1、将样本做去皮和去脂处理，并用均质器均质样本，然后称取适量的均质物至离心管内。2、依次加入蒸馏水、试剂A、衍生化试剂，振荡混匀后孵育半小时。3、依次加入试剂B、试剂C、提取剂，并振荡混匀。4、离心5分钟，取上层有机相至离心管内，再用氮气吹干。5、用净化剂溶解干燥物，加入试剂D，离心2分钟后待检。
一、鸡新城疫抗体检测步骤
1、将鱼虾蟹、畜禽肉、内脏等样本做去皮、去脂肪等处理，再用均质器均质样本，然后称取3±克均质物至15毫升的离心管内。
2、依次加入4毫升蒸馏水、毫升试剂A以及毫升衍生化试剂，并振荡混匀，于65℃水浴中孵育半小时。
3、依次加入1毫升试剂B、毫升试剂C、1瓶4毫升的提取剂，然后振荡混匀。
4、在室温下（20-25℃）以4000r/分钟的速度离心5分钟，取2毫升上层有机相至5毫升的离心管内，在50-60℃水浴中用氮气（或空气吹干仪）吹干。
5、取1毫升净化剂溶解干燥物，再加入毫升试剂D振荡混匀，在室温下（20-25℃）以4000r/分钟的速度离心2分钟，最后待检。
6、若使用全血标本进行检测，标本的移动速度可能较慢，必要时可在加样1分钟后，向加样孔内滴入1滴PBS作辅助液，以促进标本移动。
二、鸡新城疫的症状表现
1、急性型
（1）病鸡呼吸困难，会发出“咕噜”的特殊怪声。
（2）病鸡的嘴、鼻中有大量黏液，产蛋量下降。
（3）病鸡出现下痢，其粪便的颜色为黄白色或绿色，有麻痹和神经症状。
2、最急性型
此类症状大多出现在3-4周龄的小鸡身上，发病时通常不会表现出任何症状，但病发后小鸡会快速死亡。
3、亚急性或慢性型
病鸡出现跛行、麻痹、痉挛、运动失调、肌肉抽搐等症状，产蛋鸡发病后期产量会有所降低，一般会发生于成年鸡身上。
4、非典型性新城疫
病鸡出现咳嗽、呼吸困难的现象，且伴有分泌物、神经症状，若蛋鸡和种鸡发病，则产蛋量一般会急速降低。
微生物学诊断 （一）病毒的分离 1．鸡胚分离法。 2．细胞培养分离法 将经过处理的检样材料接种于鸡肾单层细胞或鸡胚成纤维单层细胞上，经过35～37℃孵育2d，观察单层细胞上出现的蚀斑 （二）血清学试验 1. 红细胞凝集抑制试验（HI） 应用已知鸡新城疫病毒来检测病鸡体内的抗体。病程5～6d以上者，血液有抗体产生，病程10d以上者，其抗体效价可达1:1280或更高，所以应用已知病毒来测定可疑血清的方法更有实际意义。 免疫与治疗 严格按照免疫程序接种。雏鸡10～12日龄首免,用Ⅳ系苗点眼和滴鼻；25～30日龄二免,用Ⅳ系苗饮水免疫；60～70日龄三免,用Ⅰ系苗或油乳剂灭活苗皮下注射,以后每隔半年加强免疫１次。
步骤 (1)发现与鉴定病毒 (2)诊断病毒性疾病（3免疫机体抗体效价的测定 测定(鸡新城疫（ND）的HA和HI)一般以鸡新城疫Ⅱ系或LaUra系冻干苗作为已知抗原，进行试验。
1、将样本做去皮和去脂处理，并用均质器均质样本，然后称取适量的均质物至离心管内。2、依次加入蒸馏水、试剂A、衍生化试剂，振荡混匀后孵育半小时。3、依次加入试剂B、试剂C、提取剂，并振荡混匀。4、离心5分钟，取上层有机相至离心管内，再用氮气吹干。5、用净化剂溶解干燥物，加入试剂D，离心2分钟后待检。
一、鸡新城疫抗体检测步骤
1、将鱼虾蟹、畜禽肉、内脏等样本做去皮、去脂肪等处理，再用均质器均质样本，然后称取3±克均质物至15毫升的离心管内。
2、依次加入4毫升蒸馏水、毫升试剂A以及毫升衍生化试剂，并振荡混匀，于65℃水浴中孵育半小时。
3、依次加入1毫升试剂B、毫升试剂C、1瓶4毫升的提取剂，然后振荡混匀。
4、在室温下（20-25℃）以4000r/分钟的速度离心5分钟，取2毫升上层有机相至5毫升的离心管内，在50-60℃水浴中用氮气（或空气吹干仪）吹干。
5、取1毫升净化剂溶解干燥物，再加入毫升试剂D振荡混匀，在室温下（20-25℃）以4000r/分钟的速度离心2分钟，最后待检。
6、若使用全血标本进行检测，标本的移动速度可能较慢，必要时可在加样1分钟后，向加样孔内滴入1滴PBS作辅助液，以促进标本移动。
二、鸡新城疫的症状表现
1、急性型
（1）病鸡呼吸困难，会发出“咕噜”的特殊怪声。
（2）病鸡的嘴、鼻中有大量黏液，产蛋量下降。
（3）病鸡出现下痢，其粪便的颜色为黄白色或绿色，有麻痹和神经症状。
2、最急性型
此类症状大多出现在3-4周龄的小鸡身上，发病时通常不会表现出任何症状，但病发后小鸡会快速死亡。
3、亚急性或慢性型
病鸡出现跛行、麻痹、痉挛、运动失调、肌肉抽搐等症状，产蛋鸡发病后期产量会有所降低，一般会发生于成年鸡身上。
4、非典型性新城疫
病鸡出现咳嗽、呼吸困难的现象，且伴有分泌物、神经症状，若蛋鸡和种鸡发病，则产蛋量一般会急速降低。
一.新城疫的预防工作是一项综合性工程。饲养管理，防疫，消毒，免疫，治疗及监测六个环节缺一不可。不能单纯依赖疫苗来控制疾病。加强饲养管理和兽医卫生，注意饲料营养，减少应激，提高鸡群的整体健康水平；特别要强调全进全出和封闭式饲养制，提倡育雏、育成、成年鸡分场饲养方式。严格防疫消毒制度，杜绝强毒污染和入侵。建立科学的适合于本场实际的免疫程序，充分考虑母源抗体水平，疫苗种类及毒力，最佳剂量和接种途径，鸡种和年龄。坚持定期的免疫监测，随时调整免疫计划，使鸡群始终保持有效的抗体水平。一旦发生非典型ND，应立即隔离和淘汰早期病鸡，全群紧急接种3倍剂量的LaSota（Ⅳ系）活毒疫苗，必要时也可考虑注射Ⅰ系活毒疫苗。如果把3倍量Ⅳ系活苗与ND油乳剂灭活苗同时应用，效果更好。对发病鸡群投服多维和适当抗生素，可增加抵抗力，控制细菌感染。参考免疫程序：1.肉仔鸡7日龄LaSota或Clone-30弱毒苗滴鼻、点眼；24～26日龄LaSota喷雾免疫或Ⅰ系苗肌肉注射。或7日龄ND-Ⅳ系或Clone-30弱毒苗点眼+灭活苗皮下注射；15日龄LaSota弱毒苗点眼，或喷雾，或2倍量饮水。2.蛋鸡和肉种鸡7日龄LaSota滴鼻点眼，同时ND灭活苗肌肉注射；28日龄LaSota喷雾免疫或2倍量饮水；9周龄Lasota喷雾免疫；必要时可考虑用Ⅰ系苗注射补强；开产前2～3周ND+EDS+IB三联灭活苗肌肉注射，二.（1）综合防制措施加强饲养管理，提高鸡的抗病力和对免疫的应答。严格隔离消毒，切断传播途径。大中型鸡场应执行“全进全出”制度，谢绝参观，加强检疫，防止动物进入易感鸡群，工作人员、车辆进出须经严格消毒处理。（2）预防接种：我国最常用的疫苗有鸡新城疫Ⅰ、Ⅱ、L（Lasota）系活疫苗和油乳灭活疫苗。Ⅰ系苗是一种中等毒力的活苗，产生免疫力快（3～4天），免疫期长，可达1年以上，但对雏鸡有一定的致病性，常用于经过弱毒力的疫苗免疫过的鸡或2月龄以上的鸡，多采用肌注或刺种的方法接种。Ⅱ系和L系苗属弱毒力苗，大小鸡均可使用，多采用滴鼻、点眼、饮水及气雾等方法接种。油乳灭活疫苗对鸡安全，可产生坚强而持久的免疫力，另外不会通过疫苗扩散病原，但是注射后需10～20天才产生免疫力。疫苗使用应根据实际情况制定出自己的免疫程序和免疫途径。大型鸡场多采用气雾和饮水免疫；小型鸡场和农家养鸡可采用滴鼻和注射等方法。现介绍几个免疫程序供参考。小型鸡场和农户养鸡的免疫程序：第一次，4～7日龄雏鸡用Ⅱ系苗滴鼻免疫，25～30日龄用Ⅱ系或L系弱毒苗进行第二次免疫（滴鼻或饮水）。2月龄后用Ⅰ系苗肌注免疫疫期可持续一年以上。在有零星新城疫发生的鸡场或鸡群，可参考下列免疫程序：雏鸡在3～5日龄时以Ⅱ系苗滴鼻免疫，至17～21日龄仍以Ⅱ系或L系苗滴鼻或饮水进行第二次免疫，待2月龄后用Ⅰ系苗肌注。对产蛋鸡或种鸡可每年进行1～2次Ⅰ系苗肌注免疫。鸡新城疫油乳灭活疫苗可用于任何年龄的鸡。2周龄以内的雏鸡皮下或肌肉注射0．2毫升，同时以Ⅱ系或L系苗滴鼻，鸡很快产生免疫力，免疫期可达70～140天；肉鸡以此法1次免疫，可保护至出售，2月龄以上的鸡用0．5升注射，免疫期可达10个月以上；经弱毒苗免疫过的育成鸡。在开产前2～3周注射毫升，整个产蛋期均可得到保护。大型鸡场应建立免疫监测，定期测定母源抗体水平和鸡群的血凝抑制效价（HI），以便制定科学的免疫程序。（3）鸡场发生鸡新城疫的处理：鸡群一旦发生本病，首先将可疑病鸡检出焚烧或深埋，被污染的羽毛、垫草、粪鸡新城疫病变内脏便亦应深埋或烧毁。封锁鸡场，禁止转场或出售，立即彻底消毒环境，并给鸡群进行注射感康多肽（天宇生物）配合刀豆素混合饮水，每瓶用于1000羽成禽，2000羽雏禽，病情严重的连用2-3天。
几点关于疫苗使用的注意事项，帮助大家能够做到成功免疫，健康养殖。只知道使用疫苗，但忽视了平常消毒工作：使用新城疫疫苗可以使鸡体产生一种抵抗新城疫病毒的物质，这也就是我们常说的抗体。抗体维持时间的长短与环境中病毒的数量有直接关系。若环境中病毒的数量多的话，它不断和体内的抗体中和，抗体维持的时间就短。故疫苗虽然用了，但消毒不彻底，还是容易发生新城疫的。2.疫苗选择上存在问题：市场上所使用的新城疫活苗主要有两种，一种是普通苗，一种是SPF苗。疫苗本身是使用鸡蛋提取的，普通苗是普通鸡下的蛋提取的，这种苗或多或少都会含有一定量的病菌（如：支原体）。SPF苗是使用SPF种鸡产的蛋提取的，这种种鸡是饲养在特定的环境中的（空气、水、饲料都经过处理的，本身不带病菌）。为什么有些疫苗使用后会产生严重的呼吸道症状，排除正常的疫苗后应激和外界感染外，有些原因与疫苗本身是分不开的。故选用疫苗时应尽量使用SPF苗。3.养殖户为省事首次使用疫苗采用饮水免疫，导致后期新城疫常发：新城疫活苗最佳使用方式是滴鼻点眼（相对饮水效果，一方面可以克服饮水防疫不均匀现象；另一方面可以提高呼吸道的抗病力，大家可能都有这样的体会，就是鸡一旦发生新城疫，往往都是从呼吸道开始的，为什么呢？根本的一点就是呼吸道粘膜的抵抗力下降了，而新城疫的主要感染途径主要通过呼吸道感染。滴鼻点眼可有效提高呼吸道粘膜的抵抗力），特别是在首免，基础免疫非常重要。4.养殖户重视油苗预防，忽视活苗预防：使用油苗注射虽然比较均匀，抗体维持时间较长，但它只能提高血液中的抗体水平，并不能提高呼吸道粘膜的抗体水平，从而不能有效阻止新城疫从呼吸道感染。新城疫疫苗使用最可靠的办法就是——油苗结合活苗使用。5.活苗饮水水质存在问题：如新城疫疫苗本身就很敏感，阳光照射、金属容器盛放都会使疫苗被破坏，差的水质也不例外。水中所含的许多矿物质（如Ca、Fe、Mg）都会对疫苗产生影响。为了提高饮水使用疫苗的效果最好使用凉开水，水中应加入脱脂奶粉、免疫增强剂（如胸腺肽）。有的地区疫苗（活苗）质量不错，但水质比较差，往往饮水后没有几天就出现病症。采用凉开水饮用，大大降低了新城疫的发病率。6.疫苗使用的剂量过大或两次间隔的时间不合理：新城疫疫苗的用量并不是越大越好，若用多了，可产生严重毒性反应（疫苗本身是有一定的毒性的，用多了会激发严重的呼吸道症状），或者产生免疫麻痹（疫苗用多了，疫苗一点作用不起，不能产生抗体了）。间隔时间过短，使用过频，会产生严重的毒性反应。若间隔时间过长，由于体内抗体过度消耗，抗体水平过低，机体对于新城疫的抵抗力明显降低，若此时再使用新城疫活苗防疫的话，疫苗本身的毒性及应激造成抵抗力下降，外界再有新城疫病毒感染的话，很容易激发新城疫的发生。总之，合理的疫苗使用是成功养殖的基础，预防的效果远远高于治疗效果，希望大家能够对于免疫做到足够的重视，正确规范的免疫预防疾病，控制疾病的发生！
鸡新城疫，由副粘病毒引起的高度接触性传染病。又称亚洲鸡瘟或伪鸡瘟。常呈急性败血 鸡新城疫鸡新城疫症状。主要特征是呼吸困难、便稀、神经紊乱、粘膜和浆膜出血。死亡率高，对养鸡业为害严重。发病的早晚及症状表现依病毒的毒力、宿主年龄、免疫状态、感染途径及剂量、并发感染、环境及应激情况而有所不同。该病以呼吸道和消化道症状为主，表现为呼吸困难，咳嗽和气喘，有时可见头颈伸直，张口呼吸，食欲减少或死亡，出现水样稀粪，用药物治疗效果不明显，病鸡逐渐脱水消瘦，呈慢性散发性死亡。剖检病变不典型，其中最具诊断意义的是十二指肠粘膜、卵黄病柄前后的淋巴结、盲肠扁桃体、回直肠粘膜等部位的出血灶及脑出血点。发病的早晚及症状表现依病毒的毒力、宿主年龄、免疫状态、感染途径及剂量、并发感染、环境及应激情况而有所不同。该病以呼吸道和消化道症状为主，表现为呼吸困难，咳嗽和气喘，有时可见头颈伸直，张口呼吸，食欲减少或死亡，出现水样稀粪，用药物治疗效果不明显，病鸡逐渐脱水消瘦，呈慢性散发性死亡。剖检病变不典型，其中最具诊断意义的是十二指肠粘膜、卵黄病柄前后的淋巴结、盲肠扁桃体、回直肠粘膜等部位的出血灶及脑出血点。主要成分:新支流等多联特异免疫型乳杆菌及其代谢产品、益生菌保护剂等组成活菌总数*10CFU/瓶用法用量：预防：6000羽/瓶 治疗：3000羽/瓶，2小时饮完。预防方案：肉鸡、肉鸭：7，17，27日龄各用一次，6000羽一瓶。配合治疗时加倍使用。蛋鸡，麻鸡，三黄鸡等：3000羽/瓶，种鸡：6000羽/瓶。咨询电话：
1. Vongxay K, Wang SN, Zhang XF, Wu BB, Hu HX, Pan ZJ, Cheng SY, Fang WH. Pathogenetic Characterization of Vibrio parahaemolyticus Isolates from Clinical and Seafood Sources. International Journal of Food Microbiology, 2008, . 王淑娜，方维焕。荧光定量PCR法检测副溶血弧菌tdh基因的表达差异。畜牧与兽医，2008，已录用。3. 陈 阳，吴 迪，陈雪燕，赵焕灿，扈鸿霞，Cheick A Diakite，方维焕。猪链球菌2型分离株对野生斑马鱼的致病性。动物医学进展，2008，已录用。4. 刘刚，李肖梁。犬瘟热病毒H基因的序列分析与表达。畜牧与兽医，2008，已录用。5. 陈健舜, 李肖梁，田国明，马有智，方维焕。检测猪链球菌2型的三重PCR方法建立与应用。中国兽医学报, 2008,已录用。6. Vongxay K, Pan ZJ, Zhang XF, Cheng SY, Mei LL, XU C, Wang SN, Fang WH. Occurrence of pandemic clones of Vibrio parahaemolyticus isolates from seafood and clinical samples in a Chinese coasting province. Foodborne Pathogens and Disease, 2008, 5(2):. Yang ZZ, Shuai JB, Dai XJ, Fang WH. A survey on porcine circovirus type 2 infeciton and phylogenetic analysis of its ORF2 gene in Hangzhou, Zhejiang Province. Journal of Zhejiang Univ Science B, 2008, 9(2):. Jiang LL, Chen JS, Xu JJ, Zhang XF, Wang SN, Zhao HC, Vongxay K, Fang WH. Virulence characterization and genotypic analyses of Listeria monocytogenes isolates from food and processing environments in eastern China. International Journal of Food Microbiology, 2008, 21(1): . Shuai JB, Li XL, Chen N, Chen CY, Fang WH. Characterization and potential use of truncated PCV2 capsid protein and its polyclonal antibody for diagnosis of PCV2 infections. Acta Microbiologica Sinica, 2008:4891):. Shuai JB, Wei W, Jiang LL, Li XL, Chen N, Zhang ZF, Fang WH. Mapping of nuclear localization signals in open reading frame 2 protein from porcine circovirus type 1. Acta Biochimica et Biophysica Sinica, 2008, 40(1):. Chen N, Hu HX, Zhang ZF, Shuai JB, Fang WH. Genetic diversity of the envelope glycoprotein E2 of classical swine fever virus: Recent isolates branched away from historic and vaccine strains. Veterinary Microbiology, 2007, 127:. Shuai JB, Wei W, Li XL, Chen N, Zhang ZF, Chen XY, Fang WH. Genetic characterization of porcine circovirus type 2 (PCV2) from pigs in high-seroprevalence areas in southeastern China. Virus Genes, 2007, 35:. 陈健舜,江玲丽,方维焕。李斯特菌毒力因子及其进化探讨。微生物学报，2007, 47(4):738-742。14. 徐 程，陈亚波，方维焕。O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的原核表达与抗原性分析。动物医学进展，2007，28（6）：14-18。15. 应薇芳，赵焕灿，钱 娅，方维焕。浙江部分地区屠宰场待宰猪链球菌的检测及药敏试验。动物医学进展，2007，28（6）：24-26。16. 潘自降，坎 布，沈 飙，娄高明，方维焕。副溶血弧菌海产品和临床分离株的表型及溶血素相关基因分析。微生物学报，2007，47（3）：508-511。17. 田国明，李肖梁，陈健舜，陈雪燕，方维焕。单核细胞增多性李斯特菌LMO1847基因在不同应激条件下的表达。畜牧与兽医，39(7):7-10。18. Chen XY, Xu JJ, Shuai JB, Chen JS, Zhang ZF, Fang WH. The S-layer proteins of Lactobacillus crispatus strain ZJ001 is responsible for competitive exclusion against Escherichia coli O157:H7 and Salmonella typhimurium. International Journal of Food Microbiology，2007,115(3):. Yang ZZ, Habib M, Shuai JB, Fang WH. Detection of PCV2 DNA by SYBR Green I-based quantitative PCR, Journal of Zhejiang University Science B, 2007, 8(3):. Jiang LL, Ke CL, Xu JJ, Chen JS, Chen XY, Chen N, Shuai JB, Fang WH. Listeria monocytogenes mutants carrying Newcastle disease virus F gene fused to its actA and plcB: In vitro expression and immunogenicity in chickens, Acta Biochimica et Biophysica Sinica, 2007, 39(1):57-6621. 陈亚波，徐 程，张桂芝，方维焕。新城疫病毒HN蛋白抗原表位分析及结构域基因原核表达。中国预防兽医学报，2007，29（1）：32-3522. Li XL, Shuai JB, Fang WH*. Protection of Carassius auratus Gibelio against infection by Aeromonas hydrophila using specific immunoglobulins from hen egg yolk. Journal of Zhejiang University Science B, 2006, 7(11):. Yang ZZ, Fang WH, Habib M. First Results of Detection of PRRSV and CSFV RNA by SYBR Green I-based Quantitative PCR. Journal of Veterinary Medicine B, 2006;53(10):. Li L, Fang WH, Li JR, Huang YW, Yu L. Oral DNA vaccination with the polyprotein gene of infectious bursal disease virus (IBDV) delivered by attenuated Salmonella elicits protective immune responses in chickens. Vaccine, 2006, 24(33-34):. John Dikki M, Chen XY, Chen N, Fang WH*. Attenuated Salmonella typhimurium as a carrier for prokaryotic and eukaryotic expression vectors, Journal of Zhejiang University (Agric. & Life Sci., ed), 2006, 32(3):. Fang WH, Birgitte B, Siegumfeldt H. Leucocins 4010 from Leuconostoc carnosum cause a matrix related decrease in intracellular pH of Listeria monocytogenes, FEMS Microbiology Letters, 2006, 258(2): 208-21327. Jiang LL, Xu JJ, Chen N, Shuai JB, Fang WH. Virulence phenotyping and molecular characterization of a low-pathogenicity Listeria monocytogenes isolate from milk, Acta Biochimica et Biophysica Sinica, 2006, 38(4):. 徐晶靓, 江玲丽, 陈 宁, 帅江冰, 方维焕。携带外源基因的重组减毒单核细胞增多性李斯特菌构建与鉴定。微生物学报，2006,46(3):445-450。29. Vongxay KP, Cheng SY, Zhou XY, Shen B, He XL, Zhang GZ, Fang WH Prevalence of Vibrio parahaemolyticus in seafoods and their processing environments as detected by Duplex PCR. Journal of the Science of Food and Agriculture, 2006, 86(12): . 张桂芝，陈亚波，徐 程，张朝政，方维焕。新城疫病毒F蛋白结构域基因原核表达与抗原表位分析。浙江大学学报（农业与生命科学版）2006，32（1）：82-87。31. 杨宗照, 方维焕。猪瘟合并猪繁殖呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)感染。中国兽医学报, 2006,26(3):. Zeng HY, Zhang XF, Sun Z, Fang WH. Multiplex PCR identification of Listeria monocytogenes isolates from milk and milk-processing environments. Journal of the Science of Food and Agriculture, 2006, 86(3):. Yang ZG, Sun HX, Fang WH. Haemolytic activities and adjuvant effect of Astragalus membranaceus saponins (AMS) on the immune responses to ovalbumin in mice. Vaccine, 2005, 23 (44): . 李肖梁, 尹兆正, 钱娅，朱志刚，方维焕。抗嗜水气单胞菌IgY的提纯及体外抑菌效果研究。浙江大学学报（农业与生命科学版）, 2005, 31(4):. 戴贤君, 方维焕。减毒沙门氏菌为载体的口服生长抑素DNA疫苗对草鱼安全性。中国兽医学报, 2005，25(5):. 戴贤君, 方维焕。减毒沙门氏菌为载体的草鱼口服生长抑素DNA疫苗构建及其稳定性。中国兽医学报 , 2005, 25(4):. 马有智，戴贤君,李肖梁，方维焕。表达猪链球菌溶血素基因的减毒沙门氏菌的构建及鉴定。中国兽医学报, 2005,25(5):478-480。38. 陈雪燕, John M. Dikki, 江玲丽, 帅江冰, 方维焕。重组质粒在减毒沙门氏菌中的稳定性及其对细菌侵袭力的影响。微生物学报，2005，45(5):. 贺晓龙, 张桂芝，方维焕。动物性食品中大肠埃希氏菌O157:H7特异性PCR方法的建立。中国兽医科技, 2005, 35(8):. Ke CL, Song HH , Jiang LL, Zeng HY, Zhang GZ, Fang WH. Construction of the recombinant Listeria monocytogenes mutant expressing green fluorescent protein. Journal of Zhejiang University (Agric. & Life Sci., ed), 2005, 31(5): . Jiang LL, Song HH, Chen XY, Ke CL, Xu JJ, Chen N, Fang WH. Characterization of a Mutant Listeria monocytogenes Strain Expressing Green Fluorescent Protein. Acta Biochimica et Biophysica Sinica, 2005, 37(1): 19–2442. Song HH, Wang ZL, Zheng DX, Fang WH, Li Y, Liu YY, Niu ZD, Qiu BS. A novel mucosal vaccine against foot-and-mouth disease virus induces protection in mice and swine. Biotechnology Letters, 2005, 27(21):. Song HH, Fang WH, Wang ZL et al. Detection of foot-and-mouth virus antibodies using a purified protein from the high-level expression of codon-optimized, foot-and-mouth disease virus complex epitopes in Escherichia coli. Biotechnology Letters, 2004, 26(16):1277-128144. 姜中其，陈晓红，方维焕，张应勤，孙建华。规模化猪场仔猪断奶腹泻大肠杆菌耐药性监测。浙江大学学报（农业与生命科学版），2004, 30(5):. 张晓峰，方维焕，程洁，施伟良。李斯特菌选择性增菌培养分离比较研究。中国公共卫生, 2004, 20(6):. 马有智，李肖梁，方维焕。猪链球菌2型溶血素基因PCR快速检测方法研究。浙江大学学报（农业与生命科学版）2004，30（1）：78-8247. 李 龙，方维焕, 樊拥军，许 健，方 立，李建荣，于 涟。减毒沙门氏菌为载体在Vero细胞中表达传染性法氏囊病病毒多聚蛋白基因。生物工程学报，2004，20（3）：437-440。48. Fang WH, Siegumfeldt H, Budde BB, Jakobsen M. Osmotic stresses led to decreased intracellular pH of Listeria monocytogenes as analyzed by fluorescence ratio-imaging microscopy. Applied & Environmental Microbiology, 2004, 70(5):. Song HH, Zhou L., Fang WH, Li Yong et al. High level expression of codon optimized food-and-mouth disease virus complex epitopes and cholera toxin B subunit chimera in Hansenula polymorpha. Biochemical and Biophysical Research Communications, 2004, 315(1):. Song HH, Li Y., Fang WH, Geng YF et al. Development of a set of expression vectors in Hansenula polymorpha. Biotechnology Letters, 2003, 25:. 谢荣辉，方维焕，李建荣，卢觅佳，于涟。萧山鸡IL-2基因真核表达载体构建及其在VERO细胞中的表达。浙江大学学报，2003，29（6）：649-654。52. 梁雪芽，方维焕，江玲丽。鸡新城疫口服DNA疫苗的安全性、稳定性与免疫效力。 生物工程学报，2003，19（1）：24-29。53. 马有智，方维焕，柯春林，张晓峰。猪链球菌2型JX分离株的生物学特性。中国兽医学报，2003,23（4）：326-328。54. 马有智，方维焕。猪链球菌血清2型JX02株溶血素基因的克隆及序列分析。中国兽医学报， 2003，23（5）：460-46255. 方维焕，梁雪芽，李建荣。减毒沙门氏菌为载体传递DNA疫苗诱导对鸡新城疫病毒的免疫保护。中国兽医学报，2003,23(6):527-529。56. 张晓峰，李爱云，方维焕，江玲丽，柯春林。多重聚合酶链反应鉴别单核细胞增生李斯特菌的研究。中华检验医学杂志，2003，26（2）93。57. 张晓峰，方维焕，江玲丽，杜华华。应用聚合酶链反应检测食品中单核细胞增多性李斯特菌。中国预防医学杂志， 2003，37（3）：199。58. 方维焕。食品安全标准和监控体系建设需尽快与国际接轨。国际学术动态，2003，1：15-18。59. 张晓峰，程 洁，方维焕。抗李斯特菌免疫机理研究进展。中国人兽共患病杂志，2003，19（5）：113-115。60. 方维焕、梁雪芽。减毒沙门氏菌为载体在真核细胞中表达鸡新城疫病毒F蛋白的研究。生物化学与生物物理学报，2002,34(4):488-493。61. Zhong BX, Weng HB, Fang WH. Preparation of protein samples for gel electrophoresis by sequential extraction. Journal of Zhejiang University, Science ed., 2002，3（5）. 宋厚辉，方维焕。猪链球菌ZJ株溶血素基因的克隆和序列分析。中国预防兽医学报，2002，24（2）：103-10563. 梁雪芽，方维焕。猪生殖与呼吸综合征病毒的分子生物学研究进展。中国兽医科技.2001,31(8).14-1764. 宋厚辉，方维焕。 产气荚膜梭菌主要毒力因子的分子生物学研究进展。预防兽医学进展，2001，3（1）：13-16。65. Fang WH, Almeida ., & Oliver . Effects of lactoferrin and milk on adherence of Streptococcus uberis to bovine mammary epithelial cells. American Journal of Veterinary Research, 2000, 3:. Fang WH. & Oliver S. P. Identification of lactoferrin-binding proteins from bovine mastitis causing Streptococcus uberis. FEMS Microbiology Letters, 1999, 176:. Almeida ., Fang WH., & Oliver . Adherence and internalization of Streptococcus uberis to bovine mammary epithelial cells are mediated by host cell proteoglycans. FEMS Microbiology Letters, 1999, 177:. Fang WH., Luther D. A. & Oliver S. P. Protein expression by Streptococcus uberis in co-culture with bovine mammary epithelial cells. FEMS Microbiol. Letters, 1998, 166:. Fang WH., Luther D. A., Almeida R. A. & Oliver S. P. Decreased growth of Streptococcus uberis in milk from mammary glands of cows challenged with the same mastitis pathogen. Journal of Veterinary Medicine B, 1998, 45:. Ali-Vehmas T., Vikerpuur M., Fang WH., and Sandholm M. Giving selenium supplements to dairy cows strengthens the inflammatory response to intramammary infection and induces a growth-suppressing effect on mastitis pathogens in whey. Journal of Veterinary Medicine A, 1997, 44:. Fang WH., Myllys V. & Sandholm M. Resazurin reduction as a function of respiratory burst of bovine polymorphonuclear neutrophils. American Journal of Veterinary Research, 1997, 58(6):. Fang WH. A novel fluorometric method for evaluation of postantibiotic effect on mastitis-causing Staphylococcus aureus and Escherichia coli. Journal of Microbiological Methods, 1996, 26:. Fang WH. Quantification of Staphylococcus aureus and Escherichia coli in the liquid medium by fluorometry and its use in phagocytosis assay. Journal of Appled Bacteriology, 1996, 80:. Koivunen A-L., Maisi P., Fang WH. & Sandholm M. Inhibition of the protease activity in tracheobronchial aspirates of horses with COPD. American Journal of Veterinary Research, 1996, 57(5):. Malbe M., Salonen M., Fang WH., Oopic T., Jalakas M., Klaassen M. & Sandholm M. Disposition of enrofloxacin (BaytrilR) into the udder after intravenous and intra-arterial injections. Journal of Veterinary Medicine A, 1996, 43:. Fang WH., Vikerpuur M. & Sandholm M. Reconstitution of mastitic milk by adding blood plasma and leukocytes into low cell count milk. Veterinary Research (France), 1996, 27:. Fang WH., Shi M., Huang L. & Chen J. Antagonism of the lactic acid bacteria towards Staphylococcus aureus and Escherichia coli on the agar plates and in milk. Veterinary Research (France), 1996, 27:. Fang WH. & Pyorala S. Mastitis-causing Escherichia coli: Serum sensitivity and susceptibility to selected antibacterials in milk. Journal of Dairy Science, 1996, 79:. Fang WH. & Vikerpuur M. Potency of antibacterial drugs in milk as analyzed by the ß-glucuronidase-based fluorometry. Journal of Veterinary Pharmacology & Therapeutics, 1995, 1:. Fang WH., Vikerpuur M. & Sandholm M. A fluorometric ß-glucuronidase assay for analysis of bacterial growth in milk. Veterinary Microbiology, 1995, 46:. Malbe M., Klaassen M., Fang WH., Myllys V., Vikerpuur M., Nyholm K., Sankari S., Suoranta K. & Sandholm M. Comparison of selenite and selenium yeast feed supplements on Se-incorporation, mastitis and leukocyte function in Se-deficient dairy cows. Journal of Veterinary Medicine A, 1995, 42:. Fang WH. & Sandholm M. Inhibition of the proteinase activity in mastitic milk. Journal of Dairy Research, 1995, 64:. Fang WH., Shi M., Chen J., Huang L. & Shao Q. Comparative aspects of bacterial growth in milk and whey. Chinese Veterinary Science (English), 1994, 1(1):. Fang WH., Shi M., Chen J., Huang L. & Shao Q. Turbidometric determination of bacterial growth in whey. Chinese Veterinary Science (English), 1994, 1(1):. Fang WH., Shi M., Huang L. & Shao Q. Growth of lactic acid bacteria, Staphylococcus aureus and Escherichia coli in normal and mastitic milk and whey. Veterinary Microbiology, 1993, 37:. Fang WH., Jiang C. & Liu H. Epidemiological aspects of bovine mastitis and its control in several dairy herds in south-east China. Preventive Veterinary Medicine, 1993, 15(2-3):. Hu SH, Fang WH, Lu HR, et al. Effect Of Teat Dipping And Dry Cow Therapy On Mastitis In A Commercial Dairy-Herd In China. Preventive Veterinary Medicine, 1990, 10:(1-2), 91-96.
我用的是间接ELISA，以下copy自我的毕业论文：将抗原用包被液稀释至约10 ?g/mL；分别将阳性血清和阴性血清用TBS倍比稀释，稀释梯度从1：200，1：400至1：204800，二抗用的是HRP标记的羊抗兔IgG(1:5000稀释) 。酶标仪测定450nm处各个孔的吸光度(A450)，计算阳性血清与阴性血清的吸光度之比(P/N)，当P/N＜时为阴性，当P/N≥而＜为可疑，当P/N≥为阳性，将P/N≥时所对应的抗体最高稀释倍数作为抗体的效价。
免疫学的发展是人们在实践中不断探索、不断总结和不断创新的结果。下面我给大家分享一些免疫学技术论文，大家快来跟我一起欣赏吧。
心理神经免疫学研究
摘要心理神经免疫学(Psychoneuroimmunology)是一门探索人类心身健康奥秘的新型边缘学科。它研究神经系统如何将心理因素转换为可以影响健康的生理状态的机制，特别是脑和行为如何影响免疫系统，又如何受到免疫系统的影响的。免疫系统和神经系统之间是否真正存在联系一直有争论，我们实验室围绕高级神经活动对免疫系统的作用开展了研究。工作包括：条件反射性免疫抑制和增强、情绪应激与免疫、心理行为干预与癌症等。这些工作不仅证实了心理调控，比如信号刺激、情绪和意念想象等，确实可以影响免疫系统的功能，而且对有关机制进行了探讨。
关键词心理神经免疫学，条件反射性免疫，情绪应激，心理行为干预。
分类号B845
有人统计，人类疾病有2/3与心理刺激、生活境遇有关，其中心身疾病占1/3。实际上，心理因素可以影响生理因素的观点是各国文化群体都普遍认可的。也就是说，精神和躯体之间是互相联系的。然而心理因素如何影响健康和疾病却一直是个谜。随着科学的发展，一门新兴交叉型边缘学科，心理神经免疫学(Psychoneuro- immunology)诞生了。它融合了心理学、生物化学、免疫学、行为学、解剖学、分子生物学和临床医学等多种学科，研究神经系统如何将心理因素转换为可以影响健康的生理状态的机制，特别是脑和行为如何影响免疫系统，又如何受到免疫系统的影响的。这些研究对认识精神活动在健康和疾病中的作用打开了科学之窗。人们看到了免疫系统，这一保护机体免受传染病和肿瘤侵袭的防御系统，是精神和躯体之间的桥梁[1,2]。但是，尽管已经有很多研究表明神经系统可以影响免疫系统，依然有不少生理学家认为免疫系统是独立的自我调节系统。实际上这涉及一个由来已久的争议问题，即心身分离还是心身交互作用的问题。本文的目的就是依据我们自己的工作，阐明心理行为因素在调节免疫功能中的作用及其相应的机制。这些工作包括了条件反射性免疫抑制和增强、情绪应激的免疫效应、心理行为干预与癌症等。
1心理神经免疫调节的研究
条件反射性免疫抑制和增强
条件反射性免疫是中枢神经系统调节免疫系统的重要证据。自从Ader和Cohen在1975年第一次发表关于条件反射性免疫抑制(conditioned immunosuppression, CIS)的工作以来，这一实验范式得到了广泛的关注。在这种实验范式中，一种对于实验动物来说在味觉上新异的溶液，比如糖精水，被用作条件刺激(conditioned stimulus, CS)，而免疫抑制剂如环磷酰胺、环孢霉素A等具胃肠道毒副效应的药物作为非条件刺激(unconditioned stimulus, UCS)，二者配对呈现。随后再次给与条件刺激，则发现实验对象出现了条件性味觉厌恶的行为现象，而且免疫功能也受到了显著的抑制。针对这一现象的解释是有争议的。有的认为这是条件反射性的调节作用，是中枢神经系统调控免疫功能的重要证据之一。另一些则认为可能是应激的作用。动物对糖精水的厌恶行为也即味觉厌恶性条件反射的建立不能排除某种程度的应激的存在，而应激则会引起肾上腺皮质激素的升高，从而抑制免疫功能[3]。为弄清条件性免疫抑制的实质，我们分别采用一次性和两次性的CS-UCS结合训练方式，并在不同时程呈现条件刺激，观察由条件刺激引起的味觉厌恶性行为与条件反射性免疫抑制的关系，发现两者的表现方式和表现程度并不同步，条件反射性免疫抑制并非是厌恶行为反应或情绪应激的伴随产物 [3,4]。并进一步发现不具明显毒性作用的生物免疫抑制剂作为UCS时，也能建立条件性的免疫抑制效应[5]。条件刺激不仅可诱发动物的细胞免疫抑制反应而且可诱发体液免疫反应的抑制作用，并且随着强化水平的增加，条件反射性免疫抑制效应增强[6]。这些实验证明条件反射性免疫抑制是条件刺激的作用，而不是应激效应。对CIS的合理的解释是脑中CS―UCS的联想学习过程，中枢神经系统储存了对条件刺激(CS)的知觉信息，该条件刺激与UCS的免疫抑制反应相偶联，CS再次呈现时就产生一个直接信号激活免疫系统引起反应。
利用联想学习原理，条件反射性免疫调节应该是双向的。也就是说，条件刺激可以产生免疫抑制效应，也就可以产生免疫增强效应。建立起条件反射性免疫增强(conditioned immuno-enhancement, CIE)的模式将更有利于证明条件反射性免疫调节是中枢神经系统调控免疫系统的结果。而且由于CIE所用药物的免疫效应与CIS有所不同，CIE模式将为脑和免疫系统相互作用的研究提供新视角。为次，我们在国际上首次尝试以卵清白蛋白(ovalbumin, OVA)抗原作为非条件刺激，糖精水作为条件刺激，经过一次配对，在初次抗体反应曲线的上升阶段再次单独呈现条件刺激时，诱导出条件反射性抗OVA抗体生成的增加[7]。虽然该条件性抗体增强的幅度较低，但从统计学上看，条件反射组和非条件反射组之间有了临界值差异。但该模式最初没有得到完全成功的验证[8]。为重复检验条件性抗体增强效应，再次分别用糖精水和电针作为条件刺激，进一步观察和分析条件性抗体增强的动态反应，对条件反射性抗体增强的发生发展过程做一完整的描述。
在用糖精水作为条件刺激的重复实验中[9]，不同于先前工作的是，再次单独呈现条件刺激的时间是放在初次抗体反应的下降段，而不是放在初次抗体反应曲线的上升段。这是考虑到在基础抗体值比较低时，条件反射本身的效应可能得到充分体现。而实验结果也证实了这一点。统计学数据表明，抗体水平在条件反射组和其他控制组之间的差异均达到了p<甚至的水平。
我们还发现，条件刺激诱发的抗体生成曲线在动力学上与抗原再次进入体内引起的二次抗体反应曲线很相似。单独给予条件刺激后约15天左右出现明显的抗OVA抗体水平增高，20、25天左右达到峰值，以后明显下降并逐渐接近正常水平[10]。这一结果不仅仅证明了联想学习可以调节免疫功能，而且发现了条件反射性免疫过程与抗原引发免疫应答过程的基本规律是类似的。这些工作从免疫增强的方向论证了信号刺激的免疫调节作用，建立了稳定可靠的CIE模型。
从临床角度出发，条件反射性免疫增强的重要意义在于通过脑的调控提高免疫力，增强机体对疾病的抵抗力。考虑到CIE模式在人类临床应用的可能性，寻找合适的条件刺激很重要。因为甜味饮料是人类日常生活中经常会遇到的，从新异性的角度考虑，糖精水或甜味饮料都不太适用于人类。因此尝试将一种躯体感觉信号――外周电针刺激――作为条件刺激，考察它能否诱发特异性抗体增强反应。 电刺激信号是通过两支刺入肌肉5mm的细钢针发送的。为了减少实验误差，选择传统医学中的穴位足三里作为针刺的位置，因此这种条件刺激物也可以称为电针。在这个研究中我们选择的电压强度分别为2伏特和4伏特[11]。
在本研究中，先是将电针刺激和腹腔注射OVA进行一次配对。经过一段时间的间隔，再次对动物实施电针。然后分别在第二次电针后的第10，17，24和31天经尾静脉取血，检测抗体值。结果发现，不管是2伏特还是4伏特的电针，均能显著提高抗体浓度，在第10和第17天时最为明显。研究还发现，甚至在麻醉状态下，电针和卵清白蛋白也可以实现配对，也就是说，在条件反射训练时麻醉的动物也出现了反射性抗体生成增加。没有发现电针本身对抗体生成有任何影响。这些结果进一步证实，仅需经过条件刺激和非条件刺激的一次配对，再次呈现的条件刺激即可诱发出条件反射性免疫反应。验证了条件反射性抗体增强的客观存在性和普遍性。而且，电针被用作为一个有效的条件刺激物，将为把条件反射性免疫调节在临床上得到应用提供了一种可能性。
条件反射性免疫调节的神经机制
条件反射性免疫抑制效应和免疫增强效应都表明与免疫无关的信号刺激能转变为具有触发免疫反应的非条件刺激的性质，这种转换必然发生在脑内，因而可以说这是脑对免疫系统调控的直接证据，但脑内究竟发生了什么并不清楚，条件反射性免疫调节的相关神经回路和脑机制还远远没有弄清[2]。为了直接洞察脑的变化，探讨脑内中枢整合机理，找寻直接观察脑内活动的指标是必要的。
C-fos蛋白是神经元激活的一个标志物。它通常处于不活动或表达很低的状态，但在受刺激时能作出短暂而迅速的反应，可成为神经元兴奋水平的客观指标。利用免疫组化技术，我们发现，再次单独呈现条件刺激可以导致包括脑干，边缘系统和大脑皮质在内的区域大量c-fos蛋白的表达。其中有一些脑区尤为重要。不论是条件性抑制范式还是条件性增强范式，再次单独呈现条件刺激都可以引起岛叶皮质、杏仁中央核和下丘脑室旁核c-fos蛋白的大量表达。这些结果表明，条件性免疫反应是和大脑的活动相关联的[10,12,13]。
但是必须指出的是，在我们和其他作者报道的关于脑机制的研究中，所采用的条件刺激物都是糖精水。我们的实验已经证实，以电针作为条件刺激也可以很好地诱发出条件性免疫改变，而电针和糖精水所激活的脑区是大不相同的，因此在今后的研究中阐明以电针为条件刺激所激活的大脑区域将有助于进一步确定与条件反射性免疫调节有关的共同脑机制，排除刺激引起的非特异性相关。
目前关于条件反射性免疫的神经化学机制研究也很缺乏。由于中枢胆碱能系统被认为与学习记忆有很密切的关系，该系统的这些功能主要是由毒蕈样受体(muscarinic receptor, M受体)介导的。为再次验证条件反射性免疫与学习过程有关，实验采用对M受体具有阻断作用的药物东莨菪碱作为工具药，考察整个M受体系统在条件反射性免疫调节中的作用。结果发现在以电针为条件刺激的条件反射性抗体增强模式的学习阶段是中枢胆碱能M受体依赖的，但在条件反射的唤起阶段是非胆碱能受体依赖的。在条件反射训练前阻断M受体，条件反射性免疫不再发生。但在条件反射训练完成后再抑制乙酰胆碱的合成，则不会影响条件刺激诱发的免疫反应。这些结果表明中枢乙酰胆碱参与了学习阶段的记忆形成过程，但不影响已经形成的记忆的再提取。这从神经生化的角度论证了条件反射性抗体生成的增加与学习记忆有关[14]。
2情绪应激与免疫
除条件反射性免疫的研究外，应激与免疫的研究是进行精神行为因素对免疫功能作用研究的另一热点[2]。已经有很多证据表明，应激可以导致免疫功能改变。但是，相关的动物研究大多采用电击或束缚的方式来引起应激效应。尽管这些模型也含有心理应激的成分，但其主要成分是生理性的。为了考察情绪应激对行为、神经内分泌和免疫功能的影响，研究采用两种情绪应激的动物模型：一种是传统的，以电击装置为信号刺激诱发曾有过电击经历大鼠的情绪应激。另一种是本实验室新建的，用空瓶刺激诱发定时喂水大鼠的情绪应激。这两种类型情绪应激源激活的脑区有许多共同点[15]。
在传统的电击信号刺激模式中[16]，动物分成4组：电击组、情绪应激组、装置对照组A1和装置对照组A2。电击组动物用OVA免疫后2周内无规律给予10分钟/日，共6日的足电击，其余时间内无处置;情绪应激组动物除给予电击组动物电击的当天同样强度和频率的足电击外，在2周内的其余时间将其每天置于电击装置内10分钟而无电击(恐惧的情绪应激);对照组A1动物仅在给予电击组动物电击的当天被置于电击装置中10分钟而无电击;对照组A2的动物则每天被置于电击装置中10分钟而无电击。结果发现情绪应激组动物的呆滞行为和排泄行为显著增加;去甲肾上腺素、肾上腺素及皮质酮水平均显著提高。在抗OVA 抗体水平和脾脏指数上， 情绪应激组动物较装置对照组A2动物显著降低，而其余各组间无显著差异。并发现脾脏指数分别与肾上腺素含量和去甲肾上腺素含量呈显著负相关。
在空瓶刺激诱发的情绪应激模式中[17]，动物先进行一周2次/日的定时饮水训练，然后腹腔注射OVA抗原以激发特异性抗体反应。此后动物被分成3组：分别为情绪应激组、生理应激组、和对照组。情绪应激组的动物每天只有一次饮水的机会，而另一次则给予一只空的饮水瓶，持续14天，以产生情绪应激。生理应激组的动物也是只有一次饮水的机会，但并不另外再给一次空瓶的刺激。这种设置的目的是控制缺水本身可能造成的生理应激的影响。对照组保持每天两次饮水不变。结果发现情绪应激产生了很显著的行为改变，即攻击行为和探究行为显著增加;血浆皮质酮、肾上腺素和去甲肾上腺素的水平显著提高;白细胞计数和抗OVA抗体浓度显著下降。抗体水平和脾脏的重量与儿茶酚胺水平之间均存在显著的负相关。但情绪应激的时间作用点和时程对应激的免疫效应有影响 。与此相对的是，缺水导致的生理应激只能诱发探究行为，升高皮质酮水平，降低白细胞计数。但它不诱发攻击行为，不影响抗体水平和脾脏指数，也不激活交感神经系统。这些结果进行了反复的验证 [18~20]。
上述两种模式的研究结果都证明，情绪应激对免疫功能产生了抑制效应，激活了下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)和交感神经系统(sympathetic nervous system, SNS)。由于抗体水平和脾脏指数与儿茶酚胺水平存在显著的负相关，而与皮质酮水平无关，提示交感神经系统的激活可能及情绪应激对体液免疫功能调节的中介机制。而皮质酮水平可能只是应激的一种反应。
为了进一步澄清HPA轴与SNS在情绪应激免疫调节中的作用 ，我们分别采用糖皮质激素合成抑制剂美替拉酮阻断HPA轴，外周交感神经末梢的6-OHDA损毁SNS的活动。结果发现，对SNS的阻断能消除情绪应激对体液免疫功能的抑制。而HPA轴的阻断没有这种作用。这些实验证明是交感神经系统介导了情绪应激所致的体液免疫抑制。进一步的证据是，非选择性β-肾上腺素能受体(β-adrenergic receptor, β-ADR)拮抗剂心得安可以逆转情绪应激诱发的体液免疫抑制作用，表明SNS是通过b-ADR介导情绪应激导致的体液免疫功能的抑制。在此基础上，进一步发现参与的受体亚型是选择性的b2-ADR而非b1-ADR[21,22]。
尽管以往大多数研究者认为，应激引起的免疫功能抑制主要是因为应激可以导致肾上腺皮质激素的释放，从而导致免疫功能下降。换句话说，免疫功能的抑制与应激激活的HPA轴有关。但采用我们的情绪应激模型，发现情绪应激引起的体液免疫功能抑制主要是由交感神经系统β-肾上腺素能受体介导的。这为阐明情绪应激的免疫抑制效应的机理提供了新资料。
3心理行为干预与癌症
正如上述研究发现的，心理因素比如情绪或者条件性学习可以引起动物的行为和免疫功能的改变。我们考虑是否可以通过心理行为干预手段来影响癌症病人的免疫功能。虽然有研究报道，癌症可以通过将心理、情绪等多种因素整合起来影响病人的整个机体，但研究结果并不一致[23]。为此，我们打算通过两个研究来考察行为干预对于癌症病人的作用。纳入第一个研究的是40个正在接受放疗的乳腺癌患者，根据年龄、教育程度、癌症分期和接受治疗的状况，她们被随机而匹配地分成两个组：一组接受为期一个月的心理行为干预，另一组作为对照。首先指导干预组病人学会渐进性肌肉放松，然后对她们进行想象训练。想象自己漫步在海滩上，初升的太阳照在脸上，海水轻柔地漫过脚面等等。然后想象免疫细胞如何杀死癌细胞，被杀死的癌细胞又是如何被海水冲刷掉。在干预的前后，分别采取病人的唾液和血液，测定NK细胞的活性。结果发现心理―行为干预可以显著提高NK细胞活性。而且需通过服药来克服放疗引起的白细胞计数降低的副作用的患者比例显著下降[24]。该研究表明，心理行为干预对免疫功能的改善和恢复具有非常显著的作用。
第二个研究纳入120名正在接受放化疗的癌症患者。同样的，依据匹配原则他们被分为一个干预组和一个控制组。除了干预的时间延长到3个月以外，其他的实验条件与上述研究基本相同。所测定的指标包括白细胞计数、NK细胞活性和免疫球蛋白(IgG，IgM，IgA)等。结果发现，干预组在所有免疫功能参数上都得到了不同程度的提高，其中NK细胞活性显著提高[25]，生活质量也都得到明显的改善，治疗引起的副作用在很大程度上也得到了缓解。不论是乳腺癌还是肺癌患者，不论是放疗患者还是化疗患者，干预组的生活质量评分，包括躯体功能、角色功能、情绪功能、认知功能和社会功能上都显著高于控制组。同时干预组的症状评分，包括疲劳、呕吐、疼痛和食欲不振等都有显著下降[26~28]。而且，通过行为干预，患者学会运用更为积极的认知方式来应对癌症，摒弃原先的逃避心理，从而使得情绪状态、身体机能和生活质量都得到很好的改善[29,30]。成长策略和社会支持有助于提高癌症生存者的生活质量，增加正性情感[31]。这些结果反复证明了，NK细胞的活性对认知行为干预的作用相当敏感，心理行为干预确实改善了癌症患者及其生存者的生活质量。免疫功能的提高， 特别是NK细胞活性的增强可能在心理行为干预中起着重要的中介作用。
4结语
中枢神经系统和免疫系统之间存在着相互作用。上述三个方面的工作证明某些心理过程，比如联想性学习、情绪、行为想象、和认知策略等确实可以对免疫功能产生影响。也即高级神经精神活动能调节免疫功能。但免疫系统的变化也能影响高级神经精神活动的功能。免疫系统的紊乱不仅导致疾病，也与衰老、性格和行为变化有关。如抑郁症或“病态行为”就与细胞因子如白细胞介素-1有关[32,33]。但这方面的研究尚需深入展开。随着中枢神经系统和免疫系统之间相互作用研究的深入，在人类健康的维护和疾病的防治上将会有新的前景。
致谢：作者感谢曾对本文的研究工作做出重要贡献的博士后、博士生、硕士生和研究助手，他们是王建平、李杰、邵枫、黄景新、陈极寰、王玮雯、刘艳、郑丽、李波、吕倩、卫星、郭友军。
参考文献
[1] 林文娟. 精神与免疫.见：21世纪初科学发展趋势课题组编.《21世纪100个科学难题》吉林出版社，1998. 693~701
[2] 林文娟. 心理神经免疫学的研究及其思路问题. 心理学报，1997, 3: 301~305
[3] 林文娟，卫星, 郭友军，汤慈美,刘艳. 味觉厌恶性条件反射与条件反射性免疫抑制的研究. 心理学报，1998,30(4)： 418~422
[4] 李杰， 林文娟，李波，卫星. 条件反射性细胞免疫抑制及其作用时程的实验研究. 中国行为医学科学, 2003, 12(5): 481~483
[5] 林文娟, 陈极寰, Husband A J. 以兔抗鼠淋巴细胞血清为非条件刺激的条件性免疫抑制. 心理学报, 2002, 34 (2): 259~300
[6] 郑丽，林文娟, 邵枫, 王玮雯. 对体液免疫反应的条件反射性调节. 心理科学, 2002, 25(1)：27~30
[7] Lin Wenjuan, King M, Husband A. Conditioned behavioral learning activated antibody response to ovalbumin: New evidence for the communication between CNS and immunity. Proceedings of the Second Afro-Asian Psychological Congress, 1993, 788~793
[8] 李波, 林文娟，卫星，汤慈美，郭友军. 以抗原作为非条件刺激的条件反射性免疫调节的研究. 心理学报，1997, 29(sup)：34~38
[9] 陈极寰，林文娟, 王玮雯，杨杰，邵枫. 条件反射性抗体反应增强的动态分析――以OVA为非条件刺激物. 心理学报，2003, 35(2): 261~265
[10] Chen Jihuan, Lin Wenjuan, Wan Weiwen, Shao Feng, Yang Jie, Wang Bairen, Kuang Fang, Duan Xiaoli and Ju Gong. Enhancement of antibody production and expression of c-Fos in the insular cotex in response to a conditioned stimulus after a single-trial learning paradigm. Behavioral Brain Research, 2004, 154 (2): 557~565.
[11] Huang Jingxin, Lin Wenjuan, Chen Jihuan. Antibody response can be conditioned using electroacupuncture as conditioned stimulus. Neuroreport, 2004, 15(9): 1475~1478
[12] Lin Wenjuan, Li Jie, Zheng Li, Wang Weiwen, Chen Jihuan. Expression of c-fos in amygdala and conditioned immunosuppression. Acta Psychologica Sinica, 2004, 36(4): 500~505
[13] 李杰， 林文娟，郑丽，李波. 条件反射性免疫抑制激活过程中下丘脑核团c-fos的表达. 心理学报， 2004, 36: 201~207
[14] 黄景新. 电针信号诱发的条件性免疫调节作用及其神经机制. 博士学位论文, 中国科学院心理研究所，2003
[15] 邵枫，林文娟，王玮雯，陈极寰. 情绪应激对不同脑区c-Fos表达的影响. 心理学报，2003, 35(5): 685~689
[16] 邵枫，林文娟，王玮雯, 郑丽. 电击信号对大鼠体液免疫及内分泌功能的影响. 心理学报，2000, 32(4): 428~432
[17] 林文娟，王玮文，邵枫. 慢性情绪应激对大鼠行为，神经内分泌和免疫反应的影响：一个新的情绪应激模型.科学通报，2003, 48(9): 926~929
[18] 邵枫, 林文娟, Washington Welton Craig, 王玮雯. 心理应激的免疫抑制作用及其与神经内分泌反应的相关性.心理学报, 2001， 33(1): 43~47
[19] 邵枫，林文娟. 情绪应激体液免疫调节作用的影响因素研究. 心理学报, 2001, 33(6): 543~547
[20] Shao Feng, Lin Wenjuan, Weiwen Wang, Washinton Jr WC and Zheng Li. The effect of emotional stress on the primary humoral immunity of rats. Journal of Psychopharmacology, 2003, 17 ( 2 ) : 153~157
[21] 邵枫，林文娟. 外周交感神经系统在情绪应激体液免疫调节中的作用. 中国行为医学科学, 2001, 10: 401~404
[22] 王玮雯.交感神经系统在情绪应激所致体液免疫功能改变中的作用. 博士学位论文, 中国科学院心理研究所，2003
[23] 刘艳，林文娟. 肿瘤与心理神经免疫. 美国中华心身医学杂志，1998, 2(1): 21~22
[24] 刘艳, 林文娟, 刘新帆, 张冀岗. 心理行为干预对乳腺癌患者情绪反应及免疫功能的影响. 心理学报, 2001, 33: 437~441
[25] 王建平，林文娟, 梁耀坚, 秀云.心理干预对癌症患者免疫功能的影响. 中国肿瘤临床, 2002, 29(12): 841~844
[26] 王建平, 林文娟, 崔俊南. 心理干预在放患者中的应用.应用心理学，2001, 7(3): 13~17
[27] 王建平, 林文娟, 陈仲庚. 心理干预在化患者中的应用. 心理科学, 2002, 25(5): 517~519
[28] 王建平, 林文娟, 孙宏伟. 中国癌症患者心理干预研究. 中国肿瘤临床, 2002, 29(3): 305~309
[29] 王建平, 林文娟, 孙宏伟. 癌症病人心理干预的效果及其影响因素. 心理学报, 2002, 34(2): 200~204
[30] 王建平，林文娟, 梁耀坚, 秀云. 应对策略在癌症患者心理干预中的中介作用. 中国临床心理学杂志, 2003, 11(1): 1~4
[31] Lu Q, Lin W, Ziltzer L. Quality of life and coping resources among Chinese cancer survivors. Psycho- oncology, 2003, 12 (4): 197~197
[32] 杨宏宇, 林文娟. 白细胞介素-1在病态行为中的作用及其机理. 心理科学进展, 2004, 12(2): 290~295
[33] 迟松，林文娟. 抑郁症神经内分泌免疫学研究进展及心理治疗的作用. 中国临床心理学杂志, 2003, 11(1): 77~80
点击下页还有更多>>>免疫学技术论文
(1)测定方法：APTT和相似试验常用于检测柠檬酸抗凝血浆中的抗磷脂抗体(狼疮抗凝物，LAC)。不同的试剂对LAC有不同的灵敏度，另外，所采用的稀释倍数也不同。不同的检测方法具有不同的灵敏度，并用于检测不同的类抗体。没有一个实验系统可检测所有的抗磷脂抗体。ELISA法和凝集试验检测心磷脂抗体的一致性约为60%-70%，有时抗磷脂抗体的不同反应性可与不同的疾病相关。如VDRL试验与梅毒相关性良好，但与SLE典型的抗磷脂抗体甚差。主要是SLE或原发性APS患者检测抗体时需辅助因子β2糖蛋白。(2)狼疮抗凝物：狼疮抗凝物一词指体外抗凝血效应的现象，而体内这种相关性可能不涉及抗凝物而是一种血栓前效应。(3)样本加热：如同在抗组蛋白抗体中的描述，病人血清加热后可以导致抗磷指抗体的ELISA结果升高或假阳性，与血清中补体热灭活相关(56℃，30min)，至少部分是由于内源性磷脂排出造成抗磷脂抗体的释放。β2-糖蛋白Ⅰβ2-糖蛋白Ⅰ不仅是检测SLE和APS典型磷脂抗体必需的辅助因子，其自身本来就是这些疾病中的自身靶抗原。与β2-糖蛋白Ⅰ的反应：可区分自身免疫疾病患者血清和梅毒、HIV感染的抗心磷脂阳性血清。SLE患者与APS典型综合征似乎比与传统的磷脂抗体有更好的相关性。
kàng lín zhī zōng hé zhēng
Antiphospholipid syndrome
皮肤性病科
抗磷脂综合征是一种自身免疫性疾病，机体免疫功能失调致使女性体内产生多种自身抗体。这些抗体主要攻击血小板，引起血小板减少，破坏血管内皮细胞，致使血栓形成、胎盘梗塞，导致流产、胎死宫内等。三分之一的患者无症状，仅在产前检查时发现胚胎或胎儿发育停止而死亡。其诊断主要依靠于血中抗磷脂抗体、抗核抗体的检测。抗磷脂抗体致习惯性流产是抗磷脂综合征的一种表现。抗磷脂抗体阳性者若不予治疗，自然流产的发生率可高达50％～90％，故积极诊治抗磷脂综合征是必要的。
抗磷脂综合征是一组与抗磷脂抗体有关的症候群。抗磷脂抗体阳性和复发性静脉或动脉栓塞、习惯性流产、血小板减少症是其临床主要特征。病人可伴有或不伴有其它结缔组织病。
抗磷脂综合征可分为原发性与继发性。原发性不伴有结缔组织病，只有很少数的原发性病人会演变为继发性；继发性为伴有结缔组织病者，较多见于年轻女性。两者的抗磷脂抗体没有其特异性，临床特征也基本相同，但在继发性病人中的心瓣膜病变、溶血性贫血、低补体血症和中性粒细胞减少症更为多见。
在已有的报告中，SLE病人中狼疮抗凝物质 (LAC) 阳性率约为30％ (16％～65％不等)，抗心磷脂抗体阳性率约为40％(17％～87％不等)。
有抗心磷脂抗体的红斑狼疮病人常有不典型的狼疮，抗核抗体常常阴性，多有复发性静脉或动脉栓塞并发症和习惯性流产、血小板减少症。
抗磷脂综合征是多系统累及的疾病，主要临床表现还有：
1.皮肤表现 皮损常常是病人最早的临床表现，主要皮损为网状青斑，其次为小腿溃疡，可表现如坏疽性脓皮病。皮肤表现还有指、趾红斑或紫红斑的远端皮肤缺血，浅表性血栓性静脉炎和甲下碎裂样出血。
2.血栓形成 主要是深静脉栓塞，病人中可达60％～70％，发生率远远高于动脉血栓，还可以累及视网膜血管、肾静脉。也有其它的静脉栓塞发生。血栓形成也可发生在冠状血管与肠系膜血管，以及大的周围动脉，导致指(趾)或肢体的坏死与截肢。
3.中枢神经系统的表现 主要是中风，常常复发，偶可导致多发性栓塞性痴呆、一过性缺血性发作、不典型性偏头痛和舞蹈症等。
抗磷脂抗体是一组自身抗体，包括：引起梅毒血清反应假阳性的物质，狼疮抗凝物质和抗心磷脂抗体。引起梅毒血清反应假阳性的物质是第一个被认识的抗磷脂抗体，病人有5％～19％可能发展成红斑狼疮或其它结缔组织病；LAC也是一类抗磷脂抗体，能阻断凝血酶原转化为凝血酶，有LAC的病人临床上常有凝血障碍，并伴有出血倾向；心磷脂是梅毒血清反应假阳性的主要抗原成分，抗心磷脂抗体(aCL)有IgG、IgM和少量的IgA三个血清抗体同型，有抗磷脂酰丝氨酸抗体(aPS)、抗磷脂酰肌醇抗体(aPI)、抗磷脂酸抗体(aPA)和抗磷脂酰甘油抗体(aPG)等几种。研究表明，IgG型的aCL与血栓形成及习惯性流产密切相关，但IgM型的aCL也可能参与其中，并认为IgM型的aCL与溶血性贫血有一定的关系。一般说来，在抗心磷脂抗体阳性时其它几种抗磷脂抗体也阳性，故目前常用抗心磷脂抗体检测代表抗磷脂抗体的检测。
发病机制：抗磷脂抗体是一组自身抗体，包括：引起梅毒血清反应假阳性的物质，狼疮抗凝物质和抗心磷脂抗体。引起梅毒血清反应假阳性的物质是第一个被认识的抗磷脂抗体，病人有5％～19％可能发展成红斑狼疮或其它结缔组织病；LAC也是一类抗磷脂抗体，能阻断凝血酶原转化为凝血酶，有LAC的病人临床上常有凝血障碍，并伴有出血倾向；心磷脂是梅毒血清反应假阳性的主要抗原成分，抗心磷脂抗体(aCL)有IgG、IgM和少量的IgA三个血清抗体同型，有抗磷脂酰丝氨酸抗体(aPS)、抗磷脂酰肌醇抗体(aPI)、抗磷脂酸抗体(aPA)和抗磷脂酰甘油抗体(aPG)等几种。研究表明，IgG型的aCL与血栓形成及习惯性流产密切相关，但IgM型的aCL也可能参与其中，并认为IgM型的aCL与溶血性贫血有一定的关系。一般说来，在抗心磷脂抗体阳性时其它几种抗磷脂抗体也阳性，故目前常用抗心磷脂抗体检测代表抗磷脂抗体的检测。
(一)临床指标
1.静脉血栓形成；
2.动脉血栓形成；
3.习惯性流产；
4.血小板减少。
(二)实验室指标
1.中－高滴度的IgG抗心磷脂抗体；
2.中－高滴度的IgM抗心磷脂抗体；
3.狼疮抗凝物质阳性。
至少一项实验室指标加一项临床指标可诊断为抗磷脂综合征，其中抗心磷脂抗体必须有二次检查阳性(间隔至少三个月)。
无临床症状抗磷脂抗体阳性病人可不治疗或用小剂量的阿司匹林，并注意减少可能引起血栓形成的因素，如中止吸烟，不再用口服避孕药等。
对于有急性深静脉血栓形成的病人静注肝素仍然是最有效的方法，同时可伴用其它的溶栓药物。
对于血栓形成后的长期治疗可采用华法林，但应注意治疗中的出血倾向。
伴有血小板减少的抗磷脂综合征病人的治疗可用泼尼松、达那唑(炔睾醇)或大剂量静脉注射丙种球蛋白(1GIV)治疗。
无特殊。
抗磷脂综合征（antiphospholipid syndrome，APS）是指由抗磷脂抗体（APL抗体）引起的一组临床征象的总称，主要表现为血栓形成，习惯性流产，血小板减少等。