策略研究30、临床毛细管电泳的研究31、基于光电检测与信息处理技术的纳米金免疫层析试条定量测试的研究32、贫铀长期作用后的吸收分布特点及其主要蓄积器官的损伤效应研究33、基于磁性微球的PMMA微流控免疫分析芯片系统的研究34、hr HPV、L1壳蛋白、p16蛋白与宫颈病变的关系及诊断价值研究35、76例急性白血病的MICM分型及预后(来源:学术堂)

医学检验?是关于人的还是动物的?

医学啥?你是发表职称的吧?

简单的可以选方法学的比对,两种测定方法的比对,两种设备的比对都可以的。少复杂一些的就是疾病中某一(或某些)测定物质的调查。复杂的就是研究了,学生肯定做不来的,一般需一些经费。

核酸检测方法的分析论文

在平时的学习、工作或生活中,大家都接触过作文吧,作文根据体裁的不同可以分为记叙文、说明文、应用文、议论文。还是对作文一筹莫展吗?下面是我帮大家整理的做核酸检测作文,供大家参考借鉴,希望可以帮助到有需要的朋友。

妈妈带着我和妹妹来到体育中心做核酸检测。

虽然现在已经是秋天了,但天气还是跟三伏天似的。大中午的太阳像一个超级大的火球一样,炙烤着大地,阳光是那么强烈,整个世界都笼罩在一片耀眼的光芒之中。

到了体育中心,只见做核酸检测的队伍像一条条长龙,一眼望不到边,每人间隔一米,大家井然有序地排着队,等待做核酸检测。

左等右等,终于轮到我了。我手拿身份证给工作人员登录信息。登记完之后,我就往前走,由另一位医人护人员给我做核酸检测。我打量着眼前这位医护人员,她顶着炎炎烈日,身上穿着密不透风的防护服,只见她拿出一支棉签让我张开嘴巴。这时,我很紧张。医护人员看我很紧张,便安慰我:“检查真不可怕,只是有点痒。”然后,我照着她说的做了。这时,我仔细观察这位医护人员,她被防护服包得很紧,紧得和一个在蒸笼里的一个包子一模一样,她的汗水像豆子般滴下。哦,在这样闷热的如包包子似的医务人员,对待我们却还却还是那样有耐心。她们真了不起。

在这里,我想说:“医护人员们,你们辛苦了!谢谢你们顶着炎炎烈日给我们做核酸检测。谢谢你们!”

一阵阵秋风吹落了金黄的树叶,带来了丝丝寒意,同时也没收了我的健康。看到体温表上37。3度的数字,我的心怦怦直跳,心想:“按照学校的要求,我必须做核酸检测。”

于是,我被衣服包成了一个大圆球和妈妈飞快的来到人民医院发烧门诊。下了楼远远望去在干净明亮的大厅我们看见有三四名小朋友在等待。我走到那个可怕的地方,一看见白大褂就想起了姐姐说的话太吓人了!正好,我透过窗户看见美丽的喷泉,心想:“这应该能让我变得不害怕吧。”但是我刚看了一会儿,就想,“我是小孩儿,应该不会从鼻子里吧。”我自言自语的说。但是,该干啥还得干啥,我只能面对现实。

只见那位医生拿出一个大概有1分米长的棉签,直向我嘴巴冲去,“哦,兴好,兴好,不是从鼻子眼儿里捅到嗓子眼儿里,如果是的话我就该跑了。”我正想着,一边张大嘴巴,当那根又细又长的棉签,捅到我嗓子眼儿那一刻,我都快吐了,那个味儿是真的难受,现在回想起那个味儿还想吐呢,等他把那根又细又长又难闻的棉签拿出来时,我的心情由阴变成了晴,心从紧张到放松,我心想,啊,终于结束“战斗”了,终于不用在难受了。但是啊,我觉得核酸检测并不疼,就是恶心,其他也到没有我想的那么怕。

这件事让我知道了在生活上其实有些事并不像想象的那样可怕,一定要面对现实。

突然爆发的疫情打破了往日的宁静,为防控疫情,烟台市全体市民要做核酸检测。8月4日,妈妈接到了村里的通知,说是明天早上在村广场做核酸检测。听到这个消息,我又惊又喜,心想:做核酸会不会很痛呢?

8月4日傍晚,跟着妈妈到广场排队拿号。我看到敬爱的医护人员,穿着防护服,戴着护目镜和口罩,早就做好了准备。不一会下起了大雨,我们赶紧找地方躲避。一会儿,雨停了,我们回到广场等候。激动的心,颤抖的手,我的心像打鼓一样砰砰直跳。“我的妈呀,做核酸检测疼不疼呀!”我非常忐忑,心里直犯嘀咕。我的腿就像灌了铅一样,一步都不想往前迈,可是医生的检测真是神速,不一会儿就轮到我了。

首先要登记,负责登记的志愿者对我说:“贺玉利,你害不害怕啊?”正在我疑惑之际,我发现原来是我们学校老师在跟我说话,看着穿防护服的老师,顿时我觉得不那么害怕了。登记之后,医生让我坐下,和蔼地对我说:“小朋友,把口罩摘下来吧。”哎呀!把我吓得都忘了摘口罩了,我飞快地摘下口罩。医生又说:“把嘴巴张开,啊——”我照着做了,医生拿出棉棒,向我口中伸去,直达咽部,在喉咙里转了一圈儿,我的喉咙里痒了一下,很快就好了。“小朋友,你可以走啦。”抬起头,看到医护人员浸湿防护服,看到志愿者老师忙碌的身影,我不由得一阵心酸,情不自禁的打了一个庄严的队礼。他们真不容易,我真盼望疫情早点儿结束!

今天是8月19日,妈妈接到了通知,说是明天早上7:45准时到达学校做核酸检测。妈妈告诉了我,我又惊又喜,心想:做核酸会不会很痛呢?但是能和好朋友一起学习,玩耍,能和老师相遇,再痛我也不怕!

一大早我就起来了,听见外面正在下着倾盆大雨,即使再大的雨也阻挡不了我的脚步。我和爷爷打着伞往学校走去。到了学校,我看到了一个小篮球厂,大树的叶子非常茂盛,到了教室,老师说了几句话,就去楼道找家长排队,我站在第十三个,过了一会儿,终于走到了做核酸的地?方了,我往前面看到了医护人员在准备,我快坚持不住了,心里还是特别的紧张,老师告诉我不要害怕,一点儿都不痛,只是拿着棉签往嘴里搅一圈,就好了。轮到我了,医护人员首先拿出一根棉签伸到我的嘴里。搅一圈,然后又拿出来把它放到小瓶子里,最后把它弄断。我感到很恶心,想吐,爷爷说我很坚强!

其实一点儿都不可怕,我希望结果早点儿出来,这样我就能和好朋友一起学习、玩耍,还能跟老师相遇,还能学习更多的知识!

“啊……”你问我为什么要“啊”,接着往下看,你就明白了。

今天一大早,我就被妈妈叫醒了。唉,我的梦还没做完呢!我还想再睡一会儿,但是今天得做第二次全民核酸检测(放假前做了第一次核酸检测),所以我只好慢悠悠地起床。起床后,我想吃完饭再去,妈妈说:“做完核酸检测,再吃饭吧!”于是,我就和妈妈戴上口罩出发了。

来到学校门口,这里已经有许多人在排队了。忽然,一位老奶奶说:“啊,身份证忘拿了!”她这么一说,妈妈才想起来我们也没带证件。“苍天啊,为什么你也忘带了?!”我感叹了一声,赶紧和妈妈回家去拿。

等我们再次来到学校时,人已经所剩无几,我们连忙跑过去,正好十个人。走进校门,只见许多阿姨坐在椅子上,她们是给我们统计信息的。轮到我做核酸检测了。我先张开嘴巴,“啊……”了几声,医生用棉签在我的喉咙里转了几圈,就放进了一个管子里,我有点想吐的感觉。听妈妈说,这些管子都要统一送到城里去做检测,一天以后才能出结果。

但愿这是我们定州最后一次做全民核酸检测,希望病毒早日被消灭,人们重新过上安居乐业的生活。

前段时间郑刚刚经历了一小场千年不遇的暴雨,汛情还未结束,疫情又来势汹汹,让我们的城市雪上加霜,为了能够尽快控制疫情,郑州市全员进行核酸检测。

今天下午,我们一家人也来到了小区的检测点。离检测点还有很远我就看见了一条“长龙”,爸爸妈妈带着我连忙加入了检测大军。我抬头一看,根本就看不到队首,心想:这要等多长时间才能轮到我呀!

10分钟过去了,30分钟过,一个小过去了还没有轮到我,我等得不耐烦了,于是就问爸爸:“什么时候到我们呀?我都快热死了,站了这久我又累又热,难受死了,我不想检测了,咱们回家吧。”爸爸看了我一眼说:“不行疫情当前,我们要严格遵守国家规定,这也是为抗疫做出自己的贡献。”我点了点头,又继续等待。

又过了半个小时,终于轮到了我。我坐在座位上,看到了身穿防护服的白衣天使,突然想起了我刚才的抱怨,羞愧万分。炎炎烈日这些白衣天使牺牲了自己的休息时间,穿着密不透风的防护服为我们检测,她们不累吗?她们不热吗?我有什么理由抱怨呢?她们才是最辛苦的。做完检测我站了起来向她们深深地鞠了一躬说道:“您们辛苦了,谢谢!”

回到家,爸爸表扬我,说我长大了,懂得感恩了。疫情当前,人人有责!作为小学生应该积极响应国家号召,遵守国家规定,就是为抗疫做出贡献。

今天早上,妈妈说要带我去做核酸检测,我有点紧张,因为我听说核酸检测要戳到我的喉咙。

我们来到检测点,人非常非常多。妈妈说,核酸检测其实就是用一根棉签往嘴里一搅就好了,很简单的。我一听,原来就是在喉咙里捣鼓几下嘛,有什么好怕的,心里顿时安定了许多。

马上要轮到我了。我看到前面一个人正在做核酸检测。医生刚把棉签伸进她的嘴巴,她就往后一缩。医生又把棉签伸进去,她还是一缩,也不知道最终医生到底有没有采到样。我想,我要做得更好一点,做一个大人都佩服的榜样。于是,我就大踏步走向前,很快就轮到我了。

可是想起来容易做起来难,我还是紧张起来了。医护人员拿出一根棉签,要往我嘴里塞。我感觉这根棉签像一条毒蛇要钻进我的嘴里。“别怕!”我一边默默给自己打气,一边张开了嘴巴。一开始,棉签在我的舌头根部搅和着。我平时有个小癖好,喜欢用舌头在自己的嘴巴里卷来卷去,医生搅和的这个地方我平时好像都卷过,我感觉不怎么难受,稍微有点梗,就像感冒时鼻腔堵塞的那种感觉。接下来,就来点猛料了。棉签突然往我喉咙里一戳,我感觉我的后脑勺好像被戳出了一个洞。正当我快承受不住的时候,医生把棉签拿了出来。呀,终于好了,我松了口气。我看到医生在棉签上涂了点红药水,放进了一个试管里,大概是要拿到医院里去做检查吧。

唉,虽然核酸检测没有我想象中那么恐怖,但是也有点儿难受的。真希望疫情赶快过去,让我们能开开心心地过一个暑假。

5月17日,早上八点,外婆带着我去做核酸检测,地点在金水农场幼儿园。

我们来到幼儿园,就发现一条长龙似的的队伍,从幼儿园的办公室门口一直延伸到幼儿园的大铁门,我们跟着队伍排在后面。每个人都要站在同一条黄线上,并且要保持一米的距离。

大约站了二十分钟的时候,一位穿着防护服的医务人员来到我的身旁,核对我的身份信息,给我一张写着我名字的小纸条。另一位医务人员用消毒液在我身上喷了一下。

又过了五分钟的时刻,终于轮到我做检测了。只见一位穿着防护服的医务人员让我把身份证给她看,她核实信息之后,就把身份证还给了我。还递给我一个小药瓶和一根棉签。

接着,一位医生叫我坐在椅子上,仰起头,张开嘴,她用那根棉签在我口腔里刮了几下,核酸检测就做完了。

一开始,我很害怕,做完之后,才发现并没有我想象中的那么可怕。

在回家的路上,我想:这么热的夏天,我就只穿着一件单衣服,都感到很热,那些穿着像大熊猫的医生们,一定会很难受的。长大以后,我也要当一位医生,治好病人,保护大家!

第一次做核酸检测,真兴奋!

妈妈一大清早就去当志愿者了,我起床后只喝了一杯牛奶,吃了几片面包,然后跟随爸爸去他们学校做核酸检测。由于学校在村里,自然少不了走山路。

公路像一条带子,沿着山坡,或者就搭在坡上,车子一会儿左拐弯,一会儿右拐弯,一会儿上坡,一会儿下坡,很颠簸。车子前行,只见一座一座山躲到了我的后面,一、二、三,我默默地数着山,不一会儿就睡着了……

车停了,我被惯性震了一下,顿时清醒起来。我打开车门,深吸了一空气,农村的气息好清爽!周围都是矮矮的居民房,一个院子一户人家,像极了老家村里的样子,太亲切了。我不觉兴奋起来,可我要保持冷静,因为爸爸顺便稍上了同事家的老奶奶和一个小女孩,要注意形象。我双手插兜,挺胸抬头,佯装自若,尽量把自很己装得很帅很酷。

今天村里要检测的.人不多,我们很快排上了队。排在前面的人也就有五六个。医护人员的操作真熟练,从录入信息到咽拭子检测不到三分钟,挺快的。可是不知为什么检测突然中止了,我向前瞄去,只见几个医护阿姨正拿着手机点着一个系统,可半天也没动静。于是,爸爸上前去帮助,掏出手机登录那个系统,可还是不行,听说是登录用户太多,系统正在抢修升级。此刻,我仿佛看到了很多网络工程师忙碌的身影。

我前面只剩一个人了,虽然近在咫尺,可又仿佛遥隔千里!没办法,等,再等,还是没办法。很快到午饭时间了,大家只好作罢,各自离去。

爸爸带我到了学校食堂,狼吞虎咽地吃了满满一大碗面条。吃完了,我就去找那个女孩儿玩,不一会儿,我们熟悉了,我们玩捉迷藏,跳方格,玩健身器材,玩得很开心。

下午时间到了,医护阿姨又来了,系统也修好了,不一会儿就到轮我了,我坐在椅子上,仰头张嘴,喉咙里发出“啊……”阿姨拿着一根像棉棒的细长木棍,在我的嗓子眼里桶了几下,顿时感觉嗓子里翻江倒海,恶心想吐!眼泪也瞬间涌出了眼眶,不疼,有点难受而已。“好了”,只见医护阿姨把细棍子折断,有棉的一截给放进了玻璃管里。

啊!终于完了,再回头看看医护阿姨,她们依旧在忙碌,医护阿姨可真伟大!

疫情期间“核酸检测”是我们经常听到的一个词,那你们知道做核酸检测时,是会感到舒服,还是会感到疼痛呢?是用什么工具进行检测呢?会不会打麻药呢?今天,就让这个刚刚做完检测的我,给大家提个醒吧!

最近鼻子总是一到晚上睡觉就容易堵塞,呼吸不畅,妈妈今天决定带我去医院做个检查。因为需要做鼻腔镜检查,必须先做核酸检测,没有问题才能去做进一步检查,我怀着一颗既忐忑又期待的心跟着妈妈去缴费。不一会就来到专门做核酸检测的小帐篷前排队。

“韩欣格来了吗?”随着工作人员的叫喊声,我也被妈妈“推”到了医生面前,其实我一开始也跟别人一样满怀期待地在小帐篷前排队等候。但当我看到前面检测的人满脸恶心地从帐篷里出来时,我那期待的眼神在下一秒就凝固了。“到你啦!快过去啊!”妈妈把我往前推了推,“这个……我……”我开始犹豫了,可妈妈的力气就像大力水手,一下子就把我送到医生面前,我知道,这场灾难甩不掉了。

只见一位医生冲我微微一笑,但在我心里,这个微笑让我浑身一颤。随后她拿出一根长长的棉签,对我保证地说:“一定不会痛的,我会很轻哟!”可在我心里,长长的棉签仿佛一根长针,迎接我的必定是强烈的疼痛感,我身体紧绷的站着。一切准备就绪后,那位医生拿起“针”慢悠悠地伸进我的喉咙,不停地搅动,搞得我满脸通红,十二分的难受,恶心的感觉慢慢向我袭来。可那医生完全没有停下来的意思,哎,算了,忍不住了“呕!呕!不行了——”看着我那狼狈的样子,妈妈也是哭笑不得。

这就是我惊心动魄的全部检查过程,现在,你们还对核酸检测感兴趣吗?

莆田,敲响了抗疫的警钟,还启动全市核酸的方案。这个方案一确定下来,我家楼下和小区里的人,不管是老幼妇孺都从四面八方涌向马路。那空荡荡的马路一眨眼的工夫就排起了一条长龙。于是我们决定明天再去做核酸检测。

可到了晚上凌晨一点左右,正在睡梦中的我被一个电话吵醒了,是姑姑打来的电话。她说:“赶紧起床下来做核酸,这个时候人不会多。"于是我揉了揉眼睛爬下了床,很不情愿地下楼来到了马路上。一看,虽然人没有白天那么多,但还是排着一条“龙”。刚排没一会儿,我和妹妹就开始有些不耐烦了,妹妹一直吵着要睡觉,这时妈妈把手机给了她,并让我边排队边照看妹妹,妈妈就飞奔到楼上搬了把椅子下来,让我和妹妹坐在旁边等待。

不知过了多久,队伍慢慢地移动到了学校门口,工作人员要求十人一组出示健康码才可以入校。进入校内,我们来到第一个帐蓬前,工作人员要求将身份证放在胸前拍照登记,随后我们便来到护士面前,我有些紧张地四处张望,有正在排队的,有在维持程序的,还有一些不肯配合哭闹的幼小儿童……终于到我了,只见穿着密不透风的防护服的护士将一根一次性的棉签伸入我的嘴里不停搅动后,拿出来放入装着药水的瓶子里折断,我和妈妈、妹妹做完核酸检测便火速离开了现场。

回家路上,我边走边想,这些护士太伟大了!她们冒着危险、不眠不休、加班加点地给我们做核酸检测,我才是半夜排了一会儿队都不耐烦,可她们还要从早忙到黑地为我们做核酸检测啊!我真想对她们说:“谢谢您们!您们辛苦了!”

当你第一次做一件事之前,可能会觉得很难,但在你真正去做的时候,可能会发现并没有想象中的那么难。

记得上学的一天,全体学生要核酸检测。我是第一次做核酸检测,所以并不知道核酸检测是怎样的。我便提心吊胆,想着核酸检测是什么样?:打针?吃药?量体温?……这些我并不害怕,但是打针和吃药让我有一点点紧张,想着想着,我变得又害怕,又紧张!

排队的时候,我紧张地在原地踱步,突然看见一间教室里有几名“白衣战士”不知道,在给学生干什么?有几个学生从后门走出去,边走边擦眼泪。啊!他们一定非常痛苦吧?他们到底遭受了怎样的痛苦呢?走进教室,我的心“怦怦,怦怦”的打起鼓来,脚步也变得沉重了,不敢再往前移,真想打退堂鼓。

这时,一名“白衣战士”对我说:“小朋友,过来。”他那没有学生了,我坐在椅子上,张大嘴巴,只感觉喉咙痒痒的。不一会儿,“白衣战士”就说好了,耶,终于好了!我高兴地回到了教室,原来核酸检测就一下子,几秒钟而已,把嘴巴张大,说个“啊”字就结束了,而且一点也不疼!

我明白了一个道理:一些事情看起来很难,但只要勇敢去面对,就会发现这并没有自己想象中的那样可怕。

从十五号起,小区的广场上就总有一长条队伍,也不知到是干什么的。后来我才知道楼下在做核酸检测。

今天是周末,所以我还在床上睡懒觉。睡到了十点多才起来。我赶紧洗漱了一下就来吃早餐了。刚吃完早餐,我们就接到了爸爸的电话。“吴佳璇,赶紧叫妈妈他们准备准备,马上就要去做核酸检测了,快点换好衣服下楼吧!”我跟妈妈报告:“妈,爸爸叫我们下楼做核酸检测。”“那你先叫弟弟去换衣服,我马上好。”

我们做好了准备,拿上身份证就下楼了。在去核酸检测的路上,我问妈妈:

“妈,啥是核酸检测啊?”

“就是拿一根很长的棉签在你喉咙里转来转去。”

“那会不会把我弄吐吧!”

“有可能。”

听到这里,我有点害怕了,因为我以前一吐就要把胆汁也吐出来,嘴里还非常苦,所以我非常怕我吐。

我们来到“长龙”的“尾巴”那里,排了进去,后面还有人不断的排过来。队伍中的人们看上去很轻松的样子。我却表现得很沉重,因为我从来没有做过核酸检测。眼看我马上就要成为“龙头”了,因此,我非常紧张。我只好找吴佳烨(我的弟弟)玩“石头剪刀布”来缓解。我俩玩的很开心,一下就把紧张抛到了九霄云外。排着排着,我们来到了一个棚子底下妈妈在帮我们登记。我又开始紧张了:完了完了,马上要做核酸检测了我肯定要吐了,到时候可不要丢人啊!妈妈带着我们来到检测处,我拿着一个小瓶子,想着:它是干嘛的?难道是放样品的?还是抽血的?我来到了另一个棚子下,棚子下有一个医护人员,旁边有一个牌子,上面写着“二号检测处”。由于我害怕,就让弟弟先去检测。弟弟出于好奇,就真的走过去检查,没有犹豫一下。只见医务人员拿出了一根比普通棉签长两倍的棉签伸到弟弟嘴里搅,然后又拿出来,把它放在小瓶子里,然后把它弄断。我看弟弟一下就做完了,我也去做。也就是把棉签伸到喉咙里转。然后就是喉咙有点干。

其实核酸检测也不是很恐怖,只不过是我的心理作用而已……

核酸检测的成本效益问题分析从最初的几百元,到现在不到十块钱就可以检测一次核酸,究竟核酸检测价格都包含哪些组成部分?疫情初期,试剂盒价格一度超过200元/个。对此,国家医保局一方面降低了核酸检测耗材的价格,另一方面降低了医疗服务中的人工成本,同时核酸检测仪器经过更大范围应用之后也相应降低了成本。核酸检测点的成本是多少?外界看到的是固定资产投资的成本,有两个特别重要的可变动成本,并没有计算进去。市场化的核酸检测机构,前期投入包括两方面——一块是前期物业装修费用等,另一块是仪器费用。但是,可以明确的是,这是一项纯手工的买卖,需要一对多地人工采集核酸,如果市场化运作,那么,就不应该是志愿者服务的形式,也就是说,像备受争议的北京朝安医学检验所(因很多人在质疑4月26日注册,5月9日就已投入到北京居民的核酸检测任务,对比朝阳卫健委已经做了情况说明),这种纯商业机构,如果要承担政府采购项目,要有利润,那就要有人工成本,采样人员、化验人员的工资要由这种机构承担。因为核酸检测是政府采购,所以,这种核酸检测机构省去了市场推广费用,但又因为政府采购价格已经控制在合理范围了,所以,利润肯定不会很高。而剩下的就是风险了,这种核酸检测机构,面临两大风险,对于企业,最致命的是疫情突然结束(注意,此处仅仅从商业角度分析),另外一个风险是因为管理不善,加上临时组成的团队其人员素质、技术水平等等制约,比如出现假阳性结果,因此而被行政制裁。所以,核酸检测点即使放开申办,想要投资的企业,还是应该三思而后行。百度文库VIP已帮您省69元现在恢复最低仅需0.3元/天​​立即续费​核酸检测的成本效益问题分析知未文娱核酸检测的成本效益问题分析从最初的几百元,到现在不到十块钱就可以检测一次核酸,究竟核酸检测价格都包含哪些组成部分?疫情初期,试剂盒价格一度超过200元/个。对此,国家医保局一方面降低了核酸检测耗材的价格,另一方面降低了医疗服务中的人工成本,同时核酸检测仪器经过更大范围应用之后也相应降低了成本。核酸检测点的成本是多少?外界看到的是固定资产投资的成本,有两个特别重要的可变动成本,并没有计算进去。

pcr检测核酸论文

【综述】几种用于发现未知病毒核酸序列的技术及其应用翁康生 病毒是引发人类传染性疾病的主要病原体之一, 它们极大地威胁着人类健康。目前还存在人类尚未认知或新出现的病毒, 随时可能严重危害人类健康安全〔1 - 3〕。及早地发现,鉴别未知的或新出现的病毒, 是有效的预防和控制的先决条件之一。因此, 建立、储备、改良、发展、乃至创新应用于发现、鉴别未知或新出现病毒的技术方法是十分必要的。近20 多年来, 常采用传统的微生物学技术方法和现代分子生物学技术方法相结合的途径, 发现和鉴别未知病毒。通过细胞培养的方法分离病毒、电镜观察、用已知病毒的抗血清建立的免疫学方法作排他性检测、用已知病毒核酸序列建立的PCR、杂交等方法, 作特异核酸序列的检测、用分子生物学技术获得未知病毒核酸序列, 查询基因数据库, 检出并确定未知病毒基因组序列, 最终发现鉴别出未知病毒。对于无法用细胞分离培养的未知病毒, 有的采用免疫学与分子生物学技术相结合, 筛选获取病毒特异抗原编码基因的克隆, 进而发现鉴别出该病毒。更多的则是采用相应的分子生物学技术, 从被检样品中发现获取未知病毒的核酸序列,进而发现鉴别未知病毒。无论未知病毒是否可以用细胞培养分离, 最终对其基因组序列的测定分析, 是鉴别和判断的决定性依据之一, 而获取未知病毒的核酸序列是前提条件。从少量样品中, 从高度复杂的宿主细胞核酸物质中, 分离、扩增、获取足够量的无基因序列资料的未知病毒的核酸片段, 供进一步克隆、测序、生物信息学分析, 是用分子生物学技术发现、鉴别未知和新出现病毒的关键之一〔4〕, 也是最终测定分析, 拼接出未知和新出现病毒基因组序列的瓶颈步骤。病毒所携核酸物质有DNA 和RNA 之分, 可采用的技术方法也有所不同, 现将有关技术与其应用作一简介, 以供参考。1 代表性差异分析法代表性差异分析法是为寻找分析两个生物样品复杂的基因组间有何差异而发展建立起来的分子生物学技术方法, 并不断得到演化, 发展和应用。病毒感染宿主细胞后, 与未感染的同类细胞相比, 二者核酸物质间的差异主要在于是否存在病毒核酸。消减去二者核酸间相同序列的背景部分, 扩增、比较、选取余下可能存在差异的部分, 进一步分析以发现未知病毒的核酸序列。病毒的核酸结构各有不同, 可选用相应的代表性差异分析法, 见表1 。111 DNA 代表性差异分析法(DNA Representation differenceanalysis , DNA RDA)此方法是Lisitsyn 等〔5〕利用核酸消减杂交技术〔6〕、PCR 方法和双链DNA 热变性后互补链退火复性的二级动力学原理〔7 - 8〕作者单位:上海市疾病预防控制中心 200336表1 病毒核酸类型与各代表性差异分析法的选用病毒核酸类型DNA RDA c DNA RDA非rRNA 序列6 核苷酸引导c DNA RDAds DNA 线状√ds DNA 环状√ss RNA polyA( + ) √ss RNA polyA( - ) 3 √ds RNA polyA( - ) √ 3 负链ss RNA polyA( - ) 视病毒在宿主细胞的转录机制而定。而建立的。方法中将需分析的样品DNA(Test DNA ,T- DNA) 和对照DNA(Driver DNA ,D - DNA) 设为二组,分别用同一种限制性内切酶酶切处理,并接上5′端去磷酸化的人工接头,补齐接头后,加入与接头序列互补的引物作PCR 扩增。切除扩增产物上的人工接头后,切出的T - DNA 连上第二种人工接头,变性后与过量的变性D - DNA 杂交。通过杂交,消减去T- DNA 中与D - DNA 中同源的核酸序列,而只存在于T - DNA 中的靶序列DNA(Target DNA) 则自我退火复性,其两端连有第二种人工接头。加入与第二种接头互补的引物作PCR ,只有靶序列DNA呈指数扩增,因而得到进一步富集。进过如此重复的几个轮回后,以电泳检测比较T- DNA 和D - DNA ,将T- DNA 中呈现的差异部分作分离,克隆,序列分析。Lisitsyn 等以10μg 人淋巴细胞基因组DNA 作为D - DNA ,在相同的人DNA 中加入相当于单拷贝量的120 pg 腺病毒DNA作T- DNA。以此作为实验模型,用DNA 代表性差异分析法成功的寻找、鉴定出外加入的腺病毒DNA 序列。应用此技术,Chang 等〔9〕在艾滋病相关的卡波西肉瘤(Kaposis Sarcoma) 中发现一段类似人类疱疹病毒的基因, 并由此发现一种新的病毒HPV8。以后人们又以此技术发现鉴定了HPV6、TTV 病毒、黄热病毒样基因组、MDV 等〔10 - 13〕DNA 病毒。112 cDNA 代表性差异分析法(cDNA Representation differenceanalysis , cDNA RDA)Hubank 等〔14〕针对mRNA 所含序列相对简单的特点,提出了cDNA 代表性差异分析法。它的基本原理与DNA RDA 相同,主要不同在于,采用识别4 核苷酸序列的限制性内切酶,它的识别位点在mRNA 反转录成的cDNA 中出现的频率更高,平均酶切片段长度约256 bp ,保证了cDNA 序列群中绝大多数序列,至少被切出一个片段可扩增,供差异分析,分离鉴定。cDNA RDA 技术相对经济,可高效灵敏地用于非常少的起始材料而获得结果〔15〕。具有polyA( + ) - RNA 病毒,其核酸可类似于mRNA 分离纯化,因此可应用此技术。利用cDNA RDA技术,发现鉴定了TiV、MenV ,等〔16 ,17〕RNA 病毒。113 非rRNA 序列6 聚核苷酸引导反转录的cDNA RDA中国预防医学杂志2007 年6 月第8 卷第3 期 Chin Prev Med , June 2007 , Vol18 No13 ·317 ·© 1994-2008 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.netpolyA( - ) - RNA 病毒,其核酸物质不似于mRNA ,需和宿主细胞总RNA 同时分离,并用随机引物作反转录。因为宿主细胞总RNA 中rRNA 约占80 % ,由于竞争反应、靶序列信号被湮灭等原因,从这样的总RNA 抽提物中,用随机6 聚核苷酸引物引导反转录的cDNA RDA 技术,发现鉴别polyA( - ) - RNA 病毒核酸序列是困难的。Endoh 等〔18〕罗列了6 聚核苷酸所有可能的排列组合,共计4 096 个序列模式,以大鼠18S、518S、28S 等rRNA、微卫星重复序列、SARS - CoV、BI - 3 病毒等的序列数据为模型,筛选出在rRNA 序列中出现频率极低或不出现的6 聚核苷酸序列模式共96 种。将这些序列分别合成并混合后,称之为非rRNA 序列6 聚核苷酸引物。生物信息学分析96 种序列模式在哺乳动物病毒科具代表性的1 791 个病毒基因组序列中出现的频率,数据表明,非rRNA 序列6 核苷酸引物可引导绝大多数病毒的cDNA 合成。分别用非rRNA 序列6 聚核苷酸引物和随机6 核苷酸引物作cDNA 反转录效率、cDNA RDA 试验,结果表明,二类引物对人工合成的RNA (二类引物在其序列中出现的频率相似) 反转录效率几乎相等,而前者对细胞总RNA反转录效率远低于随机引物。用二类引物作cDNA RDA ,检测人工合成的RNA ,前者灵敏度是用随机引物的30 倍。在模拟实验中用非rRNA 序列6 聚核苷酸引物引导反转录,串联cDNARDA 技术,检测鉴别出感染细胞的BI - 3 和SRAS - Cov 核酸序列片段。此方法能从1μg 总RNA 中检测出3 ng 的外来RNA ,其检测灵敏度不及普通的PCR 检测方法,但对于检测鉴别在宿主细胞中复制,但不知其基因序列的poly A( - ) - RNA 病毒而言,也是一个可选择的方法。114 抑制消减杂交cDNA RDA 技术结合消减杂交和PCR 抑制作用〔19〕的技术原理,Diatchenks 等〔20〕等发展出了抑制消减杂交技术( suppressionsubtractive hybridization ,SSH) 。与前两种RDA 技术不同点在于,SSH 技术将内切酶酶切处理的T - cDNA 分为两份,分别接上不同序列的去磷酸化的接头1 和2 ,分别于过量的D - cDNA作第一轮杂交。杂交过程中两组中的单链T - cDNA 浓度趋同,T- cDNA 中的非靶序列单链cDNA 与D - cDNA 中相应序列形成杂交双链而被消减, T - cDNA 中差异表达的单链cDNA被显著富集。合并一轮杂交物,加入过量变性D - cDNA ,作第二轮杂交。合并的二组份一轮杂交物中剩下的趋同化、经消减杂交后的单链T - cDNA 能互补杂交, 可以形成: 原组内T- cDNA 单链间的杂交、T - cDNA 与D - cDNA 单链间的杂交、二组间T- cDNA 单链间的杂交。补齐杂交反应后双链cD2NA 末端,用分别与接头1 和2 的外侧部分序列互补的寡核苷酸为引物,作PCR 扩增。二组份间T- cDNA 互补单链杂交物,因两端分别具有接头1 和2 ,可被指数扩增;T - cDNA 与D -cDNA 杂交物和剩余单链T- cDNA ,因一端具接头序列,被线性扩增;而同组间T- cDNA 杂交物两端具反转重复长序列,因抑制性PCR 效应,在PCR 反应循环中分子内退火形成稳定的“锅柄结构”〔19〕而不被扩增。因此,SSH 技术通过二轮消减杂交和抑制性PCR 特异扩增,使假阳性大大降低,提高了检出低丰度靶mRNA 的灵敏度。Hu 等〔21〕应用SSH 技术,结合反转录酶的模板切换(tem2plate - switching) 功能, 以HCV RNA 阳性血清体外感染的人MOLT- 4 急性淋巴母细胞白血病T 细胞系为模型,通过反转录合成全长cDNA、抑制性消减杂交、消减的cDNA 文库构建、反相斑点杂交筛选,在被筛的96 个克隆里,T- cDNA 探针杂交呈特异阳性的16 克隆中,序列分析后得到4 个插入HCV 序列的克隆。2 非特异多重引导滚环式扩增法乳头瘤病毒、痘病毒等,其基因物质为环状DNA 分子。在事前未知基因序列的情况下,发现和鉴别这类病毒核酸序列还可选择非特异多重引导滚环式扩增法(multiply primed rolling -circle amplification ,RCA) ,扩增、分离、获取其基因片段供进一步分析。自然状况下,环状DNA 经常以滚环方式进行复制。Dean等〔22〕应用随机6 聚核苷酸作引物,加入φ29 DNA 聚合酶,以质粒DNA 和噬菌体DNA 为模型,建立了多重引物引导的滚环式扩增法。φ29 DNA 聚合酶可长距离( > 70 000 nt) 地结合于DNA模板,进行链置换DNA 合成。而随机6 聚核苷酸引物可多位点的与单链环状DNA 互补复性。在φ29 DNA 聚合酶作用下,以随机引物引导,合成与模板互补的DNA 链。当合成链延伸到与模板结合的随机引物5′端时,在φ29 DNA 聚合酶的链置换活性作用下,下游被延伸的随机引物链被“甩”出模板。而上游的延伸链继续在环状模板上复制合成。同时,被从单链环状模板上“甩”出的互补链,又成为新的模板,随机引物与之结合,在φ29 DNA 聚合酶作用下,继续以枝杈的形式进行链延伸和链置换,最后以双链DNA 串联体形式释放。用此法可使1 ng 纯pCU18 环状DNA 模板延展式地扩增至107倍。Rector 等〔23〕以此原理建立了不依赖已知的特定基因序列(非序列依赖性) 的多重引导滚环式扩增环状DNA 病毒基因组方法,并应用其扩增获取了HPV 16 的基因组DNA。在接近实样的试验样品中,由于稀释倍数和环状DNA 分子较大等原因,将HPV 16 基因组DNA 扩增了214 ×104 倍。3 病毒颗粒相关核酸的非序列依赖性PCR 扩增病毒核酸可包裹于病毒外壳内,病毒的蛋白外壳或脂膜对病毒核酸具有保护作用。而病毒颗粒具有不同于细菌或其他真核细胞的理化特性。利用这样的特点Allender 等〔24〕和Stang等〔25〕各自建立了病毒颗粒相关核酸的非序列依赖性PCR 扩增方法(sequence - independent amplification) 。两种方法的共同点在于,依据病毒颗粒小、具一定密度,用0122μm 滤器过滤、或再串上超速密度梯度离心,从样品中分离出病毒颗粒,DNA 酶酶解游离的DNA ,裂解病毒颗粒,抽提获取较纯的病毒颗粒相关核酸。Allender 等〔24〕借鉴RDA 原理,对病毒颗粒相关核酸用限制性内切酶酶切后,作非序列依赖性单引物PCR 扩增( sequence -independent single primer amplification ,SISPA) :将抽提获取的DNA或RNA 分别补齐,合成第二链DNA ,或反转录,合成双链cDNA。限制性内切酶酶切后,酶切片段两端连接一种接头,并以与接头同序列的单一寡核苷酸为引物,作PCR 扩增。扩增产物进一步克隆与序列分析。用此法检验HBV 阳性血清和GBV - B 阳性血清样品,结果在相当于106/ ml 个基因组拷贝浓度的50μl样品中,可重复试验检出相应的病毒基因片段。Stang 等〔25〕则在得到双链DNA 或双链cDNA 后加入k - 随机引物,此种引物5′端含有20 个固定序列的核苷酸,3′端则有·318 · 中国预防医学杂志2007 年6 月第8 卷第3 期 Chin Prev Med , June 2007 , Vol18 No13© 1994-2008 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. 核苷酸随机简并序列。与变性模板退火时,6 核苷酸随机简并序列随机地与模板相应序列互补退火,在T4 DNA聚合酶作用下作链延伸。然后在延伸产物中加入k - 随机引物中固定序列部分的20 寡核苷酸作引物,进行PCR 扩增。扩增产物电泳分析、克隆、测序。用此方法检验由实时- PCR 定量,包括病毒颗粒相关核酸及游离核酸在内的病毒基因组拷贝数为109/ ml 的Cox - 3 和MAV - 1 培养物。前者的12 克隆中,9 个克隆插入有肠道病毒的四个不同区域的同源基因片段;而6 个MAV - 1 中分离的克隆内,5 个含有99 % 同源MAV - 1 基因片段。基于病毒颗粒分离纯化、DNase 处理、病毒颗粒相关核酸的非序列依赖性PCR 扩增,获取、鉴定未知病毒的基因片段,尽管灵敏度不够高,但其实验时间较短,步骤相对简单,对于病毒拷贝数高,时间紧急的样品鉴别,是较适宜的一套方法。病毒的种类、结构、特性多种多样,感染病毒后需要检验的样品又各不相同,因此用于发现鉴别未知病毒的核酸序列的技术,也不是固定不变和完全通用的。以上的技术方法各有优缺点和适用范围。而针对扩增获取未知病毒基因组序列片断,这一发现鉴定未知病毒的分子生物学技术的要点或瓶颈,必然还会有新的改进、创新技术出现,将会更快、更灵敏、更简便、更准确的发现鉴别未知病毒。参 考 文 献〔1〕 Drosten C , Gunther S , Preiser W, et al1 Identification of novel corona2virus in patients with severe acute respiratory syndrome1 N Engl J Med ,2003 , 348 : 1967 - 19761〔2〕 ven den Hoogen BG, de Jong JC , Groen J , et al , A newly discoveredhuman pneumovirus isolated from young children with respiratory tractdisease1 Nat Med , 2001 , 7 : 719 - 7241〔3〕 Fouchier RA , Hartwig NG, Bestebroer TM, et al1 A previously unde2scribed coronavirus associated with respiratory disease in human1 ProcNatl Acad Sci U S A , 2004 , 101 : 6212 - 62161〔4〕 Muerhoff AS , Leary TP , Desai SM, et al1 Amplification and subtractionmethods and their application to the discovery at novel human viruses1 JMed Virol , 1997 , 53 : 96 - 1031〔5〕 Lisitsyn N , Lisitsyn N , Wigler M1 Cloning the differences between twocomplex genomes1 Science , 1993 , 259 : 946 - 9511〔6〕 Lamar EE , Palmer E1 Y- encoded1 Species - specific DNA in mice :evidence that the Y chromosome exists in two polymorphic forms in in2bred strains1 Cell , 1984 , 37 : 171 - 1771〔7〕 Wieland I , Bolger G, Asouline G, et al1 A method for differencecloning : geng amplification following subtractive hybridization1 Proc NatlAcad Sci USA , 1990 , 87 : 2720 - 27241〔8〕 Milner JJ , Cecchini E , Doming PD1 A kinetic model for subtractive hy2bridizationg1 Nucleic Acids Res , 1995 , 23 : 176 - 1871〔9〕 Chang Y, Cesarman E , Pessin MS , et al1 Identification of herpesvirus- like DNA sequence in AIDS - Associated Kaposi’s Sarcoma1 Scie2nce , 1994 , 266 : 1865 - 18691〔10〕 Challoner PB , Smith KT , Parker JD , et al1 Plaque - associated expres2sion of human herpesvirus 6 in multiple selerosis1 Proc Natl Acad SciUSA , 1995 , 92 : 7440 - 74441〔11〕 Nishizawa T , Okamoto H , Konishi K, et al1 A novel DNA virus (TTV)associated with elevated transaminase levels in pasttransfusion hepatitisof unknown etiology1 Biochem Biophy Res Commun , 1997 , 24 : 92 -971〔12〕 Simons JN , Pilot - Matios TJ , Leary TP , et al1 Identification of two fla2vivirus - like genomes in the GB hepatitis agent1 Proc Natl Acad SciUSA , 1995 , 92 : 3401 - 34051〔13〕 Endoh D , Cho KO , Tsukamoto K, et al1 Application of representationaldifference analysis to genomic fragments of Mark’s disease virus1 J ClinMicrobiol , 2000 , 38 : 4310 - 43141〔14〕 Hubank M, Schatz DG1 Identifying differences in mRNA - expression byrepresentational difference analysis of cDNA1 Nucleic Acids Res ,1994 , 22 : 5640 - 56481〔15〕 Bowler LD1 Representational difference analysis of cDNA1 Methods MolMed , 2004 , 94 : 49 - 661〔16〕 Chua KB , Wang LF , Lam SK, et al1 Tioman virus , a novel paramyxo2virus isolated fromfruit bats in Malaysia1Virology , 2001 , 283 : 215 -2291〔17〕 Bowden TR , Westenberg M, Wang LF , et al1 Molecular characteriza2tion of Menangle virus , a novel paramyxovirus which infects pigs , frutbats , and humans1 Virology , 2001 , 283 : 358 - 373〔18〕 Endoh D , Mizatanil T , Kirisawa R , et al1 Species - independent detec2tion of RNA virus by representational difference analysis using non - ri2bosomal hexanncleotides for reverse transcription1 Nucleic Acids Res ,2005 , 33 : e651〔19〕 Siebert PD , Chenchik A , Kellogg DE , et al1 An improved PCR methodfor walking in uncloned genomic DNA1 Nucleic Acids Res , 1995 , 23 :1087 - 10881〔20〕 Diatchenko L , Lau YF , Campbell AP1 Suppression subtractive hy2bridization : a method for generating differentially regulated or tissue -specific cDNA probes and libraries1 Proc Natl Acad Sci U S A , 1996 ,93 : 6025 - 60301〔21〕 Hu Y, Hirshfield I1 Rapid approach to identify an unrecognized viral a2gent1 J Virol Methods , 2005 , 127 : 80 - 861〔22〕 Dean FB , Nelson JR , Giesler TL , et al1 Rapid amlification of plasmidand phage DNA using phi 29 DNA polymerase and multiply - primedrolling circle amplificationg1 Genome Res , 2001 , 11 : 1095 - 10991〔23〕 Rector A , Tachezy R , Ranst MV1 A sequence - independent strategyfor detection and cloning of circular DNA virus genomes by using multi2ply primed rolling - circle amplification1 J Virol , 2004 , 78 : 4993 -49981〔24〕 Allander T , Emerson SU , Engle RE , et al1 A virus discovery methodincorporating DNase treatment and its applicationg to the identificationgof two bovine parvovirus species1 Proc Natl Aced Sci USA , 2001 , 98 :11609 - 116141〔25〕 Stang A , Korn K, Wildner O , et al1 Characterization of virus isolates byparticle - associated nucleic acid PCR1 J Clin Microbiol , 2005 , 43 :716 - 7201(收稿日期: 2006 - 05 - 15)中国预防医学杂志2007 年6 月第8 卷第3 期 Chin Prev Med , June 2007 , Vol18 No13 ·319 ·© 1994-2008 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved.

PCR技术是一种体外酶促合成、扩增特定DNA片段的方法。下面是我整理的关于pcr技术论文,希望你能从中得到感悟!

技术的研究进展

摘要 PCR技术是一种体外酶促合成、扩增特定DNA片段的方法。因其高强的特异性和灵敏度以及检测速度快、准确性好等优点,已被广泛地应用于水产、微生物检测等许多领域。该文从PCR技术的原理及应用方面进行了综述,并对其发展做出了展望。

关键词 PCR技术;研究进展;应用

中图分类号 Q819 文献标识码 A 文章编号 1007-5739(2012)10-0047-02

PCR(polymerase chain reaction,PCR)即聚合酶链式反应,它是一种体外酶促合成,扩增特定DNA片段的方法。1985年,美国Karray等学者首创了PCR技术,并由美国Cetus公司开发研制[1]。随着科学技术的发展和突破,PCR技术已在多个领域得到广泛地应用,如微生物检测、兽医学、水产养殖等方面。由于该技术具有较强的灵敏度、准确度和特异性,又能快速进行检测,因而其应用领域也在不断延伸[2-3]。随着PCR技术的不断发展,在常规PCR技术的基础上又衍生出了许多技术,如多重PCR(mutiplex PCR)技术[4]、实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)技术[5]、单分子PCR技术[6]。

1 PCR技术原理

PCR技术是根据待扩增的已知DNA片段序列、人工合成与该DNA 2条链末端互补的2段寡核苷酸引物,在体外将待检DNA序列(模板)在酶促作用下进行扩增。PCR的整个技术过程经若干个循环组成,一个循环包括连续的3个步骤:第1步是高温条件下的DNA模板变性,即模板DNA在93~94 ℃的条件下变性解链;第2步是退火,即人工合成的2个寡核苷酸引物与模板DNA链3’端经降温至55 ℃退火;第3步是延伸,即在4种dNTP底物同时存在的情况下,借助TaqDNA聚合酶的作用,引物链将沿着5’-3’方向延伸与模板互补的新链[7]。经过这个循环后,合成了新链,可将其作为DNA模板继续反应,由此循环进行。循环进程中,扩增产物的量以指数级方式增加,一般单一拷贝的基因循环25~30次,DNA可扩增l00万~200万倍[1]。PCR反应的步骤很简单,但是具体的操作是复杂的,如退火温度的确定、延伸时间的长短以及循环数等。因此,不同的反应体系应该确定适当的反应条件,以避免假阴性或假阳性等情况的产生。

2 PCR技术的分类

在传统PCR技术的基础上,根据人们的需要以及各个领域的应用要求,又衍生出很多种类的PCR技术。新技术在各领域广泛应用并逐渐改进,为进一步的研究提供了基础。

2.1 实时荧光定量PCR技术

1996年,学者经过研究,在传统PCR技术的基础上,首创了实时荧光定量PCR技术,新技术已经应用至医学领域、分子生物学和其他基础研究领域。实时荧光定量PCR技术基于传统技术的优势,还具有实时性、准确性、无污染,实现了自动化操作和多重反应,是PCR技术研究史上从定性到定量的飞跃[8]。

荧光定量PCR技术最大的特点是能将荧光基团加入到PCR反应体系中,借助于荧光信号,累积实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析[9]。实时监测这一特点是常规PCR技术所不具有的,因为其对扩增反应不能进行随时的检测。常规PCR技术的扩增终产物需要在凝胶电泳等条件下才能进行,无法对起始模板进行准确的定量,而荧光定量PCR技术的反应进程可以根据荧光信号的变化做出准确的判断[10-11]。一个PCR循环反应结束之后,定量PCR仪可以收集1个荧光强度信号,荧光信号强度的变化可以反映产物量的变化情况,这样就可以得到1条荧光扩增曲线[12]。荧光信号在指数扩增阶段,PCR产物荧光信号的对数值与起始模板量之间存在线性对应关系,然后进行定量分析[13]。

2.2 多重PCR技术

多重PCR(mutiplex PCR)技术是PCR技术的一种,为同一管中加入多对特异性引物,与PCR管内的多个模板反应,在一个PCR管中同时检测多个目标DNA分子。多重PCR技术可以扩增一个物种的一个片段,也可以同时扩增多个物种的不同片段[14]。

在同一反应体系中,多重PCR技术进行多个位点的特异性扩增时,引物间的配对、引物间的竞争性扩增等会对扩增效果产生重要影响。一方面,如果能选择适宜的反应体系和反应条件,可极大地提高多重PCR的扩增效果[15]。主要包括退火温度、退火及延伸时间、PCR缓冲液成分、dNTP的用量、引物及模板的量等。另一方面,DNA的抽提质量也影响多重PCR扩增效率,如DNA抽提不干净或降解都将影响PCR扩增效果[16]。

2.3 单分子PCR技术(SM-PCR)

单分子PCR技术是在传统PCR技术的基础上发展的,基本循环过程相同,但在反应条件、模板数量、DNA 聚合酶选择、引物设计方面具有不同点。该技术是以少量或单个DNA分子为模板进行的PCR[17]。

单分子PCR技术反应中,DNA 模板浓度极低,这就要求模板有较高的质量。因为这是试验成败的决定性因素。在设计引物时,应该严格控制GC的含量和Tm值,同时尽量避免引物间存在可配对序列。在反应混合物模板数极低的情况下,若引物之间存在少量配对序列,扩增时极易形成二聚体,使反应无法进行,得不到所需要的产物[18]。由于单分子PCR技术反应的变性温度(96~98 ℃)大多比常规PCR技术(94 ℃)略高,因而对DNA 聚合酶热稳定性的要求也更加严格,需要有较好的热稳定性,以防止温度过高而使其失活。其变性时间(5~15 s)、退火时间及延伸时间也短于常规PCR技术[17]。

3 PCR技术的应用

3.1 PCR技术在水产上的应用

基因表达是检测某个基因在不同发育期或不同组织中的表达量变化,或受到某种试验处理过程中的影响而出现表达量变化的情况。有学者应用real-time PCR技术研究碳水化合物含量对翘嘴红鲴糖代谢酶G6Pase、GK以及PEPCK表达量的影响[19-21],研究结果可为翘嘴红鲴饲料配方中的最合适糖含量提供理论依据。孙淑娜等[22]研究叶酸拮抗剂对斑马鱼心脏发育相关基因BMP2b及HAS2表达的影响,表明叶酸拮抗剂对早期胚胎的心脏发育影响较大,可导致斑马鱼心脏发育延迟及心脏形态异常,并下调斑马鱼心脏发育相关基因BMP2b及HAS2的表达,这可能是叶酸生物学活性受抑后导致心脏发育异常的机制之一。Sawyer et al[23]以斑马鱼的未受精卵、胚胎、仔鱼和成鱼为研究材料,采用实时荧光定量PCR技术,检测了P450aromA和P450aromB在不同组织的表达量,表明在各组织中均有2种基因的表达,但表达量显著不同,呈现组织特异性。

3.2 PCR技术在微生物检测上的应用

1990年,Bej et al[24]在利用多重PCR的方法检测了Leg-ionella类菌种和大肠类细菌,其结果是通过点对点方法固定的多聚dT尾捕捉探针和生物素标记的扩增DNA进行杂交来检测的。张志东等检测口蹄疫病毒(FMDV)持续性感染的带毒动物,表明实时荧光定量PCR技术具有快速检测、准确、客观等优势,较优于传统的检测方法[25-26]。Metzger-Boddien et al[27]对PCR-ELISA的方法进行了评价,结果显示,样品中沙门氏菌的检出率可以达到98%。

4 展望

传统PCR技术以及衍生出来的新型PCR技术自面世以来,已被广泛应用到生命科学的各个领域。随着技术方法的不断改进与完善,荧光定量PCR技术将会逐渐完善并广泛应用。多重PCR技术在食品病原微生物、非致病微生物及环境微生物检测中具有重要作用;未来的研究主要集中在去除食品抑制因子干扰、改进样品前处理技术等方面,其次是整合应用多重PCR与其他技术,必将在未来食品微生物检测中有非常好的应用前景。

5 参考文献

[1] 常世敏.PCR在食品微生物检测中的应用[J].邯郸农业高等专科学校学报,2004,21(4):23-25.

[2] 唐永凯,俞菊华,徐跑,等.实时荧光定量PCR技术及其在水产上的应用[J].中国农学通报,2010(21):422-426.

[3] 吴学贵.LPS刺激点带石斑鱼免疫相关基因的克隆与组织表达差异性分析[D].海口:海南大学,2011.

[4] 侯立华,黄新,朱水芳,等.双色荧光多重PCR技术及在禽流感病毒检测中的应用[J].生物技术通报,2010(1):168-172.

[5] 查锡良.生物化学[M].7版.北京:人民卫生出版社,2009:483-485.

[6] 张杰道.生物化学实验技术PCR技术及应用[M].北京:科学出版社,2005:12-18.

[7] 谢海燕.黑线仓鼠LHR部分序列克隆及组织器官的表达差异[D].曲阜:曲阜师范大学,2011.

[8] KUBISTA M,ANDRADE J M,BENGTSSON M,et a1.The real-time pol-ymerase chain reaction[J].MoLecular Aspects of Medicine,2006,27(2-3):95-125.

[9] AGINDOTAN B O,SHIEL P J,BERGER P H.Simultaneous detection of potato viruses,PLRV,PVA,PVX and PVY from dormant potato tubers by TaqMan real-timeRT-PCR[J].J Virol Methods,2007,142(1-2):l-9.

[10] 李丽平.小麦慢锈品种叶片受条锈菌侵入后的木质素合成及调控研究[D].雅安:四川农业大学,2009.

[11] 薛霜,独军政,高闪电,等.实时荧光定量PCR技术研究进展及其在兽医学中的应用[J].中国农学通报,2010(7):11-15.

[12] SCHUBERT J,FOMITCHEVA V,SZTANGRET-WISNIEWSKA J. Dif-ferentiation of Potato virus Y strains using improvedsets of diagnostic-PCR-primers [J].J Virol Methods,2007,140(1-2):66-74.

[13] 袁继红.实时荧光定量PCR技术的实验研究[J].现代农业科技,2010(13):20-22.

[14] 朱善元.生物检测技术PCR及其在兽医微生物检测中的应用[J].黑龙江畜牧兽医,1999(11):21-22.

[15] 黄银花,胡晓湘,李宁,等.影响多重PCR扩增效果的因素[J].遗传,2003,25(1):65-68.

[16] 陈诺,唐善虎,岑璐伽,等.多重PCR技术在食品微生物检测中的应用进展[J].生物技术,2010,37(10):72-75.

[17] 刘连生.常规PCR技术与单分子PCR技术[J].医学信息,2010,23(11):4379-4380.

[18] 顾超颖.汗孔角化病的临床分析,SSH1、ARPC3基因突变检测和表达谱分析[D].上海:复旦大学,2008.

[19] 唐永凯,俞菊华,刘波,等.翘嘴红鲌肝脏G6Pase催化亚基的克隆以及摄食和饲料中碳水化合物对其表达的影响[J].水产学报,2007,31(1):45-53.

[20] 刘波,谢骏,苏永腾,等.高碳水化合物日粮对翘嘴红鲌生长、GK及GK mRNA表达的影响[J].水生生物学报,2008,32(1):47-53.

[21] 俞菊华,戈贤平,唐永凯,等.碳水化合物、脂肪对翘嘴红鲌PEPCK基因表达的影响[J].水产学报,2007,31(3):369-373.

[22] 孙淑娜,桂永浩,宋后燕,等.叶酸拮抗剂甲氨喋呤导致斑马鱼心脏发育异常及BMP2bHAS2表达下调[J].中国当代儿科杂志,2007,9(2):159-163.

[23] SAWYER S J,GERSTNER K A,CALLARD G.Real-time PCR analysis of cytochrome P450 aromatase expression in zebrafish:gene specific tissue disyribution,sex differences,developmental programming,and estrogen regulation[J].General and comparative endocrinology,2006,147(2):108-117.

[24] BEJ A K,MAHBUBANI M H,MILLER R,et a1.Multiplex PCR amplif-ication and immobilized capture probes for detection of bacterial patho-gens and indicators in water[J].Mol Cell Probes,1990,4(5):353-365.

[25] ZHANG Z D,ALEXANDERSEN S.Detection of carrier cattle and sheep persistently infected with foot-and-mouth disease virus by a rapid real-time RT-PCR assay[J].Journal of Virological Methods,2003,111(2):95-100.

[26] ZHANG Z D,BASHIRUDDIN J B.Quantitative analysis of foot-and-mouth disease virus RNA duration in tissues of experimentally infected pigs[J].TheVeterinary Journal,2009,180(1):130-132.

[27] METZGER-BODDIEN C,BOSTEL A,KEHLE J.Salmonella sp.PCR-ELISA for analysis of food samples[J].J Food Prot,2004,67(8):1585-1590.

点击下页还有更多>>>关于pcr技术论文

核酸检测的原始论文

因为那个时候刚刚开始爆发,什么时候都还没有研制出来呢,大家对这个病刚开始是一无所知的,后来才开始提取病毒,然后才进行研究,才会有做核算这种的,刚开始都是做ct,后来发现做ct查不出来,然后才发明了核酸

你好,只要是您所在地方,不是高风险地区,到了北京之后,是只要提供48小时核酸检测证明和健康码行程码就可以了

您好,如果您从唐山去了北京,如果没有去中高风险地区,就不用隔离。如果从北京的中高风险地区返回,则需要隔离。在您返回北京之前,认真查看唐山的疫情防控要求,提前做好准备。

1.对密接人员实施“7+3”管理,第1、2、3、5、7、10天各开展一次核酸检测。 2.对次密接人员,实施7天居家隔离医学观察,在第1、4、7天各一次核酸检测。 3.入境人员在第一入境地实施“7天集中隔离+3天居家健康监测”,在第1、2、3、5、7、10天各开展一次核酸检测。

4.对7天内有高风险区旅居史人员,采取7天集中隔离,第1、2、3、5和7天核酸检测。 5.对7天内有中风险区旅居史人员,采取7天居家隔离医学观察,第1、4和7天核酸检测。 6.对7天内有低风险区旅居史人员入唐后,要提前向目的地社区(村)、单位或所住宾馆报告,纳入社区管理,进行健康监测,实施“三天两检”核酸检测措施。

3月16日开始北京就不需要核酸检测证明,更不需要隔离

核酸检测的数学小论文

用数学的眼光看世界、用数学的眼光看医学,数学无处不在,核酸检测也不例外!今天我们要跟大家讨论的话题是:从核酸检测的“混检”谈起。         大家知道:核酸检测是尽早发现新冠病毒感染的最有效的途径,在防疫抗疫中具有不可或缺的重要作用,因而,如何及时、准确、高效开展核酸检测就成了我们必须高度关注的重大问题。从数学的角度来看,就是一个实验设计的最优化问题,也就是说:要在最短的时间内、以最少的检测量、花费最少的成本、检测尽可能多的人群。         目前通行的核酸检测方法,有“单检”与“混检”两种:什么是“单检”呢?就是将每个人的采集样本分别放入每个人的专用试管,进行“一对一”的检测,检测的结果谁阴、谁阳、谁是病毒携带者,精准无误;但是,如果需要检测的人数比较多,比如几十万、上百万甚至上千万,“单检”的工作量太大,成本太高,很难及时完成检测工作。         在实际的检测中,经常面临需要检测的人数成千上万甚至更多的情况,只靠“单检”难以胜任。这时候,就需要“混检”,也就是将几个人的采集样本混合后放入同一试管,进行“多对一”的检测,如果检测结果为阴性,那么这几个人就全部通过;如果检测结果为阳性,说明这几人当中有病毒携带者,就需要对这几个人再做进一步检测。         假设某个疫情的地区,有100个“密切接触者”需要核酸检测,已经采集了这100人的核酸样本,如果采用“单检”,需要检测100次;而中低风险地区,病毒的感染率不足1%(也就是说,平均每100个人当中,至多只有1人可能携带新冠病毒),为了检测出这100个人当中的1个病毒携带者,我们花费了成百倍的时间与成本;如果采用“混检”,就可以提高效率、缩短时间、降低成本。         目前国内通行的“1:10均匀混检”是这样的:先把这100人的采集样本依次编号、并按每10人一组均分成10组,1至10号为第一组、11至20号为第二组、……、91至100号为第十组。         然后,对每一组中的10个样本,都分别进行一次“混检”(也就是把10个人的样本混合在一起,作一次检验);哪一组“混检”结果为阴性,哪一组就一次性全部通过;哪一组“混检”结果为阳性,说明这组10人当中有病毒携带者,就需要对这10个人再分别做一次“单检”。         最乐观的情况是:十个组的“混检”结果都是阴性,100个人的检测全部通过,只花了“单检”十分之一的时间与成本就完成检测工作。         最有可能发生的情况是:十个组的“混检”结果出现了一个组阳性(假设是第二组),其余各组检测结果都是阴性,除第二组10个人之外,其余90个人全部通过检测。         然后,再对“混检”呈阳性的第二组进行一对一的“单检”,就可以精准找出病毒携带者。于是,对这100人的样本,一共检测20次,只花费“单检”五分之一的时间与成本,就完成了同样的检测。换句话说,最大的可能是:“混检”只花“单检”五分之一的时间与成本,就完成同样的检测。         不知道大家是否还记得我们在《晓星说数学:小白鼠试毒问题》中曾经介绍过“实验设计最优化”的一种“二分法”?         从理论上说,目前通行的“均匀混检”,还可以用“二分法”进一步改进为“二分法混检”;采用“二分法混检”最可能的情况是:只花费“单检”七分之一的时间与成本,就完成同样数量的检测。        “二分法混检”的关键,是一步步地将待检测的样本尽可能“对半”分组:仍然假设待检测的样本为100人,将这100人依次编号,并“对半”分组,1至50号为A1组,51至100号为A2组。         然后,A1与A2两组分别进行“混检”……        最理想的情况是:A1与A2两组“混检”结果均为阴性,100人全部通过检测;仅两次就完成了检测工作。         最可能发生的情况是:A1与A2两组“混检”的结果,一组为阴性而另一组为阳性,假设阳性为A1组,A1组还需要继续用“二分法混检”;阴性为A2组,A2组50人全部通过检测。         A1组的“二分法混检”,仍然再对半分组,1至25号为B1组,26至50号为B2组。         然后,B1与B2两组又分别进行“混检”:         上一步检测已知A1组呈阳性,所以这一步B1与B2两组“混检”的结果,不可能出现两组皆阴,最大的可能仍是一阴一阳,假设阳性为B1组,B1组还需要继续用“二分法混检”;而阴性为B2组,B2组25人全部通过检测。         继续对B1组用“二分法混检”,将B1组分成两个尽可能接近的组,1至13号为C1组,14至25号为C2组,对C1与C2又分别进行“混检”,最大的可能仍是一阴一阳,假设阳性为C1组,C1组还需要继续用“二分法混检”;而阴性为C2组,C2组12人全部通过检测。          继续对C1组用“二分法混检”,将C1组分成两个尽可能接近的组,1至7号为D1组,8至13号为D2组,对D1与D2两组又分别进行“混检”,最大的可能仍是一阴一阳,假设阳性为D1组,D1组还需要继续用“二分法混检”;而阴性为D2组,D2组6人全部通过检测。         继续对D1组用“二分法混检”,将D1组分成两个尽可能接近的组,1至4号为E1组,5至7号为E2组,对E1与E2两组又分别进行“混检”,最大的可能仍是一阴一阳,假设阳性为E1组,E1组还需要继续用“二分法混检”;而阴性为E2组,E2组3人全部通过检测。         继续对E1组用“二分法混检”,将E1组中4人均分成两组,1、2两号为F1组,3、4两号为F2组,对F1与F2又分别进行“混检”,最大的可能仍是一阴一阳,假设阳性为F1组,F1组只剩两人,需要继续“单检”;而阴性为F2组, F2组两人全部通过检测。         呈阳性的F1组只剩两人,继续检测只能“单检”,检测结果最大的可能仍是一阴一阳。无论如何,通过六次“二分法混检”与两次“单检”,一共14次检测,我们完成了100人的检测,所花时间与成本仅仅是“单检”的七分之一。         其实,以上的检测方法还可以改进,不需要六次“二分法混检”再来两次“单检”,而是在第五次“二分法混检”之后,紧接着就来四次“单检”,一共也是14次检测,就完成100人的检测。         以上我们所讨论的“1:10均匀混检”与“二分法混检”,有个重要的前提,那就是:已知病毒的感染率不足1%;如果疫情加重,风险等级提高,病毒感染率达到了5%,又应该如何进行核酸检测呢?。限于篇幅,不再赘述,仅留个问题供大家思考:        仍然是100人的采集样本的检测,假设阳性率为5%(即每100人当中最多有5个病毒携带者),现在按“1:5均匀混检”,也就是按每组5个人把这100人均分为20组,请问:应该如何安排“混检”与“单检”,最少需要检测几次?最多需要检测几次?         提示:只需要考虑两种极端情况:(1)5个阳性样本恰好被分在了同一个组;(2)5个阳性样本恰好被分在了五个不同的组。         用数学的眼光看世界、用数学的眼光看医学,数学无处不在,核酸检测也不例外!在核酸检测这样的重大实际问题中,我们再次看到了数学方法的强大威力!

用适当的单位 填空。疫情来了,收到通知全体人员都要进行核酸检测,六六老师迈着一步50(    )的脚步赶到离家800(    )的检测点,发现排队的队伍有100(    )那么长,而且每个人之间都要隔着1(    )!  轮到我了,身高1(    )60(    )的白衣天使拿出差不多10(    )长的小棒,插入我喉咙下大约6(    )深,检测结束,医护人员奖给了我价值5(    )的棒棒糖。 虽然检测有点痛苦,但为了生命安全,还是要检测的!听有些人说,如果去医院检测,一次要花30(  )呢!排队问题: 66老师,排队去做核酸检测。发现我的前面有4人。后面有8人,问整个队伍一共有几人?66老师第二次排队去做核酸检测,发现前面有4人,后面的人数是我前面的3倍,问整个队伍一共有多少人?66老师第三次排队去做核酸检测。发现后面有5人,前面的人数是后面的2倍。问这只队伍一共有多少人?疫情来了,白衣小队组织去救援,这只小队有9组,每个小队有8人。问,这次救援小队一共有多少人?分到石柱镇的白衣天使,男生有8人,女生的人数是男生的3倍,问:分到石柱镇的白衣天使一共有多少人?医护人员搭了4个帐篷,每个帐篷需要5名白衣天使的协助。问有几名白衣天使在帐篷下工作?一辆大巴车能坐30名乘客。大巴车能乘坐的人数是小面包车的5倍,问:两辆大巴车,一共能坐多少人?六六老师准备坐大巴车去酒店隔离,一辆大巴车能坐30名乘客。排队时,老师发现我前面有8人,后面有19人,问:这辆大巴车 够坐吗? 六六老师在酒店隔离,酒店的一桶泡面要8元,买9桶,六六老师带了100元, 够吗?  如果有钱剩下,买4元一瓶的牛奶,能买几瓶? 如果六六老师45元买了9桶泡面,妈妈,36元买了6桶泡面。问:谁买的泡面便宜?月刘老师拿了20元 去买3元一根的火腿肠。买了6根,应找回多少钱?妈妈买了三个面包和一箱牛奶,一个面包要5元,一箱牛奶要45元,还剩下40元。问:妈妈一共带了多少元钱?到了酒店,66老师看一本36页的故事书。如果每天看6页,几天看完?如果打算4天看完,平均每天看几页?66老师每个星期工作5天,每天工作6小时。问:一个星期工作多少时?如果66老师每个星期工作5天,一共工作了40小时,问:平均每天 工作多少小时?

  • 索引序列
  • 核酸检测的论文方向
  • 核酸检测方法的分析论文
  • pcr检测核酸论文
  • 核酸检测的原始论文
  • 核酸检测的数学小论文
  • 返回顶部