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可以去搜搜红楼丫鬟 从这一方面着手
参考文献？不明白。以下是形象特点晴雯，贾宝玉身边的四个贴身大丫头之一。直爽倔强，嫉恶如仇，对爱情、对人生都有自己的独立见解。她胸怀坦荡，口齿尖利，从不向主子们献媚。宝玉有时发少爷脾气，她敢于反唇相讥，绝不一味巴结讨好，由此而赢得了宝玉对她的爱慕和尊重。她曾公开表示，宁可冲撞了王夫人，也不愿无辜受气。抄检大观园时，她不顾一切地大发脾气，把为虎作伥的王善保家的痛斥一顿。她那敢怒敢骂、锋芒毕露的反抗行为，自然为统治者所不容。为此，蒙受许多恶毒的诽谤和粗暴的打击，气得身患重病，连着几天水米不进，被人硬从炕上拖了出去。在无人过问的凄凉境况中，她怀着冤屈和仇恨，悲愤地离开了人世。死后贾宝玉特地为她撰写《芙蓉女儿诔》。晴雯是一个光彩照人的具有反抗性格的女奴形象。
论林黛玉的矜持及其文化意蕴 摘要：林黛玉在《红楼梦》描绘的众多女性形象中最具时代的典型意义，她作为封建末世的古典女性，虽有着一定的追求自由的叛逆意识，但同时也潜藏着封建礼教的阴影，这种阴影在“为爱而生，为爱而死”的林黛玉身上体现出来的是矜持。她的矜持具有一种丰富而深刻的文化艺术内涵，它是美学的、伦理道德的、历史的、心理的。关键词：《红楼梦》；林黛玉；矜持；文化艺术内涵 曹雪芹笔下的林黛玉是一个说不尽的人物形象，她生活在封建末世，是一个才貌兼备的古典美女，她为恋爱而生，为恋爱而死，孤傲任性等等，这些都是历来评论家们对她的艺术概括。然而在这个具有时代典型意义的艺术形象身上，似乎还潜藏着一股暗流，那就是封建礼教逼迫而成的淑女风度，这种风度便是林黛玉的矜持。本文将从各种角度分析林黛玉在爱情等方面所表现出来的矜持，揭示其丰富而又深刻的具有时代性的文化艺术内涵。 一林黛玉是西方灵河岸上三生石畔一棵绛珠草的化身，她具有天然的灵性，而赤霞宫神瑛侍者用甘露对她的灌溉，使她的一生饱含爱的诗情。她为爱而生，却又生在一个黑暗的时代，在无法选择的社会和家庭环境里，她经历了一场爱情劫难之后，带着她未了的爱而魂归离恨天。正如蒋和森先生所说：“生命对于她，不是一首充满诗情的恋歌，就是一场充满眼泪的磨难。在这之间，没有其他任何转身的空隙。”[1]爱情，是林黛玉生活中唯一可望见的光芒，甚至成了她生命的全部意义。她与贾宝玉同气相求，互为知己。青梅竹马的贾宝玉对林黛玉一片真情，他把林黛玉的喜怒哀乐、忧愁病痛放在心上，对她在意下心，呵护唯谨。他也是真正关心和了解林黛玉的人，他不仅知疼知热，护短争长，还深知黛玉的心思，懂得她诗中、话中甚至形体语言中包含的深义，他是黛玉的知心、知己和知音。所谓“万两黄金容易得，知心一个也难求。”但黛玉却并未因此而真正幸福，她不得不在自由的恋爱中诚惶诚恐，坚守着一条心理防线，直到她生命结束。因此，在恋爱中，不管是初恋阶段还是热恋阶段，她总是不由自主地流露出她的矜持。文本有关于宝黛爱情的情节中就有许多例子，每个例子都蕴含着作者别有用心的深意，是人物在各个生活场面展现出矜持的实证。第一，宝黛共读《西厢记》。文中描写，宝玉笑道：“我就是个‘多愁多病’的身，你就是那‘倾国倾城’的貌。”林黛玉听了，不觉带腮连耳通红，登时直竖起两道似蹙非蹙的眉，瞪了一双似睁非睁的眼，微腮带怒，薄面含嗔，指宝玉道：“你这该死的胡说！好好儿的把这淫词艳曲弄了来，说这些混话欺负我。我告诉舅舅舅母去。”这里，曹雪芹的才子之笔用了极精当的词语把一个贵族少女那种娇羞嗔怒的神态语言刻画得入木三分，这些笔墨并不是白费的，曹雪芹的妙笔是要展示林黛玉矜持而动人的一面。第二，凤姐打趣，宝玉失态。在二十五回有这样的描写，凤姐对黛玉笑道：“你既吃了我们家的茶，怎么还不给我们家作媳妇儿？”众人都大笑起来。黛玉涨红了脸，回过头去,一声儿不言语。这是一处。另一处是，“这里宝玉拉住黛玉的手，只是嘻嘻的笑，又不说话。黛玉不觉又红了脸，挣着要走。”这种描写看似细微却不难看出曹雪芹的苦心，林黛玉的形象也正是在这种点点滴滴的描写中丰满起来的，这是作者苦心经营的痕迹，因为女孩子的矜持是一种很细腻的感情流露，她的表现极其细微含蓄，不细心的人是很难描写出这种心理变化的。在此我们不得不佩服曹雪芹的细腻之笔。第三，探黛玉，比鸳鸯。二十六回，宝玉去探黛玉，黛玉在午休中说了一句“每日家情思睡昏昏”，恰好被宝玉听到了，“林黛玉自觉忘情，不觉红了脸，拿袖子遮了脸，翻身向里装睡着了。”接下来便是宝玉的言语造次了。他笑道：“好丫头，‘若共你多情小姐同鸳帐，怎舍得叠被铺床？”林黛玉登时撂下脸来，说道：“你说什么？”宝玉笑道：“我何尝说什么？”黛玉便哭道：“如今新兴的，外头听了村话来，也说给我听；看了混帐书，也来拿我取笑儿。我成了替爷们解闷的了。”一面哭着，一面下床来往外就走。在这个例子中，也许很多人都会替宝玉感到无辜，可以讲，他的言辞是一种进入“忘我”境界的自然流露，他那么爱黛玉，疼都来不及，怎么会有取笑之心呢？这只不过是黛玉自尊而害羞心理在作怪，使她一次次为维护其淑女的形象，而表现出来的矜持。宝玉的意思，黛玉是愿意接受的；她不能接受的是宝玉的表达方式。一个大家闺秀，不能随便让一个异性开玩笑，尤其不能让一个异性用轻佻的口吻称之为配偶。传统强调明媒正娶，所谓明媒正娶，即旨在以仪式的庄重性提高女性的身份和婚姻的严肃性。可以看出黛玉对身份是很看重的。第四，吵架过后有关宝黛的各个场面。在宝黛最大的一次吵架之后，宝玉去潇湘馆找黛玉，两个人在那里流泪时，因宝玉忘了带手帕，黛玉摔了手帕给他，宝玉见她摔了帕子来，忙接住拭了泪，又挨近前些，伸手拉了黛玉一只手，笑道：“我的五脏都揉碎了，你还只是哭。走罢，我同你往老太太那里去罢。”黛玉将手一摔道：“谁同你拉拉扯扯的。一天大似一天了，还是这么涎皮赖脸的，连个道理也不知道。”这一个例子最能证明黛玉的矜持，本来两个人和好了，黛玉摔手帕给他，这本是一个很有深意的情人之间的爱的表示，而宝玉拉她的手之后，接下来应该是更进一步的亲昵，但黛玉却来个一百八十度的转弯，骂宝玉涎皮赖脸的不懂道理，其实她这里的“道理”就是封建礼教的伦理道德。可以说，这是黛玉第一次采取了自觉意识的语言和行为来维护自己矜持的淑女形象。她的矜持随着她年龄的增长也有个成长过程，长大了就没有小时那种亲密，这是女孩自觉意识中集体无意识的内化。同时他们的爱情也渐趋成熟，黛玉的矜持也表明她越来越矛盾和痛苦。正像王昆仑所讲：“越当爱情需要发展的时候，才会意识到封建礼教束缚的严紧，因此使这姑娘表现出爱悦的反面。……宝黛之间开始了内心与行迹两方相矛盾的痛苦了。”[2]第三十二回，黛玉听到宝玉在人前说：“林妹妹不说这样混帐话，若说这话，我也和他生分了。”黛玉听了这话，不觉又喜又惊，又悲又叹。这时她所惊者乃宝玉在人前称扬于她，其亲热厚密，竟不避嫌疑。再有就是宝玉一面说，一面禁不住抬起手来替她拭泪。黛玉忙向后退了几步，说道：“你又要死了，这么动手动脚的！”但她后来又因自己的话而后悔，看到宝玉急得一脸汗，也近前伸手替他拭面上的汗。这是何等的矛盾！第三十四回，宝玉被打，黛玉去看他时，知道凤姐来了，连忙立起身就要走，她怕被看到她因为哭泣而肿得像桃儿一样的眼睛，怕别人取笑她。第四十五回，黛玉因为自己说了“戴上那个，成了画儿上画的和戏上扮的渔婆儿了”这句话的未忖度而后悔，羞的脸飞红。等等这些例子，无一不在说明黛玉内心深处的那一方不可侵犯的领土，那是封建社会里一般女子都有的道德意念，林黛玉也有，在这一方土地上她用自己的尊严搭建起一座城堡，里面就住着她的矜持。综上所有的例子，可以看到黛玉在自觉或不自觉中流露出来的矜持，不是脸红就是生气，不是着急跺脚就是流泪。然而这些无意识的动作表情只能说明林黛玉的纯真直率。她叛逆，但她也受到封建礼教的约束，她也是个大家闺秀，在她的骨子里这种烙印是去不掉的，只是她比其他女子表现得较为自然而耐人寻味而已。这是曹雪芹的高明之处。他塑造了一个更完美的古典美女，让她更真实地体现时代的内容。用红学家的话来概括为：“这一艺术形象为什么这样深入人心，也许，我们最先想到的是爱情，悲剧的爱情。”“林黛玉所以能打动人们，因为她是一个黑暗世界里的叛逆者，她体现着那一时代妇女们的某些希望和痛苦。”[3]林黛玉在爱情中所表现出来的矜持，对于活在那个时代的她来说是必要的，而且是女性美的体现，但林黛玉的这种美却是在矛盾中体现的，她敢于冲破一些禁忌和宝玉自由恋爱，又不由自主地流露出她的矜持，确实令人心动而怜爱。她的这种矜持给她增添了许多女性阴柔美的韵味。小说中的其他女性也有其矜持，例如宝钗，但她的矜持是对封建礼教的绝对遵从，是与封建势力水乳交融的一个淑女形象，她总体上端庄稳重，却没有少女纯真的性情，像封建社会铸造出来的木偶一样，很骄矜，造作。林黛玉总体上却是天然去雕琢的纯真美，在她可爱的叛逆中时而无意识地表露出她的矜持，这种矜持是在矛盾中产生的，那些例子证明，她在渴望宝玉的表白与害怕中挣扎，种种矜持是她沉重的精神枷锁的无意识体现。尽管说她的矜持是必要的，但也使她在爱情中失去了一些机会，也是一种悲剧。这也是王昆仑先生所说的宝黛恋爱的深刻和特殊之处，“一方面爱的火焰非常炽烈，一方面爱的情绪又无法交流。”“在特殊环境的规定之下，他们的爱情只能是严石重压下的激流，浓云包围中的暗月；具体说，他们只能有无声的渴望，过敏的猜疑和浪费的争吵，而不能有现代人的明朗通畅。”[4]这就是那个时代必要的矜持。在爱情中，林黛玉是矜持到底的，她最后毅然地绝粒，以求速死来对那个阴冷而潮湿的社会作最高形式的抗议，从另一种意义上讲，这也是她最矜持的一种抗议。当然，作为一个复杂的人物形象，黛玉在与宝玉的接触中也有很多不避嫌的地方，像第十九回中就写到有一天黛玉自在床上歇午觉，宝玉将黛玉唤醒，和黛玉歪着说话儿，乃至宝玉将两手呵了两口，便伸手向黛玉膈肢窝内两肋下乱挠。在这个例子中，他们的关系还只是处于朦胧中的初恋阶段，他们这种亲密是一种自由活泼的接触。他们自小就被贾母安排住在一起，青梅竹马的感情自然而然地使他们自小与别人不同，像第二十七回宝钗的想法所暗示的那样：“宝玉和黛玉是从小儿一处长大的，他兄妹间多有不避嫌疑之处，嘲笑无忌，喜怒无常。”在长辈们的眼里，那时的他们只不过是两小无猜的兄妹，他们并没有拿着男女授受不亲的眼光来看待他们的亲密行为，基于此，宝黛之间自然就有较多的自由恋爱空间，也就有了较多的不避嫌之处。然而，如上文所述，黛玉的矜持是有个成长过程的，当她越接近当时一般女子的结婚年龄时，她的矜持就日益凸现了，上述例子已证明。但如第五十四回中写到的这种例子，即贾母命宝玉为姐妹们斟酒并要求他们都要饮干，而宝玉至黛玉前，“偏他不饮，拿起杯来，放在宝玉唇上边，宝玉一气饮干。”黛玉这一不避嫌的举措应是她性格中任性反抗的一面，这一面我们并未否认，但也并不能因此而否认她骨子里尚存的矜持。若深入体味，这应是她与宝玉之间一个默契的地方，是一种情不自禁的真情流露，只能说明他们的情意之深。二从传统文化的审美艺术角度来看，以矜持端庄、温文尔雅为特征的女性美观念是明末清初小说戏曲家塑造理想女性形象时的自觉意识。到曹雪芹的笔下，尽管有所突破，但还不彻底，因此林黛玉的矜持是曹雪芹在塑造时抹不去的传统女性美观念意识驱动下的一个投影。从美学上来分析，这个投影是优美而可贵的，不仅是一种神韵美，也是一种情态美。但不管是文化层面还是美学层面，这两个层面都是相联系的，因为明清小说戏曲中的女性形象展示的多方面的美学内蕴与中国传统女性文化对女性德、容、言、功的要求密不可分。作为小说家，其创作心理必然带有时代性，曹雪芹生活在清代，清代许多积淀下来的文化氛围难免会影响他的思想，进而影响他所创作的人物。就他对女性美观念这一思想意识而言，发展到清代，在中国传统女性文化的影响下，必然带有其时代的审美准则。综观中国传统女性文化，历史上开始对女性行为规范，可以追溯到周代。周代有关女性行为规范的规定，所贯穿的思想：一是男女有别，一是男尊女卑。在先秦诸子的著述中，就包含着许多有关女性行为规范的内容。像孟子对“不待父母之命，媒妁之言，钻穴隙相窥，逾墙相从”的行为提出了尖锐的批评。他赞同男女有别，认为“男女授受不亲”，而对某些不得不“相授”的行为，则提出了“礼”与“权”的行为准则。像这类例子的著述还有很多，总之他们对待女性的态度基本上是轻视的、贬低的。秦汉时代，国家开始以法令的形式推行礼教。就对女性行为的规范而言，强化了女性的“贞”的意识。汉代开始就出现了专门的女教书，这就是班昭的《女诫》和刘向的《列女传》。在这些传统的集体意识的熏染下，随着社会对女性“德行”的关注，特别是女教书的流播，明清时代逐渐形成了女性美的另一传统，即注重品德修养，强调内在气质与外在举止相统一，以端庄、文雅、谦和、含蓄为外在特征，以深切地体现出封建社会的道德伦理规范为内在特征的女性美传统。这种女性美的标准渐渐地就演绎为一种固定的模式，以致对中国人的审美意识、女性观念都产生了深刻影响。曹雪芹毫无例外地也以这一模式去构造他的人物形象，像宝钗、李纨，她们都是端庄谦和的典型，而黛玉，则是作者力图突破固有的审美模式但有所保留的叛逆女性，事实已证明黛玉也是那一时代的一个淑女，是一个独特的古典淑女，前面大量的例子已经证明林黛玉她矜持含蓄的一面。曹雪芹保留了这一面必要而能体现女性优美的旗帜。黛玉的美正如一评论所言：“她全然是浸透着中国优秀古典文学和精神传统的优美形象，是被中华民族的历史杰出诗人所熏陶出来的有着浓郁诗人气质的少女，是一个相当诗化了的清气逼人的人物，有着一种说不出的神韵美，有着惊世骇俗的独特风采。”“这是一个接近完美的人物，显示了一种综合美，既不缺乏女子所特有的温柔，缠绵，更有着一般女子所难具有的某些似乎只属于男子的可贵品质。”[5] 另外，林黛玉在爱情中的娇嗔矜持，实际上也是对宝玉爱极了的表现，是“情重愈斟情”，是“求全之毁”。她的平等观念使她决不容许宝玉不专情于她，而作为一个贵族小姐，她又不敢正面表白爱情，所以只得以或哭或恼的方式去进行试探，同时发泄自己的不满。这正好表现了女子所特有的情态美，正是《脂砚斋重评石头记》中第八回回前所评点：“幻情浓处故多嗔，岂独颦儿爱妒人”。西方美学重视空间感，中国美学则重视生命感，表现在东方艺术非常着重“灵”而排斥“肉”的诱惑，中国艺术不管其内容所反映是什么，都有一个“灵”在跳跃，中国人对人的评价，向来注重的是气质、风度、人格、教养等。林黛玉的矜持正体现着一种教养和人格美，车尔尼雪夫斯基曾说：“人格美是我们的感觉能领悟的世界中的最高的美。”[6]林黛玉在人格上的尊严使她一心想着宝玉，却又不明说，也不许宝玉挑明，在那里一味相思，埋怨伤心，生病。这即是其内在气质与外在特征的糅合体现。可以说，人品的外表神态和内在素质的一致，是曹雪芹在《红楼梦》中塑造黛玉形象的美学准则。三《红楼梦》写了宝黛爱情，但不仅仅是为了歌颂他们的爱情，为的是写使他们爱情一波三折的背后东西，曹雪芹刻画林黛玉的矜持，不仅仅是为了表现其古典含蓄美，为的也是写使她矜持背后的社会内容。曹雪芹结合清朝封建末世的时代特征来塑造贵族少女林黛玉的形象是反映现实的。林黛玉首先呈现在我们面前的，是一个具有人的复杂性的活生生的形象，她是一个富有社会内容的活人，反映着十八世纪中国封建社会的历史风貌，因此这个人物形象远大于思想，是一个典型性很高的典型环境中的典型人物，而不是缺乏真实性的单一的公式化概念化的人物。林黛玉之所以矜持，用蒋和森的话说：“这一方面是由于这个少女始终没有脱去金闺小姐的阶级本性，同时又是由于在她的身上堆积着太厚的历史层岩。”[7]那是怎样的一种“历史层岩”呢？正像宝玉的“多情”一样，黛玉的“矜持”具有极其丰富、极其深刻的社会内涵，是这两个伟大的艺术典型最动人之处和文本的精粹所在。《红楼梦》孕育和诞生的年代，正是清王朝号称极盛的康、雍、乾时期，是封建中国最后一度的回光返照。表面上歌舞升平，政局稳定，而骨子里却充溢着沉积已久的历史苦闷和难以界说的种种骚动。古老的封建中国在政治伦理中心和宗法小农经济的控制下，已绵延了两千年，时日既久，生机渐衰，为在封闭的旧壳内谋求稳定的局面，无数的士人怀着“补天”的理想走完了艰难的一生：程颢、程熙、朱熹、方孝孺、张居正、黄道周……历史发展的悲剧内涵令人沉思。而明代中叶带有异质倾向的局部商品经济和个性自由的呐喊，随着明末的动荡和清兵入关，亦已萎缩成心理的潜流。于是，伴随着“康乾盛世”的到来，探索者陷入迷茫之中，即使有个别敏锐的士子感悟到“天”已残破难补，但却无法从历史发展的理论高度解释盛世内衰的具体内涵，无法跳出或回归、或虚无、或放纵这古老中国晚期探求者的三界五常。文学上，经过明中叶感情的高扬，易代之际发生了变化，变得历史反省的意味很浓：深沉、冷静而又感伤苦涩。《桃花扇》、《长生殿》、纳兰词、《聊斋志异》、《儒林外史》、《红楼梦》……风雨凄凉、人世沧桑的喟叹映现出一个阶级层共同的时代感受，那正是近于绝望的、飘零无根的先进知识分子的心灵悲音。①这是沉郁的历史大背景。林黛玉正是在这个大背景之下诞生的，在一定程度上，她寄托着文人士子的情怀，而就她的矜持这一点来讲，不难想象这是一个人在追求个性自由中不定时的窒息。难以摆脱的大背景是造成这种窒息的闷气。在文化系统中，伦理道德是对社会生活秩序和个体生命秩序的深层设计。于是林黛玉在追求自己的爱情时内心总存在着一股阻力，使她做出一些并不希望出现而又不自觉要出现的矜持，这就是伦理道德对个性生命序的深层设计。爱情，在那个时代，就意味着对整个社会秩序的严重叛乱。封建统治者所“恶”的并不是淫乱，而是正当的爱情。因为如果容许爱情自由，势必打破男尊女卑、一夫多妻、宗法制度等一系列封建秩序，而且为封建专制者最禁忌的人权也将势必通过爱情自由、婚姻自主而得到苏醒。伦理道德往往是和历史相结合的，历史是一个发展的过程，它包含社会生活方方面面的问题，所有出现的深刻问题都会形成一种历史气质，历史心理。封建社会的伦理道德在历史的演变下形成的气质同样会强加于每个人，进而内化为人们的自觉意识。例如封建社会强加于人，进而内化为当时女性自觉意识的“淑女”气质。所谓“封建淑女”，是一个较为宽泛的概念，很难有严格的界定，即使从《诗经?关雎》“窈窕淑女，君子好逑”算起，在中国几千年历史长河中，它的内涵也经历了复杂的变化。在封建道德的辞典里，满足“三从四德”的要求，符合“德言工容”的标准，在“才”与“德”的关系中，又遵循“女子无才便是德”的原则，这样的女子，是大体可以称作“封建淑女”的。虽然明清时代的一些有识之士，如李贽、颜元、汪中、袁枚等都曾就妇女的“节”、“礼”、“学”、“见”等问题提出过自己的见解，但整个社会的总体看法并未能因之改变。②黛玉身上也无疑保留了“封建淑女”的部分气质特点，但又基于个人修养和所处环境的不同，表现出鲜明的个人特点和时代风尚，她是一个“淑女的理想化”人物形象。黛玉渴望和追求心中“美好”的真谛、纯真的爱情，却受到封建传统的无形压抑，以及封建家族的重重阻挠，在无限凄苦中魂归离恨天。如果说《红楼梦》产生的年代是导致黛玉矜持一面的大背景，那么说贾府环境则是不可忽略的具体背景。大背景笼罩着整个社会，具体的环境则是大背景的现实体现。贾府是“钟鸣鼎食之家，翰墨诗书之族”，实质上是封建社会的缩影。因此，贾府自有一定之规，即“凭他有什么刁钻古怪的毛病，见了外人，还是要行出正经礼教来的”，“若一味地只管没里没外，不与大人争光，凭他生得怎样，也是该打死的”。在讲究“横竖礼体不错”的贾府，面对这条绝不含糊的硬指标，孙辈的外来客林黛玉更无特殊化的任何理由。她来到贾府之后，且不说集体无意识的驱动和特定环境的暗示，单就客观条件看，贾府也并未对她放任自流。抵达当晚，贾府就配齐了整套侍从班子，其中包括“凡饮食、言语、行步、礼节皆教之”的四位教引嬷嬷。此外，长辈平辈甚至丫环也不时指点。而大观园看似众姐妹自由的天地，但它始终是在贾府的围墙之内的，置身其中的女儿们也是脱不开封建礼教的桎梏的，它未尝不可以被看作是拘役女儿们、使她们行动不得自由活动的牢笼，就如同龄官对提着笼中雀的贾蔷说的：“你们家把好好的人弄了来，关在这牢坑里学这个牢什子还不算，你这会子又弄个雀儿来，也偏生干这个！”在大观园中，林黛玉无疑是最具自我意识、最具独立个性的女性形象。但她在面对现实的时候，所表现出来的孤傲、反抗和叛逆，其实也是颇为有限的，即使她借以嘲笑、挖苦他人的思想前提仍是深深依赖于传统的价值标准的。她一方面痛恨自己所处的混乱污秽的社会环境，以实际行动向之宣战；一方面为了生存，她又不得不在一定程度上向现实低头。生活对于她来说是无边无际的矛盾和痛苦。总之，不管是从历史的角度，还是封建伦理道德的角度来看，林黛玉的矜持表现是必然的。她的..................... 参考文献： 1、[1][3][7][8][9]蒋和森，红楼梦论稿?林黛玉论[M]，北京人民文学出版社，1981。 2、[2][4]王昆仑文集?林黛玉的恋爱悲剧[M]，北京团结出版社，1988。 3、[5]蒋晓兰，论林黛玉的真与美[J]，安顺师范高等专科学校学报，2003。 4、[6]辛未艾译，车尔尼雪夫斯基论文学?中卷[M]，上海译文出版社，1979。注释： ①本处论点参阅了李汉秋，胡益民：《清代小说》，安徽教育出版社1989年版，第196—197页。 ②参阅唐富龄：《明清文学史?清代卷》，武汉大学出版社1991版。
我们写论文中的“参考文献”又叫参考书目，根据我自己写论文的经历来看它的意思是指我们在撰写毕业论文过程中所查阅参考借鉴过的著作和报刊杂志等等一些资料，然后把它标注在在毕业论文的末尾。
一、那论文的参考文献具体是指什么呢？
二、我们在引用参考文献时需要注意什么呢？
三、我给大家讲一下参考文献格式：
1、参考文献和注释。按论文中所引用文献或注释编号的顺序列在论文正文之后，参考文献之前。图表或数据必须注明来源和出处。
[编号]、作者、文章题目、期刊名(外文可缩写)、年份、卷号、期数、页码。
[编号]、作者、书名、出版单位、年份、版次、页码。
2、附录。包括放在正文内过分冗长的公式推导，以备他人阅读方便所需的辅助性数学工具、重复性数据图表、论文使用的符号意义、单位缩写、程序全文及有关说明等。
[M]——专著,著作
[C]——论文集(一般指会议发表的论文续集，及一些专题论文集，如《xxx大学研究生学术论文集》
[N]—— 报纸文章
[J]——期刊文章：发表在期刊上的论文，尽管有时我们看到的是从网上下载的(如知网)，但它也是发表在期刊上的，你看到的电子期刊仅是其电子版
[D]——学位论文 ：不区分硕士还是博士论文
[R]——报告：一般在标题中会有"关于xxxx的报告"字样
[S]—— 标准
[P]——专利
[A]——文章：很少用，主要是不属于以上类型的文章
[Z]——对于不属于上述的文献类型，可用字 母"Z"标识，但这种情况非常少见
[DB/OL] ——联机网上数据(database online)
[DB/MT] ——磁带数据库(database on magnetic tape)
[M/CD] ——光盘图书(monograph on CDROM)
[CP/DK] ——磁盘软件(computer program on disk)
[J/OL] ——网上期刊(serial online)
[EB/OL] ——网上电子公告(electronic bulletin board online)
很显然，标识的就是该资源的英文缩写，/前面表示类型，/后面表示资源的载体，如OL表示在线资源。
四、经验总结
我们在写论文的时候，尤其是我们的毕业论文，说多了都是泪呀，这都是根据我自己当年写毕业论文的血泪史，总结出来的结论参考文献有三个好处：
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平儿，她是《红楼梦》中王熙凤的陪房丫头，贾琏之妾。她是个极聪明、极清俊的女孩儿（第四十四回宝玉之语）。虽是凤姐的心腹，要帮著凤姐料理事务，但她为人很好，心地善良，常背著王熙凤做些好事。王熙凤死后，王仁和贾环等要把巧姐卖给藩王作使女，是平儿陪伴巧姐逃出大观园。后来，贾琏把平儿扶了正。平儿，王熙凤陪房丫头，贾琏侍妾，王熙凤最得力的心腹助手。聪慧、干练、心地善良，又善于处世应变，以贾琏之俗，凤姐之威，竟能体贴周旋。贾琏和多姑娘私通，平儿从枕套中抖出一绺青丝，但她向凤姐隐瞒了事情真相，避免了一场风波。凤姐有病，探春代理家政，平儿陪侍。那些管家媳妇见探春年轻，又是庶出，以为她办事没有经验，想欺负她，连得她生身母亲赵姨娘也来惹是生非。碰到此类事情，平儿竟能应付自如，处置得体。探春弊端，平儿总是先表示支持，接着又说出一番早就该改而竟未改的道理来，即不伤害探春，又保全了凤姐的面子，引得宝钗过来摸平儿的脸笑道：“你张开嘴，我瞧瞧你的牙齿舌头是什么做的。从早起来到这会子，你说这些话，一套一个样子，也不奉承三姑娘，也没见你说奶奶才短想不到，也并没有三姑娘说一句，你就说一句是；横竖三姑娘一套话出，你就有一套话进去；总是三姑娘想到的，你奶奶也想到了，只是必有个不可办的原故……他这远愁近虑，不亢不卑，她奶奶便不是和咱们好，听他这一番话，也必要自愧的变好了，不和也变和了。”（第五十六回）平儿从不弄权仗势欺人，心地善良，本能地同情那些和她地位相仿或更低的奴隶们，在茯苓霜和玫瑰露事件中，她劝凤姐“得放手时须放手”，“什么大不了的事，乐得不施恩呢？”（第六十一回）这才使柳家母女免去了一场灾难。贾琏偷娶尤二姐，平儿得知后告诉了凤姐，后见凤姐如此虐待尤二姐，她又把同情给了尤二姐，引起王熙凤的不满。尤二姐一死，王熙凤推说没有钱治办丧事。平儿偷出二百两碎银子给贾琏，把局面应付过去。当然，以平儿这样奴隶地位，应命去处理种种复杂的关系和事件，是十分困难的。在纷繁的矛盾中间，她常常感到处境的艰难和内心无告的悲苦。这是一个很成功的人物形象。平儿天资聪慧，可偏与王熙凤成主仆关系，则显得有点儿“小巫见大巫了”，不过在日常事务处理上，平儿可是帮了凤姐的大忙了，所以说王熙凤对平儿也挺好。但虽说跟着王熙凤吃香的喝辣的，但也有不如意的地方，比如说平儿实际上去贾琏也有爱幕之情但是有王熙凤在，她也不敢太过于表露，而且由于凤姐婚久不孕，使她更加看管贾琏，不让他和别的女人相处太密切，当然，这一切都不是从表面上能看出来的。所以有时贾琏和平儿乘着王熙凤不在，偷偷亲热一番，被凤姐发现了，还要冷嘲热讽一番。但是平儿还是比较善良的，当贾琏在外面沾花惹草，勾搭上尤二姐后，王熙凤假惺惺的去把尤二姐接回来，却在背地里使坏，使二姐已经成形的胎儿堕掉了，二姐也不堪忍耻辱而自缢身亡，在这期间，贾府里唯一对她好的便是平儿了，一直对他百般照顾，还把好死时将要交给贾琏的二百两银子一文不少的交给了贾琏。由此可见，平儿的心地是十分善良的。这样可爱的姑娘谁能不为之动心？？平儿在贾府没落后出家为妮，一生遁入空门，从此与世俗无缘，唉，平地儿啊，可怜，可悲，可叹的平儿呀！平儿的结局作者没有暗示。后四十回续书写到凤姐去世，平儿悉心照料孤女，最后贾琏把她扶了正。平儿敬重有能力的女子，所以她对凤姐言听计从，对探春是处处顾及。平儿是一个聪明人，所以她才可以在凤姐和贾琏的夹缝中生活。看第21回俏平儿软语救贾琏，就可以知道她平日既抓着贾琏的把柄，也有凤姐的把柄，所以他两都有忌讳她的时候。平儿借着凤姐的权利在逐步影响和控制一批人。她的地位在一步步地提升，只是不知是有意还是无意。她深知“水至清则无鱼，人至察则无徒”，平儿的性格就是希望息事宁人,大事化小,而且心地善良.处在这样恶劣的生存环境!如果是一般人，不是被贾琏夫妇蹂躏而死，就会变为他们的鹰犬。然而，平儿不仅没有“助纣为虐”，反而“阻纣为虐”。她对凤姐是忠心的，被人称作凤姐儿的一把“总钥匙”；凤姐一时一刻也离不开她，她也极力协助凤姐儿，简直成了“凤姐儿助理”，在凤姐儿生病、探春理家时，她竞成了凤姐儿的“代理人”。不过，无论在何种情况下，她总是以好心为人，以公平处事。凤姐儿将施淫威时，她总是极力劝阻；即便自己“行权”时，也从不略示威风；遇到下人犯了过错，也往往“大事化小、小事化了”，从不多事。这在第六十一回“判冤决狱平儿行权”作了集中的描写。她的聪明、机智、干练、特别是她的为人处世，赢得了贾府上下各种人等的称赞和尊敬。这是她的人格力量显示的结果。
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扩展资料：
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参考资料来源：百度百科-参考文献
论文参考文献怎么写（通用11篇）
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会计论文参考文献有哪些
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在正文写作完毕后，空两行（宋体小四号）
1.连续出版物的格式 标引项顺序号 作者.题名[J].刊名，出版年份，卷号(期号)：起止页码. (外名可缩写，缩写后首字母大写，并省略缩写点) 2.专著的著录格式 标引项顺序号 作者.书名[M].版本(第一版不标注).出版地：出版者，出版年:起止页码. 3.论文集的著录格式 标引项顺序号 作者.题名[C].见(英文用In)：主编.论文集名.出版地：出版者，出版年:起止页码. 4.学位论文的著录格式 标引项顺序号 作者.题名[D].保存地点：保存单位，年份. 5.专利的著录格式 标引项顺序号 专利申请者.题名[P].国别 专利文专利号，发布日期. 6.技术标准的著录格式 标引项顺序号 起草责任者.标准代号 标准顺序号—发布年 标准名称[S].出版地：出版者，出版年. 7.报告 标引项顺序号 报告人.题名[R].会议名称，会址，年份.
毕业论文无论对普通大学毕业生还是成教毕业生都是个挠头的问题，开题报告、参考文献等等都是让人十分烦恼的事情，下面YJBYS我为大家带来本科毕业医学论文，欢迎阅读!
摘要 ：目的：总结10例骨纤维结构不良患儿的诊治过程、方法及治疗效果。方法：10例病历均行手术治疗，病灶清除加植骨9例，单纯病灶清除1例。植骨行自体髂骨植骨8例，磷酸钙人工骨植骨1例。2例开窗较大患儿，使用可吸收医用膜覆盖开窗处，以防止软组织生长进入。结果：10例患儿随访1～4年，病理性骨折均骨性愈合，愈合时间3～5个月，局部疼痛就诊病例症状消失，无复发病例。未出现病理性骨折及再发骨折病例。X片复查：局部囊状阴影消失，囊腔骨化，密度均匀。10例患儿近期随访均无生长发育障碍。1例患儿病灶位于股骨外上髁干垢端，骨垢破坏，病灶突破关节内软骨面，手术仅行病灶清除，未予植骨，以防骨垢早闭。近期疗效较满意，无膝内外翻。有待远期随访。结论：对早期发现的患儿，积极地治疗，无论是疗效还是治疗难度都令人满意。一旦出现病理性骨折，治疗难度加大，术后愈合周期延长，患儿疼痛时间延长，加之病理性骨折需固定，治疗费用加大。
关键词 ：骨纤维结构不良;病灶清除加植骨;骨垢破坏;病理性骨折
骨纤维结构不良作为骨组织肿瘤样病变的一种，近年来随着人们医疗意识及经济条件的提高，临床病例呈上升趋势。作为骨组织肿瘤样病变的一种，占骨组织肿瘤样病变首位。发病均为青少年儿童，年龄10岁左右，发病可发生于任何骨骼，多数患儿无任何症状，早期不易发现，后期多达2/3的病例发生病理性骨折，大多数病例以此为首发症状[1]。陕西勉县九冶医院骨科2003年1月～2006年12月共收治骨纤维结构不良患儿10例，病理性骨折2例，10例患儿均行病灶清除加植骨，骨折病例加用内、外固定，随访1～4年，平均18个月，取得满意疗效，现报告如下。
1 资料与方法
一般资料：2003年1月～2006年12月我院骨科共收治骨纤维结构不良患儿10例，其中男4例，女6例，年龄4～12岁，平均岁。本组10例病例中，以病理性骨折就诊发现2例，病灶周围疼痛拍片发现2例，余6例均为病灶周围外伤。骨折后拍片发现，1例尾椎骨折发现小转子病灶，1例外踝骨折发现胫骨下段病灶，8例病例既往均无任何症状。本组病例仅2例有明显症状。1例胫骨大结节处病灶，局部疼痛就诊。1例股骨外上髁，病灶破坏骨垢，突破关节内软骨面，引发膝关节积液，肿痛，活动受限就诊。余8例既往均无任何症状。影像学检查：X片表现为膨胀性溶骨改变，呈磨砂玻璃样，部分囊状阴影，不规则钙化，皮质变薄不一。实验室检查：骨碱性磷酸酶升高7例，最高480 mmol/L，高出正常3倍。血沉均正常。
手术治疗：①病灶清除：10例患儿均行局部开窗，病灶清除，开窗范围力争小，但以将病变组织清除干净为准，加压冲洗。②植骨：本组10例患儿，9例行植骨，1例患儿病灶位于股骨外上髁干垢端，骨垢破坏，病灶突破关节内软骨面，手术仅行病灶清除，未予植骨，以防骨垢早闭，影响生长发育。9例植骨病例中，8例取自体髂骨植骨，1例磷酸钙人工骨植骨。自体髂骨植骨以大块髂骨修剪成小骨条植入。2例开窗较大患儿，使用可吸收医用膜覆盖开窗处，以防止软组织进入。
2 结果
本组10例患儿随访1～4年，骨折患儿均骨性愈合，愈合时间3～5个月，局部疼痛就诊病例症状消失，无复发病例。X片复查：局部囊状阴影消失，囊腔骨化，密度均匀。10例患儿近期均无生长发育障碍。1例患儿病灶位于股骨外上髁干垢端，骨垢破坏，病灶突破关节内软骨面，手术仅行病灶清除，未予植骨，以防骨垢早闭。近期疗效较满意，无膝内外翻。有待远期随访。
3 讨论
骨纤维结构不良患儿大多无任何症状，多在健康查体及病灶周围外伤，骨折后拍片协诊时发现。少数累及临近关节而引发症状，仅感疼痛，大多休息后缓解，而生长发育期儿童因骨垢生长出现关节疼痛较为常见，多数休息后缓解，未予重视因而漏诊，直至出现病理性骨折后才被发现。而早期发现，早期治疗，能积极预防病理性骨折的出现。本组病例均行手术治疗，病灶清除植骨，目的在于彻底清除病灶，恢复病灶处骨质组织学结构及生物力学结构，能积极预防远期病理性骨折的.发生。目前治疗本病主要以手术治疗为主，刮除、植骨为大多数同行选择的术式。
骨纤维结构不良为一组以骨纤维变性为特征的囊性病变，为先天性、非遗传性疾病，原因、发病机制尚不清。本病系瘤样病变的一种，发病率局瘤样病变首位，我国较国外发病率高。女性多见，男女比1：2～3。非手术治疗方法国外研究较多，主要使用双磷酸钠盐化合物治疗，其二代产物羟乙磷酸钠治疗能减轻疼痛，可减慢溶骨改变的速度，但对原发病灶并不能治愈;国内尚未广泛使用，仍以手术治疗为主，手术能彻底清除病灶，短期恢复病灶处骨质组织学结构及生物力学结构[2]。我们认为，对早期发现的患儿，积极地治疗，无论是疗效还是治疗难度都令人满意。一旦出现病理性骨折，治疗难度大大加大，术后愈合周期延长，患儿疼痛时间延长，加之病理性骨折需固定，治疗费用加大。本组10例患儿随访1～4年，效果满意，未出现病理性骨折及再发骨折病例。近期文献报道对本病拟行基因治疗的研究，有望突破。
本组10例患儿均系病灶较局限，单发病损病例。有症状患儿仅为局部疼痛，无皮肤色素沉着，及性早熟等表现，诊断并不困难。无局部畸形，手术方式较简单。对病灶较大、多发性侵犯病例尚缺，结论有一定局限性，个别病例有待长期随访。
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人生在世，必须活得有骨气！ 骨气是什么？骨气是一种不屈于他人的精神，是一种折不断，压不弯的精神，是一个人人格的体现，有时甚至是一个国家国格的标志。 梅汝璈就是一个有骨气的人。东京审判时，作为中国代表团团长的梅汝璈面对外国人的刁蛮行为，始终不卑不亢。在审判的座位排序上，他坚持要求按受降书签定的顺序来排位，否则“无颜去见中国人民”。在事关中国的正当权力方面，他没有屈服，始终据理力争，直至赢得尊严。梅汝璈在外国人面前，所表现的不仅仅是他个人的骨气，更是一个民族的骨气，他的行为，让当时国际社会对中国刮目相看。 纵观古今，像梅汝璈这种有骨气的人难道还少吗？晏子出使出国，不从“狗洞”（小门）入，义不受辱；陶潜不为五斗米折腰，辞官归隐；李白不愿“事权贵”，“天子呼来不上船”；曾子墨在美国打拼，面对外国人的刁难，不卑不亢，据理力争；普通工人孙天帅，不给韩国女老板下跪，高挺胸膛，饭碗被砸，却站得笔直。这些人，不都是有骨气的人吗？因为有骨气，他们不卑不亢；因为有骨气，他们不畏强势；因为有骨气，他们活出尊严，赢得尊重。 “铮铮铁骨”固然值得景仰，先忍而后起，忍辱负重，也是大丈夫，也是有骨气的人。越王勾践，被吴王夫差击败，掳进宫中为仕多年。勾践为夫差尝大便，做马夫，博得夫差信任，得以回归故里。他卧薪尝胆，苦心建国，三千越甲，吞灭强吴，除去心头恶气，成就一代霸业。我们能说勾践是没有骨气的表现吗？不能。骨气，有时候不是挺出来的，是人忍出来的。那份忍辱负重的精神，那份压不平，折不断，吓不倒的精神，同样称之为骨气！ 然而，生活中却不乏得了“软骨病”的人。他们整天谈论韩国、日本的某影星，“帅呆了！”、“酷毙了！”挂在嘴边，却不知我国的航天英雄杨利伟从事什么职业；他们迷恋于“万圣节”“愚人节”“圣诞节”，却不知“端午节”“中秋节”是哪一天；他们以穿外国名牌为荣，以吃洋快餐为美，以用日货、美货为傲，“月亮是外国的圆”，却把国货贬得一文不值。更可恨的是，个别人居然把讨好洋鬼子、取悦洋鬼子当作一种荣耀，甘愿低声下气做了一条哈巴狗。这些人是可悲的，因为他们的做法只会引起外国人的反感。试想，一个连自己的国家与民族都不爱的人，一个没有骨气的人，会得到别人的尊重吗？ 铮铮傲骨，构成了中华民族的脊梁。有骨气的中华儿女，曾经为中国的屈辱抗争过，曾经为中华的崛起奋斗过。新一代的青年更应该铭记：人生在世，必须活得有骨气！
为探究早期人类胚胎骨骼干细胞起源，同济大学联合解放军总医院第五医学中心和北京放射医学研究所进行了相关研究，相应成果发表 Cell Research 杂志。该研究利用10x Genomics单细胞转录组测序绘制了早期人类胚胎肢芽、长骨和颅骨的发育图谱，并结合体内外功能验证发现了一群定位于软骨外膜，具有自我更新和分化为软骨与成骨细胞潜能的胚胎骨骼干祖细胞（eSSPC），对于深入理解人类骨骼发育及损伤修复机制具有重要意义。接下来我带大家一起走进这篇文章 通过单细胞转录组和功能分析来剖析人类胚胎骨骼干细胞的个体发育 Dissecting human embryonicskeletal stem cell ontogeny by single-cell transcriptomic and functionalanalyses 【发表杂志】 Cell Research （IF：）； 【发表时间】 2021年3月； 【应用技术】 10x Genomics单细胞转录组测序；研究流程 骨骼的发生发育在小鼠、小鸡和蝾螈等生物中已经得到了广泛的研究，而人类的研究主要停留在组织形态学水平。本研究首先对孕5周人类胚胎肢芽和孕8周人类胚胎长骨进行高通量单细胞转录组测序，分别分析肢芽和长骨的发育谱系，然后再结合流式细胞术等实验鉴定胚胎骨骼祖细胞（eSSPC）的表型标记（PDGFRAlow/-PDPN+CADM1+），最后在颅骨样本中发现了一群具有同样表型的细胞，说明其可能在膜内成骨和颅骨发育过程中发挥关键作用。 研究背景 先前的研究表明自我更新的骨骼干细胞（SSCs）存在于高等脊椎动物和早期发育阶段。SSCs是一群能够自我更新并分化产生软骨细胞、成骨细胞和基质细胞的组织特异性干细胞，在骨骼发育和损伤修复过程中发挥关键作用。人类胚胎SSCs在早期骨骼形成中的个体发生仍然是未知的。在脊椎动物中，附肢骨骼的最早祖细胞是在肢芽中形成的。虽然在小鼠和鸡肢芽中发现了不同的间充质祖细胞，但人类肢芽中的细胞异质性和谱系层次尚不清楚。总之，关于人类胚胎骨骼发生的单细胞转录组测序研究仍然缺乏。在本研究中，通过10x Genomics单细胞转录组测序生成了第一个全面的人类胚胎骨骼发生细胞图谱。通过系统地检查多个骨骼部位的细胞异质性和谱系层次，本研究在人类胚胎长骨和颅骨中发现了不同的骨骼干/祖细胞。 主要结果 1. 整体分析肢芽和长骨发育过程中单细胞转录组 本研究对上肢和下肢芽（5个Weeks Post Conception，WPC），以及前肢和后肢长骨（8WPC）进行解剖并接受酶消化。流式分选后，进行10x Genomics单细胞转录组测序（图1b） ，最终在5WPC肢芽中获得19,890个单细胞，在8WPC长骨中获得15,680个单细胞。对肢芽和长骨样本的综合分析发现了16个亚群（图1c）。PRRX1+肢芽间充质亚群和EPCAM+上皮细胞亚群主要存在孕5周样本。RUNX2+骨祖细胞、OSR2+NOV+软骨膜间充质基质细胞、SOX9+成软骨细胞和软骨细胞、MYOG+肌细胞以及SOX10+施旺细胞主要在孕8周样本中检测到。成骨软骨前体细胞（cluster4，OCP）平均分布于肢芽和长骨样本之间，提示最早的骨骼干祖细胞可能包含于其中（图1c-e）。Pearson相关分析明确区分了成骨亚群和非成骨亚群。RNA velocity伪时间分析显示，肢芽间充质祖细胞向OCPs分化连续，随后细胞命运分化成成骨和软骨谱系（图1f）。PAGA分析显示，OCPs在连接肢体芽间充质祖细胞（PRRX1+）到胚胎长骨中的PMSC/软骨母细胞/软骨细胞（SOX9+）和骨祖细胞（RUNX2+）中发挥了关键作用（图1g）。2. 肢芽发育过程中的间充质细胞谱系 在5WPC人类肢芽中识别出10个亚群（图2a）。4个间叶细胞亚群的层次聚类分析显示，LBM1（cluster 1）与LBM2（cluster2）聚类，而LBM3（cluster 3）和OCP（cluster4）聚类在一起（图2b）。在两个上皮细胞亚群中（图2a），只有cluster 9（对应上皮细胞1，图1c,d）高表达AER标志物FGF8，这与之前在小鼠胚胎中的研究一致。PAGA分析显示LBM2和上皮亚群之间存在很强的相关性（图2c）。细胞周期分析显示，LBM2相比其他间质亚群具有更强的增殖能力。GO分析显示，LBM2富含调控代谢过程的基因，而LBM3和OCP富含参与胚胎骨骼发育和骨化的基因。 本研究分析了最近发表的小鼠肢芽（）单细胞转录组测序数据集发现，除了LBM2和上皮（非AER亚群）亚群在小鼠肢芽中未被预测外，大多数人类亚群在小鼠中是保守的。缺乏高度增殖的LBM2亚群暗示小鼠肢芽提前成熟。小鼠OCP亚群高表达 SOX9 ，提示早期软骨分化。综上所述，与人类相比，这些数据揭示了人体肢芽间充质和上皮细胞的细胞异质性和物种特异性。3. 长骨发育过程中的软骨谱系 由于5WPC人肢芽未开始成骨，本研究继续分析8WPC长骨，以寻找人类胚胎SSCs。骨软骨细胞系（OCLCs）分为7个亚群（图3a）。胚胎长骨OCP细胞进一步分群鉴定得到3群干祖细胞，GO分析显示，与干细胞增殖相关的基因在cluster3中富集（图3b），提示其可能含有胚胎骨骼干细胞/祖细胞（eSSPC）。拟时序分析显示从eSSPC到骨祖细胞、成软骨细胞/软骨细胞和软骨膜间充质基质细胞（PMSC）亚群的强定向流（图3c）。转录调控网络分析发现eSSPC富集了转录因子FOXP1/2（图3f）。免疫荧光染色显示FOXP1/2+细胞主要定位于软骨外膜和新生的初级骨化中心内部。连续性克隆传代以及体内外分化实验证明eSSPC具有自我更新和成骨、成软骨分化潜能，它有可能调节长骨发育和初级骨化中心（POC）的形成。4. CADM1作为胚胎骨骼祖干细胞（eSSPC）表型标记的鉴定 为了分离eSSPC用于体外功能研究，研究者首先筛选长骨软骨细胞系OCLC亚群间差异表达的细胞表面标记物。发现细胞粘附分子CADM1在eSSPC中优先表达（图4a）。CADM1也在施旺细胞中表达，免疫荧光显示CADM1分布于软骨膜和初级骨化中心（POC）（图4b）。在转录平均细胞评分（TACS）分析中显示，在软骨细胞OCLC亚群中富集PDGFRAlow/-PDPN+CADM1+细胞可进一步提高eSSPC的纯度。用流式细胞仪对eSSPC进行单细胞转录组测序分析排序PDGFRAlow/-PDPN+CADM1+细胞。聚类分析发现两个不同的亚群，包括的eSSPC表达 FOXP1 、 FOXP2 和 GAS2 , 和施旺细胞表达 SOX2 、 SOX10 和 MPZ 。相似度分析也证实eSSPC是PDGFRAlow/-PDPN+CADM1+高度富集细胞。 研究者进一步检测eSSPCs的自我更新和分化潜能，发现PDGFRAlow/-PDPN+CADM1+细胞可以分化为成骨和软骨。PDGFRAlow/-PDPN+CADM1-细胞仅发生成骨分化。5. 颅骨发育过程中的成骨谱系发展 为了测试在胚胎颅骨中是否存在类似的骨骼干细胞，研究者在2个8WPC人颅骨中进行了单细胞转录组测序分析，发现了一群同样具有PDGFRAlow/-PDPNCADM1+表型的神经脊来源细胞（Neural crestderived cells, NCDCs）在颅缝和软骨膜内富集，暗示其可能在膜内成骨和颅骨发育过程中发挥关键作用。研究结论 人类骨骼干细胞（SSCs）已经在胎儿和成人的长骨中被发现。然而，人类胚胎SSCs在早期骨骼发生过程中的时空个体发生尚不清楚。在这里，本研究以单细胞分辨率绘制了人类肢体芽和胚胎长骨的转录景观，以解决这个基本问题。本研究发现在人肢芽间叶和上皮内存在显著的异质性，并利用已知的标记基因将它们沿着近端远端和前后轴排列。骨-软骨形成的祖细胞最早出现在核心肢芽间充质中，在胚胎长骨进行软骨内成骨过程中，这些祖细胞产生了多个群体的干细胞/祖细胞。重要的是，本研究发现了一个软骨膜胚胎骨骼干/祖细胞（eSSPC）亚群，它可以自我更新并生成骨软骨细胞系，但不能生成脂肪细胞或造血间质。eSSPC以粘附分子CADM1为标记，与FOXP1/2转录网络高度富集。有趣的是，在人类胚胎颅骨的矢状缝中也发现了具有相似表型标记和转录网络的神经嵴衍生细胞。综上所述，本研究揭示了人类胚胎骨骼发生过程中的细胞异质性和谱系层次，并识别出独特的骨骼干/祖细胞，它们协调软骨内和膜内骨化。参考文献 He J,Yan J, Wang J, et al. Dissecting human embryonic skeletal stem cell ontogeny bysingle-cell transcriptomic and functional analyses. Cell Res . 2021; 31(7): 742-757.李超 | 文案
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