在正文书写完毕后，空两行（宋体小四号），再书写“参考文献”四个字（居中），“参考文献”使用宋体四号加粗，前后两个字之间不空格。“参考文献”书写完毕后空一行（宋体小四号）再书写参考文献的具体内容。
参考文献的序号左顶格书写，并用数字加方括号表示，如〔1〕，〔2〕，?，每一参考文献条目的＇最后均以“．”结束。参考文献只列出作者已直接阅读，在撰写论文过程中主要参考过的文献资料，所列参考文献应按论文参考的先后顺序排列，参考文献一律书写在论文正文结束后，不得放在各章（节）之后。
参考文献引用的技巧
如果我们在论文中有引用了他人的学术观点、数据、材料、结构等，就一定要记得详细的标注出来的。我们引用参考文献也应该要规范，如果我们在论文中标注的参考文献不规范，也从侧面反映出论文写作者的水平和态度。
参考文献不宜过多，文献的多少能体现出论文占有资料的程度。一般情况下，中文论文的参考文献偏少，但也不能简单以文献引用量达到多少简单划分，不同性质的论文引用参考文献的多少页相差很大。
格式为作品的“出版年份”或期刊的“年、卷（期）”+“：页码（或页数范围），”对于多个引用文件。
每一引用文件的页码或页码范围（有些出版物也将表示引用文件位置的信息作为页码）应分别列在每个引用文件的序号中，放在方括号后。
扩展资料：
论文格式的注意事项：
1、打印要求
所有毕业论文均采用A4纸打印，上下边距2.5cm，左边距3cm，右边距2.5cm。行距为行距的倍数（设定值为1.25）；字符间距为默认值（缩放100%，间距：标准），封面为教务处统一规定的封面。
2、字体要求
纸上使用的字体要求是宋体。
期刊的参考文献格式：[序号]主要责任者.文献题名[J].刊名，年，卷(期)：起止页码.
专著、论文集、报告：[序号]主要责任者.文献题名[文献类型标识].出版地：出版者，出版年:起止页码(可选).
论文集中的析出文献：[序号]析出文献主要责任者.析出文献题名[A].原文献主要责任者(可选)原文献题名[C].出版地：出版者，出版年：起止页码.
学位论文：[序号]主要责任者.文献题名[D].出版地：出版单位，出版年：起止页码(可选).
报纸文章：[序号]主要责任者.文献题名[N].报纸名，出版日期(版次).
电子文献：[序号]主要责任者.电子文献题名[电子文献及载体类型标识].电子文献的出版或获得地址，发表更新日期或者引用日期.
书写格式：
2007年8月20日在清华大学召开的“综合性人文社会科学学术期刊编排规范研讨会”决定，2008年起开始部分刊物开始执行新的规范“综合性期刊文献引证技术规范”。该技术规范概括了文献引证的“注释”体例和“著者—出版年”体例。
不再使用“参考文献”的说法。这两类文献著录或引证规范在中国影响较大，后者主要在层次较高的人文社会科学学术期刊中得到了应用。
文后参考文献的著录规则为GB/T 7714-2005《文后参考文献著录规则》，适用于“著者和编辑编录的文后参考文献，而不能作为图书馆员、文献目录编制者以及索引编辑者使用的文献著录规则”。
顺序编码制的具体编排方式。参考文献按照其在正文中出现的先后以阿拉伯数字连续编码，序号置于方括号内。一种文献被反复引用者，在正文中用同一序号标示。一般来说，引用一次的文献的页码（或页码范围）在文后参考文献中列出。
格式为著作的“出版年”或期刊的“年，卷（期）”等+“：页码（或页码范围）.”。多次引用的文献，每处的页码或页码范围（有的刊物也将能指示引用文献位置的信息视为页码）分别列于每处参考文献的序号标注处，置于方括号后（仅列数字，不加“p”或“页”等前后文字、字符。
页码范围中间的连线为半字线）并作上标。作为正文出现的参考文献序号后需加页码或页码范围的，该页码或页码范围也要作上标。作者和编辑需要仔细核对顺序编码制下的参考文献序号，做到序号与其所指示的文献同文后参考文献列表一致。另外，参考文献页码或页码范围也要准确无误。
以上内容参考百度百科——参考文献
期刊论文参考文献格式如下：
参考文献格式：我国对参考文献的格式有严格的规定和标准，并在2005年就制定了国家标准，即《文后参考文献著录规则——中华人民共和国国家标准（GB/T 7714-2005）》。
根据参考文献的类型分类如下：
M——专著（含古籍中的史、志论著）
C——论文集
N——报纸文章
J——期刊文章
D——学位论文
R——研究报告
S——标准
P——专利
A——专著、论文集中的析出文献
Z——其他未说明的文献类型
电子文献类型以双字母作为标识：
DB——数据库
CP——计算机程序
EB——电子公告
非纸张型载体电子文献，在参考文献标识中同时标明其载体类型：
DB/OL——联机网上的数据库
DB/MT——磁带数据库
M/CD——光盘图书
CP/DK——磁盘软件
J/OL——网上期刊
EB/OL——网上电子公告
参考文献著录格式：
1 、期刊作者．题名[J]．刊名，出版年，卷(期)∶起止页码
2、专著作者．书名[M]．版本(第一版不著录)．出版地∶出版者，出版年∶起止页码
3、论文集作者．题名[C]．编者．论文集名，出版地∶出版者，出版年∶起止页码
4 、学位论文作者．题名[D]．保存地点．保存单位．年份
5 、专利文献题名[P]．国别．专利文献种类．专利号．出版日期
6、 标准编号．标准名称[S]
7、 报纸作者．题名[N]．报纸名．出版日期(版次)
8 、报告作者．题名[R]．保存地点．年份
9 、电子文献作者．题名[电子文献及载体类型标识]．文献出处，日期
文献类型及其标识
1、根据规定，各类常用文献标识如下：
①期刊[J]②专著[M]③论文集[C]④学位论文[D]⑤专利[P]⑥标准[S]⑦报纸[N]⑧技术报告[R]
2、电子文献载体类型用双字母标识，具体如下：
①磁带[MT]②磁盘[DK]③光盘[CD]④联机网络[OL]
3、电子文献载体类型的参考文献类型标识方法为：
[文献类型标识/载体类型标识]。例如：①联机网上数据库[DB/OL]②磁带数据库[DB/MT]③光盘图书[M/CD]④磁盘软件[CP/DK]⑤网上期刊[J/OL]⑥网上电子公告[EB/OL]
期刊论文：
[1]周庆荣，张泽廷，朱美文，等．固体溶质在含夹带剂超临界流体中的溶解度[J].化工学报，1995(3)：317—323
[2]Dobbs J M, Wong J M. Modification of supercritical fluid phasebehaviorusing polor coselvent[J]. Ind Eng Chem Res, 1987,26:56
[3]刘仲能，金文清.合成医药中间体4-甲基咪唑的研究[J].精细化工，2002(2)：103-105
[4] Mesquita A C, Mori M N, Vieira J M, et al . Vinylacetate polymerization by ionizing radiation[J].Radiation Physics and Chemistry,2002, 63:465
论文的参考文献格式怎么写
参考文献就是你在某本书参考的资料，写论文时必须把参考的这本书的书名、作者及出版社 注明在论文结尾，否则就是侵权。若未参考则不需注明。
你发表的是什么期刊？核心期刊还是省级期刊，还是国家级的期刊?
一篇论文参考文献最低不能低于20条，但因作者投稿期刊级别不同，则期刊对论文参考文献数量存在差异性，建议作者认真阅读期刊要求，根据投稿期刊要求撰写论文参考文献。
一篇论文参考文献最低不能低于20条，但因作者投稿期刊级别不同，则期刊对论文参考文献数量存在差异性，建议作者认真阅读期刊要求，根据投稿期刊要求撰写论文参考文献。
期刊论文参考文献格式如下：
参考文献格式：我国对参考文献的格式有严格的规定和标准，并在2005年就制定了国家标准，即《文后参考文献著录规则——中华人民共和国国家标准（GB/T 7714-2005）》。
根据参考文献的类型分类如下：
M——专著（含古籍中的史、志论著）
C——论文集
N——报纸文章
J——期刊文章
D——学位论文
R——研究报告
S——标准
P——专利
A——专著、论文集中的析出文献
Z——其他未说明的文献类型
电子文献类型以双字母作为标识：
DB——数据库
CP——计算机程序
EB——电子公告
非纸张型载体电子文献，在参考文献标识中同时标明其载体类型：
DB/OL——联机网上的数据库
DB/MT——磁带数据库
M/CD——光盘图书
CP/DK——磁盘软件
J/OL——网上期刊
EB/OL——网上电子公告
参考文献著录格式：
1 、期刊作者．题名[J]．刊名，出版年，卷(期)∶起止页码
2、专著作者．书名[M]．版本(第一版不著录)．出版地∶出版者，出版年∶起止页码
3、论文集作者．题名[C]．编者．论文集名，出版地∶出版者，出版年∶起止页码
4 、学位论文作者．题名[D]．保存地点．保存单位．年份
5 、专利文献题名[P]．国别．专利文献种类．专利号．出版日期
6、 标准编号．标准名称[S]
7、 报纸作者．题名[N]．报纸名．出版日期(版次)
8 、报告作者．题名[R]．保存地点．年份
9 、电子文献作者．题名[电子文献及载体类型标识]．文献出处，日期
文献类型及其标识
1、根据规定，各类常用文献标识如下：
①期刊[J]②专著[M]③论文集[C]④学位论文[D]⑤专利[P]⑥标准[S]⑦报纸[N]⑧技术报告[R]
2、电子文献载体类型用双字母标识，具体如下：
①磁带[MT]②磁盘[DK]③光盘[CD]④联机网络[OL]
3、电子文献载体类型的参考文献类型标识方法为：
[文献类型标识/载体类型标识]。例如：①联机网上数据库[DB/OL]②磁带数据库[DB/MT]③光盘图书[M/CD]④磁盘软件[CP/DK]⑤网上期刊[J/OL]⑥网上电子公告[EB/OL]
期刊论文：
[1]周庆荣，张泽廷，朱美文，等．固体溶质在含夹带剂超临界流体中的溶解度[J].化工学报，1995(3)：317—323
[2]Dobbs J M, Wong J M. Modification of supercritical fluid phasebehaviorusing polor coselvent[J]. Ind Eng Chem Res, 1987,26:56
[3]刘仲能，金文清.合成医药中间体4-甲基咪唑的研究[J].精细化工，2002(2)：103-105
[4] Mesquita A C, Mori M N, Vieira J M, et al . Vinylacetate polymerization by ionizing radiation[J].Radiation Physics and Chemistry,2002, 63:465
期刊文献的参考文献格式为分为期刊、专著、论文集、学位论文、报告、专利文献、国际、国家标准、报纸文章、电子文献。具体如下：
（1）期刊
［序号］主要作者。文献题名［J］。刊名，出版年份，卷号（期号）：起止页码。
（2）专著
［序号］著者。书名［M］。出版地：出版者，出版年：起止页码。
（3）论文集
［序号］著者。文献题名［C］。编者。论文集名。出版地：出版者，出版年：起止页码。
（4）学位论文
［序号］作者。题名［D］。保存地：保存单位，年份。
（5）报告
［序号］作者。文献题名［R］。报告地：报告会主办单位，年份。
（6）专利文献
［序号］专利所有者。专利题名［P］。专利国别：专利号，发布日期。
（7）国际、国家标准
［序号］标准代号，标准名称［S］。出版地：出版者，出版年。
（8）报纸文章
［序号］作者。文献题名［N］。报纸名，出版日期（版次）。
（9）电子文献
［序号］作者。电子文献题名［文献类型/载体类型］。电子文献的出版或可获得地址，发表或更新的期号/引用日期（任选）。
参考文献根据参考资料类型可分为：
1、纸质文献类型：专著［M］，会议论文集［C］，报纸文章［N］，期刊文章［J］，学位论文［D］，报告［R］，标准［S］，专利［P］，论文集中的析出文献［A］，杂志［G］。
2、电子文献类型：数据库［DB］，计算机［CP］，电子公告［EB］。
3、电子文献的载体类型：互联网［OL］，光盘［CD］，磁带［MT］，磁盘［DK］。
期刊的参考文献格式：[序号]作者，篇名[J]，刊名,出版年份,卷号(期号)起止页码。
参考文献是在学术研究过程中，对某一著作或论文的整体的参考或借鉴。征引过的文献在注释中已注明，不再出现于文后参考文献中。
参考文献类型及文献类型，根据GB3469-83《文献类型与文献载体代码》规定，以单字母方式标识：
专著M ； 报纸N ；期刊J ；专利文献P；汇编G ；古籍O；技术标准S 。
学位论文D ；科技报告R；参考工具K ；检索工具W；档案B ；录音带A 。
图表Q；唱片L；产品样本X；录相带V；会议录C；中译文T。
乐谱I； 电影片Y；手稿H；微缩胶卷U ；幻灯片Z；微缩平片F；其他E。
一篇论文参考文献最低不能低于20条，但因作者投稿期刊级别不同，则期刊对论文参考文献数量存在差异性，建议作者认真阅读期刊要求，根据投稿期刊要求撰写论文参考文献。
你发表的是什么期刊？核心期刊还是省级期刊，还是国家级的期刊?
一般十篇以内百度学术可以找到参考文献,输入关键词，在输入年份，就能找到相对应的参考文献。如果不知道参考文献格式要求，可以百度搜，参考文献自动生成器。直接按着填就出来了。 百度搜索参考文献自动生成器，按着里面填，点生成参考文献就出来了。 参考文献标准格式参考文献类型：专著［M］，论文集［C］，报纸文章［N］，期刊文章［J］，学位论文［D］，报告［R］，标准［S］，专利［P］，论文集中的析出文献［A］电子文献类型：数据库［DB］，计算机［CP］，电子公告［EB］电子文献的载体类型：互联网［OL］，光盘［CD］，磁带［MT］，磁盘［DK］A：专著、论文集、学位论文、报告［序号］主要责任者.文献题名［文献类型标识］.出版地：出版者，出版年.起止页码（可选）［1］刘国钧，陈绍业.图书馆目录［M］.北京：高等教育出版社，1957.15-18.B:期刊文章［序号］主要责任者.文献题名［J］.刊名，年，卷（期）：起止页码［1］何龄修.读南明史［J］.中国史研究，1998,(3):167-173.［2］OU J P，SOONG T T，et al.Recent advance in research on applications of passive energy dissipation systems［J］.Earthquack Eng,1997,38(3):358-361.C:论文集中的析出文献［序号］析出文献主要责任者.析出文献题名［A］.原文献主要责任者（可选）.原文献题名［C］.出版地：出版者，出版年.起止页码［7］钟文发.非线性规划在可燃毒物配置中的应用［A］.赵炜.运筹学的理论与应用——中国运筹学会第五届大会论文集［C］.西安：西安电子科技大学出版社，1996.468.D：报纸文章［序号］主要责任者.文献题名［N］.报纸名，出版日期（版次）［8］谢希德.创造学习的新思路［N］.人民日报，1998-12-25（10）.E：电子文献[文献类型/载体类型标识]：[J/OL]网上期刊、[EB/OL]网上电子公告、[M/CD]光盘图书、[DB/OL]网上数据库、[DB/MT]磁带数据库［序号］主要责任者.电子文献题名［电子文献及载体类型标识］.电子文献的出版或获得地址，发表更新日期/引用日期［12］王明亮.关于中国学术期刊标准化数据库系统工程的进展［8］万锦.中国大学学报文摘（1983-1993）.英文版［DB/CD］.北京：中国大百科全书出版社，1996.作者.题名[D].所在城市:保存单位,发布年份.李琳.住院烧伤患者综合健康状况及其影响因素研究[D].福州:福建医科大学,2009. 其他的：作者.题名[J].刊名,年,卷(期):起止页码.沈平,彭湘粤,黎晓静,等.临床路径应用于婴幼儿呼吸道异物手术后的效果[J].中华护理杂志,2012,47(10):930-932. 作者.书名[M]. 版次.出版地: 出版者,出版年:起止页码.胡雁.护理研究[M].第4版.北京:人民卫生出版社,2012:38. 作者.题名[N].报纸名,出版日期(版次).丁文祥.数字革命与国际竞争[N].中国青年报,2000-11-20(15). 作者.题名[EB/OL].网址,发表日期/引用日期(任选).世界卫生组织.关于患者安全的10个事实 [EB/OL].其他： [R]、[P]、[A]、[C]、[Z]等。
参考文献是文章或著作等写作过程中参考过的文献。
因参考文献的著录格式各刊不尽相同，投稿前作者应注意杂志稿约的有关规定，至少得先看看有关期刊发表的论文的参考文献是如何标注的，以了解有关期刊的参考文献的著录格式，以免出错。许多作者投递的稿件书写格式包括参考文献的著录格式与杂志所要求的不同。
坦率地讲，编辑和审稿专家也是人，工作中多少也有感情因素。如果拿到手中的是一篇书写格式不合要求的文章，别的暂且不论，就书写格式不规范这一条，就足以给编辑留下不好的印象，甚至让编辑做出退稿的决定。
就算最后没有被退稿，此类稿件较书写格式规范的稿件被录用的可能性大大降低。其实作者犯的是一个很低级的错误，让编辑很自然地联想到，该作者不太尊重期刊，还有期刊的编辑以及审稿专家。
因此，作者在投稿前一定要注意期刊参考文献的著录方式，以免产生不必要的负面影响。其实，并不复杂，只要稍稍留意即可。
说到人工智能（AI），相信大家一定很熟悉吧。
随着 科技 的发展，人工智能已经运用到了我们生活的方方面面。
作为一种新兴的颠覆性技术，AI在手机、人脸识别、围棋等领域都有造诣。
但是，大家知道AI在医疗领域也有涉猎吗？
一直以来，“AI+医疗”都是科学家们研究的重点。
它不仅可以减轻医疗的负担，同时也可以减少误诊漏诊的发生。
那么接下来让我们去看看，AI在医疗领域的运用如何。
人工智能和癌症
1 原发不明癌症：找不到原发点的癌症
原发不明癌症（CUP，Cancer of unknown primary）即 肿瘤起源的原发性位点并不能确定。
在现代精准医疗诊疗体系中，有一类患者在就医时其肿瘤组织已经发生转移，且通过现有的检测方法无法找到其肿瘤组织的原发灶，从而无法对其进行标准化治疗，这部分患者生存期短，生存率低，我们称其为“原发不明癌症”患者。
2 用人工智能寻找肿瘤起源
2021年5月5日，哈佛医学院 Faisal Mahmood 团队在《Nature》发表的研究报告中显示，科学家们开发出了一种人工智能（AI）系统，能利用常规获得的组织学切片来 准确寻找转移性肿瘤 的起源，同时还能产生一种“鉴别诊断”策略，用于对原发性不明癌症患者进行诊断。[1]
用TOAD算法
寻找癌症
人工智能（AI）尤其是深度学习（DL）能够大批量地处理高维数据，在哈佛医学院的研究中，AI就能够利用患者组织学切片来寻找转移性肿瘤的起源，同时还能针对原发不明原因的癌症患者产生一种鉴别诊断策略。
这种 基于深度学习的算法 被称之为TOAD算法，能同时识别肿瘤到底是原发性的还是转移性的，还能 预测其起源的位点 。
研究人员利用约2.2万个肿瘤病理学切片来训练该模型，随后在6500个已知的原发病例中检测TOAD算法，并分析越来越复杂的转移性癌症病例，以此来建立针对原发不明癌症的AI模型。
对于已知原发性起源的肿瘤而言，该模型能准确地在83%的时间里正确识别癌症，并在96%的时间里将诊断列入前三名的预测结果中。
然后，研究团队在317个原发灶不明癌症中测试了该AI模型，结果发现该AI模型的诊断与病理学家的一致率为63%，前三名诊断一致率为82％。
AI+医疗
未来的路还很长
AI医疗在未来的
3大发展优势
癌症诊断：
减少诊断“假阳性”
在诊断方面，传统方式是通过计算机辅助检测系统（CAD）进行诊断，这需要专家对数据进行预处理和筛选，以及手工定义诊断规则和相关图像特征，由于过分依赖专家预先设定的标准参数进行诊断，所以容易出现假阳性的情况。
而AI深度学习算法则 可以依靠海量数据自主学习专家的诊断方法，独立自主地处理图像并对疾病进行诊断。
自动提取图像特征：
发现肉眼难以观察到的改变
因为专家在常规阅片时，难以识别如此之多的定量资料，而AI能够同时处理大规模定量资料并建立相关性，并且每一次分析具有可重复性。
例如，肺部的良、恶性结节相似度高，难以肉眼准确区分。
AI能够自动提取影像学生物标志物特征， 检测出人眼难以发现的微小结节， 同时降低假阳性，进而对肺部结节进行鉴别，并将肿瘤风险评估、鉴别诊断、预后预测及治疗疗效相联系。
肿瘤监测及治疗疗效预测：
辅助专家实时监测肿瘤
在肿瘤治疗疗效的监测中，肿瘤体积的变化是重要的评价指标。当肿瘤体积明显缩小时，肉眼可以识别，但如果只是肿瘤质地改变、瘤内异质性改变时，肉眼难以识别。
AI则可以通过处理治疗不同时间节点的MRI/CT图像，学习并提取相应肿瘤质地及异质性改变特征，准确识别肿瘤改变的区域，并给出肿瘤内部变化的热点图，进而辅助临床专家对治疗疗效进行判定。[2]
AI医疗未来3大难点
数据可及性：
缺少数据支撑
可靠的AI模型需大量高质量训练数据支撑，但很多医院或研究机构出于研究保密或患者隐私保护，很难实现数据共享，数据的“孤岛现象”是困扰AI临床应用的关键问题。
模型泛化性：
数据无法通用
泛化性指模型对未训练数据的预测能力，即A医院数据获得的模型在B医院预测的准确性。
模型的泛化性主要受限于数据本身的一致性和数据标签注释的主观性。
不同的拍照设备、光照条件和个体间差异将影响图像数据的一致性，不同的检验仪器、检验试剂也对临床数据影响较大。
结果可解释性：
无法显示参数运算过程
AI尤其是DL因为其内部决策过程被成千上万的训练参数所掩盖，所以实践中AI算法的权重和特征通常是不可解释的，因此，临床医师很难充分把握模型的工作过程和具体影响因素。[3]
当然，以上研究结果只是使用全切片图像来进行人工智能辅助的癌症起源预测的第一步，目前AI在肿瘤领域的应用尚处于初步 探索 阶段。
相信将来会有越来越多的AI医疗数据来建立算法，同时随着AI在不同疾病上的应用经验积累，我们期待AI在诊断水平上会有更大的提升，未来或有望让诊断过程标准化并改善当前的癌症诊断策略。
参考文献：
[1]
[2]袁紫旭, 徐挺洋, 姚建华,等. 人工智能在恶性肿瘤诊治中的应用[J]. 中华实验外科杂志, 2019, 36(2):203-207.
[3]Zhu W, Xie L, Han J, et al. The Application of Deep Learning in Cancer Prognosis Prediction[J]. Cancers (Basel), 2020, 12(3): 603. DOI:10.3390/cancers12030603
外界刺激 (如药物、紫外线和电离辐射) 和内源性自由基和活性氧 (ROS)会直接或者间接地损伤蛋白质、脂质和 DNA 等细胞成分，为了抵御这些不利影响，机体形成了一套复杂的氧化应激应答系统来缓解细胞所受的损害。而 Nrf2 ， 作为 调控抗氧化应激的一种关键转录因子，在诱导机体的抗氧化应答中起着重要作用 ，如调节氧化还原平衡、药物代谢和排泄、能量代谢、铁代谢、氨基酸代谢、生存、增殖、自噬、蛋白酶体降解、DNA 修复和线粒体生理机能。另外，Keap1-Nrf2 系统已成为癌症和神经退行性疾病以及许多自身免疫和炎性疾病的重要治疗靶点。 Nrf2 的自我介绍 ：大家好，我是 Nrf2~我是 Cap'n'collar(CNC) 转录因子家族成员，我的“身体”由七个 Neh 域 (Nrf2 ECH 同源结构域) 组成，每个域具有不同的功能，如 Neh1 CNC-bZIP 域负责与 small Maf (sMAF) 蛋白结合和二聚化；Neh2 结构域通过 DLG 和 ETGE 基序介导与 Keap1 的相互作用；Neh4、Neh5 和 Neh3 域对于 Nrf2 的反式激活非常重要；Neh6 结构域是一个富含丝氨酸的区域，可调节我的稳定性。大家猜猜，我是怎么被激活的呢？ Nrf2 的激活“大戏” 1、经典途径——Keap1-Nrf2 途径 说到 Nrf2 的经典激活机制，不得不提一提 Nrf2 老搭档——Keap1 (Kelch ECH 相关蛋白 1)。Keap1 是一种 Cullin3 (Cul3) 依赖性的 E3 泛素连接酶复合物的底物衔接蛋白，可与 Cul3 和 Rbx1 组装成功能性 E3 泛素连接酶复合物 (Keap1-Cul3-E3)，进而对 Nrf2 进行调控。Keap1 含有三个功能域，包括一个 BTB 结构域，一个 IVR 和一个 Kelch 或 DGR 结构域。BTB 结构域结合 Cul3，是 Keap1 二聚化所必需的。Kelch/DGR 结构域可与上面提到的 ETGE 和 DLG 基序相互作用，这对于维持 Nrf2 和 Keap1 之间的相互作用至关重要。IVR 连接了 BTB 和 Kelch/DGR 结构域，含有一些可调节 Keap1 的活性的半胱氨酸残基。 在正常的生理条件下，Keap1-Cul3-E3 泛素连接酶靶向位于 Nrf2 N 端的 Neh2 结构域 (位于 DLG 和 ETGE 基序之间) 的多个赖氨酸残基，并促进泛素化，随后泛素化的 Nrf2 被递送至 26S 蛋白酶体进行降解。[PS: DLG 和 ETGE 与 Keap1 中的 Kelch 域相互作用，一般称为“铰链和闩锁” (Hinge-and-latch model) 模型]。 而暴露于 ROS、亲电胁迫会使 Keap1 中特定的半胱氨酸残基被修饰，引起 Keap1-Cul3-E3 泛素连接酶的构象变化，干扰 Nrf2 泛素化，随后 Nrf2 易位至细胞核，通过与 sMAF 蛋白的异二聚化作用结合到靶基因的 ARE/EpRE (抗氧化反应元件/亲电响应元件) ，诱导一系列细胞保护性基因表达，如 NQO1 、 GST 、 HMOX1 、 GCL 、 GSH 等。2、非经典途径——自噬-溶酶体途径 除 Keap1-Nrf2 途径外，Nrf2 激活的非典型机制，即 自噬-溶酶体途径是由自噬功能障碍驱动的 ，自噬-溶酶体途径在介导氧化应激中也起关键作用。自噬是一种严格调控的细胞降解途径，负责清除受损的蛋白质和细胞器，包括氧化受损的蛋白质和功能异常的线粒体，自噬可以是非选择性的，也可以是选择性的。p62/SQSTM1 (以下称 p62) 是一种选择性自噬的经典受体，用于降解泛素化的底物。p62 参与许多信号转导途径，其中包括 Keap1-Nrf2 途径。自噬功能障碍 (如 Atg5 、 Atg7 缺失，*毒物环境等引起)则会导致自噬衔接蛋白的 p62 的积累。由于 p62 是能与许多蛋白相互作用的多域蛋白，它的积累会导致许多结合蛋白的隔离和功能丧失，包括 Keap1。研究表明，p62 与 Nrf2 竞争结合 Keap1，这种相互作用使 p62 可以将 Keap1 螯合到自噬体中，从而阻止了 Keap1 介导的 Nrf2 降解，导致 Nrf2 通路激活。 Nrf2 在癌症中的两面做派 在生理条件下，Nrf2 维持细胞的氧化还原稳态，并发挥抗炎功能和进一步的抗癌活性，从而支持细胞存活。因此，Nrf2 的激活在癌症化学预防中很重要。但是，Nrf2 的过度活化也会赋予癌细胞多种优势，比如保护癌细胞免于凋亡和衰老，促进细胞生长，介导癌细胞对化疗和放疗的抗性等。1、Nrf2的阳光面——激活抑制肿瘤发生 Nrf2-Keap1 途径的激活是抗肿瘤发生的最重要机制之一。通过靶向 Nrf2/ARE 途径来调控基因，进而发挥化学预防作用的一些化合物，不仅包括合成化合物如 Oltipraz ，还有一些植物来源的化合物，例如 Sulforaphane 、 Curcumin 、 Resveratrol 等。 2、Nrf2 的阴暗面——组成型激活促进癌症的发展 一些研究表明在各种癌症中 Nrf2 信号通路组成性激活会促进癌细胞的生长和增殖，阻止细胞凋亡，增强癌症干细胞 (CSC) 的自我更新能力，更重要的是，可增强癌细胞的化学耐药性和放射抗性。因此，阻断 Nrf2 信号是一种有前途的癌症治疗方法，特别是对于 Nrf2 水平升高的癌症。靶向 Nrf2 的抑制剂也有很多，比如 Brusatol 、ML385、 Luteolin 、Ochratoxin A、 Retinoic acid (ATRA)、 Trigonelline 等。 另外，据报道有几种机制可增强癌症中Nrf2 的活性，如 (1)体细胞的 KEAP1 、 CUL3 或 Nrf2 突变；(2) Keap1 的表观遗传沉默；(3) 破坏 Nrf2 和 Keap1 之间相互作用的蛋白质异常积累，如改变 Nrf2-Keap1 结合的 p21、p62；(4) 通过癌基因依赖性信号传导导致的 Nrf2 转录上调，如癌基因 K-Ras 通过 Mek-Erk-Jun 信号通路激活 Nrf2 转录；(5) 通过代谢中间体修饰 Keap1 等。 总而言之，Nrf2 的激活在癌症中作用是双重的。 为了预防氧化和炎症应激导致的慢性疾病和癌症，增强 Nrf2 的活性仍然是一种传统而有效的方法。但 Nrf2 在各种癌症中的组成性激活又会促进癌细胞增殖并导致癌细胞的化学抗性、放射抗性。因此，想知道 Nrf2 的激活是否会导致癌症，如何靶向 Nrf2 (直接或间接抑制上游蛋白激酶)，以及对 Keap1 结构进一步确定，还需要大家继续努力搞科研啦！ Nrf2 激活剂 Sulforaphane 可以激活 Nrf2，并通过 AMPK 依赖性信号传导抑制高糖诱导的胰腺癌。 Curcumin 乙酰转移酶 p300/CREB 结合蛋白特异性抑制剂；通过 Keap1 半胱氨酸修饰诱导 Nrf2 蛋白的稳定。 TBHQ 广泛使用的 Nrf2 激活剂，通过激活 Nrf2 来免受 Doxorubicin (DOX) 诱导的心脏毒性。 Resveratrol 天然多酚，具有抗氧化、抗炎、保护心脏和抗癌的特性。它的靶点广泛，例如 mTOR、JAK、β-amyloid、Adenylyl cyclase、IKKβ、DNA polymerase，也是 Nrf2 激活剂。 Oltipraz 一种 HIF-1α 激活抑制剂，也是强效的 Nrf2 激活剂。 Carnosol 一种有效的核糖体 S6 激酶 (RSK2) 抑制剂；Nrf2 激活剂，能提高细胞核内 Nrf2 的水平。 Nrf2 抑制剂 Brusatol 可抑制 Nrf2，通过一种不依赖于 Keap1、蛋白酶体和自噬蛋白降解系统的机制激发 Nrf2 的消耗。 Luteolin 有效的 Nrf2 抑制剂，具有抗炎和抗癌特性。 Retinoic acid RAR 核受体的天然激动剂，对 RARα/β/γ 作用的IC50为 14 nM；可以通过激活视黄酸受体抑制 Nrf2。 Trigonelline 有潜在抗糖尿病活性的生物碱；有效的 Nrf2 抑制剂，能阻断 Nrf2 依赖性的蛋白酶体活性。 缩写： BTB domain: Broadcomplex/tramtrack/bric-a-brac domain IVR: Intervening region DGR domain: Double glycinerepeat domain参考文献 1. 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