关于荧光增强剂的论文参考文献

洗衣用品其发展历史从最早的洗衣皂，到后来随着洗衣机的普及和合成洗涤剂配方和生产技术的进步出现的洗衣粉，再到21世纪逐渐成为主流洗衣产品的洗衣液，洗涤产品越来越适合现代家庭洗衣的需求。对消费者来说，洗衣液是新一代的安全环保产品，使用方便。洗衣液的功能性较强，使用方便、溶解速度快、低温洗涤性能好，具有柔软、杀菌、提亮色泽及增白等功能。相对于洗衣粉来说，碱性较低，性能温和，对人体皮肤及织物损伤较小。 目前市场上常用的合成洗涤剂的成分主要分为五大类:活性成分、助洗成分、缓冲成分、增效成分和辅助成分。具体有表面活性剂、软水剂、碱剂、增白剂、抗再沉积剂、分散剂、缓冲剂以及酶制剂、填充剂和水等。 洗涤过程实际上是一个复杂的物理、化学相互作用的过程。在洗涤过程中反复的拉伸、摩擦及各种化学品如表面活性剂、助洗剂、漂白剂和洗涤剂其他成分都会影响到织物的性能。在日常护理过程中，合成洗涤剂不同程度上改变了纺织品服装的理化性能，如在洗涤剂中加入荧光增白剂，可以改善纺织品服装的白度，达到增白的效果。 荧光增白剂，是利用荧光给予人们视觉器官以增加白度感觉的白色染料。是一种能吸收紫外光并激发出蓝色或蓝紫色荧光的有机化合物，与材料上的黄光互补，达到增白的效果。在日光照射下，荧光增白剂不但能反射可见日光，同时还能吸收日光中肉眼不可见的紫外线(波长为300~400 nm使分子激发，再回到基态时，紫外线能量便消失一部分，转化成能量较低的可见光反射出来，其反射光为波长420~500 nm的蓝紫光，使织物上的反射光总量增加，织物上的蓝紫光波反射量提高，抵消了织物上因黄色光反射量多造成的黄色感，使织物具有明显的洁白感。 在颜色世界里，人们遇到最多的颜色是白色，这个颜色处于色空间占着大约470~570 nm主波长的相当狭窄的范围，它具有高明度和低彩度的颜色属性。基于目视感知而判断反射物体所能“显白的程度”，术语上称之为白度。白度的定义为:完全漫反射体在可见光谱范围内的漫射比均为1的理想表面的白度值为100。 白度及其定量评价是纺织产品检验中广泛遇到的问题，并成为许多产品的直接和间接的质量指标之一。白作为一种独特的颜色，白度的评价与测量可以说是一个以一般色度学为基础而又有其特殊性的复杂问题。想要全面考虑各种因素的影响来对白度进行合理的定量评价是困难的，CIE一直努力促成解决白度评价的一致性问题，在TC1. 3色度委员会下成立了一个“白度分技术委员会”，从事视觉实验与白度测量仪器的研究与交流，对白度测量的规范取得如下的约定: (1)推荐用D65光源为近似的CIE标准光源进行视觉的及仪器的白度测量; (2)在与(1)不一致的条件下得到的实验数据不能用于确立或检验白度公式; (3)推荐使用白度W = 100的完全反射漫射体作为白度公式的参照标准，确定或检验白度公式都必须使得完全反射漫射体的白度值等于100。 据此，任何白色物体的白度表示它对于完全反射漫射体的白色程度的相对量[3]。在纺织品的颜色测量中，由于纺织品表面的经纬结构在不同方向上表现出不同的反射特性，为了使测量不受织物表面特性的影响，照明条件多采用积分球漫射照明方式，同时为使测量可以根据需要保留或排除规则反射成分，其测量条件通常采用测量光束与样品法线成8度角的形式。这就是目前纺织品颜色反射测量中比较通用的照明和观察几何条件，称为d/8。 目前，在国际市场上出现的多通道快速分光测色仪多为双光束光学结构，照明光源以脉冲氛灯为主，也有卤钨灯等恒定光源;探测器基本上都是自扫描光电二极管列阵(SPD)，少数采用CCD列阵;样品测量尺寸一般都有几个孔径可供选择。同时，系统中都考虑了镜面反射成分，包括与排除(SCI/SCE)切换功能，另外，大多数系统是可以反射和透射测量两用的[4]。 为了了解含荧光增白剂的洗衣剂对织物白度的影响，本文选取了4种纯棉织物作为实验材料，使用含荧光增白剂的洗涤剂洗涤织物，同时以自来水洗涤作为对比，考察两种条件下不同织物多次洗涤织物白度的变化。 2结果与讨论 2. 1不同洗涤条件对织物白度的影响 图1和图2分别为洗涤条件1和洗涤条件2对所测样品白度的影响。 从图中可以看出，除2号面料外，其余三种面料经洗涤剂洗涤后白度都有明显的增加，引起织物白度的上升大于水洗条件的影响，且上升速率大于水洗条件下的速率。对于3号和4号本身白度较低的织物而言，两种洗涤条件下白度的变化速率差异更为显著。这表明水洗与使用含有荧光增白剂的洗涤剂洗涤，对织物白度的影响程度不同，使用洗涤剂洗涤时对白度的影响更为显著，但两种洗涤条件下白度变化的整体趋势大致相同。 2. 2多次洗涤对织物白度的影响 如图1和图2所示，前三次洗涤对织物白度产生的影响较大，白度的变化速率较快。第一次洗涤对白度的影响最为显著，其后，随着洗涤次数的增加，变化趋势渐缓。 水洗条件下洗涤十次之后，除2号面料仍有缓慢下降的趋势之外，其余三种织物的白度趋于稳定，变化幅度减小。洗涤剂洗涤条件下，3号面料仍有缓慢上升的趋势，其余三种织物的白度趋于稳定，变化幅度减小。 2. 3面料不同对织物白度的影响 不同织物在两种洗涤条件下织物白度的变化如图3所示。 1号和2号面料是使用荧光增白剂做过增白处理的面料，水洗时织物白度稍有下降，可能是因为面料上的荧光增白剂脱附所致，但变化不大。1号面料使用洗涤剂洗涤时，洗涤剂中的荧光增白剂吸附到面料上，使面料白度有所上升。2号面料在两种洗涤条件下，织物白度的变化都不大。在水洗条件下白度呈下降趋势，使用洗涤剂洗涤对白度的影响小于水洗条件。可能是由于2号面料吸附的荧光增白剂趋于饱和，使用洗涤剂洗涤时，白度变化不大。 3号面料与4号面料在两种洗涤条件下白度都有所上升，使用洗涤剂洗涤时白度的变化值大于水洗条件。3号为坯布，黄度较大，白度低。经水洗和洗涤剂洗，白度上升趋势都很显著。4号面料为奶白色，经洗涤后面料白度变化也较明显。这表明，用含有荧光增白剂的洗涤剂洗涤，对未做过增白处理的织物影响较大。 3结论 用含荧光增白剂的洗涤剂洗涤，对织物白度的影响比用水洗洗涤影响大，且对未经增白处理的织物的白度有较显著的影响。 (2)随着洗涤次数的增加，织物白度的变化速率渐缓，织物的白度趋于稳定。 参考文献 【1】郑翔龙，林尚鹏.国内外洗衣液市场及技术发展综述[J].日用化学品科学，2010, 33 【2】宋钧才.漫谈自度、黄度和灰度田.中国纤检,2003, (4) :47 -48. 【3】宋宗明.自度评价及自度公式[J].纺织基础科学学报，1990, (1):71一75. 【4】徐海松.计算机测色与配色新技术[M].北京:中国纺织出版社，1999: 38一47.

【关键词】 树突状细胞；绿色荧光蛋白；RNA；转染 Effect of dendritic cells transfected with total RNA of HepG2 cell line using GFP marker in vitro 【Abstract】 AIM: To investigate the feasibility of GFP as a marker to observe the dendritic cells (DCs) transfected with total RNA of tumor cells and the feasibility of the transfected DCs serving as a vaccine for potential immunotherapy. METHODS: Plasmid pGFPC3 was transfected into HepG2 stably. Total RNA was extracted from the HepG2GFP using Trizol; DCs were induced by liver cancer patients peripheral blood mononuclear cells (PBMCs), and transfected with the total RNA. The effect of transfection was observed by a fluorescence microscope, the changes of phenotype were detected by flow cytometry, and the change of IL12 secretion in the supernatant of DCs was detected by ELISA assay. The cytotoxic effect of CTLs was assessed by MTT assay. RESULTS: GFP was expressed stably in the HepG2GFP cells that presented green fluorescence under a fluorescence microscope, so did DCs transfected with total HepG2GFP cell RNA. After transfection, the expression of membrane molecules such as CD80 ( to ), HLADR ( to ), CD83 ( to ), CD86 ( to ) was increased dramatically, IL12 secretion in the supernatant was elevated significantly 〔(±) ng/L to (±) ng/L, P＜〕. The CTLs activated by DCs transfected with total HepG2GFP RNA showed a potent specific lysis to HepG2 cells. CONCLUSION: GFP could be used as a marker to observe the effect of transfection of DCs with total tumor cell RNA. DCs transfected with total tumor cell RNA may serve as a promising vaccine of immunotherapy. 【Keywords】 dendritic cell；green fluorescent protein；RNA；transfection 【摘要】 目的：探讨GFP作为标记观察肝癌细胞RNA转染DCs效果的可行性及肿瘤细胞RNA转染DCs制备疫苗的可行性. 方法：绿色荧光蛋白质粒载体 pGFPC3稳定转染肝癌细胞HepG2，Trizol法提取筛选后细胞HepG2GFP总RNA；分离肝癌患者外周血单核细胞体外诱导DCs细胞，总RNA转染DCs，荧光显微镜下观察转染效果，流式细胞仪检测转染前后DCs表型变化；ELISA法检测转染前后上清中IL12变化情况；MTT法检测效应细胞对靶细胞的杀伤率. 结果：pGFPC3稳定转染肝癌细胞HepG2后可得到稳定表达GFP的细胞HepG2GFP，荧光显微镜下呈绿色荧光；总RNA转染的DCs荧光显微镜下呈绿色荧光，CD80(上升至)，HLADR(上升至)，CD83(上升至)，CD86(上升至)表达明显升高，上清IL12分泌量ng/L显著增高(±→±，P＜)；诱导的CTL能够对肝癌细胞株HepG2起特异性杀伤作用. 结论：GFP可以作为肿瘤细胞RNA转染树突状细胞的观察标记，肿瘤细胞RNA转染DCs可作为一种有效的肿瘤疫苗. 【关键词】 树突状细胞；绿色荧光蛋白；RNA；转染 【中图号】 0引言 肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是一种常见的恶性肿瘤，适合手术治疗的患者只占一少部分，具有较高的复发率，预后很差，严重威胁人类健康〔1〕. DCs(dendritic cells, DCs)是体内功能强大的专职性抗原提呈细胞，它能够高效的摄取、处理抗原，并将处理后的多肽呈递给静息型T细胞，引起针对该抗原的特异性免疫反应〔2〕. 国内外类似的研究中，都没有明确的可以观察肿瘤RNA转染DCs效果的指标，我们应用绿色荧光蛋白质粒载体 pGFPC3稳定转染肝癌细胞HepG2，提取筛选后细胞HepG2GFP总RNA转染DCs，观察转染后DCs绿色荧光蛋白表达及特异性表面标志及功能相关分子表达，检测其上清细胞因子分泌，探讨其作为肿瘤疫苗的可行性. 1材料和方法 材料肝癌患者外周血单个核细胞来源于我科造血干细胞移植患者；HepG2肝癌细胞株由我科常规传代培养. 流式细胞仪（BD），DG3022A型酶联免疫检测仪（华东电子管厂），荧光显微镜Optiphot XIF（Nicon）等均为我院常备. FITCCD80，FITCHLADR，PECD83，PECD86抗体购自BD公司；rhGMCSF，rhIL4购自Peprorotec公司；TNFα购自我校生物技术中心；绿色荧光蛋白载体pGFPC3由陕西省肿瘤医院贾军博士惠赠；脂质体Transfection2000，Trizol Reagent购自Invitrogen；RPMI 1640培养基、胎牛血清、G418购自Gibco公司，Xvivo无血清培养基购自BioWhittaker；IL12 ELISA检测试剂盒购自Bioscience公司；MTT购自Sigma公司. 方法参照Transfection2000说明书，pGFPC3转染HepG2，G418筛选2 mon. 筛选细胞命名HepG2GFP，荧光显微镜下观察. Trizol试剂提取HepG2GFP总RNA，紫外灯下观察，-80℃冻存备用. 同样方法提取HepG2总RNA. 取肝癌患者造血干细胞分离液，贴壁法分离单核细胞，贴壁细胞在细胞因子rhGMCSF，rhIL4作用下，诱导DCs. 倒置显微镜、电子显微镜观察细胞形态，流式细胞仪检测细胞表型. 转染树突状细胞收集培养4 d的DCs，转入6孔板，转染HepG2GFP总RNA. 另设转染HepG2总RNA及空白对照组. 继续培养48 h. 荧光显微镜下观察. 细胞因子分泌的测定48 h后，收集各组DCs上清，ELISA法检测转染前后各组细胞上清中IL12分泌量. 效应收集各组DCs，30 Gy 60Co照射后与复苏冻存的非贴壁细胞按20∶1比例混合接种于24孔板，培养5 d，收集的细胞即为效应细胞. 收集对数生长期的HepG2细胞作为靶细胞，将效应细胞与靶细胞按20∶1比例混合接种于96孔板. 同时设单一靶细胞组、单一效应细胞组. 培养24 h后，MTT法检测.以下述公式计算杀伤效率.CTL杀伤效率=〔1-（效靶A490-效应细胞A490）/靶细胞A490〕×100%.统计学方法：结果采用SPSS 统计软件分析.2结果 总RNA转染DCs稳定转染及筛选后得到的HepG2GFP细胞，能够稳定的表达GFP，荧光显微镜下所有细胞都呈现绿色荧光（图1），传代20次以上仍无消失. 与对照细胞相比，GFP基因修饰细胞在形态、生长等特性上均无显著改变，也未见GFP表达对靶细胞的毒性. 使用Trizol提取HepG2GFP细胞总RNA后，取2 μL总RNA进行凝胶电泳，可见5 s，18 s和28 s条带（图2）. 单个核细胞贴壁后，贴壁细胞在细胞因子GMCSF，IL4的作用下，培养第2日出现细胞集落，但细胞集落较小. 5 d后，集落明显增加、变大，出现具有毛刺状突起的细胞. 至7 d，集落开始减少，产生大量具有树枝状突起的细胞（图3A，B）. 荧光显微镜下，HepG2GFP总RNA转染DCs组细胞呈绿色荧光，而HepG2总RNA转染组及空白对照组则无明显荧光表达（图4A，B，C）. 图1荧光显微镜下pGFPC3稳定转染后HepG2胞浆荧光阳性 ×250（略） 图2HepG2GFP细胞的总RNA电泳（略） 图3树突状细胞形态(第7日)（略） 流式细胞仪检测细胞表型诱导d 7，DCs表达CD80 ，HLADR ，CD86 ，CD83低表达，仅；转染后上述分子表达明显升高，分别为CD80 ，HLADR ，CD86 ，CD83 ，提示转染后细胞具有成熟DCs特征. 图4总RNA转染DCs×250（略） 检测IL12分泌HepG2GFP总RNA转染DCs组上清中IL12分泌明显增加，显著高于转染前〔（±) ng/L vs (±) ng/L； n=6，P＜〕. 介导细胞毒效应HepG2GFP总RNA转染DCs刺激的CTL对HepG2细胞杀伤率为（±）%，未转染的DCs刺激的T细胞对HepG2的杀伤作用为(±)%，无DCs刺激T细胞对HepG2的杀伤作用为(±)%，总RNA转染DCs刺激的CTL对HepG2细胞杀伤率明显高于两个对照组（n=6，P＜）. HepG2GFP总RNA转染DCs刺激的CTL对SMMC7721和K562细胞杀伤率分别为(±)%和(±)%，对HepG2细胞杀伤率明显高于SMMC7721和K562细胞（n=6，P＜）. 3讨论 DCs是体内功能最强大的专职性抗原提呈细胞，它在T细胞免疫中发挥着极其重要的作用〔2〕. 应用各种肿瘤抗原致敏DCs制备疫苗是近年来研究的热点 〔3-8〕. 肿瘤细胞总RNA转染DCs制备疫苗与其他方法相比，具有如下优越性：首先，它不受已知肿瘤抗原的限制，可诱导出多克隆的CTL；其次，转染所需的RNA可以通过扩增方法得到，很少量的肿瘤组织样本即可扩增得到大量的RNA〔8〕. 但目前国内外的研究中，尚未有可以明确观察总RNA转染DCs效率的方法. 我们应用稳定表达GFP的HepG2GFP总RNA转染DCs，以GFP为标记观察总RNA转染DCs的效率，探讨其作为肿瘤疫苗的可行性，为肝癌临床治疗提供实验基础. 本试验中，HepG2GFP总RNA转染后的DCs在荧光显微镜下观察，胞质呈现绿色荧光，证实GFP mRNA可以在DCs胞质内正常表达，同时说明肿瘤细胞总RNA同样也可以在DCs胞浆内进行翻译表达. 转染后CD83，CD80，CD86，HLADR表达明显升高，IL12分泌明显增加，说明RNA转染，促进了DCs的体外成熟. 成熟DCs主要通过MHCI类途径，将肿瘤细胞总RNA在DCs胞质内进行翻译表达的肿瘤抗原呈递给T淋巴细胞. 此途径诱导的T淋巴细胞主要为CD8+细胞毒性T淋巴细胞（CTL）. 本试验中，诱导的CTL对HepG2的细胞毒效应明显高于对照组T细胞，证实诱导的T淋巴细胞为肿瘤特异性的. 因此，在当前仍未发现肝癌特异性抗原情况下，应用肝癌细胞总RNA转染DCs制备瘤苗，诱导针对肝癌细胞的多克隆CTL，可以作为肝癌DCs疫苗的一个发展方向. 【参考文献】 〔1〕 Qin LX, Tang ZY. The prognostic molecular markers in hepatocellular carcinoma 〔J〕. 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